CD4+CD25+调节性T细胞在支气管哮喘中的研究进展

近年来,关于CD4^＋CD25^＋调节性T细胞在支气管哮喘发病中作用的研究有相当大的进展,支气管哮喘的发病机制已不能单纯用Th1/Th2平衡理论来解释,CD4^＋CD25^＋调节性T细胞越来越受到重视,它通过细胞接触和分泌细胞因子发挥免疫抑制功能,维持自身免疫平衡,控制支气管哮喘的发展,Foxp3、IL-6等在其功能调控中发挥重要作用。支气管哮喘中,有关CD4^＋CD25^＋调节性T细胞作用机制及数量变化的观点不一,糖皮质激素通过增强CD4^＋CD25^＋调节性T细胞功能发挥治疗作用。     

重症化脓性脑膜炎儿童血CD4~+CD25~+调节性T细胞的变化

目的初步探讨CD4~+CD25~+调节性T细胞(Tregs)在儿童重症化脓性脑膜炎病程早期的变化及其可能的作用。方法回顾性研究2014年8月至2015年12月入住PICU的39例严重化脓性脑膜炎患儿的临床资料,并根据患儿入院后12h内血Tregs降低与否分为无Tregs降低组和Tregs降低组(Tregs计数410个/mm3为降低),分析早期Tregs改变与临床表现、实验室指标和转归的关系。结果 39例患儿中,13例(33%)Tregs比例明显下降(31%),18例(46%)Tregs绝对计数下降(410个/mm~3)。4例病死患儿均来自于Tregs降低组。与无Tregs降低组比较,Tregs降低组患儿外周血白细胞低于正常的比例更高,血清降钙素原升高更显著(P0.05)。结论儿童重症化脓性脑膜炎患儿早期Tregs可能受到抑制,这与患儿炎症反应更重、病死率更高有关。     

急性白血病患儿CD4~+CD25~+调节性T细胞和NK细胞免疫作用探讨

目的观察外周血CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+Treg)及自然杀伤细胞(na-ture killer cell,NK)在白血病患儿及非白血病患儿的不同,了解白血病患儿的免疫状态,探讨CD4+CD25+Treg细胞及NK细胞在小儿急性白血病肿瘤免疫中的意义。方法以流式细胞术检测急性白血病初诊患儿及非白血病患儿各30例的外周血CD4+CD25+Treg细胞、NK细胞的数量及比例。结果外周血CD4+CD25+CD127-细胞占CD4+T细胞的比例白血病组为(11.45±1.41)%,显著高于对照组为(6.98±1.09)%(P<0.05)。而NK细胞数量白血病组为(5.13±2.97)%,显著低于对照组为(15.06±3.91)%(P<0.05)。结论 (1)急性白血病患儿外周血CD4+CD25+Treg细胞数量升高,NK细胞数量降低,表明急性白血病患儿NK细胞免疫功能处于抑制状态。CD4+CD25+Treg细胞可能在白血病的发生、发展中起一定作用。(2)通过检测CD4+CD25+CD127-T细胞可较好的反映CD4+CD25+Treg细胞的比例,简便可行、重复性好、检测结果准确、可靠。     

哮喘小鼠气道重塑过程中CD4~+CD25~+调节性T细胞和Th17细胞表达的动态变化

目的探讨哮喘小鼠Th17细胞和CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)在脾组织中表达水平的变化规律及与气道重塑的关系。方法将SPF级雌性Balb/c小鼠48只随机分为对照组和哮喘组,利用腹腔注射卵清蛋白(OVA)和氢氧化铝混悬液致敏及雾化吸入OVA激发制备哮喘气道重塑模型,对照组应用生理盐水替代。两组分别在雾化2周、4周及8周后的24 h内随机处死8只小鼠,左肺组织病理切片观察肺气道重塑程度;流式细胞仪测定脾组织中Th17、CD4+CD25+Treg细胞占CD4+T细胞的百分比。结果随着激发时间的延长,哮喘组支气管总管壁面积(Wat/Pbm)及支气管平滑肌面积(Wam/Pbm)逐渐增厚(P0.01);脾组织细胞悬液中Th17细胞水平逐渐升高,与气道重塑的程度呈正相关(P0.01),而CD4+CD25+Treg细胞水平逐渐降低,与气道重塑程度均呈负相关(P0.01)。结论哮喘小鼠气道重塑是动态变化的过程,激发的时间越长,气道重塑越严重,Th17细胞表达越高,CD4+CD25+Treg细胞表达越低,两者间免疫失衡可能是哮喘气道重塑发生的重要因素之一。     

