辽宁省空调冷却水中非嗜肺军团菌基因分型与毒力初探

目的了解辽宁省集中空调冷却水中检出的非嗜肺军团菌基因分型,并对其携带的毒力基因情况进行调查。方法采用16SrDNA和mip基因作为引物对2013～2017年辽宁省各大公共场所空调冷却水中分离到的9株非嗜肺军团菌基因分型鉴定,同时对它们分泌的系统毒力岛基因组进行了检测。结果检出4株茴芹军团菌(L.anisa),2株吉斯特军团菌(L.geestiana),1株沃斯利军团菌(L.worsleiensis),2株红光军团菌(L.rubrilucens);9株非嗜肺军团菌中有8株携PAI毒力基因。结论辽宁省公共环境集中空调冷却系统中存在非嗜肺军团菌,以茴芹军团菌居多,且多数分离菌株携带毒力基因,是可致病性病源菌。     

漂白粉杀灭嗜肺军团菌及其影响因素的实验研究

目的：研究漂白粉杀灭嗜肺军团菌效果及其影响因素。方法：应用悬液定量杀菌试验观察漂白粉溶液对嗜肺军团菌的杀灭作用及温度、PH值、有机物对其杀菌效果的影响，以空气人工喷菌消毒试验观察漂白粉气雾对空气中嗜肺军团菌的杀灭作用。结果：有效氯含量500mg/L、1000mg/L漂白粉溶液对嗜肺军团菌作用1min杀灭率为100％，有效氯含量100mg/L、250mg/L漂白粉溶液分别对嗜肺军团菌作用10min,5min，杀灭率均为100％。杀菌作用随温度升高、PH降低而增强，因有机物存在而减弱。有效氯含量4mg/L的漂白粉气雾对空气中嗜肺军团菌作用40 min，杀灭率为100％，结论：漂白粉可用于杀灭水环境和空气中的嗜肺军团菌。     

84消毒液杀灭嗜肺军团菌及其影响因素的实验研究

目的：研究84例消毒液杀灭嗜肺军菌效果及其影响因素。方法：应用悬液定量杀菌试验观察84消毒液溶液对嗜肺军团菌的杀灭作用及温度，pH值，有机物对其杀菌效果的影响。以空气人工喷菌消毒试验观察84消毒液气雾对空气中嗜肺军团菌的杀灭作用。结果：有效氯含量250mg/L,500mg/L84消毒液溶液对嗜肺军团菌作用1min杀灭率为100％，有效氯含量500mg/L,100mg/L84消毒液溶液分别对哮肺军团菌作用10min,5min，杀灭率均为100％，杀菌作用随温度升高，pH值降低而增强，因有机物存在而减弱，有效氯含量3mg/L的84消毒液气雾对空气中嗜肺军团菌作用40min，杀灭率为100％，结论：84消毒液可杀灭水环境和空气中的嗜肺军团菌。     

嗜肺性军团菌的遗传学

嗜肺性军团菌是人类呼吸道疾病一军团病的致病菌。本菌为需氧性革兰氏阴性杆菌,广泛分布于水环境中。嗜肺性军团菌对人的致病性是由于本菌能进入肺泡巨噬细胞和单核细胞内,并且可以繁殖的缘故。由于嗜肺性军团菌也可以在实验室人工培养基上生长,故将其分类为兼性细胞内致病菌。对嗜肺性军团菌和人单核吞噬细胞间的相互作用已做过十分详细的检查。嗜肺性军     

嗜肺军团菌荧光定量PCR法的建立和初步应用

目的建立嗜肺军团菌特异、快速检测方法,探讨南京地区公共场所环境水样嗜肺军团菌污染状况。方法根据嗜肺军团菌的mip基因保守序列设计引物和探针,通过对嗜肺军团菌标准株ATCC33152、嗜肺军团菌南京分离株及大肠埃希菌ATCC25922、鼠伤寒沙门菌ATCC14028、福氏2a志贺菌ATCC12022进行检测,验证该方法的特异性。并应用该法对南京地区某商场、宾馆、办公楼、医院共计13家的中央空调系统的冷却水、淋浴水和景观水共计88份环境水样进行了PCR检测及军团菌的分离培养。结果该法对嗜肺军团菌有特异性扩增曲线,而对其他细菌无阳性扩增曲线。88份水样中荧光定量PCR方法检测出28份阳性,阳性率为31.8%;传统培养方法分离出17株军团菌,分离率为19.3%。结论本文建立的荧光定量PCR检测方法具有良好的特异性,可用于环境水中军团菌污染状况调查。南京地区中央空调冷却水中检出率最高,存在发生军团菌病的可能,应引起足够重视。     

