用途广泛的紫球藻

紫球藻(Porphyridium spp.)是红藻门中唯一的单细胞类群;常常多个细胞聚生,外被粘质的鞘膜。自60年代以来,国外许多学者围绕紫球藻的分类、生态、营养、培养、食用等方面进行了研究。进入80年代,紫球藻在医药、化工等领域的应用非常广泛,不少国家怀着极大兴趣进行研究和开发。国内除1986年华汝成先生在其著作《单细胞藻类的培养与利用》中对国外紫球藻     

紫球藻生物活性物质及其应用

紫球藻（Porphyridium)是一种海水单细胞红藻，其在培养繁殖过程中，能够合成藻胆蛋白，高不饱和脂肪酸，硫酸酯多糖等生物活性物质，具有广阔的应用前景。本文综述了分类，形态，及其活性物质的生物应用研究。     

紫球藻(Porphyridium cruentum)原生质体分离研究

收集对数生长期的紫球藻细胞，经1%氯化苄预处理后，用1.8%纤维素酶和1.2%果胶酶组成的混合水解酶液（含0.6mol/LNaCl，pH7.2），在28℃下缓慢振荡酶水解细胞壁，4h后原生质体分离率比未预处理组提高74%，在最佳分离条件下的原生质体分离率高达56.4%，基本能满足原生质体融合的需求。     

紫球藻（Ｐorphyridium cruentum）原生质体分离研究

收集对数生长期的紫球藻细胞，经１％氯化苄预处理后，用１.８％纤维素酶的１.２％果胶酶组成的混合水解酶液（含０.６mol／Ｌ ＮaＣl,pＨ７.２），在２８℃下缓慢振荡酶水解细胞壁，４h后原生质体分离率比未预处理组提高７４％，在最佳分离条件下的原生质体分离率高达５６.４％，基本能满足原生质体融合的需求。     

紫球藻胞外多糖的分离及体外抗乙肝病毒活性的初步研究

目的 研究紫球藻胞外多糖的分离及体外抗乙肝病毒活性。方法 紫球藻培养液通过离心、浓缩、透析、醇析、脱蛋白、冷冻干燥等步骤从中分离出胞外多糖；采用ELISA和MTT法测定紫球藻胞外多糖对2215细胞分泌e抗原（HBeAg）的影响。结果 元素分析表明，胞外多糖舍N：0．82％、C：32．91％、H：6．19％；氨基酸分析表明，含有17种氨基酸，含量为2．49％。红外光谱和紫外光谱分析表明，所分离的胞外多糖具有多糖的特征吸收峰，糖环为吡喃环，舍有硫酸酯基团。该胞外多糖对2215细胞分泌的HBeAg有不同程度的抑制作用，其治疗指数（TI）大于2。结论 紫球藻胞外多糖在体外具有抗乙肝病毒作用。     

紫球藻的培养与多不饱和脂肪酸合成的研究进展

综述各种主要培养基、有机和无机碳氮源、磷源、维生素、O2等营养因子；温度、光照、特殊光源、pH值、盐度等环境物理因子；接种量、抗生素等其它因子对紫球藻生长及多不饱和脂肪酸合成的影响，特别提及不同生长时期和半连续培养方式等其它时空因素对该藻合成AA和EPA的促进或抑制效果。此外，介绍了以计算机在线控制和高自动化为主导的新型紫球藻光生物反应器的研制进展、分离纯化该藻AA和EPA的不同方法，并对未来的研究思路提出了设想，指出利用正交及优化实验等科学手段获取紫球藻培养及生产AA和EPA的最佳条件、设计更大规模和更高自动化控制程度的反应器以及发展新型高效分离提纯技术手段是未来研究的趋势。     

紫球藻多糖的提取和测定

本文用蒽酮法对紫球藻细胞和培养中的多糖分布和含量进行了测定。     

紫球藻对四氧嘧啶糖尿病小鼠血糖的调节

目的研究紫球藻对四氧嘧啶糖尿病小鼠的血糖水平及抗氧化能力的影响。方法用四氧嘧啶建立糖尿病小鼠模型,紫球藻藻粉600mg.kg-1和1200mg.kg-1灌胃给药,连续18d后,测定空腹12h血糖、血浆胆固醇、甘油三酯含量和SOD活性。结果与糖尿病模型组相比,两实验组小鼠的血糖显著降低(P<0.001);血浆甘油三酯水平呈下降趋势。1200mg.kg-1紫球藻给药组小鼠血浆SOD活性显著升高(P<0.01)。结论紫球藻能降低四氧嘧啶糖尿病小鼠血糖并呈现一定的抗氧化能力。     

