小干扰RNA在小鼠体内的分布及对呼吸道合胞病毒的干扰效果

目的 观察小干扰RNA( siRNA) 7816在小鼠体内的分布及吸收情况,探讨siRNA7816对呼吸道合胞病毒(RSV)感染的抑制效果.方法 将5’端带有三氢吲哚氰( cy3)荧光基团的siRNA7816,通过滴鼻的方法散布到小鼠的肺组织中,并于滴鼻后的12h将小鼠处死,无菌条件下取小鼠肺组织、肝脏组织及肠组织,并迅速行组织冷冻切片,荧光显微镜下观察siRNA7816在Balb/c小鼠体内的分布情况.将48只Balb/c小鼠随机分为6组,每组8只,各组均予以1010 pfu·L-1的RSVA2标准株病毒行滴鼻处理,并于感染后的第2天分别予治疗组小鼠0.5 nmol、1.0 nmol及2.0 nmol的治疗量siRNA7816,阴性对照组则予以1.0 nmol的阴性siRNA,PBS组予PBS滴鼻处理,空白对照组不予任何处理.于感染后的第3天将小鼠处死,并于无菌条件下取小鼠肺组织,通过光学显微镜观察小鼠肺组织的病理改变和免疫组织化学检测光密度值的方法,了解siRNA7816对RSV病毒的抑制效果.结果 siRNA7816通过滴鼻的方法能够顺利到达Balb/c小鼠肺部,并分布于支气管、肺泡等处,且分布水平较高;病理结果显示siRNA7816能显著减轻RSV感染小鼠的炎症,免疫组织化学分析结果显示siRNA7816对RSV病毒蛋白的表达有抑制作用,与PBS组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 采用滴鼻的方法可以将siRNA投送到小鼠肺组织的有效部位并形成一定浓度,siRNA7816对RSV的复制有一定抑制作用.     

基于非靶向代谢组学技术探究喂养方式对剖宫产婴儿粪便中代谢物的影响

目的探讨母乳和混合喂养对剖宫产婴儿粪便代谢物的影响。方法横断面研究。2021年秋季与2022年冬季分别在西安市南、北两家母婴护理机构收集了23例1月龄健康剖宫产婴儿粪便样本, 将样品分为母乳喂养组(11例)和混合喂养组(12例)。基于非靶向代谢组学方法, 借助气相色谱-质谱联用技术, 探索不同喂养方式下剖宫产婴儿粪便代谢产物的变化情况, 利用非参数Mann-Whitney U检验方法筛选差异代谢物, 并对差异代谢产物进行代谢通路分析。结果共定性出155种代谢物, 包括糖及糖类衍生物57种, 脂肪酸34种, 有机酸25种, 氨基酸22种, 酯类8种, 核苷4种, 维生素3种以及2种其他物质。通过对差异代谢物的相对含量进行分析, 发现母乳喂养组中部分糖及糖的衍生物含量较高, 而混合喂养组中氨基酸、有机酸及脂肪酸含量较高。通过对差异代谢物的代谢通路进行分析, 共获得28条代谢通路, 其中丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢, 缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸代谢, 精氨酸代谢及柠檬酸循环(TCA循环)等代谢通路对婴儿健康有一定的影响。结论喂养方式对剖宫产婴儿粪便中的代谢物存在影响, 且混合喂养可能在一定程度...     

糖皮质激素对呼吸道合胞病毒反复感染小鼠肺组织病理改变的影响

目的探讨地塞米松(Dex)对呼吸道合胞病毒(RSV)反复感染小鼠肺病理改变的影响 .方法通过RSV两次感染小鼠,用光镜、电镜观察肺组织形态,对RSV肺炎 +地塞米松(Dex)处理组及肺炎对照组进行对比研究.结果①首次感染RSV 肺炎组小鼠肺泡壁破坏显著,胞质内有较多RSV颗粒;肺间质淋巴细胞浸润明显,肺泡壁增厚,第7d达高峰,第9d后逐渐好转.Dex组肺泡壁破坏轻,RSV颗粒存在时间长;细胞浸润等炎症反应第9d达高峰,第12d无缓解.②再次感染RSV鼠,Dex组及对照组较首次感染有早而重的肺泡炎症.但Dex组较对照组炎症反应持续时间长,尤其在第12d时Ⅱ级以上炎症仍占6 7%,胞质内有RSV颗粒.对照组再次感染肺泡壁的损害较首次轻,无RSV颗粒,炎症反应重, 恢复快.结论 Dex对RSV首次及再次感染鼠均有减轻炎症反应的作用,但使炎症高峰期推迟,病毒清除能力减低,病程明显延长.RSV肺炎治疗中应尽量减少使用糖皮质激素.     

