Sestrin2在miR-19诱导的非小细胞肺癌细胞上皮-间质转化中的表达及六神丸干预研究

目的 探讨Sestrin2在六神丸调控miR-19诱导的非小细胞肺癌细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)中的作用.方法 实验分为对照组、miR-19过表达组、六神丸组.对照组为常规血清培养的A549细胞;miR-19过表达组为常规血清培养的过表达miR-19 A549细胞;六神丸组予以六神丸含药血清干预过表达miR-19 A549细胞.48 h后分别以CCK-8检测A549细胞增殖,Transwell小室检测A549细胞迁移能力,实时荧光定量PCR(quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)检测miR-19表达,蛋白印迹检测Sestrin2、PTEN以及EMT标记分子E-cadherin、Vimentin的表达.结果 细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)检测结果显示,六神丸组A549细胞增殖速度较对照组、miR-19过表达组明显减慢;Transwell小室实验显示,六神丸组A549细胞迁移数量较miR-19过表达组、对照组明显减少;qRT-PCR检测结果显示,六神丸组A549细胞中miR-19表达较miR 19过表达组、对照组明显降低;Western blot检测结果显示,与对照组、miR-19过表达组相比,六神丸组A549细胞中Sestrin2、E-cadherin、PTEN表达明显上调,Vimentin表达明显下调.结论 六神丸能够抑制miR-19诱发的人肺腺癌细胞株A549发生EMT,与激活Sestrin2信号通路有关.     

miR-552通过PTEN/AKT信号通路促进非小细胞肺癌A549细胞的恶性生物学行为

目的 探讨miR-552通过调控PTEN/AKT信号通路促进人非小细胞肺癌A549细胞的恶性生物学行为及其相关机制。方法 通过qRT-PCR检测人肺癌组织样本和人非小细胞肺癌A549细胞系中miR-552、PTEN mRNA的表达情况;通过Western blotting检测PTEN、AKT、p-AKT蛋白的表达情况;通过CCK-8检测miR-552表达对A549细胞增殖能力的影响;通过Transwell小室检测miR-552表达对A549细胞迁移和侵袭能力的影响;通过流式细胞术检测miR-552表达对A549细胞凋亡能力的影响。结果 miR-552在肺癌组织和A549细胞中的表达显著上调。过表达miR-552可显著促进A549细胞的增殖、迁移和侵袭,并抑制细胞凋亡,而抑制其表达则结果相反。与癌旁组织相比,肺癌组织中PTEN表达显著下调。过表达miR-552可下调PTEN蛋白表达,上调p-AKT蛋白表达,对AKT蛋白无影响,而抑制其表达则结果相反。结论 miR-552可能通过PTEN/AKT信号通路促进人非小细胞肺癌A549细胞的恶性生物学行为。     

CCL5对人肺腺癌细胞增殖、凋亡的影响及机制研究

目的:研究敲低CC基序趋化因子配体5(CCL5)在非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞中的表达及对A549细胞增殖、迁移、凋亡等生物学活性的影响,探讨CCL5促进A549细胞上皮间质软化(EMT)的可能分子机制。方法:体外培养肺腺癌A549细胞,应用shRNA敲低A549细胞中CCL5基因,分为阴性对照组(siRNA-NC)及实验组(siRNA-CCL5)。应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞中CCL5mRNA表达;CCK-8、Transwell实验观察下调CCL5表达后细胞增殖、迁移、侵袭能力的变化;流式细胞术检测细胞凋亡的变化;蛋白印迹法(Western blot)检测E-钙黏附蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)及TGF-β信号通路TGF-β蛋白表达量的变化。结果:与对照组相比,敲低CCL5表达后实验组A549细胞CCL5mRNA表达下调(P<0.05);CCK-8实验结果显示A549细胞的增殖受到抑制(P<0.05);Transwell实验显示A549细胞的迁移、侵袭明显抑制(均P<0.05);A549细胞凋亡增加;West...     

