RT—PCR检测BCR—ABL基因中的几个问题

ＲＴ－ＰＣＲ是检测ＢＣＲ－ＡＢＬ蠹合基因的主要手段。本文阐述了不同临床表型的ＢＣＲ－ＡＢＬ蠹合基因及其ＲＴ－ＰＣＲ检测常遇到的几个问题（即结构的正确评估和质量控制）。     

应用筑巢式RT—PCR检测BCR—ABL融合基因的探讨

应用筑巢式ＲＴ－ＰＣＲ检测２０例ＣＭＬ血或／及骨髓中ＢＣＲ／ＡＢＬ基因的表达，证实较普通ＲＴ－ＰＣＲ其为一种快速、敏感而准确的检测方法。同时以ＡＢＬ基因为ＲＮＡ及ｃＤＮＡ质量对照，有效地排除了因标本质量欠佳而致的假阴性或因标本污染所致的假阳性。我们还发现在ＣＭＬ中Ｐ２１０ＢＣＲ／ＡＢＬ的表达接近为１００％，且与化疗无明显相关。     

GATA—2与免疫球蛋白重链胚系基因Cμ在白血病细胞中的表 …

应用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）对不同类型白血病患者骨髓（ＢＭ）或外周血（ＰＢ）细胞ＧＡＴＡ－２和ＩｇＨ胚系基因ＣμｍＲＮＡ的表达进行检测，探讨ＧＡＴＡ－２与ＩｇＨ胚系基因Ｃμ在白血病细胞中的表达与共表达及意义。在正常人ＢＭ和ＰＢ细胞中未检测到ＧＡＴＡ－２和ＩｇＨ胚系基因Ｃμ。在急性髓性白血病（ＡＭＬ）和急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）以及慢怀粒细胞白血病慢性期（ＣＭＬ－ＣＰ）ＧＡＴＡ－２检出     

TCR独特型DNA疫苗诱导抗淋巴系统肿瘤免疫反应的实验研究

本研究观察ＴＣＲ独特型ＤＮＡ疫苗诱导ＢＡＬＢ／ｃ小鼠抗肿瘤免疫反应的情况。用ＣＥＭ淋巴瘤细胞系和ＢＡＬＢ／ｃ小鼠作模型,ＲＴ－ＰＣＲ扩增ＣＥＭ系特异性重排的ＴＣＲ Ｖβ基因,克隆到真核表达载体ｐｃＤＮＡ３中作为ＤＮＡ疫苗。用肌内注射法免疫小鼠,间接免疫荧光法检测小鼠抗体生成和用ＭＴＴ法测定ＣＴＬ活性以检测抗独特型的细胞免疫。结果发现,接种ＤＮＡ疫苗后第４周开始小鼠血清中即可检测到特异性抗独特型抗体     

儿童B系急性淋巴细胞白血病TEL-AML1融合基因的研究

目的了解ＴＥＬＡＭＬ１融合基因在儿童Ｂ系急性淋巴细胞白血病（急淋）中的发生率及其与临床诊断和预后的关系,并比较巢式逆转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）和双标记荧光原位杂交（ＦＩＳＨ）两种方法。方法采用巢式ＲＴＰＣＲ和双标记ＦＩＳＨ技术检测ＴＥＬＡＭＬ１融合基因。结果和结论ＲＴＰＣＲ检测发现儿童Ｂ系急淋中２２．５％（４０例中９例）的患者有ＴＥＬＡＭＬ１融合基因转录本,这类患者预后较好,完全缓解率达１００％。ＲＴＰＣＲ和ＦＩＳＨ技术是检测ＴＥＬＡＭＬ１的有效方法,并为临床诊断和预后估计提供了有一定价值的手段。     

荧光定量PCR与RT-PCR技术检测HCV-RNA的比较观察

目的 比较荧光定量ＰＣＲ与ＲＴ－ＰＣＲ（定性）检测不同检材中的ＨＣＶ－ＲＮＡ,评价荧光定量ＰＣＲ技术测定ＨＣＶ－ＲＮＡ水平的价值。方法 采用荧光定量ＰＣＲ及ＲＴ－ＰＣＲ（定性）技术同时检测了７１例血液透析患者的血清,血浆,淋巴细胞、尿液标本中ＨＣＶ－ＲＮＡ。结果 血清、淋巴细胞,尿液标本中ＨＣＶ－ＲＮＡ的荧光定量ＰＣＲ检出率（４６．３８％,８０．００％）,分别高于相应标本中ＨＣＶ－ＲＮＡ的ＲＴ－Ｐ     