呼吸道合胞病毒感染对哮喘小鼠RANTES表达的影响

目的研究呼吸道合胞病毒(RSV)感染对哮喘小鼠RANTES(regulated upon activation normal T cellexpressed and secreted)生成的影响。方法将BALB/c小鼠分为对照组、哮喘组、RSV感染组和RSV感染哮喘组4组,每组各8只。先采用卵清白蛋白致敏法制作小鼠哮喘模型,随后以RSV感染小鼠,RSV感染后24 h处死小鼠。检测小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中RANTES及IFN-γ的浓度,并计数炎性细胞数。结果 RSV感染组和对照组,RSV感染哮喘组和哮喘组小鼠之间,BALF中的RANTES浓度差异均有统计学意义(P均<0.05);而对照组和哮喘组,RSV感染组和RSV感染哮喘组小鼠之间的RANTES浓度差异则无统计学意义(P均>0.05)。各组小鼠BALF中的IFN-γ浓度差异无统计学意义。哮喘组、RSV感染组、RSV感染哮喘组小鼠BALF中的各种炎性细胞计数均较对照组升高,差异均有统计学意义(P<0.05),哮喘小鼠以嗜酸性粒细胞增高为主,而RSV感染小鼠以中性粒细胞为主。结论感染RSV可使小鼠RANTES的表达增加,但哮喘未能使小鼠RANTES表达增加,提示RANTES增加可能与RSV感染有关,而与哮喘状态无关。     

Effects of respiratory syncytial virus infection on RANTES expression in murine model of asthma

目的 研究呼吸道合胞病毒(RSV)感染对哮喘小鼠RANTES(regulated upon activation normal T cell expressed and secreted)生成的影响.方法 将BALB/c小鼠分为对照组、哮喘组、RSV感染组和RSV感染哮喘组4组,每组各8只.先采用卵清白蛋白致敏法制作小鼠哮喘模型,随后以RSV感染小鼠,RSV感染后24 h处死小鼠.检测小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中RANTES及IFN-γ的浓度,并计数炎性细胞数.结果 RSV感染组和对照组,RSV感染哮喘组和哮喘组小鼠之间,BALF中的RANTES浓度差异均有统计学意义(P均<0.05);而对照组和哮喘组,RSV感染组和RSV感染哮喘组小鼠之间的RANTES浓度差异则无统计学意义(P均>0.05).各组小鼠BALF中的IFN-γ浓度差异无统计学意义.哮喘组、RSV感染组、RSV感染哮喘组小鼠BALF中的各种炎性细胞计数均较对照组升高,差异均有统计学意义(P<0.05),哮喘小鼠以嗜酸性粒细胞增高为主,而RSV感染小鼠以中性粒细胞为主.结论 感染RSV可使小鼠RANTES的表达增加,但哮喘未能使小鼠RANTES表达增加.提示RANTES增加可能与RSV感染有关,而与哮喘状态无关.     

黄芪对幼兔缺血再灌注后肠黏膜细胞凋亡的影响及对肠黏膜屏障的保护

目的 研究黄芪对幼兔肠缺血再灌注后肠黏膜细胞凋亡的影响及肠黏膜屏障的保护作用.方法 雄性幼兔20只,分假手术组、肠缺血再灌注组(模型组)、黄芪组、生理盐水组(对照组);黄芪组在手术前7天予黄芪腹腔注射6 mg/(kg·d),对照组每天予等量生理盐水.在手术时制作肠缺血再灌注模型,观察小肠组织及血浆超氧化物歧化酶(SOD)活性、肠黏膜细胞凋亡指数、肠黏膜形态损伤情况及黄芪对其改变的影响.结果 肠缺血再灌注后血浆及小肠组织SOD活性明显降低,肠黏膜细胞凋亡指数明显增加,小肠黏膜形态及肠黏膜屏障功能损害加重,黄芪能显著改善上述改变.结论 黄芪对幼兔肠缺血再灌注肠黏膜屏障损伤有明显的保护作用.     