胞红蛋白酵母表达载体构建与表达纯化

胞红蛋白是脊椎动物珠蛋白超家族的一员,具有重要的生物学功能,已在大肠杆菌中成功表达。酵母表达系统作为常用的真核表达系统,具有外源蛋白表达蛋白量大且活性高等优点。该研究通过PCR扩增技术获得胞红蛋白编码基因并通过DNA重组技术构建并鉴定了胞红蛋白毕赤酵母分泌型表达载体CYGB-pGAPZαA。将重组载体经单酶切线性化后通过电转化法转入毕赤酵母GS115,利用梯度浓度的Zeocin抗生素和PCR技术筛选得到阳性转化子。工程菌经发酵培养后,发酵上清液经镍柱分离得到较高纯度的目的蛋白,并经电泳等方法验证鉴定。     

A-40926混合物中B0组分的分离纯化

目的 开发一种高纯度A-40926混合物中B0组分(以下简称A-40926 B0)的分离纯化工艺。方法 采用中压色谱系统,以聚合物微球为载体,A-40926 B0的收率为指标,筛选聚合物微球的类型,优化洗脱条件。结果 型号为UniPS30-300的微球为最佳层析介质,上样量为10mg(每毫升填料),洗脱剂依次为体积分数30%,45%的乙醇溶液,流速为1.5BV/h(BV：层析柱体积);所得产品纯度大于95%,层析总收率大于75%。结论 此种高纯度A-40926 B0的分离纯化方法简单易行,收率稳定,适于工业化生产。     

替考拉宁的分离纯化

目的 优化替考拉宁纯化工艺,制备纯度高、满足欧洲药典标准的替考拉宁。方法 采用大孔树脂吸附、结晶等技术分离替考拉宁,结合二元液相色谱系统,以聚合物微球为载体,对填料的型号和洗脱条件进行优化,最终得到高质量替考拉宁样品。结果 PS30-300微球为最佳纯化介质,洗脱剂为65%甲醇-水,上样量为10mg/mL填料,洗脱流速为1.5~2.0BV/h柱体积时洗脱效果最佳。在此实验条件下产品纯度≥99%,纯化收率≥75%。结论     

替考拉宁的分离纯化

目的优化替考拉宁纯化工艺,制备纯度高、满足欧洲药典标准的替考拉宁。方法采用大孔树脂吸附、结晶等技术分离替考拉宁,结合二元液相色谱系统,以聚合物微球为载体,对填料的型号和洗脱条件进行优化,最终得到高质量替考拉宁样品。结果 PS30-300微球为最佳纯化介质,洗脱剂为65%甲醇-水,上样量为10mg/mL填料,洗脱流速为1.5～2.0BV/h柱体积时洗脱效果最佳。在此实验条件下产品纯度≥99%,纯化收率≥75%。结论该分离纯化方法简单,快速,易于操作,适于工业化生产。     

吡柔比星的分离与纯化

目的确定用硅胶柱层析纯化吡柔比星粗品的工艺条件。方法采用薄层层析-硅胶柱层析法考察不同展开剂的层析效果,最优洗脱剂为二氯甲烷-甲醇;以吡柔比星的回收率和平均含量为评价指标,考察了流速、进样量与层析柱再生条件对层析粗分和精分的影响。结果硅胶柱层析粗分吡柔比星的最佳工艺条件:以梯度洗脱方式洗脱,洗脱剂流速5.0mL.min-1,上样量16.6mg.mL-1柱体积,0.5g.L-1氢氧化钠溶液离线再生硅胶。吡柔比星质量分数经粗分后由原来的35.7%提高到90%左右,回收率为96.2%。硅胶柱层析精分吡柔比星的最佳工艺条件为洗脱剂二氯甲烷-甲醇比例为90∶10,流速3.5mL.min-1,上样量16.6mg.mL-1柱体积,甲醇再生3倍柱体积。吡柔比星质量分数经精分后由粗分的90%提高到99.6%左右,回收率为97.5%。结论硅胶柱层析纯化吡柔比星所得产品符合质量要求。     

制备高效液相色谱法分离纯化乌拉立肽的研究

目的 对乌拉立肽粗品纯化并制备符合纯度要求的乌拉立肽纯品.方法 采用C18 (H) ODS柱(30mm×250 mm,10μm);流动相A为0.1％甲酸-水溶液,流动相B为100％乙腈;检测波长215 nm;体积流量30 mL/min;进样量60 mg.结果 RP-HPLC一步纯化后得到乌拉立肽质量分数达到98％.通过多次样品收集和冷冻干燥,制备了高纯度的乌拉立肽.结论 建立了乌拉立肽的纯化工艺,制备出符合要求的乌拉立肽纯品.