miR-199-3p过表达调控肺癌A549细胞生长、侵袭及上皮间质转化机制研究

目的 探究miR-199-3p过表达靶向抑制SOX5对肺癌A549细胞生长、侵袭及上皮间质转化(EMT)的影响。方法 荧光素酶实验检测miR-199a-3p与SOX5靶向关系。构建SOX5 pcDNA载体过表达SOX5,将miR-199-3p与pcDNA-SOX5单独或联合转染A549,将细胞随机分为对照组(Control组)、miR-199-3p过表达组(mimic组)、SOX5组和mimic+SOX5组进行后续实验。克隆形成法检测肺癌A549细胞增殖情况,流式细胞术检测肺癌A549细胞凋亡情况,Transwell检测肺癌A549细胞侵袭能力;荧光显微镜观察肺癌A549细胞EMT形态学变化;蛋白免疫印迹试验检测Ki-67、PCNA、Bax、Bcl-2、Caspase-3、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin蛋白表达水平。结果 与SOX5组比较,mimic+SOX5组细胞克隆形成率降低,Ki-67、PCNA蛋白水平降低,细胞凋亡率升高,Bax/Bcl-2和cleaved Caspase-3/Caspase-3比值升高,细胞侵袭数降低,E-cadherin蛋白水平...     

miR-514b-3p靶向MDM2对肺癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响

目的 探讨miR-514b-3p在肺癌组织中的表达水平,研究miR-514b-3p对肺癌细胞增殖、迁移侵袭的影响和分子机制.方法 qRT-PCR检测52例肺癌组织和与其对应的癌旁组织中miR-514b-3p的表达水平.构过表达miR-514b-3p的A549细胞株,MTT法检测细胞活力,Transwell法检测细胞迁移...     

乙酰辅酶A合成酶2在胰腺癌的表达及意义

目的 探讨乙酰辅酶A合成酶2(ACSS2)在胰腺癌中的表达及意义。方法 采用免疫组织化学染色法检测ACSS2在胰腺癌组织及其癌旁正常组织中的表达，RT-PCR法检测胰腺癌组织和细胞中ACSS2 mRNA表达。将ACSS2干扰RNA(si-ACSS2组)及阴性对照(NC组)均分别转染胰腺癌细胞系PANC-1和MIA PaCa-2后，采用CCK-8法检测胰腺癌细胞增殖，Transwell实验检测胰腺癌细胞侵袭和迁移，Western blot法检测胰腺癌细胞中上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的蛋白表达。结果 ACSS2在胰腺癌组织中的表达高于癌旁正常组织(P<0.05)。胰腺癌组织中ACSS2 mRNA表达高于癌旁正常组织(P<0.01);胰腺癌细胞系PANC-1、BxPC-3、MIA PaCa-2、AsPC-1中ACSS2 mRNA表达亦高于人胰腺导管上皮细胞(P<0.05或P<0.01)。与NC组相比，si-ACSS2组PANC-1和MIA PaCa-2细胞增殖、侵袭和迁移减少，E-cadherin蛋白表达增加，而Vimenti...     

Effects of overexpression of IncRNA AC079466.1 on apoptosis of NSCLC cells through endoplasmic reticulum stress signaling pathway北大核心CSCD

目的初步探讨lncRNA AC079466.1在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织和细胞中的表达,及其过表达对A549和H1299细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响。方法收集20例NSCLC患者癌组织及相应的癌旁组织,qRT-PCR检测lncRNA AC079466.1在组织和细胞中的表达。转染过表达质粒为AC079466.1组,转染空质粒为NC组,无转染为Blank组。MTT、流式细胞术、Transwell检测过表达lncRNA AC079466.1对A549和H1299细胞活力、凋亡、迁移和侵袭的影响;Western blot检测过表达lncRNA AC079466.1对内质网应激相关因子GRP78、PERK、eIF2α、ATF4、CHOP,以及Bax、caspase-3表达的影响。结果与癌旁组织相比,癌组织中lncRNA AC079466.1的表达水平明显降低;与HBE细胞相比,lncRNA AC079466.1在A549和H1299细胞的表达量明显降低。与Blank组和NC组相比,AC079466.1组A549和H1299细胞的活力、迁移、侵袭能力均明显下降,凋亡率明显升高,内质网应激相关因子GRP78、p-PERK、eIF2α、ATF4、CHOP,以及Bax、caspase-3表达均明显上调。结论过表达lncRNA AC079466.1可明显抑制A549和H1299细胞的活力、迁移和侵袭能力,并促进细胞的凋亡,其机制可能与促进内质网应激介导的细胞凋亡有关。     