黄芪对幼兔肠缺血-再灌注肠黏膜屏障的保护作用

目的研究黄芪对幼兔肠缺血再灌注(IIR)肠黏膜屏障的保护作用。方法雄性幼兔20只。随机分成假手术组、IIR组(模型组)、黄芪组、生理盐水组(对照组)。黄芪组及对照组手术前7 d分别予黄芪6 mg/(kg.d)(腹腔注射)和生理盐水。观察幼兔缺血再灌注后小肠组织及血浆超氧化物歧化物(SOD)活性、肠黏膜形态损伤程度及黄芪对其损伤的作用。结果IIR后血浆及小肠组织SOD活性明显降低,小肠黏膜形态及肠黏膜屏障功能损害加重,黄芪能显著提高血浆及小肠组织SOD活性及减轻肠黏膜形态损伤。结论黄芪对幼兔IIR肠黏膜屏障损伤有明显的保护作用。     

IL-1β诱导NF-κB通路对肠三叶因子治疗坏死性小肠结肠炎的影响及意义

目的 研究肠三叶因子(ITF)对坏死性小肠结肠炎(NEC)新生大鼠的肠黏膜中白细胞介素1β(IL-1β)含量的影响,观察ITF对NEC新生大鼠中核因子-κB(NF-κB)的活化及胞内分布规律,探讨其在NEC发病机制中的作用.方法 50只新生Wistar大鼠随机分为5组(正常对照组、正常对照给予ITF组、NEC模型组、NEC给予生理盐水组、NEC给子ITF组),每组10只,并于NEC模型后,母鼠身边喂养3 d.第四天处死并取回盲部组织1～2 cm固定、包埋、切片、HE染色,观察组织学变化及免疫组化表现NF-κB的表达,其他肠组织制备组织匀浆,取上清液检测IL-1β含量.结果 NEC新生大鼠模型中损伤肠组织IL-1β含量明显增多,NF-κB表达增强.ITF治疗组能明显的抑制NEC新生大鼠肠组织IL-1β的产生和NF-κB(P65)的表达.结论 NF-κB信号通路可能参与了NEC发病过程,并起着信号转导作用;ITF通过抑制NF-κB信号通路,减轻小肠结肠组织炎症反应,起到保护肠黏膜的作用.     

经鼻重组腺相关病毒T-bet基因转染对呼吸道合胞病毒感染小鼠呼吸道炎症的影响

目的 观察携带T-bet基因的重组腺相关病毒(rAAV-T-bet)转染对呼吸道合胞病毒(RSV)感染模型小鼠呼吸道炎症的影响.方法 健康6～8周龄Balb/c小鼠40只.按随机数字表法分为4组:正常对照组(A组)、RSV感染模型组(B组)、模型/对照病毒rAAV载体介导的增强型绿色荧光蛋白(rAAV-eGFP)干预组(C组)及模型/rAAV-T-bet干预组(D组),每组10只.将B组、C组和D组小鼠用滴度为1.26×1010 PFU·L-1的RSV液滴鼻,每只100 μL;A组用等量人喉癌上皮细胞(Hep-2细胞)培养上清液代替RSV液.于RSV接种第5天,再次麻醉小鼠,A组和B组经鼻滴入293细胞培养上清液;C组经鼻滴入293细胞包装的rAAV-eGFP对照病毒液,D组经鼻滴入293细胞包装的rAAV-T-bet.7 d后处死小鼠,检测各组小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞成分及IL-4和γ干扰素(IFN-γ)水平,并观察其肺组织病理学变化.结果 1.B组小鼠BALF中细胞总数和淋巴细胞计数百分比分别为(43.91±10.41)×109L-1、(65.15±1.88)%,A组分别为(14.52±3.57)×109L-1、(25.79±1.07)%,A组与B组比较差异均有统计学意义(Pa<0.05);D 组小鼠BALF中细胞总数和淋巴细胞计数百分比分别为(24.84±4.35)×109L-1、(29.48±11.97)%,与B组、C组比较差异均有统计学意义(Pa<0.05).2.B组小鼠BALF中IL-4和IFN-γ水平分别为(74.32±10.06) ng·L-1、(89.36±20.38) ng·L-1,A组分别为(6.01±1.02) ng·L-1、(177.32±18.16) ng·L-1,A组与B组比较差异均有统计学意义(Pa<0.05);D组分别为(49.14±7.59) ng·L-1、(145.28±43.52) ng·L-1,与B组、C组比较差异均有统计学意义(Pa<0.05).3.A组小鼠呼吸道无明显炎症改变;B组和C组小鼠小支气管、血管黏膜下和周围肺组织有明显炎性细胞浸润,血管壁明显水肿;D组小鼠呼吸道炎症明显减轻.结论 T-bet基因转染能改善RSV感染模型小鼠呼吸道内细胞因子IL-4和IFN-γ异常表达,同时对淋巴细胞在肺内聚集、肺组织炎症有一定抑制作用.     