糖皮质激素对哮喘小鼠CD4+CD25+调节性T细胞的作用

目的：建立哮喘小鼠动物模型并给予吸入糖皮质激素治疗,通过分析CD4+CD25+调节性T细胞及相关细胞因子在哮喘发病中的变化情况,以及观察糖皮质激素治疗对该细胞的影响和干预作用,探讨哮喘发作的新的免疫机制。方法：分别制备哮喘组（OVA）,哮喘吸入激素治疗组（OVA/GC）及对照组（NS）动物模型。所有小鼠于末次激发后24 h,取右肺中叶标本作病理切片,观察炎症改变;同时收集外周抗凝血及肺组织细胞悬液,通过流式细胞仪及酶联免疫吸附试验（ELISA）测定CD4+CD25+调节性T细胞占CD4+ T细胞的百分比和血浆中IL-10和TGF-β1水平。结果：①哮喘小鼠外周血及肺组织细胞悬液中CD4+CD25+调节性T细胞百分率明显降低（P<0.01）,吸入糖皮质激素治疗后CD4+CD25+调节性T细胞百分率明显升高（P<0.01）。②IL-10在哮喘组较对照组明显降低（P<0.01）,糖皮质激素治疗组IL-10明显升高（P<0.01）。③TGF-β1在哮喘小鼠较对照组明显降低（P<0.01）,吸入糖皮质激素治疗后TGF-β1有所升高,但差异无显著性。结论： ①哮喘小鼠CD4+CD25+调节性T细胞和IL-10,TGF-β1数量和分泌水平降低,尤其是肺部CD4+CD25+调节性T细胞不能有效聚集,导致全身和局部对炎症反应的抑制作用减弱,可能是导致哮喘发生的原因之一。②糖皮质激素可通过增加CD4+CD25+调节性T细胞及IL-10数量和分泌水平,增强其免疫抑制功能而发挥治疗作用。③外周血和肺部CD4+CD25+调节性T细胞百分率变化具有一致性,监测外周血CD4+CD25+调节性T细胞变化情况可以了解肺部变化趋势。     

CD4~+CD25~+调节性T细胞及其转录因子FoxP3在儿童过敏性紫癜发病机制中的作用

目的探讨CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)及其转录因子FoxP3在儿童过敏性紫癜(HSP)发病机制中的作用。方法研究对象为我院儿科2009年2月-2010年2月收治的急性期HSP患儿46例(HSP组)以及健康对照儿童30例(对照组)。采用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法检测外周血单个核细胞FoxP3 mRNA的表达。运用流式细胞术检测外周血中CD4+CD25+Treg的表达。结果 HSP组患儿外周血单个核细胞FoxP3 mRNA相对表达水平(32.17±23.04)低于对照组(147.91±99.15)(P<0.01)。CD4+CD25+Treg占淋巴细胞比例HSP组[(5.34±2.51)%]低于对照组[(7.85±1.97)%],两组比较差异有显著性(P﹤0.01)。CD4+CD25+Treg与FoxP3 mRNA的表达呈正相关(r=0.502,P=0.01)。结论 HSP患儿急性期存在CD4+CD25+Treg的表达降低,其特异性的转录因子FoxP3 mRNA表达下调。Treg的减少以及由此引发的免疫抑制效应不足,可能是HSP急性期免疫失衡的重要原因之一。     

癫癎患儿外周血中调节性T细胞的变化及其临床意义

目的：研究CD4+ CD25+ Foxp3+ 调节性T细胞（Treg细胞）在癫癎患儿外周血的表达水平,探讨其在癫癎发病机制中的作用。方法：采用流式细胞术分别检测41例癫癎患儿和38例健康儿童外周血Treg细胞占CD4+ T细胞的比例,及CD4+ T细胞、CD8+ T细胞、自然杀伤细胞（NK）、B细胞分别占淋巴细胞的比例。结果：癫癎组患儿外周血Treg细胞比例、CD4+ T细胞比例、CD4+ /CD8+ 比值分别为（2.4±0.5）%、（35±5）%、1.32±0.24,较对照组的（6.1±1.2）%、（38±4）%、1.60±0.24显著降低（P<0.05）;而癫癎组CD8+ T细胞比例、NK细胞比例、B淋巴细胞比例分别为（27±3）%、（11.1±5.1）%、（24±9）%,较对照组的（24±3）%、（8.5±1.9）%、(16±5)%显著升高（P<0.05）。结论：癫癎患儿外周血中存在 Treg 细胞比例异常,提示免疫机制可能参与了癫癎的发生和发展。     

