老年鼠脑老化神经细胞凋亡及基因调控的研究

目的研究老年鼠脑老化神经细胞的凋亡及基因调控。方法用ＴＤＴ法及流式细胞仪观察不同鼠龄海马神经细胞凋亡及凋亡发生率，并用免疫组织化学检测ｂｃｌ－２、ｂｃｌ－ｘ１及ｂａｘ基因表达。结果老年组神经细胞在荧光显微镜下显示较典型的细胞凋亡特点，老年组海马神经细胞凋亡率与青年组比较有显著差异。老年鼠ｂｃｌ－２，ｂｃｌ－ｘ１表达下调，而ｂａｘ的表达量明显增加。结论脑老化过程中存在着以细胞凋亡形式的神经细胞的死亡。细胞凋亡的变化与基因的表达相一致     

甘肃党参水提物对衰老模型小鼠脑细胞凋亡及相关基因表达的影响

目的 研究甘肃党参水提物对衰老模型小鼠脑细胞凋亡及相关基因表达的影响,初步明确其延缓衰老的作用机制.方法 50只昆明种小鼠随即分为5组,分别为青年对照组,D-半乳糖衰老模型组及党参低、中、高剂量组; 采用D-半乳糖致亚急性衰老小鼠模型,测定各组小鼠各剂量胸腺指数和脾脏指数;流式细胞仪观察海马细胞凋亡的变化;免疫组化法检测Bcl-2基因在海马及皮质神经元中的表达.结果 甘肃党参水提取物与衰老模型组比较,小鼠胸腺、脾指数明显升高(P＜0.05);抑制脑细胞凋亡;使细胞凋亡抑制基因Bcl-2的表达上调,党参水提物各组海马结构及皮质神经元内Bcl-2表达阳性比衰老模型组强.结论 党参水提物可提高机体免疫功能,上调Bcl-2的表达,抑制神经细胞凋亡.     

五味子纳米醇提液对衰老小鼠脑神经细胞DNA损伤的保护作用

目的探讨衰老小鼠脑神经细胞凋亡、DNA损伤和bcl-2基因的表达及五味子醇提取液对上述指标的影响。方法D-半乳糖致衰小鼠为研究对象,观察五味子及其纳米微粒的醇提液对脑组织SOD活性、MDA含量、神经细胞凋亡及DNA损伤,bcl-2基因的表达情况。结果衰老小鼠脑神经细胞MDA含量、DNA损伤率和细胞凋亡率明显增加(P<0.01),SOD活性及bcl-2基因表达明显降低(P<0.05,P<0.01)。灌服五味子醇提取液可提高SOD活性,降低MDA含量,增强神经细胞DNA损伤的修复能力,减少凋亡细胞数,增加bcl-2基因表达;五味子纳米微粒醇提液疗效优于常规醇提液。结论五味子醇提取液对D-半乳糖致衰小鼠脑神经细胞具有保护作用。     

慢性氟中毒大鼠神经细胞凋亡的研究

目的 研究慢性氟中毒对神经细胞的作用机制,特别是氟中毒与细胞凋亡的关系。方法 采用末端标记法和流式细胞仪观察法,测定了慢性氟中毒鼠脑组织中神经细胞的凋亡情况。结果 ＴＵＮＥＬ检测显示,在大鼠慢性氟中毒模型中,可见到明显的ＤＡＢ着染的阳性凋亡细胞,而且这种表达具有选择性,仅出现在海马ＣＡ４区。流式细胞仪显示,正常脑组织中的神经细胞即可测得凋亡峰;慢性氟中毒组脑组织中的凋亡峰明显高于正常对照组,但不同     

