来氟米特对胶原性关节炎大鼠CD4+CD25+调节性T细胞的影响

目的:探讨来氟米特对胶原性关节炎中免疫抑制性CD4+CD25+调节性T细胞的作用.方法:II型胶原诱导Wistar大鼠,建立胶原性关节炎模型;检测关节炎大鼠多发性关节炎评分,每周2次;流式细胞仪检测脾淋巴细胞中CD4+CD25+调节性T细胞的比例;RT-PCR检测脾淋巴细胞中Foxp3 mRNA的表达.结果:与模型组比...     

蜂毒肽通过Th1/Th2途径对胶原诱导关节炎大鼠模型免疫调节的影响

目的 探讨蜂毒肽对胶原诱导关节炎大鼠模型免疫调节的影响。方法 成功建立胶原诱导关节炎大鼠模型，随机分为模型组、蜂毒肽（0.5 mg/kg）组、甲氨蝶呤（1 mg/只）组，每组6只，另选取未造模大鼠为对照组；造模第14天起，隔日1次ip蜂毒肽，每周1次ip甲氨蝶呤，对照组、模型组ip等量生理盐水，给药21 d。观察关节肿胀程度、进行关节炎指数（AI）评分；给药结束后，收集血清，ELISA法检测血清中免疫球蛋白G （IgG）、IgG1、IgG2a、干扰素-γ（IFN-γ）、白细胞介素-4（IL-4）水平；分离大鼠脾脏，提取淋巴细胞，流式细胞术检测Th1、Th2细胞比例。结果 蜂毒肽组大鼠关节皮肤发红，关节肿胀明显减轻；与模型组比较，蜂毒肽显著抑制AI评分（P<0.05）；显著降低血清中IgG、IgG2a、IFN-γ浓度（P<0.05），升高IgG1、IL-4浓度（P<0.05）；显著下调Th1细胞比例、Th1/Th2比值（P<0.05），上调Th2细胞比例（P<0.05）。结论 蜂毒肽能通过调节Th1/Th2平衡抑制胶原诱导关节炎大鼠的炎症。     

六味五灵片对刀豆蛋白A诱导的小鼠急性免疫性肝损伤的保护作用研究

目的研究六味五灵片(Liuweiwuling Tables,LWWL)对刀豆蛋白A(concanavalin A,Con A)诱导的小鼠急性免疫性肝损伤的保护作用及机制。方法将小鼠随机分成正常组对照组、模型组、双环醇组(Bicyclol,39 mg·kg~(-1))、六味五灵片低剂量组(8 g·kg~(-1))、六味五灵片高剂量组(16 g·kg~(-1)),各给药组每天给药1次,连续7 d,末次给药1 h后,除正常对照组外,其他各组尾静脉注射Con A(15 mg·kg~(-1))制备小鼠急性免疫性肝损伤模型。HE染色观察小鼠肝组织病理变化;比色法检测小鼠血清中丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、总胆红素(TBIL);实时定量RT-q PCR测定法检测肝组织中白介素-12(IL-12)、干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-4(IL-4)、白介素-10(IL-10)mRNA的表达;流式细胞术(FCM)观察脾脏Th1(IFN-γ)/Th2(IL-4)细胞的变化;免疫印迹(Western blot)法检测肝组织中Th1/Th2转录因子T-bet/GATA-3的表达。结果与正常对照组相比,模型组小鼠血清中ALT、AST、TBIL明显升高,小鼠肝组织病理损伤严重,肝细胞大量坏死、凋亡,表明造模成功。与模型组比较,六味五灵片低、高剂量组小鼠血清中ALT、AST、TBIL的水平明显降低;脾脏中Th1细胞减少,Th2细胞增多。肝组织中IL-12、IFN-γ、TNF-α的mRNA表达下降,IL-4、IL-10的mRNA表达上升,GATA-3蛋白表达上调,T-bet蛋白表达无明显变化。结论六味五灵片通过调节Th1/Th2的平衡,保护Con A诱导的急性免疫性肝损伤。     