YY1基因在肺癌组织中的表达及其对肺癌细胞功能的影响

目的 检测转录因子YY1在肺癌组织中的表达情况,并分析其对肺癌细胞的增殖、迁移及侵袭的影响。方法 应用Taqman探针实时荧光定量PCR方法检测235例肺癌组织以及62例配对癌旁组织中YY1 mRNA的表达,并分析其表达与患者临床病理特征的关系。应用Lipofectamine 3000试剂在肺癌细胞系转染YY1过表达质粒及对照质粒。噻唑蓝（MTT）分别检测对照组和YY1过表达组在24、48及72 h对A549和H1299细胞增殖的影响。划痕实验和Transwell实验检测YY1过表达对肺癌细胞的迁移和侵袭能力的影响。结果 与癌旁组织（5.80±0.58）相比,YY1 mRNA在肺癌组织（5.07±0.58）中表达下调（P<0.01）,且YY1 mRNA的表达在不同性别、吸烟状态、病理类型及临床分期中存在差异（P<0.05）。YY1过表达组H1299细胞增殖能力在48h和72h均低于对照组（P<0.01）,A549细胞在72h低于对照组（P<0.05）。划痕实验和Transwell实验结果显示转染过表达YY1质粒后,肺癌细胞的侵袭能力及迁移能力明显下降（P<0.05）。结论 YY1在肺癌组织中低表达,上调 YY1的表达可抑制肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

G蛋白偶联受体相关分选蛋白1在非小细胞肺癌中表达的临床意义及其与顺铂化疗抵抗的关系

目的 探究G蛋白偶联受体相关分选蛋白1(GPRASP1)的表达与非小细胞肺癌(NSCLC)细胞的顺铂(DDP)敏感性的关系。方法 收集癌旁组织、原发NSCLC组织及复发NSCLC组织，用荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)法检测GPRASP1和腺苷三磷酸结合盒式亚家族A成员5(ABCA5)mRNA的表达情况。空白组和过表达组分别用慢病毒转染空白载体和GPRASP1过表达载体于A549细胞中；对照组和抵抗组分别用慢病毒转染对照小干扰RNA(si-control)于A549细胞及DDP耐药细胞中；干扰组用慢病毒转染GPRASP1小干扰RNA(si-GPRASP1)于DDP耐药细胞中。用CCK-8实验法检测细胞对DDP的半抑制浓度(IC₅₀),用RT-PCR法检测各组细胞中GPRASP1与ABCA5的表达情况。结果 癌旁组织、NSCLC组织与复发NSCLC组织中GPRASP1 mRNA表达量分别为(1.27±0.16)×10^-2、(2.68±0.30)×10^-2和(3.89±0.72)×10^-2,ABCA...     