肉苁蓉多糖对D-半乳糖致衰小鼠脑神经细胞的保护作用及机制

目的探讨肉苁蓉多糖对D-半乳糖致衰老小鼠脑神经细胞的保护作用及其机制。方法建立D-半乳糖致衰小鼠模型,观察肉苁蓉多糖对脑组织超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力、神经细胞凋亡及DNA损伤和凋亡相关基因Bcl-2的表达情况。结果衰老小鼠脑神经细胞MDA含量、DNA损伤率和细胞凋亡率明显增加(P0. 01),SOD活性、GSH-Px活力及Bcl-2基因表达明显降低(P0. 05)。灌服肉苁蓉多糖可提高SOD活性、GSH-Px活力,降低MDA含量,增强神经细胞DNA损伤的修复能力,减少凋亡细胞数,增加Bcl-2基因表达。结论肉苁蓉多糖对D-半乳糖致衰小鼠脑神经细胞具有保护作用。     

五味子纳米微粒水提液对半乳糖致衰老小鼠脑神经细胞保护作用的研究

目的 探讨五味子对衰老小鼠脑神经细胞的保护作用及其机制。方法 观察五味子及其纳米微粒水提液对D-半乳糖致衰小鼠脑组织SOD（超氧化物歧化酶）活性、MDA（丙二醛）含量；神经细胞凋亡及DNA损伤，凋亡相关基因bcl-2的表达情况。结果 衰老小鼠脑神经细胞MDA含量、DNA损伤率和细胞凋亡率明显增加（P〈0.01），SOD活性及bcl-2基因表达明显降低（P〈0.05，P〈0.01）。灌服五味子可提高SOD活性，降低MDA含量，增强神经细胞DNA损伤的修复能力，减少凋亡细胞数，增加bcl-2基因表达。且五味子纳米微粒水提液疗效优于常规剂型。结论 五味子对半乳糖致衰小鼠脑神经细胞具有保护作用。     

雷公藤内酯醇对AD模型大鼠海马神经细胞凋亡的影响

目的探讨雷公藤内酯醇(TP)对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠海马神经细胞凋亡及其相关蛋白表达的影响。方法健康雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组及用药组。模型组给予双侧海马各一次性注射凝聚态Aβ1-40,Morris水迷宫实验判断模型成功与否。对照组大鼠双侧海马注射等量生理盐水。用药组大鼠在模型制作成功后每日腹腔注射TP0.4mg/kg,共15d。应用流式细胞仪、TUNEL染色、透射电镜技术检测各组大鼠海马神经细胞凋亡的变化,免疫组织化学法检测各组大鼠海马神经细胞细胞色素C和Bcl-2蛋白表达的变化。结果用药组大鼠海马神经细胞凋亡率较模型组明显降低(P0.01),TUNEL染色阳性细胞数较模型组明显减少(P0.01);用药组大鼠海马细胞色素C阳性产物数和平均光密度均较模型组明显减少(P0.01),Bcl-2阳性细胞数和平均光密度均较模型组明显增加(P0.01)。结论 TP对AD模型大鼠海马神经细胞凋亡有抑制作用,其机制可能与TP增加AD模型大鼠海马神经细胞Bcl-2蛋白表达、减少细胞色素C的释放有关。     

黄芪对老龄小鼠神经细胞凋亡作用的研究

目的 研究黄芪对老龄小鼠脑神经细胞凋亡作用。方法 用TUNEL观察老年小鼠神经细胞凋亡率，并用免疫组织化学法检测相关基因表达，采用原子吸收法测定脑线粒体Ca^2 。以黄芪水煎剂灌胃老龄小鼠30d，观察黄芪对老年小鼠神经细胞凋亡作用的影响。结果 老龄小鼠有典型的凋亡特征，与黄芪比较细胞凋亡率有差异，老年鼠bcl-2表达下调。线粒体钙明显降低。结论 黄芪对老龄小鼠脑神经细胞凋亡有明显的抑制作用。     