桂枝汤对脾虚大鼠Th1/Th2细胞漂移的干预作用

目的采用RT-PCR方法来探讨桂枝汤干预Th1/Th2细胞漂移及机制。方法40只大鼠随机分为正常组（A组）、脾虚组（B组）、桂枝汤大剂量组（C组）、桂枝汤小剂量组（D组）等4组，每组10只；用规范的脾气虚证大鼠模型造模方法将B组、C组、D组大鼠造模，B组、C组、D组分别用蒸馏水、桂枝汤大剂量、桂枝汤小剂量灌胃，标本采集后用RT-PCR检测NFAT mRNA、IL-4 mRNA和IFN-γ mRNA表达水平。结果脾虚组的NFAT mRNA、IL-4 mRNA表达上调；而IFN-γ mRNA表达下调，经桂枝汤大小剂量组治疗后，NFAT mRNA、IL-4 mRNA表达下调，IFN-γ mRNA表达上调。结论桂枝汤对Th1/Th2细胞漂移作用途径可能是通过下调NFAT mRNA的表达，恢复了IFN-γ mRNA正常转录水平，进而下调IL-4 mRNA的表达，使脾虚大鼠Th1/Th2细胞达到一种新的平衡。     

青藤碱对小鼠复发性自然流产妊娠结局的影响及其相关机制研究

目的研究青藤碱对复发性自然流产模型小鼠妊娠结局的影响及相关机制。方法雌性CBA/J小鼠60只,雄性DBA/2小鼠20只、Balb/c小鼠10只,按雌雄比例2∶1合笼,检出阴栓者计为妊娠第1天。分为正常组:雌性CBA/J小鼠×雄性Balb/c小鼠,正常饮食,9只孕鼠;模型组:雌性CBA/J小鼠×雄性DBA/2小鼠,正常饮食,10只孕鼠;治疗组:雌性CBA/J小鼠×雄性DBA/2小鼠,自检出阴栓日开始改用含有0.5%青藤碱的饲料,10只孕鼠。计数存活胚胎数和丢失胚胎数,并计算胚胎丢失率。使用ELISA法检测血清中细胞因子IFN-γ和IL-4的水平;real-time PCR检测IL-4、INF-γ、GATA-3、T-bet基因的表达水平;Western blot测IL-4、INF-γ、GATA-3、T-bet蛋白的表达水平。结果胚胎丢失率结果表明:与模型组比较,正常组和治疗组的胚胎丢失率显著降低(P<0.01)。ELISA结果显示:与正常组相比较,模型组和治疗组中血清IFN-γ和IFN-γ/IL-4的水平均显著升高(P<0.01),IL-4水平均显著降低(P<0.01);与模型组相比较,治疗组中血清中IFN-γ水平和IFN-γ/IL-4比值均显著降低(P<0.01),而IL-4水平变化不大。Real-time PCR和Western blot的结果均显示:与正常组相比较,模型组和治疗组中IL-4、GATA-3基因的表达水平均显著降低(P<0.01);IFN-γ、T-bet基因的表达水平以及IFN-γ/IL-4比值、T-bet/GATA-3比值均显著升高(P<0.01)。与模型组相比,治疗组中IFN-γ、T-bet基因的表达水平以及IFN-γ/IL-4比值、T-bet/GATA-3比值显著降低(P<0.01)。结论青藤碱可以减少复发性自然流产的发生,其中RSA与Th1/Th2平衡漂移至Th1型有关;青藤碱治疗复发性自然流产的可能机制为降低体内Th1型细胞因子IFN-γ及转录因子T-bet的水平,从而调节Th1/Th2平衡。     

皮肌炎患者外周血CD4+Th1/Th2细胞因子及转录因子的表达

目的 探讨Th1/Th2细胞分化趋势在活动性皮肌炎(DM)发病机制中的作用.方法 分别采集15例活动性DM患者(DM组)和15例健康人(对照组)外周血,采用免疫磁珠分离获得CD4 T细胞(Th细胞),逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)检测两组Th1、Th2转录因子T-bet、GATA3及细胞因子γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素4(IL-4)的表达强度.分析T-bet和IFNγ、GATA3和IL-4的相关性;IFN-γ、IL-4表达与血清肌酸激酶(CK)含量的相关性.结果 DM组IFN-γ、GATA3及II-4表达均明显高于对照组(P＜O.05);DM组IL-4与GATA3、血清CK呈正相关(P＜O.05).结论 DM患者Th1/Th2无明显极化现象,Th1/Th2细胞因子表达均增强.     