呼吸道合胞病毒及其他病毒性肺炎患儿血淋巴细胞亚群的变化

目的了解不同病原所致病毒性肺炎时血淋巴细胞亚群的改变。方法对2002~2004年确诊为病毒性肺炎的住院患儿,采用流式细胞仪对其急性期血淋巴细胞亚群进行检测。其中呼吸道合胞病毒(RSV)性肺炎组34例,非RSV肺炎组23例。同时与30例健康对照组比较。结果非RSV组Th1细胞百分率为[(15.89±7.88)%],RSV肺炎组为[(11.76±7.31)%],均较对照组显著增高(P=0.011,0);两者亦有显著差异(P=0.026);Th1/Th2在非RSV肺炎组较RSV肺炎组及对照组均明显增高,有非常显著差异(P=0.006,0)。结论病毒性肺炎时呈现Th1应答优势,并以非RSV感染最为明显。与非RSV肺炎相比,RSV感染具有潜在的相对Th2反应倾向。     

潘生丁对呼吸道合胞病毒肺炎治疗作用的实验研究

目的探讨潘生丁（ＤＰＭ）对呼吸道合胞病毒（ＲＳＶ）肺炎的治疗作用。方法采用光镜、电镜观察肺组织形态等方法，对ＲＳＶ肺炎组与ＲＳＶ肺炎＋ＤＰＭ处理组的小鼠进行了对比观察。结果ＤＰＭ处理组小鼠肺组织病毒滴度明显低于肺炎组（Ｐ＜０．０１）；ＲＳＶ肺炎组小鼠肺间质较多淋巴细胞浸润，肺泡隔重度增宽和实变，毛细血管严重瘀血、血小板聚集和血栓形成；巨噬细胞溶酶体少，残余体堆积；ＤＰＭ处理组小鼠肺间质浸润淋巴细胞少，肺泡隔轻、中度增宽，无实变；毛细血管无瘀血、血小板聚集和血栓形成；巨噬细胞内大量溶酶体，吞噬活跃。结论ＤＰＭ能抗ＲＳＶ肺炎血管内血小板聚集和血栓形成，减少Ｔ淋巴细胞增生和浸润，提高巨噬细胞吞噬病毒能力     

The metabolic effects of cold exposure in the newborn rabbit.

Blood glucose, lactate, plasma free fatty acid and plasma and tissue individual free amino acid levels were followed in newborn rabbits exposed for 10 h to an environmental temperature of 25 degrees C. Severe hypothermia developed with an increase of blood lactate and accumulation of total free amino acids in plasma and liver. Alanine, isoleucine, leucine, valine, phenylalanine, tyrosine, ornithine and taurine were elevated in the plasma; alanine and ornithine in the liver; leucine and isoleucine in the muscle.     