高原低氧应激诱导大鼠海马CA1区神经元凋亡及其机制

目的探讨高原低氧应激诱导大鼠海马CA1区神经元凋亡及其机制。方法将48只Wistar大鼠随机分为低海拔组和高海拔组各24只,分别于海拔400m和4300m喂养30d后处死大鼠取海马组织：6只行硫堇染色及电镜观察CA1区神经细胞形态变化;6只行流式细胞仪检测神经元凋亡率;6只予比色法测定丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活性;6只采用免疫组织化学方法观察CA1区COX-2表达。结果硫堇染色示两组CA1区神经细胞形态基本一致;电镜显示高海拔组CA1区神经细胞形态、胞质内细胞器有明显损伤;高海拔组神经元凋亡率、MDA水平及COX-2表达均明显高于低海拔组（P均〈0.05）,SOD活性两组间相比无显著差异。结论高原低氧应激可诱导海马神经元凋亡,其机制可能为上调海马CA1区COX-2表达。     

老年鼠外周血淋巴细胞凋亡及细胞免疫功能变化的研究

目的　探讨老年鼠外周血淋巴细胞 (PBL)的凋亡及与细胞免疫功能变化的关系 ,为深入研究随增龄而发生的免疫功能变化提供实验依据。方法　采用 TUNEL法及流式细胞仪观察老年鼠 PBL凋亡 ;用免疫组化法检测 bcl- 2 ,bcl- xl,bax基因表达的变化 ;以淋巴细胞转化实验和NK杀伤实验判断淋巴细胞功能 ;用免疫荧光法测定外周血淋巴细胞亚群。结果　老年鼠外周血淋巴细胞凋亡较青年鼠高 (P<0 .0 1 ) ,bcl- 2及 bcl- xl表达下降 ,而 bax的表达量明显增加。老年鼠淋巴细胞转化能力降低 ,CD8阳性细胞明显降低 ,脾脏细胞对 NK靶细胞杀伤能力降低。结论　老年鼠免疫功能随年龄增长而降低的原因可能与老年鼠的 PBL凋亡增加有关 ,调控衰老过程中 PBL凋亡可能是减缓老年人免疫力降低的有效途径。     

RockⅡ在大鼠脑老化中作用机制的研究

目的探讨RockⅡ对大鼠脑老化和海马组织凋亡作用的影响。方法选择3月龄Wister雄性大鼠80只,随机分为脑老化组、对照组、脑老化限食组和对照限食组,每组20只。10周后进行为期7d的水迷宫实验,采用免疫印迹法检测各组RockⅡ及Bcl-2、Bax蛋白,并分析RockⅡ水平与大鼠逃避潜伏期的相关关系。结果与脑老化组比较,脑老化限食组、对照组和对照限食组RockⅡ表达明显降低(P<0.05,P<0.01),脑老化限食组Bcl-2明显升高,Bax和caspase-3明显降低,逃避潜伏期明显缩短,记忆搜台游泳路程明显延长,差异有统计学意义(P<0.05)。RockⅡ与逃避潜伏期呈正相关(r=0.952,P<0.01)。结论 RockⅡ可通过抑制Bcl-2表达及激活Bax蛋白表达而诱发细胞凋亡,大鼠脑老化程度与RockⅡ的表达水平呈正相关。     