非洲爪蟾驱动蛋白样蛋白 2靶蛋白对非小细胞肺癌细胞迁移侵袭的影响及其机制

目的 研究非洲爪蟾驱动蛋白样蛋白2靶蛋白(TPX2)基因对非小细胞肺癌细胞迁移侵袭的影响及其机制.方法 2018年10月至2019年8月,将非小细胞肺癌A549、H1299细胞株分为三组:空白对照组(未经转染的细胞);阴性对照组[转染非特异性的小干扰RNA(siRNA)的细胞];siRNA-TPX2组(转染TPX2特异性的siRNA的细胞).采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blotting)方法对转染小干扰RNA(siRNA)前后的非小细胞肺癌A549、H1299细胞株进行鉴定.人胆囊收缩素/缩胆囊素八肽(CCK-8)增殖实验检测细胞增殖能力.Tanswell小室迁移实验检测细胞迁移和侵袭的影响.蛋白质印迹法检测磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)-蛋白激酶B(Akt)信号通路关键分子及基质金属蛋白酶(MMPs)表达的变化.结果 siRNA-TPX2组中TPX2 mRNA和蛋白的相对表达水平显著低于阴性对照组及空白对照组(P<0.05).与阴性对照组相比,下调TPX2可抑制A549细胞的增殖[24 h(0.71±0.02)比(0.62±0.03);48 h(1.62±0.03)比(0.69±0.02);72 h(2.08±0.03)比(0.95±0.02)]、迁移[(91.18±13.97)个比(49.95±12.15)个]、侵袭[(165.46±19.19)个比(93.37±13.54)个](P<0.05).与阴性对照组相比,下调TPX2可抑制H1299细胞的增殖[24 h(0.81±0.03)比(0.65±0.02);48 h(1.73±0.02)比(0.78±0.01);72 h(2.18±0.03)比(1.16±0.02)]、迁移[(74.31±13.86)个比(38.76±9.05)个]、侵袭[(158.46±19.58)个比(88.47±11.23)个](P<0.05).TPX2表达下调能显著降低非小细胞肺癌A549、H1299细胞中PI3K、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、基质金属蛋白酶9(MMP9)和基质金属蛋白酶12(MMP12)蛋白的表达(P<0.05).激动剂胰岛素生长样因子1(IGF-1)能完全削弱TPX2-siRNA抑制A549、H1299细胞中PI3K/Akt信号通路活性及其下游MMP9和MMP12的表达(P<0.05).结论 TPX2通过调控PI3K/Akt信号通路活性及其下游MMP9和MMP12的表达促进非小细胞肺癌细胞侵袭转移.     

肿瘤蛋白翻译控制 1的反义 RNA 1在肺癌中的表达及其对肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨肿瘤蛋白翻译控制 1的反义 RNA 1(TPT1-AS1)在肺癌中的表达及其对肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响和作用机制。方法收集于 2017年1月至 2018年12月在信阳市中心医院心胸外科行手术治疗的 46例肺癌组织和对应的癌旁组织,实时荧光定量 PCR(RT-qPCR)检测组织中 TPT1-AS1和微小 RNA-671-5p(miR-671-5p)表达, Pearson相关性分析肺癌组织中 TPT1-AS1和miR671-5p表达的相关性。同时,于2019年5月至 2020年4月期间,通过体外培养肺癌细胞 A549,双荧光素酶报告基因实验验证了细胞中 TPT1-AS1和 miR-671-5p调控关系。另将 A549细胞分为对照组、小干扰 RNA阴性序列(si-NC)组、 TPT1-AS1小干扰 RNA(si-TPT1AS1)组、 si-TPT1-AS1+抑制剂阴性序列(anti-miR-NC)组和 si-TPT1-AS1+miR-671-5p抑制剂(anti-miR-671-5p)组,甲基噻唑蓝染色法(MTT)检测细胞增殖, Transwell检测细胞迁移和侵袭,蛋白质印迹实验检测细胞周期蛋白 D1(CyclinD1)基质金属蛋白酶(MMP)-2和 MMP-9蛋白表达。结果肺癌组织中 TPT1-AS1表达量较癌旁组织显著升高［(1.88±0.12)(1.01±0.08)、P<0.05］,miR-671-5p表达量较癌旁组织显著降低［(0.45±0.04)(1.01±0.06)P<0.05］。Pearson相关性分析显示,肺癌组比织中TPT1-A,S1和 miR-671-5p呈负相(r= 0.63,P<0.05)。TPT1-AS1在A5比49细胞中负调,控 miR-671-5p表达。 si-TPT1-AS1组 A549细胞存活率、迁移数和侵袭数分别为(关53.24±2.81)%、(63.11±6.51)个和( 33.78±3.23)个,均低于 si-NC组［分别为( 98.78±2.57)%、(147.44±11.08)个和(101.67±9.95)个,均P<0.05］。CyclinD1、MMP-2和MMP-9蛋白在 si-TPT1-AS1组的表达量分别为(0.43±0.05)(0.21±0.03)(0.43±0.04),较si-NC组均降低［分别为(0.86±0.04)(0.55±0.05)(0.48±0.07)均P<0.05］。si-TPT1-AS1+anti-miR-671-、5p组A549细、胞存活率、迁移数和侵袭数及 CyclinD1、MMP-2和M、MP-9蛋白表、达分别为(8,5.43±2.94)%、(125.78±10.59)个、(88.78±7.19)个、(0.75±0.03)、(0.48±0.03)、(0.43±0.04),较 si-TPT1-AS1+anti-miR-NC组均升高［分别为(54.36±2.95)%、(63.78±6.48)个、(33.56±3.54)个、(0.41±0.03)、(0.22±0.03)、(0.21±0.04),均P<0.05］。对照组与 si-NC组、 si-TPT1-AS1组与 si-TPT1-AS1+anti-miR-NC组各检测指标比较均差异无统计学意义(P>0.05)。结论肺癌组织中 TPT1-AS1表达升高, miR-671-5p表达降低,且两者呈负相关。 TPT1-AS1可能通过靶向下调 miR-671-5p的表达促进肺癌细胞增殖、迁移和侵袭。     