工业循环冷却塔水嗜肺军团菌分离株分子生学特性研究

目的 了解钢铁企业工业循环冷却塔水中的嗜肺军团菌污染状况及菌株分子生物学特性.方法 于2011年3月-2012年9月对邯郸某钢铁厂相对固定的车间冷却塔水进行连续监测,进行嗜肺军团菌的定量分离培养,对分离到的菌株进行血清分型、脉冲场凝胶电泳分型、基因序列分型、毒力基因(lvh、rtxA)检测.结果 共检测117份水样,其中20份水样检出嗜肺军团菌,检出率为17.1％;菌落总数为100～50000 CFU/L,中位数为12000 CFU/L;共分离到嗜肺军团菌23株,血清型包括Lp1、Lp3、Lp5、Lp6、Lp8,并以Lp1为主(占36.1％,9/23).23株嗜肺军团菌PFGE分型得到19种不同带型,其中15种带型为国内首次发现.23株嗜肺军团菌分成20个SBT型别,有12个型别为本研究新发现.23株菌中,lvh、rtxA基因阳性的分别有20、22株,两种毒力基因全部阳性的有19株.结论 钢铁企业的冷却塔水存在嗜肺军团菌污染,菌型呈现基因多态性,同时具有独特的基因组成,并普遍具有毒力.     

天津市公共场所水环境中嗜肺军团菌污染状况

为了解天津市公共场所水环境中嗜肺军团菌污染情况,于2011—2013年对该地区各类场所(包括宾馆、饭店、酒店、商场、超市、影城、办公楼等)水样共593件进行嗜肺军团菌检测。结果显示,集中空调类水样中嗜肺军团菌检出率为17.45%(74/424),生活类用水中检出率为1.78%(3/169),分离出的95株嗜肺军团菌菌型以LP1型为主,占76.84%(73/95)。提示该地区公共场所水环境存在嗜肺军团菌污染,应加强环境监测与防控。     

工业循环冷却塔水嗜肺军团菌分离株分子生物学特性研究

目的了解钢铁企业工业循环冷却塔水中的嗜肺军团菌污染状况及菌株分子生物学特性。方法于2011年3月—2012年9月对邯郸某钢铁厂相对固定的车间冷却塔水进行连续监测,进行嗜肺军团菌的定量分离培养,对分离到的菌株进行血清分型、脉冲场凝胶电泳分型、基因序列分型、毒力基因(lvh、rtx A)检测。结果共检测117份水样,其中20份水样检出嗜肺军团菌,检出率为17.1%;菌落总数为100~50 000 CFU/L,中位数为12 000 CFU/L;共分离到嗜肺军团菌23株,血清型包括Lp1、Lp3、Lp5、Lp6、Lp8,并以Lp1为主(占36.1%,9/23)。23株嗜肺军团菌PFGE分型得到19种不同带型,其中15种带型为国内首次发现。23株嗜肺军团菌分成20个SBT型别,有12个型别为本研究新发现。23株菌中,lvh、rtx A基因阳性的分别有20、22株,两种毒力基因全部阳性的有19株。结论钢铁企业的冷却塔水存在嗜肺军团菌污染,菌型呈现基因多态性,同时具有独特的基因组成,并普遍具有毒力。     

军团菌病的流行现状及防治研究进展

军团菌病（Legionnaires’ disease）是由军团菌引起的急性呼吸道传染病。1976年在美国费城退伍军人大会中，军团菌病首次爆发，导致221人发病，34人死亡。1977年Fraser等的报告中此菌被命名为嗜肺军团菌。追溯美国历史上几起不明原因的肺炎爆发流行也是由该菌引起，由此建立了一个新的菌科——军团菌科、军团菌属，目前包含有42个种，60多个血清型，其中最重要的是嗜肺军团菌。     

2007年-2013年广州白云机场口岸部分中央空调军团菌带菌情况调查

目的了解广州机场口岸地区中央空调冷却水及冷凝水军团菌污染情况,为预防和控制军团菌病提供科学依据。方法从2007年5月-2013年10月,采集机场口岸地区部分公共场所中央空调冷却水和冷凝水196份,按照ISO11731:1998标准进行嗜肺军团菌分离培养、血清分型及鉴定。结果军团菌检测总阳性率为7.65%,15份阳性样本共分离嗜肺军团菌共20株,血清型多样性,从L1到L14,以L1为主。结论机场口岸公共场所中央空调存在嗜肺军团菌污染,嗜肺军团菌L1型占比率较大,且抗逆性较强,故对军团菌病的防治不能松懈,应时刻提高警惕,加强预防与控制工作。     

公共场所集中空调通风系统军团菌污染情况调查

目的 了解阳江市公共场所内集中空调系统冷却水嗜肺军团菌检出情况及菌型,分析和评价公共场所内发生军团菌病暴发流行的风险.方法 采集阳江市公共场所集中空调冷却水42 份,对水样进行预处理后,应用GVPC、BCYE、BCYE-cys 培养基进行嗜肺军团菌分离培养,然后进行血清分型和鉴定.结果 42 份空调冷却水中嗜肺军团菌检出率为35.7%,血清型以LP1 为主,检出率在不同季度有显著性差异,在不同类型公共场所间无明显差异.结论 阳江市公共场所集中空调冷却水中存在嗜肺军团菌,对人群构成潜在健康危害,应加强预防控制工作.     