有氧运动对血管性脑痴呆小鼠学习记忆能力的影响

目的探讨有氧运动对血管性脑痴呆小鼠记忆能力的影响及其作用机制。方法暴露小鼠双侧颈总动脉,重复夹闭动脉3次,尾静脉放血建立血管性脑痴呆小鼠模型,小鼠随机分为三组:假手术组、模型组和有氧运动组。术后第二天开始进行有氧运动,连续7周。训练结束后进行行为学检测,术后30天收集小鼠脑组织样本(海马、前额叶、全脑和血清)。HE染色观察海马CA1区的病理学变化、TUNEL法检测海马CA1区神经细胞凋亡、Western blot和紫外分光光度计检测Bcl-2、Bax、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、生长相关蛋白(GAP-43)、脑源性神经营养因子(BDNF)、乙酰胆碱合成酶(ACHE)、乙酰胆碱转移酶(CHAT)、突触素(SYP)、神经细胞黏附分子(NCAM)及神经细胞黏附分子受体(NR2B)的变化。结果与假手术组相比,模型组小鼠的僵直时间显著缩短,CA1区神经元细胞病变严重,凋亡细胞增加,MDA和ACHE蛋白的表达明显上升,SYP、NCAM、NR2B、SOD、BDNF、CHAT、GAP-43和Bcl-2蛋白表达降低,Bax蛋白表达没有明显变化。与模型组相比,有氧运动组小鼠的僵直时间显著延长,海马区的组织病变情况改善,且凋亡细胞减少,MDA和ACHE蛋白的表达明显降低,SYP、NCAM、NR2B、SOD、BDNF、CHAT、GAP-43和Bcl-2蛋白的表达升高,Bax蛋白表达没有明显变化。结论有氧训练可能通过上调Bcl-2、SOD、BDNF、CHAT、GAP-43、SYP、NCAM及NR2B蛋白表达,下调MDA和ACHE蛋白表达,减少自由基损伤和海马区神经元细胞凋亡,从而改善血管性痴呆小鼠的学习记忆功能。     

参麦注射液对大鼠神经元内质网应激诱导凋亡的影响

目的 探讨参麦注射液对大鼠皮层神经元内质网应激诱导凋亡的保护作用.方法 体外培养SD乳鼠皮层神经元细胞,免疫组织化学、免疫荧光染色鉴定神经元纯度,流式细胞术AnnexinV、PI双标检测凋亡率及活性caspase-3、-9表达,Western印迹免疫分析GRP78、细胞色素C蛋白、Bcl-2蛋白表达,Fura-2/AM法荧光分光光度计检测细胞内钙浓度([Ca~(2+)]i).结果 SD乳鼠皮层神经元可纯化体外培养,2 μmol/L毒胡萝卜素作用神经元24、48 h细胞凋亡率分别是17.88%、21.38%,参麦治疗组分别是7.42%、8.16%,两组差异显著(P<0.05).胡萝卜素诱导神经元糖调节蛋白GRP78表达上调,活化caspase-3、-9,使细胞色素C蛋白表达增加,Bcl-2表达减少.参麦注射液促进细胞Bcl-2表达,抑制细胞色素C释放,减少活性caspase-3、-9含量,降低[Ca~(2+)]i浓度.结论 参麦注射液能抑制体外培养神经元内质网应激所致的凋亡可能与其降低[Ca~(2+)]i浓度有关.     

颈动脉狭窄对大鼠认知功能及海马神经元凋亡的影响

目的探讨颈动脉狭窄大鼠认知功能改变与海马神经元凋亡及BCL-2、BAX蛋白表达的关系。方法雄性SD大鼠36只,随机分为假手术组、狭窄2、4、8周组,每组9只大鼠。制备颈动脉狭窄模型后,各组采用Morris水迷宫检测记忆能力,TUNEL法观察海马神经元凋亡,免疫组化检测BCL-2、BAX蛋白表达。结果①狭窄组各时相点与假手术组比较,平均逃避潜伏期延长,平台象限游泳距离百分比降低,差异有统计学意义,P〈0．01。随狭窄时间的延长,平均逃避潜伏期逐渐增加,平台象限游泳距离百分比逐渐降低。②各狭窄组大鼠的凋亡神经元比例高于假手术组,随狭窄时间的延长,凋亡神经元的比例逐渐升高,差异均有统计学意义。③BCL-2蛋白在狭窄2周组达高峰,狭窄4周和狭窄8周组逐渐减弱,均高于假手术组,差异有统计学意义。④BAX蛋白表达在2周时表达增强,8周时达高峰,均高于假手术组,差异有统计学意义。结论颈动脉狭窄大鼠海马神经细胞BCL-2／BAX蛋白比例失衡引起海马神经细胞凋亡,可能是大鼠颈动脉狭窄后出现认知功能障碍的机制之一。     