野菊花总黄酮对佐剂性关节炎大鼠的治疗作用及其部分机制研究

目的 观察野菊花总黄酮（total flavonoids of Chrysanthemum，TFC）对佐剂性关节炎大鼠的治疗作用及其部分机制。方法 采用佛氏完全佐剂（freund＇s complete adjuvant，FCA）诱导的佐剂性关节炎（adjuvant arthtitis，AA）大鼠，分为模型组、野菊花总黄酮（84，168，336mg／kg）组、来氟米特（6mg／kg）组灌胃给药。用足容积法测量关节肿胀度，采用细胞增殖法检测ConA、LPS诱导的AA大鼠脾淋巴细胞增殖反应及脾淋巴细胞IL-2的分泌水平；采用小鼠胸腺增殖法检测AA大鼠腹腔巨噬细胞（PM4p）培养上清中的IL-1水平；     

来氟米特对类风湿关节炎患者外周血Thl/Tcl细胞的影响

目的探讨来氟米特对类风湿关节炎(RA)患者外周血T淋巴细胞亚群的影响.方法采用细胞内细胞因子染色、三色流式细胞分析法检测单个细胞分泌细胞因子的情况.收集25位RA患者和10例接受来氟米特治疗前及治疗3个月后的RA患者的外周血,对CD4+、CD8+细胞分泌IL-4和IFN的情况进行检测.结果RA患者和健康对照组的外周血CD4+/CD8+T淋巴细胞中,分泌IFN(的细胞群均比分泌IL-4的细胞群多,同健康对照组相比,RA患者外周血中Th1型细胞明显减少.产生IFN的Th1型、Tc1型细胞和产生IL-4的Th2型细胞在接受来氟米特治疗后明显减少,而Tc2型细胞则无明显增加或减少.结论来氟米特可能通过抑制Th1型和Tc1型的分化、减少Th1/Tc1型细胞因子如IFN(的分泌而发挥抗炎及改变类风湿关节炎病程的作用.     

转录因子T-bet/GATA-3在哮喘大鼠中失衡表达及地塞米松的调节作用

目的 观察T细胞特异转录因子T-bet/GATA-3在支气管哮喘中失衡表达,探讨地塞米松对其调节作用.方法 36只雄性SPF级SD大鼠随机分为对照组(C组)、哮喘组(A组)和地塞米松组(D组).苏木精-伊红染色观察气道病理改变;酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测大鼠血清中IL-4、IL-5、IFN-γ含量;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹(Western blot)测定法分别检测肺组织T-bet和GATA-3 mRNA和蛋白表达.结果 肺组织中嗜酸性粒细胞(EOS)、淋巴细胞、管壁面积/支气管管腔内周长(WA/Pi) 支气管平滑肌面积/支气管管腔内周长(ASM/Pi)A组比C组明显增多或增厚(P<0.01),D组明显低于A组(P<0.01);血清中IL-4和IL-5含量,A组高于C组(P<0.01),D组低于A组(P<0.01),IFN-γ含量A组和D组均低于C组(P<0.01);肺组织中T-bet mRNA和蛋白表达A组明显低于C组(P<0.01),D组明显低于C组(P<0.01);肺组织中GATA-3 mRNA和蛋白表达A组高于C组(P<0.01),D组与C组和A组比较差异均无统计学意义(P>0.05).结论 转录因子T-bet/GATA-3在哮喘中失衡表达,地塞米松明显抑制转录因子T-bet表达,但对GATA-3表达无明显影响,其抑制哮喘的气道炎症并非通过调节转录因子T-bet和GATA-3的平衡实现.     

阻断Notch1信号通路对慢性乙肝患者外周血T细胞免疫功能的影响

目的:观察阻断Notch1信号对慢性乙型病毒性肝炎患者外周血单个核细胞(PBMC)T-bet表达,Th1和Th2型细胞因子表达以及细胞毒性T淋巴细胞(CTL)细胞毒活性的影响,探讨Notch1信号通路在调节慢性乙型病毒性肝炎患者外周血T细胞免疫功能的作用。方法:将慢性乙型病毒性肝炎患者PBMC随机分为实验组,阴性对照组和空白对照组,分别给予抗-Notch1,IgG2b和RPMI-1640培养液,采用实时荧光定量PCR(real-time Q-PCR)检测各组T-bet mRNA的表达情况,采用ELISA法检测Th1型细胞因子IFN-γ,IL-2和Th2型细胞因子IL-4,IL-10的分泌水平,采用乳酸脱氢酶释放法检测CTL对靶细胞HepG2.2.15细胞毒活性的变化。结果:用抗体阻断Notch1信号通路后,慢性乙型病毒性肝炎患者PBMC中T-bet mRNA表达增强,Th1型细胞因子IFN-γ和IL-2浓度增高,而Th2型细胞因子IL-4和IL-10浓度减少,且CTL细胞毒活性明显增强,与阴性对照组和空白对照组相比差异有统计学意义(P均<0.01)。结论:阻断Notch1信号通路可增强慢性乙肝患者PBMC中T-bet mRNA表达,使Th1型细胞因子分泌增加,Th2型细胞因子分泌减少,且使CTL细胞毒活性增强,说明阻断Notch1信号通路可增强慢性乙肝患者T细胞免疫反应,Notch1信号通路可能参与慢性乙型病毒性肝炎患者机体的免疫耐受,且可能与T-bet有关。     