基于气相色谱-质谱技术的早产儿与足月儿血清代谢组学研究

目的 应用气相色谱-质谱方法分析早产儿血清代谢物特征,寻找早产儿血清中的特异性差异代谢物。方法 收集19例早产儿和20例足月儿生后未开始喂养时的血清标本,应用气相色谱-质谱联用仪检测血清代谢谱,分析早产儿血清中397种代谢产物的代谢特征。结果 喂养前早产儿血清代谢特征与足月儿差异显著。与足月儿相比,早产儿血清中O-膦酰苏氨酸、毛地黄黄酮、鞣酸、D-果糖-1,6-二磷酸等9种代谢物的变量权重值>2且P < 0.01,提示上述差异代谢物在早产儿与足月儿之间的区分度高。差异代谢物集中于ABC转运蛋白、β-丙氨酸、嘧啶等代谢通路中,且大部分差异代谢物与临床检验指标（白蛋白、总胆红素）之间存在相关性（P < 0.05）。结论 喂养前早产儿较足月儿血清代谢物差异明显。代谢组学对改善早产儿体内代谢紊乱、探寻早产儿代谢密切相关疾病有重要意义。     

新生儿全血细胞减少伴代谢异常

患儿,男,9d,急性起病,表现为咳嗽、气促、喂养困难、嗜睡、昏迷。辅助检查提示肺部感染、严重代谢性酸中毒、高血糖、高血氨、血象三系减少。为查明病因,进行了血液酯酰肉碱谱及尿液有机酸分析及基因诊断。结果发现：血异戊酰肉碱及尿异戊酰甘氨酸和3-羟基异戊酸显著升高,游离肉碱降低,提示异戊酸血症 （IVA）;基因检测提示第12号外显子纯合突变c.1208A > G （p.Tyr403Cys）,父母为杂合突变携带者。经低亮氨酸饮食、左卡尼汀等治疗后症状稍改善,但1周后患儿死亡。新生儿肺炎是新生儿常见感染,但可能是遗传代谢病患儿的诱发因素,因此对于肺炎起病的伴有难以解释的代谢异常患儿,应进行遗传代谢性疾病筛查。     

克隆测序鉴定流感病毒诱导小鼠急性肺炎模型

目的：结合RT-PCR病毒载量检测、克隆测序基因比对以及病理改变鉴定甲型流感病毒（influenza virus, IV）鼠肺适应株（FM1株）诱导的小鼠急性肺炎模型,为急性肺炎模型提供科学的鉴定方案。方法：以FM1株滴鼻诱导昆明小鼠急性肺炎,分别于第3、5、7天取小鼠肺脏,以RT-PCR法检测IV病毒载量,并通过质粒克隆测定cDNA序列;同时观察小鼠肺脏病理改变。结果：正常组小鼠肺组织的肺泡、肺泡囊和肺泡隔形态完整,周围血管未见炎症细胞浸润;模型组在感染IV后第3、5、7 天均见肺泡、肺泡囊、肺泡管、肺泡隔等结构破坏,肺泡间隔增厚,细支气管壁增厚,大量炎症细胞浸润,肺泡壁毛细血管扩张,可见大量红细胞。与正常组比较,模型组在不同时间点的病理变化程度均有显著性差异（P<0.01）。不同时间点模型组小鼠肺组织中均可检测到IV病毒核酸,且不同时间点小鼠肺组织的病变程度与病毒载量呈正相关（P<0.01）。经测序比对发现,IV感染小鼠肺组织中RT-PCR扩增产物与已知IV cDNA序列相应片段吻合度高达99.1%。结论：克隆测序基因比对法可鉴定FM1株诱导的小鼠急性肺炎模型。     