哮喘患儿CD4+CD25+T细胞FoxP3表达的意义

目的研究表达FoxP3的CD4^＋ CD25^＋调节性T细胞在哮喘儿童外周血中的比例改变,探讨其在发病机制中的意义。方法采用细胞内染色的流式细胞术及定量PCR方法,分别在蛋白质和mRNA水平检测哮喘患儿外周血FoxP3表达,并与健康对照组进行比较。结果哮喘患儿CD4和CD25双阳性细胞所占比例与健康对照组比较无明显差异,而CD4^＋ CD25^high和CD4^＋ CD25^＋ FoxP3＋细胞明显低于对照组（Pa〈0.05）。FoxP3 mRNA表达水平与蛋白质表达水平变化一致。结论哮喘患儿CD4^＋ CD25^＋ FoxP3＋调节性T细胞明显减少,可能与哮喘的发病机制有关。     

手足口病患儿Th17、CD4+CD25+调节性T细胞的变化及意义

目的 研究手足口病患儿外周血Th17、CD4+CD25+调节性T细胞（CD4+CD25+Treg）的变化。方法 以89例手足口病患儿为研究对象,其中普通型55例,重型34例,另选取30例健康儿童为对照组;采用流式细胞术检测各组外周血CD4+CD25+Treg细胞、Th17细胞在CD4+T淋巴细胞中所占的比例;采用ELISA法检测IL-10、TGF-β和IL-17在各组的表达水平。结果 与对照组相比,重型和普通型手足口病患儿的Th17细胞、IL-17水平均明显升高（均P<0.05）,而CD4+CD25+Treg细胞、IL-10、TGF-β水平则显著下降（均P<0.05）,且手足口病患儿外周血Th17、IL-17水平随病情严重而增高,而CD4+CD25+Treg细胞、IL-10、TGF-β水平随病情严重而降低。结论 手足口病患儿外周血Th17细胞应答增强,而CD4+CD25+Treg细胞应答降低,Th17细胞与CD4+CD25+Treg细胞比例失衡可能在手足口病发病机制中具有重要作用。     

哮喘患儿CD4+CD25+调节性T细胞及IL-10和TGF-β1的变化

目的：通过测定和分析哮喘急性发作期与缓解期儿童外周血中CD4+CD25+调节性T淋巴细胞及其相关细胞因子白细胞介素-10（IL-10）和转化生长因子-β（TGF-β1）在哮喘发病中的变化情况,探讨哮喘发作的新的免疫机制。方法：分别采集74例哮喘发作期和28例哮喘缓解期患儿及20例健康儿童外周静脉血,通过流式细胞仪分析及酶联免疫吸附试验（ELISA）测定CD4+CD25+调节性T细胞占CD4+T细胞的百分比和血浆中IL-10和TGF-β1水平。结果：①哮喘发作期患儿外周血中CD4+CD25+调节性T细胞百分率及IL-10水平较缓解期及对照组明显降低（P<0.01）,而哮喘缓解期明显升高接近正常水平; ②哮喘急性发作期患儿TGF-β1水平较缓解期及对照组明显升高（P<0.05）。哮喘缓解期患儿TGF-β1水平明显降低,仍高于对照组水平; ③哮喘发作期、缓解期及对照组各组之间CD4+CD25+T细胞百分率与IL-10、TGF-β1无相关性（P>0.05）。结论：哮喘发作期患儿CD4+CD25+调节性T细胞和IL-10数量和分泌水平降低、TGF-β1水平增高,导致了全身和局部对炎症反应的抑制作用减弱,可能是导致哮喘发作的原因之一。［中国当代儿科杂志,2009,11（10）：829-832］     

CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞与IL-33在儿童哮喘发病机制中的作用

目的 探讨CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(Treg)与IL-33在儿童哮喘发病中的作用.方法 采用流式细胞仪检测45例哮喘患儿(哮喘组)、50例呼吸道合胞病毒感染喘息患儿(喘息组)及40例健康儿童(对照组)外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞百分比,采用ELISA法检测各组外周血血清IFN-γ、IL-4、IL-5及IL-33浓度,进行比较分析.结果 哮喘组患儿体内CD4+CD25+Foxp3+Treg 水平较喘息组及对照组均降低(P<0.05);哮喘组患儿体内IL-33水平较喘息组及对照组均升高(P<0.05),哮喘组患儿体内CD4+CD25+Foxp3+Treg与IL-33呈负相关(r=-0.156,P<0.01).结论 在哮喘患儿发病机制中,CD4+CD25+Foxp3+Treg与IL-33可能存在相互作用.     