EBF1-shRNA对肺腺癌A549细胞体内外增殖能力的影响

目的 研究EBF1基因下调对肺腺癌A549细胞体内外增殖的影响,并初步探讨其机制。方法 通过免疫组化和RT-PCR检测EBF1在肺癌组织和肺癌细胞系中的表达情况。根据本实验室设计的针对EBF1的小干扰RNA(shRNA)序列,选择一条已经证实最有效的序列作为靶序列和一条随机序列作为阴性对照,构建重组逆转录病毒shRNA表达载体并将其转染入A549细胞中;应用RT-PCR和蛋白质印迹法(Western blot)检测对EBF1基因的沉默效果;应用MTT比色法及BrdU染色法实验检测EBF1-shRNA对A549细胞体外增殖的影响;利用Transwell实验及划痕实验检测EBF1-shRNA对A549细胞体外侵袭及迁移能力的影响;利用流式细胞仪分析各组细胞的细胞周期;通过裸鼠腋窝皮下接种各组细胞,观察EBF1-shRNA对A549细胞在裸鼠体内的致瘤能力的影响;Western blot检测CDK6、P21、P27蛋白表达。结果 EBF1在癌旁组织及肺癌组织中的基质细胞中不表达,在NSCLC及SCLC癌细胞细胞核中表达。EBF1-shRNA有效地沉默了EBF1基因mRNA和蛋白的表达;沉默EBF1基因的表达能够抑制A549细胞的体内外增殖能力,使实验组细胞的细胞周期阻滞于G 1 期;沉默EBF1基因的表达后,实验组细胞中CDK6蛋白表达降低,P21、P27蛋白增加。结论 EBF1-shRNA通过使细胞周期阻滞于G 1 期来抑制肺腺癌A549的体内外增殖能力,这种抑制作用涉及CDK6表达下降以及P21/P27的表达上调。     

细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂 2B反义 RNA1靶向微小 RNA-339-5p对乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响