慢性粒细胞白血病异基因骨髓移植后残留白血病观察

目的：观察慢性粒细胞白血病（ＣＭＬ）异基因骨髓移植（ａｌｏ－ＢＭＴ）后残留白血病情况。方法：用逆转录－多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术测定４６例经ａｌｏ－ＢＭＴ植活的ＣＭＬ患者骨髓细胞Ｍ－ｂｃｒ／ａｂｌｍＲＮＡ表达。结果：ａｌｏ－ＢＭＴ能使约７０％ＣＭＬ患者在移植后３个月ｂｃｒ／ａｂｌｍＲＮＡ转阴。其中４例患者在移植后＋１．５～２．０个月时为ｂｃｒ／ａｂｌｍＲＮＡ（＋），于＋３个月转为阴性；１例于＋９个月转阴。１例无病存活６年以上患者，其ｂｃｒ／ａｂｌｍＲＮＡ为阳性；另１例无病存活４年以上患者ｂｃｒ／ａｂｌｍＲＮＡ为阴性。结论：ＲＴ－ＰＣＲ是当前检测残留白血病最灵敏的方法，但不能忽视其局限性。     

急性早幼粒细胞白血病基因分析

目的：分析急性早幼粒细胞白血病（ＡＰＬ）患者经全反式维甲酸（ＡＴＲＡ）联合细胞毒药物及异基因骨髓移植（ａｌｏ－ＢＭＴ）治疗后融合基因的变化。方法：采用逆转录－多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）对２２例ＡＰＬ患者治疗前后ＲＡＲα／ＰＭＬ融合基因进行检测。其中１２例患者为单纯化疗，１０例接受了ａｌｏ－ＢＭＴ，９例患者于第１次完全缓解（ＣＲ１）期、１例于第１次复发（ＲＲ１）期接受了ａｌｏ－ＢＭＴ。结果：单纯维甲酸诱导完全缓解时，７５％ＡＰＬ患者融合基因仍然阳性；继用强化疗后８３％患者融合基因转为阴性，ＲＴ－ＰＣＲ转阴时间为发病后１～３９个月；ａｌｏ－ＢＭＴ后４个月内及４个月后，分别有６２．５％及８５．７％患者融合基因转阴。结论：化疗及ＢＭＴ均可使患者融合基因转阴，ａｌｏ－ＢＭＴ似乎能更快地清除体内白血病细胞     

慢性粒细胞性白血病的不典型染色体移位检测

约９５ %慢性粒细胞性白血病 (ＣＭＬ)有特异性染色体ｔ(９ ;２２)(ｑ３４;ｑ１１)。在分子水平上该移位导致原位于９ｑ３４带的ＡＢＬ原癌基因移位到２２ｑ１１上 ,并和其中ＢＣＲ基因的一部分基因融合 ,产生ＢＣＲ／ＡＢＬ融合基因 ,后者在白血病的发生中起重要作用 ,所有不典型移位都有和ＣＭＬ典型移位相同的分子病理学基因即ＢＣＲ基因重排 ,其转录产物可用逆转录聚合酶链反应 (ＲＴ -ＰＣＲ)技术进行检测 ,１９９２年以来 ,我们先后发现了３例简单变异移位的ＣＭＬ ,其中２例显示ｔ（１;２２） ,１例显示ｔ（２０;２２）。现报道如…     