C-peptide prevents hippocampal apoptosis in type 1 diabetes

To explore mechanisms underlying central nervous system (CNS) complications in diabetes, we examined hippocampal neuronal apoptosis and loss, and the effect of C-peptide replacement in type 1 diabetic BB/W rats. Apoptosis was demonstrated after 8 months of diabetes, by DNA fragmentation, increased number of apoptotic cells, and an elevated ratio of Bax/Bcl-xL, accompanied by reduced neuronal density in the hippocampus. No apoptotic activity was detected and neuronal density was unchanged in 2-month diabetic hippocampus, whereas insulin-like growth factor (IGF) activities were impaired. In type 1 diabetic BB/W rats replaced with C-peptide, no TdT-mediated dUTP nick-end labeling (TUNEL)-positive cells were shown and DNA laddering was not evident in hippocampus at either 2 or 8 months. C-peptide administration prevented the preceding perturbation of IGF expression and reduced the elevated ratio of Bax/Bcl-xL. Our data suggest that type 1 diabetes causes a duration-dependent programmed cell death of the hippocampus, which is partially prevented by C-peptide.     

不同月龄大鼠大脑中低密度脂蛋白受体相关蛋白的表达

目的　探讨不同月龄大鼠大脑额叶、海马、纹状体低密度脂蛋白受体相关蛋白 (LRP 1)表达的变化。方法　雄性SD大鼠 15只 ,流式细胞技术检测并计算 1,3,10月龄大鼠大脑额叶、海马、纹状体匀浆单细胞悬液LRP 1表达的平均荧光指数 ;免疫组织化学技术测定大脑海马CA1区神经细胞、微血管LRP 1表达 ,并应用MIAS图像分析系统进行平均吸光度测定。结果　流式细胞研究显示 ,大鼠海马 1、3月龄LRP 1表达强度均显著高于 10月龄大鼠 ;而额叶及纹状体各月龄组间差异无显著性意义。 1、3月龄大鼠海马区LRP 1表达强度均显著高于额叶及纹状体。免疫组织化学结果显示 ,LRP 1在海马CA1区微血管、神经细胞均有表达。随着月龄的增加 ,LRP 1在微血管的表达显著下降 ,而在海马CA1区神经细胞的表达各月龄组差异无显著性意义。结论　随着月龄的增加 ,海马区LRP 1的表达有下降趋势 ,尤其是海马CA1区微血管LRP 1的表达显著下降。     

Immortal rat hippocampal cell lines exhibit neuronal and glial lineages and neurotrophin gene expression.

Clonal cell lines of rat embryonic hippocampal origin have been developed by using retroviral transduction of temperature-sensitive simian virus 40 large tumor antigens. The cell lines undergo morphological differentiation at the nonpermissive temperature and in response to differentiating agents. Immunocytochemical analysis indicates that various lines are derived from progenitors of neuronal, glial, and bipotential lineages. Selected neuronal lines differentiate in response to diffusible factors released by primary glia, and one line of glial lineage supports the maturation of primary neurons in culture. Selected cell lines exhibit different patterns of neurotrophin gene expression that change after differentiation. In some lines, the relative levels of neurotrophin 3 and brain-derived neurotrophic factor message expression may reflect the developmental or regional differential expression seen for these genes in the hippocampus in situ. These hippocampal cell lines, which express markers indicative of commitment to neuronal or glial lineages, are valuable for studies of development and plasticity in these lineages, as well as for studies of the regulation of neural trophic interactions.     

Preserved neuron number in the hippocampus of aged rats with spatial learning deficits.