CD4+CD25high+CD127low调节性T 细胞在毛细支气管炎患儿外周血中的表达改变及其临床意义

目的：探讨CD4+CD25high+CD127low调节性T 细胞（regulatory T cell, Treg）在毛细支气管炎患儿外周血中的数量变化及其临床意义。方法：随机选取31例2岁以下毛细支气管炎患儿作为毛细支气管炎组,同期住院的同年龄段支气管肺炎患儿25例和患有疝气、肾结石等非感染性疾病患儿25例分别作为支气管肺炎组和对照组,采用流式细胞术检测3组患儿外周血中CD4+CD25high+CD127lowTreg 占CD4+T 细胞百分比。结果：毛细支气管炎组患儿外周血中CD4+CD25high+CD127lowTreg 占总CD4+T 细胞的8.0%±2.1%,低于支气管肺炎组（9.6%±2.6%）及对照组（11.3%±2.9%）,差异有统计学意义（P<0.05）。结论：毛细支气管炎患儿外周血CD4+CD25high+CD127lowTreg水平可能是一个较好的反映毛细支气管炎患儿免疫功能状态的参考指标,其在外周血中数量下降提示Treg细胞可能参与毛细支气管炎的发生发展。     

孟鲁司特钠对哮喘小鼠气道重塑及Th17/CD4~+CD25~+Treg表达的影响

目的探讨白三烯受体拮抗剂孟鲁司特钠干预哮喘小鼠后气道重塑及Th17细胞/CD4~+CD25~+调节性T细胞(CD4~+CD25~+Treg)表达的动态变化及其相关性。方法将Balb/c小鼠随机分成空白组、哮喘组、孟鲁司特钠组,每组经腹腔注射鸡卵清蛋白(OVA)和氢氧化铝混悬液致敏并雾化吸入2.5%OVA以制备哮喘气道重塑模型,空白组以生理盐水替代;孟鲁司特钠组雾化前给予孟鲁司特钠混悬液灌胃,空白组及哮喘组以生理盐水代替。3组分别在雾化2周、4周及8周后的24 h内随机处死8只小鼠。肺组织病理切片观察气道重塑程度;流式细胞技术检测脾组织中Th17、CD4~+CD25~+Treg细胞占CD4~+T细胞百分比。结果各时间点哮喘组和孟鲁司特钠组支气管总管壁厚度、平滑肌厚度均高于空白组(P0.05),干预8周时孟鲁司特钠组较哮喘组上述变化明显减轻(P0.05)。与空白组比较,各时间点哮喘组和孟鲁司特钠组均显示Th17细胞数增加,与气道重塑呈正相关(P0.05);而CD4~+CD25~+Treg细胞数逐渐降低,与气道重塑呈负相关(P0.05)。干预8周时孟鲁司特钠组与哮喘组比较,Th17细胞数显著下降(P0.05);而CD4~+CD25~+Treg细胞数明显增加(P0.05)。结论孟鲁司特钠干预哮喘小鼠后能减轻气道重塑的发生,且随着用药时间延长,改善越明显;机制可能是通过改善哮喘小鼠体内Th17/CD4~+CD25~+Treg的免疫紊乱,抑制气道炎症反应从而减轻或延缓气道重塑来起作用的。     