RT—PCR检测白血病融合基因的临床意义

本文综述应用逆转录－多聚酶链反应检测白血病融合基因ＡＭＬ１－ＥＴＯ、ＰＭＬ－ＲＡＲα和ＢＣＲ－ＡＢＬ的临床意义。     

筑巢式RT—PCR对急性早幼粒细胞白血病融合基因的初步检测与分析

应用筑巢式ＲＴ－ＰＣＲ检测了３０例急性早幼粒细胞白血病（ＡＰＬ）中因染色体易位ｔ（１５：１７）所形成的早幼粒白血病维甲酸受体α（ＰＭＬ－ＲＡＲα）融合基因转录本,结果发现：１００％的Ｍ患者均有ＰＭＬ／ＲＡＲα;两种亚型Ｍ３ａ和Ｍ３ｂ其ＰＭＬ／ＲＡＲα的转录本不同,Ｍ３ａ９４％为Ｌ型,Ｍ３ｂ８４％为Ｓ型。结论：ＲＴ－ＰＣＲ检测融合基因是一种特异性强、灵敏度高的新诊断手段,还可用于预后判断和病情随访。     

巨细胞病毒即刻早期基因mRNA检测方法的建立

目的建立快速简便的逆转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）方法检测人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）即刻早期（ＩＥ）基因ｍＲＮＡ。方法设计合成跨越ＨＣＭＶＩＥ基因内含子区的一对引物，分别用ＲＴＰＣＲ和ＰＣＲ技术扩增ＨＣＭＶｍＲＮＡ和ＤＮＡ，用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交鉴定阳性产物。结果ＨＣＭＶＩＥ基因ｍＲＮＡ表达在感染后６小时即可出现，并持续到感染后至少９６小时，ＲＴＰＣＲ检测的最低敏感性为１００ｆｇ总ＲＮＡ，其他病毒和细胞ＲＮＡ不能被扩增。结论ＲＴＰＣＲ技术检测ＨＣＭＶｍＲＮＡ敏感、特异，有望应用于临床作为ＨＣＭＶ活动性感染的早期诊断方法     

53例非霍奇金淋巴瘤患者临床及实验资料分析

目的 分析多种因素对恶性淋巴瘤（ＭＬ）预后的影响,并探讨聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测免疫球蛋白重链（ＩｇＨ）和Ｔ细胞受体（ＴＣＲ）基因重排在协助Ｔ、Ｂ分型的临床意义。方法 通过ＳＡＢＣ法进行免疫分型、ＰＣＲ方法检测ＩｇＨ（ＦＲ２Ａ,３Ａ）和ＴＣＲ（β,γ）基因重排。结果 非霍奇金淋巴瘤（ＮＨＬ）发病年龄分布呈递增趋势,危险比率每年剃守１．０３９＾ｎ;Ｂ－ＮＨＬ发病率为６６．７％,Ｔ－ＮＨＬ为３１．１     

慢性髓系白血病Ph染色体分析与bcr/abl mRNA检测

目的 为进一步明确慢性髓系白血病（ＣＭＬ）患者中Ｐｈ染色体阳性细胞与ｂｃｒ／ａｂｌ融合基因表达之间的关系和比较细胞遗传学分的与聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法在ＣＭＬ应用中的优缺点,方法 用热变性姬姆萨Ｒ显带（ＲＨＧ）技术和逆转录筑巢式聚合酶链反应（ＲＴ－ｎｅｓｔ－ＰＣＲ）对３３例ＣＭＬ患者的骨髓或外周血进行了分析,对其中１１例异基因骨髓移植（Ａｌｌｏ－ＢＭＴ）或α干扰素（ＩＦＮ－α）＋小剂量羟基脲（Ｈ     

维甲酸和三氧化二砷下调NB4细胞组织因子表达的作用机制

目的 研究全反式维甲酸（ＡＴＲＡ）和三氧化二砷（Ａｓ２Ｏ３）下调ＮＢ４细胞组织因子（ＴＦ）表达的作用机制。方法 用放线菌酮抑制蛋白合成和用放线菌素Ｄ阻断ＲＮＡ合成后,用逆转录－降合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测ＡＴＲＡ对ＮＢ４细胞ＴＦｍＲＮＡ转录的影响。将含有ＰＭＬ－ＲＡＲα融合蛋白全部编码序列的重组逆转录病毒质粒转染Ｕ９３７细胞,以转染空载体的Ｕ９３７细胞为对照,用ＥＬＩＳＡ方法检测ＡＴＲＡ和Ａｓ     