Hippocampal neuron loss is widely viewed as a hallmark of normal aging. Moreover, neuronal degeneration is thought to contribute directly to age-related deficits in learning and memory supported by the hippocampus. By taking advantage of improved methods for quantifying neuron number, the present study reports evidence challenging these long-standing concepts. The status of hippocampal-dependent spatial learning was evaluated in young and aged Long-Evans rats using the Morris water maze, and the total number of neurons in the principal cell layers of the dentate gyrus and hippocampus was quantified according to the optical fractionator technique. For each of the hippocampal fields, neuron number was preserved in the aged subjects as a group and in aged individuals with documented learning and memory deficits indicative of hippocampal dysfunction. The findings demonstrate that hippocampal neuronal degeneration is not an inevitable consequence of normal aging and that a loss of principal neurons in the hippocampus fails to account for age-related learning and memory impairment. The observed preservation of neuron number represents an essential foundation for identifying the neurobiological effects of hippocampal aging that account for cognitive decline.     

胆碱酯酶抑制剂对血管性痴呆大鼠认知功能的影响

目的观察胆碱酯酶抑制剂对血管性痴呆(VaD)大鼠海马CA1区细胞凋亡、血管内皮生长因子(VEGF)及神经元型一氧化氮合酶(nNOS)的影响。方法将45只雄性SD大鼠,随机分为假手术组、模型组、治疗组,每组15只大鼠。采用双侧颈总动脉永久性结扎法建立VaD模型,假手术组和模型组用生理盐水2 ml灌胃,治疗组用多奈哌齐进行灌胃。造模后1个月,采用Morris水迷宫检测大鼠的学习记忆能力,用TUNEL检测海马CA1区神经细胞凋亡,用免疫组织化学染色方法检测大鼠海马CA1区VEGF、nNOS阳性细胞表达。结果与模型组比较,假手术组和治疗组大鼠第2天起逃避潜伏期明显缩短;海马CA1区神经细胞凋亡显著减少;海马CA1区VEGF和nNOS阳性细胞表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论多奈哌齐可能通过减少VaD大鼠海马CA1区细胞凋亡,上调VEGF、nNOS的表达,从而改善VaD大鼠的认知功能。     

卡马西平对癫痫模型大鼠海马损伤作用及对Fascin-1、突触素表达的影响

目的研究卡马西平对癫痫模型大鼠海马损伤的作用及对肌成束蛋白(Fascin-1)、突触素(SYP)表达的影响。方法选择54只无特定病原体动物(SPF)级SD健康大鼠,选取40只建立癫痫模型,分为模型组、低剂量组、中剂量组、高剂量组,每组10只,另设10只正常大鼠为正常组。低剂量组、中剂量组、高剂量组分别给予卡马西平(质量浓度2 g/L)15 mg/kg、30 mg/kg、50 mg/kg进行治疗,采用脑电图机观察大鼠潜伏期、持续时间、波幅指标,统计发作次数、发作总时间,苏木精-伊红染色法(HE)染色处理,观察海马区细胞凋亡指数,采用蛋白质印迹法(Western Blot)检测Fascin-1、突触素、Bcl-2、Bax表达水平。结果模型组潜伏期及Fascin-1、Bcl-2表达水平低于正常组、低剂量组、中剂量组、高剂量组,持续时间、波幅、海马区细胞凋亡指数及突触素、Bax表达水平高于正常组、低剂量组、中剂量组、高剂量组,差异均有统计学意义(P<0.05)。卡马西平各剂量组潜伏期高于模型组,持续时间、波幅、海马区细胞凋亡指数低于模型组,差异具有统计学意义(P<0.05)。中剂量组潜伏期、Fascin-1、Bcl-2表达水平高于低剂量组和高剂量组,持续时间、波幅、发作次数、发作总时间、海马区细胞凋亡指数及突触素、Bax表达水平低于低剂量组和高剂量组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论卡马西平能降低癫痫模型大鼠海马损伤程度,起到一定的抗癫痫作用,可能与调控Fascin-1、突触素、Bcl-2、Bax表达水平有关。