变应性气道反应与抗生素诱导的肠道菌群失调关系研究

目的建立抗生素所致肠道菌群失调小鼠模型,在此模型上用烟曲霉菌变应原滴鼻激发,探讨变应性气道反应和肠道菌群失调的关系。方法60只雌性BALB／c小鼠分为6组,每组10只。①抗生素1组：口服头孢哌酮7d,第7天给予50μl白色念珠菌1次;②对照1组：1—7d给予等量生理盐水代替头孢哌酮和白色念珠菌（①和②组于第8天断颈后取盲肠内容物做细菌和真菌培养计数）;③抗生素加激发组：前7天处理同抗生素1组,9、16d经鼻给予烟曲霉菌变应原50山;④抗生素2组：前7天处理同抗生素1组,9、16d经鼻给予50μl生理盐水;⑤激发组：前7天处理同对照1组,9、16d经鼻给予烟曲霉菌变应原50μl;⑥对照2组：前7天处理同对照1组,9、16d经鼻给予50μl生理盐水（③～⑥组于第19天检测肺部气道变应性）。结果①抗生素1组小鼠肠道内肠杆菌、肠球菌、双歧杆菌、乳酸杆菌减少,白色念珠菌增加,伴体重减少,粪便含水量增加,表明肠道菌群失调。②抗生素加激发组和激发组小鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）中细胞总数、淋巴细胞、中性粒细胞和嗜酸性粒细胞增加,尤以抗生素加激发组小鼠更为明显。③抗生素加激发组的BALF中IL4（45．35±2．36）ps／ml较对照2组（35．32±2．53）ps／ml增加,GATA-3转录因子mRNA表达水平（0．569±0．023）比对照2组（0．410±0．020）高,T—bet／GATA-3比值（0．578±0．021）较对照2组（0．804±0．035）降低。结论抗生素致肠道菌群失调小鼠经过烟曲霉菌变应原气道激发,可致Th2优势反应的气道变应性,提示抗生素致肠道菌群失调是诱发哮喘等变应性疾病发生的危险因素。     

Effect on the fetus of infusing a commercial amino acid preparation into a pregnant sheep

The common clinical practice of intravenous feeding of the pregnant woman poses the question of the effect on the fetus of such infusions. We have used the sheep as a model to study the change in fetal amino acid levels after a maternal infusion of Synthamin 13. The maternal plasma aminogram largely reflects the amino acid pattern in the infusate. However, in the fetal circulation only the branched chain amino acids (leucine, isoleucine and valine), phenylalanine and alanine rose significantly after infusion. Only leucine and isoleucine were observed to spill into the fetal urine. The results suggest that the ovine placenta selectively modifies the amino acid profile presented to the fetus when the maternal plasma aminogram is distorted. However, the fetus is not totally protected from changes in phenylalanine, which in high concentrations, is detrimental to normal development.     

Dextran sulfate sodium-induced inflammation is enhanced by intestinal epithelial cell chemokine expression in mice

Dextran sulfate sodium (DSS) induces an inflammatory bowel disease-like colitis in animals. To determine the contribution of epithelium to inflammation in the intestine, we examined the effects of DSS in transgenic mice that specifically secrete macrophage inflammatory protein-2 (MIP-2) from the intestinal epithelium. We first confirmed the production of MIP-2 from intestinal epithelial cells by Western blots in transgenic mice. MIP-2 transgenic mice were therefore an appropriate model to examine the role of epithelial cell chemokines in an inflammatory state induced by DSS. We then examined the neutrophil migration into the intestine and the effect of DSS on this migration by myeloperoxidase staining. There was an increase of myeloperoxidase-positive neutrophils in the intestine from wild-type and transgenic mice after the DSS treatment. Furthermore, the increase of neutrophils under stimulation with DSS was confirmed quantitatively by measuring specific tissue myeloperoxidase activities. It was significantly greater in DSS-treated MIP-2 transgenic mice than in wild-type mice in both the small intestine and colon. These results suggest that the inflammatory effects of DSS on both small intestine and colon are enhanced by MIP-2 secreted by epithelial cells in the transgenic mice. In conclusion, intestinal epithelial cells can act in concert with other inflammatory stimuli in maintaining inflammation.     

Suppression of granulopoietic progenitor cell proliferation by metabolites of the branched-chain amino acids

The effects of branched-chain amino acid metabolites on granulocyte-macrophage progenitor cell proliferation in marrow culture are reported. Isovalerate and propionate profoundly suppress granulopoiesis at both 3.2 and 6.4 mM concentrations, whereas methylmalonate and other metabolites suppress to a lesser degree. The parent branched-chain amino acids leucine, isoleucine, and valine do not suppress in vitro granulopoiesis at similar concentrations. Because the concentrations of the organic acids tested fall within the pathophysiologic ranges observed in patients with isovaleric, propionic, and methylmalonic acidemias, we suggest that elevated in vivo levels of isovalerate, propionate, and to a lesser degree methylmalonate are responsible for the neutropenia observed in these disorders.