目的探讨长链非编码 RNA细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂 2B反义 RNA1(lncRNA CDKN2B-AS1)对乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响及分子机制。方法收集南阳市中心医院 2017年 1月 2019年 1月收治的 37例乳腺癌患者的癌组织及癌旁组织。将 MDA-MB-453细胞分为 CDKN2B-AS1阴性对照( si-NC组)、 CDKN2B-AS1小分子干扰 RNA(si-CDKN2B-AS1组)、 CDKN2B-AS1小分子干扰 RNA+miR-339-5p阴性对照( si-CDKN2B-AS1+anti-miR-NC组)以及 CDKN2B-AS1小分子干扰 RNA+ miR-339-5p特异性寡核苷酸抑制剂( si-CDKN2B-AS1+anti-miR-339-5p组)。采用 RT-qPCR法对 CDKN2B-AS1及微小 RNA-339-5p(miR-339-5p)表达水平进行检测;细胞周期及增殖活性检测分别采用流式细胞术及 MTT实验;采用 Transwell小室技术对细胞迁移和侵袭进行检测;采用 Western blotting法对增殖标记蛋白细胞增殖核抗原 -67(Ki67)、细胞周期依赖性蛋白激酶抑制因子 1A(P21)、上皮型钙黏蛋白( E-cadherin)、神经型钙黏蛋白(N-cadherin)蛋白表达进行检测;荧光素酶报告实验检测 CDKN2B-AS1对 miR-339-5p的靶向调控。结果在乳腺癌组织中 CDKN2B-AS1表达水平上调［( 2.23±0.08)比( 1.00±0.06)］(P<0.05)。抑制 CDKN2B-AS1可增加 G0期细胞比例［(43.29±3.76)%比( 30.25±3.01)%］、 P21表达水平升高, S期细胞比例［(21.91±3.10)%比( 34.19±3.32)%］、细胞存活率［( 53.02±5.38)%比( 100.00±7.12)%］、迁移、侵袭数以及 Ki67、E-cadherin、N-cadherin蛋白表达水平降低( P<0.05)。 CDKN2B-AS1靶向调控 miR-339-5p,抑制 miR-339-5p逆转抑制 CDKN2B-AS1对 MDA-MB-453细胞增殖、迁移、侵袭的作用。结论抑制 CDKN2B-AS可抑制乳腺癌 MDA-MB-453细胞增殖、迁移、侵袭,且靶向调控 miR-339-5p表达。关键词:乳腺肿瘤;细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂 2B反义 RNA1;微小 RNA-339-5p(miR-339-5p);增殖;迁移;侵袭     

微 RNA-130a靶向人类 RUNT相关转录因子 3对肺癌 A549细胞增殖和转移的影响

目的 探讨微RNA(miR)-130a与人类RUNT相关转录因子3(RUNX3)的靶向关系及其对非小细胞肺癌A549细胞增殖、侵袭、迁移和上皮间质转化的影响.方法 将体外培养的A549细胞分为对照组(未处理)、anti-miR-NC组(转染miR-130a inhibi?tor阴性对照)、anti-miR-130a组(转染miR-130a inhibitor)、anti-miR-130a+siNC组(转染miR-130a inhibitor和NC-siRNA)和anti-miR-130a+siRUNX3组(转染miR-130a inhibitor和RUNX3-siRNA),采用实时定量PCR检测各组细胞中miR-130a和RUNX3mRNA的表达水平,蛋白质印迹法(Western Blot)检测各组细胞中RUNX3蛋白和上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)、神经型钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的表达水平,四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)检测各组细胞增殖能力,克隆形成实验检测各组细胞的克隆形成能力,Transwell小室实验检测各组细胞侵袭与迁移能力,荧光素酶实验检测miR-130a和RUNX3的靶向关系.结果 荧光素酶实验证实,RUNX3是miR-130a的潜在靶基因.与anti-miR-NC组相比,下调miR-130a可抑制A549细胞增殖[(94.72±6.05)％比(51.28±3.24)％]、克隆[(36.15±2.06)％比(15.46±1.25)％]、侵袭[(90.25±5.48)个比(42.18±3.26)个]、迁移[(118.55±9.86)个比(73.48±6.75)个](P<0.05),促进E-cadherin蛋白表达[(0.26±0.03)比(0.48±0.04)](P<0.05),而抑制N-cadherin、Vimentin蛋白表达[(0.52±0.03)比(0.25±0.02);(0.68±0.05)比(0.35±0.03)](P<0.05);与anti-miR-130a+siNC组相比,共转染anti-miR-130a与siRUNX3可成功增强A549细胞增殖[(52.16±3.12)％比(72.23±6.13)％]、克隆[(16.08±1.05)％比(22.12±1.34)％]、侵袭[(41.59±3.02)个比(68.32±4.26)个]、迁移能力[(72.26±5.18)个比(98.25±6.02)个](P<0.05),抑制E-cad?herin蛋白表达[(0.52±0.04)比(0.33±0.03)](P<0.05),而促进N-cadherin、Vimentin蛋白表达[(0.27±0.03)比(0.46±0.03);(0.33±0.02)比(0.53±0.04)](P<0.05).结论 miR-130a可通过靶向RUNX3抑制A549细胞增殖、侵袭、迁移和上皮间质转移.     