地塞米松改善胶原性关节炎大鼠免疫功能与其血药浓度的相关性研究

目的 研究地塞米松对胶原诱导性关节炎(Collagen induced arthritis,CIA)大鼠炎症和免疫的调节作用.方法 32只Wistar大鼠,分为3组,正常组10只、模型组11只,给药组11只.建立CIA模型后,给药组腹腔注射地塞米松(1 mg/kg),每周3次.连续给药4周后,处死并计算脾脏指数、胸腺指...     

scBsAb1/17双特异性抗体对小鼠类风湿性关节炎模型的治疗效果

目的比较不同剂量scBsAb1/17对Ⅱ型胶原(CII)诱导类风湿性关节炎(CIA)模型小鼠的治疗效果,及scBsAb1/17双特异性抗体与单价抗体(anti-IL-1βscFv和anti-IL-17scFv)在CIA模型小鼠中的治疗效果。方法利用CII建立小鼠类风湿性关节炎模型,小鼠成模后开始治疗,每2 d给药1次,治疗29 d。治疗结束后对小鼠关节炎指数进行临床评分,检测各组小鼠血清中CII抗体、CII特异性刺激的脾细胞增殖指数和脾脏中IL-2、IL-1β、IFN-γ、IL-6和TNF-α等细胞因子的表达水平。结果与CIA模型对照组相比,所有治疗组都能明显减轻CIA小鼠的临床症状,并明显降低血清中CII抗体水平、脾细胞增殖指数及脾脏中TNF-α、IL-6、IL-2、IL-1β和IFN-γ的表达量。相同剂量下scBsAb1/17治疗组的脾细胞增殖指数明显低于anti-IL-1βscFv治疗组(P<0.05);并且scBsAb1/17治疗组小鼠脾脏中IL-6、IL-2、IL-1β和IFN-γ的表达量明显低于anti-IL-1βscFv和anti-IL-17AscFv单独治疗组(P<0.01或P<0.05)。结论 scBsAb1/17及单价抗体对CIA模型小鼠都有治疗效果;不同剂量scBsAb1/17对CIA模型鼠的治疗效果呈剂量依赖性;相同剂量条件下,scBsAb1/17的治疗效果要优于单价抗体。     

豹皮樟总黄酮对胶原性关节炎大鼠腹腔巨噬细胞产生细胞因子及其免疫功能的影响

目的研究豹皮樟总黄酮(total flavonoids of LitseacoreanaLeve,TFLC)对胶原性关节炎大鼠(collagen-inducedarthritis,CIA)腹腔巨噬细胞(peritoneal macrophage,PMΦ)产生细胞因子及其免疫功能的影响。方法Ⅱ型胶原蛋白(collagenⅡ,CII)和氟氏完全佐剂(CFA)诱导大鼠胶原性关节炎(CIA)模型,采用体重、足爪肿胀及病理组织学变化等指标评价TFLC对CIA大鼠的治疗作用;无菌取PMΦ,体外用药(TFLC0.05、0.5、5mg·mL-1),采用小鼠胸腺细胞增殖法检测CIA大鼠PMΦ分泌白细胞介素1(interleukin-1,IL-1)的水平,小鼠脾淋巴细胞增殖法检测CIA大鼠脾细胞分泌白细胞介素2(interleukin-2,IL-2)的水平,放射免疫测定法和反转录RT-PCR法分别检测CIA大鼠PMΦ中肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的分泌和表达,中性红法测定CIA大鼠PMΦ的吞噬功能。结果TFLC(50、100、200mg.kg-1)能抑制关节肿胀,增加CIA大鼠体重,改善膝关节病理损伤。TFLC(0.05、0.5、5mg·mL-1)可降低CIA大鼠PMΦ过强的吞噬功能,下调脾细胞IL-2的分泌水平和腹腔巨噬细胞IL-1的分泌水平,同时抑制PMΦTNF-α的分泌水平以及TNF-αmRNA的表达。结论TFLC对CIA大鼠关节炎具有明显抑制作用,其抗炎和免疫抑制作用与其降低CIA大鼠PMΦ过强的吞噬功能,抑制细胞因子的分泌和表达有关。     