大同地区嗜肺军团菌感染调查

用微量凝集试验测大同地区健康大专学生４３１人，住院病人２０６例血清中嗜肺军团菌抗体，结果提示在大同地区存在嗜肺军才菌感染，感染类型以ＬＰ１、ＬＰ６、ＬＰ８、ＬＰ１２血清型为主。住院病人中以肺心病、肺炎、肺气肿、肺结核患者嗜肺军团菌感染率为高，有漏诊或误认的军团菌肺炎及嗜肺军团菌医院感染存在可能性。作者建议应重视临床嗜肺军团菌微生物学检查，重视对医院管道用水嗜肺军团菌的分离及加强对医院水系统的消毒处     

2009-2012年广西南宁市公共场所中央空调冷却水

目的了解南宁市冷却水嗜肺军团菌污染情况及基因型特征,为预防和控制军团菌病提供依据。方法 2009年1月-2012年12月,采集南宁市部分公共场所中央空调冷却水进行病原分离和基因鉴定。结果冷却水中嗜肺军团菌阳性率达21.98%,阳性率呈逐年递减趋势;除1-4月外,各月份均有嗜肺军团菌检出;脉冲场凝胶电泳(PFGE)聚类分析结果显示南宁市嗜肺军团菌1型(Lp1)的遗传相似度差异有统计学意义。结论南宁市公共场所中央空调冷却水嗜肺军团菌污染严重,菌型多样,且嗜肺军团菌1型菌株呈现遗传多样性。     

自电影院空调系统分离嗜肺军团菌的报告

自McDade等首次分离军团病杆菌并确证其病原性以来,关于本菌在世界各地引起的流行或散发病例已有多数报告。流行病学及实验室研究表明,常因该菌存在于环境的水中通过形成气溶胶而传播,其中空调系统的冷却塔或蒸发器冷凝水尤为多见。 我国已在南京自一患者分离到嗜肺军团菌,说明该地有此病存在。目前天津市区有关本菌的情况尚未见报道,为此我们对人群集中又有较广泛接触面的影剧院和宾馆等空调冷凝水进行了检测,分离到嗜肺军团菌一株。     

嗜肺军团菌致病性与效应蛋白的研究进展

嗜肺军团菌是一种可以引起军团菌肺炎和庞蒂亚克热的兼性胞内病原菌,主要侵染阿米巴原虫和人类巨噬细胞。该菌在宿主胞内能依靠Dot/Icm IVB型分泌系统产生的效应蛋白成功逃避溶酶体的降解。本文主要对嗜肺军团菌的致病物质、胞内存活与增殖机制及其效应蛋白的生物学功能进行综述,详细介绍嗜肺军团菌的毒力因子与致病机制,为军团病防治的研究提供新思路,也为其他胞内病原菌所致感染性疾病的研究提供重要的借鉴意义。     

2018—2019年北京市朝阳区公共场所水环境中嗜肺军团菌污染状况及健康风险分析

目的了解北京市朝阳区公共场所水环境中嗜肺军团菌的污染状况和健康风险。方法于2018—2019年在北京市朝阳区部分公共场所中,采集淋浴水、集中空调系统冷却水和冷凝水,检测嗜肺军团菌,分型并计算含菌浓度,根据含菌浓度评价其健康风险。结果在112户公共场所中采集水环境样品共651份,嗜肺军团菌阳性率18.6%(121/651),血清1型41份,血清2-14型80份。不同水环境中嗜肺军团菌阳性率的差异有统计学意义(χ^(2)=21.89,P<0.05),淋浴水和冷却水的阳性率高于冷凝水的阳性率。不同场所淋浴水中嗜肺军团菌的阳性率差异无统计学意义(χ^(2)=4.03,P>0.05),冷却水中嗜肺军团菌的阳性率差异无统计学意义(χ^(2)=0.12,P>0.05)。含致病力较强的1型嗜肺军团菌的中高风险样品均为冷却水。结论朝阳区公共场所水环境中存在嗜肺军团菌污染的情况,淋浴水和集中空调冷却水中有较高的检出率,冷却水中嗜肺军团菌的污染带来的健康风险较高。     