急性单核细胞白血病患者外周血和骨髓TCR Vβ亚家族T？…

采用ＲＴ－ＰＣＲ扩增急性单核细胞白血病（ＡＭＬ－Ｍ５）患者外周血和骨髓单个核细胞的ＴＣＲ Ｖβ２４个亚家族基因,分析其ＴＣＲ Ｖβ亚家族的利用情况。结果发现,不同标本中可检测到１－１９Ｖβ亚家族的Ｔ细胞,不同患者外周血和骨髓中ＴＣＲ Ｖβ亚家族Ｔ细胞分布不尽相同。研究结果提供了ＡＭＬ－Ｍ５患者外周血和骨髓中ＴＣＲ ＶβＴ细胞倾斜性分布的细胞免疫功能改变特点。     

骨髓移植供受者HLA—DRB的单链构型多态性配型

用ＰＣＲ和单链构型多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）法检查供受的ＨＬＡ－ＤＲＢ－１基因座的多态性的一致性，以此做ＤＲＢ的基因配型。１６例同胞供受对的ＤＲＢ－１的ＰＣＲ－ＳＳＣＰ配型，有６对相合（６／１６），１０对不合（１０／１６）。此基因配型结果与其它配型结果比较，说明ＤＲＢ－１的ＰＣＲ－ＳＳＣＰ配型在区分同胞供受对Ⅱ类抗原多态性上有较高的灵敏度，同时表现此类配型在应用于骨髓移植前检查同胞供的意义     

特异核酸捕获RT-PCR技术建立及在HCV RNA检测中的应用

目的 解决ＲＴ－ＰＣＲ检测ＨＣＶＲＮＡ方法的重复性较差问题,使其成为常规实验室检测方法。方法 采用亲合素生物素系统将ＨＣＶ特异的核酸片段包被在微孔板上,利用特异核酸捕获样本中的ＨＣＶＲＮＡ然后进行逆转录和ＰＣＲ扩增,从而建立了特异核酸捕获ＲＴ－ＰＣＲ检测ＨＣＶＲＮＡ方法,并与酶消化法和抽提法进行比较,评价其敏感性、特异性、重复怀及抗污染能力。结果 特异性核酸获ＲＴ－ＰＣＲ获得的电要带较为清晰,其特     

抗PML—RARα反义核酸对NB4细胞形态,PML—RARα mRNA及蛋白质？…

目的 探讨抗ＰＭＬ－ＲＡＲα反义核酸（ＦＵＡＳ）对ＮＢ４细胞的分化、ＰＭＬ－ＲＡＲα ｍＲＮＡ表达及ＰＭＬ／ＰＭＬ－ＲＡＲα蛋白细胞内定位的影响。方法 以ＮＢ４细胞为研究对象,细胞形态观察采用Ｗｒｉｇｈｔ染以法;ＰＭＬ－ＲＡＲαｍＲＮＡ表达采用ＲＴ－ＰＣＲ法;ＰＭＬ／ＰＭＬ－ＲＡＲα蛋白细胞内定位采用免疫荧光技术。结果 ＦＵＡＳ处理后第５天,细胞出现部分分化。处理后２４,７２,１２０小时,ＰＭＬ－     

儿童急性早幼粒细胞白血病PML－RARa基因的检测及意义

作者应用筑巢式逆转录／多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）对３４例儿童急性早幼粒细胞白血病（ＡＰＬ，Ｍ３）患者进行ＰＭＬ－ＲＡＲａ融合基因的检测，发现１８例初发患者标本中均有融合基因转录本；１３例经全反式维甲酸（ＡＴＲＡ）诱导缓解（ＣＲ）后的患者中，１２例仍可检测到融合基因的表达；同时对１６例巩固化疗后的患者进行微量残留病（ＭＲＤ）的检测：８例融合基因持续阴性或未次阴性的患者，除ｌ例不久复发外，余均处于良好的ＣＲ状态；而８例融合基因持续阳性或未次阳性的患者，７例已复发，其中３例分别是在ＰＣＲ阳性结果后３，３及４个月复发的。以上结果表明ＰＭＬ－ＲＡＲａ基因检测在儿童ＡＰＬ的诊断，疗效评价及ＭＲＤ监测中同样是一个快速、准确且灵敏的方法。