Effects of Th1 and Th2 cells balance in pulmonary injury induced by nano titanium dioxide

To explore the potential immunoregulatory mechanisms linking nano TiO₂ and pulmonary injury, Sprague Dawley rats were exposed by intra-tracheal instillation to nano TiO₂ with the individual doses of 0.5, 4.0 and 32 mg/kg b.w., micro TiO₂ with 32 mg/kg b.w. and 0.9% NaCl, respectively. The exposure was conducted twice a week, for four consecutive weeks. The results of lung histology demonstrated increased macrophages accumulation, extensive disruption of alveolar septa, slight alveolar thickness and expansion hyperemia. Mitochondria tumefaction organelles dissolution, endoplasmic reticulum expansion and the gap of nuclear broadening were shown. The changes of IFN-γ and IL-4 level showed no statistical difference. The mRNA expression of GATA-3 was up-regulated, whereas T-bet was significantly down-regulated. The protein expression of T-bet decreased and there were significant differences in nano 4 and 32 mg/kg groups. The imbalance of Th1/Th2 cytokines might be one of the mechanisms of immunotoxicity of respiratory system induced by nano TiO₂ particles.     

Immunomodulatory and cytotoxic effects of Nigella sativa and thymoquinone on rat splenocytes

Three different concentrations of Nigella sativa (N. sativa) ethanolic extract, thymoquinone (TQ), dexamethasone, and saline were examined to see whether they had any effects on cell viability, proliferation, and interleukin 4 (IL-4) and interferon-γ (IFN-γ) secretion in non-stimulated, phytohemagglutinin (PHA) and concavaline A (Con A)-stimulated splenocytes. In PHA and Con A-stimulated splenocytes, cell viability and proliferation were increased and Con A shifted cytokine profile towards Th2 balance. Dexamethasone treatment showed a suppression in viability, IFNγ and IL-4 secretion in non-stimulated and stimulated splenocytes. Extract and TQ reduced the viability and inhibited the proliferation of stimulated and non-stimulated splenocytes concentration-dependently. Higher concentrations of N. sativa (1000 mg/ml) and TQ (5 and 10 mg/ml) reduced the secretion of IL-4 in stimulated cells. Two higher concentrations of N. sativa had decreased IFNγ secretion in both stimulated and non-stimulated cells. In non-stimulated cells, only the highest and in Con A-stimulated cells, all TQ concentrations had inhibited IFNγ secretion. The highest concentration of N. sativa increased IFNγ/IL-4 ratio in both stimulated and non-stimulated cells while higher concentrations of TQ only had the same effect on stimulated cells. N. sativa and TQ showed cytotoxic inhibitory effect on rat splenocytes and on Th1/Th2 cytokines concentration-dependently. Higher concentrations of extract and TQ increased cytokines balance in Th1/Th2.     

人参皂苷-Ro促进小鼠脾细胞增殖及调节小鼠脾细胞Th1/Th2细胞因子的产生

目的研究人参皂苷-Ro对小鼠脾细胞增殖及细胞因子产生的影响。方法［³H］ TdR参入法检测人参皂苷-Ro对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响；酶联免疫吸附法检测人参皂苷-Ro对小鼠脾淋巴细胞产生细胞因子白介素-2、干扰素-γ和白介素-4的影响；逆转录聚合酶链式反应分析法研究人参皂苷-Ro对小鼠脾淋巴细胞中干扰素-γ、白介素-4 mRNA表达的影响。结果人参皂苷-Ro在1-10 μmol·L^-1显著促进Con A诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖及小鼠脾淋巴细胞白介素-2的产生；在2-10 μmol·L^-1促进Con A诱导的小鼠脾淋巴细胞产生和表达Th2细胞因子白介素-4, 而降低Con A诱导的小鼠脾淋巴细胞产生和表达Th1细胞因子干扰素-γ。结论人参皂苷-Ro通过调节脾细胞内Th1型和Th2型细胞因子的转录和表达发挥免疫调节作用。