脂肪间充质干细胞及非甲基化胞嘧啶鸟嘌呤核苷酸对食物过敏幼鼠外周血中CD4~+CD25~+Treg的影响

目的观察脂肪间充质干细胞(ADSC)、非甲基化胞嘧啶鸟嘌呤核苷酸(CpG-ODN)对食物过敏幼鼠外周血中CD4~+CD25~+调节性T细胞(CD4~+CD25~+Treg)的表达水平及免疫干预作用。方法将40只BALB/c雌性小鼠随机分为对照组、过敏组、ADSC治疗组(ADSC组)和非甲基化CpG-ODN治疗组(CpG-ODN组),每组10只;通过卵清蛋白(OVA)腹腔注射基础致敏和灌胃激发致敏建立小鼠食物过敏模型;对照组给予等量生理盐水替代;ADSC组在激发致敏前后两个时间点分别给予腹腔注射ADSC(1×10~6个/只);CpG-ODN组在每次灌胃激发前1 h给予腹腔注射非甲基化CpG-ODN(40μg/只)溶液。模型成功建立后对各组小鼠进行过敏症状评分;酶联免疫吸附法检测各组小鼠血清中OVA-IgE水平;流式细胞仪检测小鼠外周血中CD4~+CD25~+Treg水平;取各组小鼠空肠行苏木精-伊红染色,进行病理分析。结果过敏组过敏症状评分及血清中OVA-IgE水平均高于对照组(P0.05),ADSC组、CpG-ODN组过敏症状评分及血清中OVAIg E水平比较差异均无统计学意义(P0.05),但均低于过敏组,高于对照组(P0.01)。过敏组外周血中CD4~+CD25~+Treg水平低于对照组(P0.05),ADSC组、CpG-ODN组外周血中CD4~+CD25~+Treg水平均高于过敏组(P0.05),且与对照组比较及两组间比较差异均无统计学意义(P0.05)。病理结果显示过敏组空肠黏膜层绒毛结构破坏、水肿,大量的嗜酸性粒细胞及淋巴细胞浸润;ADSC组和CpG-ODN组空肠黏膜层绒毛结构部分破坏、无明显水肿,有少量嗜酸性粒细胞及淋巴细胞浸润。结论 ADSC和非甲基化CpG-ODN干预对食物过敏均有一定的治疗效果;均可提高食物过敏幼鼠体内CD4~+CD25~+Treg水平,同时降低OVA-IgE的表达水平,与诱导免疫耐受有一定的关联作用,且两种干预效果相当,但具体作用机制仍需要进一步探究。     

CD4+CXCR5+Tfh细胞比例及其调控因素变化对哮喘患儿的影响

目的 探讨哮喘患儿外周血滤泡样辅助性T细胞(CD4+CXCR5+Tfh细胞)比例及其转录调控因子BCL-6、BLIMP-1的表达变化.方法 依据病情将64例哮喘患儿分为哮喘急性期组(n=36)和哮喘缓解期组(n=28),另选取同期在我院行健康体检儿童25例为对照组.流式细胞术检测各组外周血CD4+CXCR5+Tfh细胞数量;实时荧光定量 PCR仪检测各组转录调控因子BCL-6、BLIMP-1 mRNA表达;双抗夹心ELISA法检测血浆总IgE、IL-2、IL-6 、IL-21浓度水平.结果 哮喘急性期组患儿CD4+CXCR5+Tfh细胞比例明显高于对照组及哮喘缓解期组(PPPPPP+CXCR5+Tfh细胞数量呈正相关(分别r=0.76、0.46,均Pr=-0.68, P结论 外周血CD4+CXCR5+Tfh细胞比例增高可能参与了儿童哮喘的急性发病过程,转录调控因子BCL-6 及BLIMP-1 mRNA的异常表达,以及局部微环境中总IgE和细胞因子IL-2、IL-6、IL-21的浓度改变可能与哮喘患儿CD4+CXCR5+Tfh细胞分化异常有关.     

肾母细胞瘤患儿外周血调节性T细胞和自然杀伤T细胞的表达研究

目的 研究肾母细胞瘤患儿外周血CD4+CD25+CD127low 调节性T细胞（Treg）和CD3+CD16+CD56+自然杀伤T细胞（NKT）的表达变化,初步探讨发生改变的原因及其临床意义。方法 选取2015年11月至2016年7月就诊的21例肾母细胞瘤患儿作为病例组,21例于本院体检的同年龄段健康儿童为健康对照组,采用流式细胞术检测两组儿童外周血中 CD4+CD25+CD127low T细胞占CD4+T细胞百分比和CD3+CD16+CD56+T细胞占CD3+T细胞百分比,分别代表Treg水平和NKT水平。结果 病例组肾母细胞瘤患儿外周血Treg水平低于健康对照组（P < 0.05）;病例组肾母细胞瘤患儿外周血NKT水平高于健康对照组（P < 0.05）。结论 Treg和NKT水平变化与肾母细胞瘤的发生与发展有关,Treg和NKT水平可能是反映肾母细胞瘤患儿免疫功能状态的较好指标。