嗜肺军团菌致病性与效应蛋白的研究进展

嗜肺军团菌是一种可以引起军团菌肺炎和庞蒂亚克热的兼性胞内病原菌，主要侵染阿米巴原虫和人类巨噬细胞。该菌在宿主胞内能依靠Dot/Icm IVB型分泌系统产生的效应蛋白成功逃避溶酶体的降解。本文主要对嗜肺军团菌的致病物质、胞内存活与增殖机制及其效应蛋白的生物学功能进行综述，详细介绍嗜肺军团菌的毒力因子与致病机制，为军团病防治的研究提供新思路，也为其他胞内病原菌所致感染性疾病的研究提供重要的借鉴意义。     

公共场所空气中存活嗜肺军团菌叠氮溴乙啶-定量PCR检测的初步研究

目的建立叠氮溴乙啶(ethidium monoazide bromide,EMA)与定量PCR(qPCR)相结合检测公共场所空气中存活的嗜肺军团菌的方法。方法用培养的嗜肺军团菌进行实验以得到EMA处理的最适条件;采集嗜肺军团菌气溶胶模拟样品,采用EMA-qPCR(EMA处理组)和qPCR(对照组)验证其检测活菌的效果;并将该方法在公共场所进行现场应用实验。结果 EMA终浓度在2.5μg/ml、4℃孵育5min、光照5 min的处理条件下,可在基本不影响活菌PCR扩增的情况下使死菌qPCR的信号降低约2 lg,即可以抑制99%的死菌PCR扩增。当死菌和活菌的浓度比例不超过1 000∶1时,EMAqPCR方法可实现对空气中存活嗜肺军团菌的定量检测。采集的公共场所气溶胶样品中,EMA处理组和对照组的嗜肺军团菌阳性率分别为37.5%(15/40)和57.5%(23/40);在两组检测结果均为阳性的10对样品中,1对样品的检测结果相同,5对样品EMA处理组检测结果低于对照组,平均低0.70 lg copies/ml,4对样品EMA处理组的检测结果高于对照组,平均高0.65lg copies/ml。结论 EMA-qPCR方法可用于公共场所空气中嗜肺军团菌活菌的快速定量检测。     

公共场所集中空调冷却水与嗜肺军团菌污染关系

军团菌病是由军团菌,尤其是嗜肺军团菌引发的肺部感染.人工水源如空调冷却水系统、冷热水管道系统、人工喷泉等均可检出军团菌.当空调冷却塔直接暴露在环境中,其运行过程中会产生细小的含菌气溶胶.人在正常呼吸时,有可能吸入气溶胶而引发军团菌感染.西班牙[1]、瑞典[2]、日本[3]等国均有关于空调冷却水系统作为传染源引发社区或医院获得性军团菌病感染的案例,南昌[4]、马鞍山[5]等十多个省市也有有关公共场所军团菌污染的相关报道.集中空调冷却水系统已被认为是军团菌病的主要源头.为分析冷却水水质与嗜肺军团菌污染之间的关系,于2009年7月对上海市100家公共场所集中空调冷却水部分水质指标及水中嗜肺军团菌污染情况进行调查,现将结果报告如下.     

军团菌rcp毒力基因的聚合酶链反应检测方法研究

目的 建立军团菌rcp毒力基因聚合酶链反应(PCR)检测方法.方法 根据GenBanK公布的嗜肺军团菌核苷酸序列合成军团菌rcp毒力基因的特异引物,采用PCR方法对2005年-2007年天津市中央空调冷却塔分离的16株嗜肺军团菌、杜氏军团菌(Legionella dumoffii,L.dum)、博氏军团菌(Legionella bozemanii,L.boz)、长滩军团菌(Legionellafeeleii,L.fee)等菌株进行了军团菌毒力基因rcp的检测.结果 3株嗜肺军团菌扩增出了900 bp的rcp基因片段,其余菌株未扩增出该基因片段.结论 本研究建立的军团菌毒力基因rcp的PCR检测方法具有较高的特异性和敏感性,适于军团菌毒力基因的深入研究.

Abstract：

Objective To establish a polymerase chain reaction method for the detection of the rcp virulence gene of L. pneumophila. Methods Sixteen strains of Legionella pneumophila, L. dumiffii, L. bozemanii and L. Longbeachae isolated from the cooling towers of the centralized air-conditioning systems in Tianjin form 2005 to 2007 were detected by polymerase chain reaction method using L. pneumophila rcp virulence gene-specific primer according to GenBank published nucleotide sequence. Results The 900 bp rcp genetic fragment was amplified in three strains of L. pneumophila, while others not. Conclusion The rcp virulence gene-based polymerase chain reaction method for the detection of L. pneumophila has been successfully established and is the foundation for the studies of Legionella virulence.