PTPL1 suppresses lung cancer cell migration via inhibiting TGF-β1-induced activation of p38 MAPK and Smad 2/3 pathways and EMT

Epithelial-mesenchymal transition (EMT) enables dissemination of neoplastic cells and onset of distal metastasis of primary tumors. However, the regulatory mechanisms of EMT by microenvironmental factors such as transforming growth factor-β (TGF-β) remain largely unresolved. Protein tyrosine phosphatase L1 (PTPL1) is a non-receptor protein tyrosine phosphatase that plays a suppressive role in tumorigenesis of diverse tissues. In this study we investigated the role of PTPL1/PTPN13 in metastasis of lung cancer and the signaling pathways regulated by PTPL1 in terms of EMT of non-small cell lung cancer (NSCLC) cells. We showed that the expression of PTPL1 was significantly downregulated in cancerous tissues of 23 patients with NSCLC compared with adjacent normal tissues. PTPL1 expression was positively correlated with overall survival of NSCLC patients. Then we treated A549 cells in vitro with TGF-β1 (10 ng/mL) and assessed EMT. We found that knockdown of PTPL1 enhanced the migration and invasion capabilities of A549 cells, through enhancing TGF-β1-induced EMT. In nude mice bearing A549 cell xenografts, knockdown of PTPL1 significantly promoted homing of cells and formation of tumor loci in the lungs. We further revealed that PTPL1 suppressed TGF-β-induced EMT by counteracting the activation of canonical Smad2/3 and non-canonical p38 MAPK signaling pathways. Using immunoprecipitation assay we demonstrated that PTPL1 could bind to p38 MAPK, suggesting that p38 MAPK might be a direct substrate of PTPL1. In conclusion, these results unravel novel mechanisms underlying the regulation of TGF-β signaling pathway, and have implications for prognostic assessment and targeted therapy of metastatic lung cancer.     

微小 RNA-494-3p靶向配子生成素结合蛋白 2促进结直肠癌细胞侵袭、迁移及上皮间质转化的实验研究

目的 研究微小RNA-494-3p(miR-494-3p)影响结直肠癌细胞迁移、侵袭及上皮间质转化(EMT)的分子机制.方法 于2019年1—12月体外培养购自美国ATCC的结直肠上皮细胞NCM460和结直肠癌细胞系T84、LS1034和HCT116,实时定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测细胞中miR-494-3p和配子生成素结合蛋白2(GGNBP2)mRNA的表达量,蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞中GGNBP2蛋白表达.将LS1034细胞分为对照(NC)组、miR-494-3p抑制剂(anti-miR-494-3p)组、抑制剂阴性对照(anti-miR-con)组、GGNBP2过表达载体(pcDNA-GGNBP2)组、空载体(pcDNA-con)组、anti-miR-494-3p+GGNBP2小干扰RNA(si-GGNBP2)组和anti-miR-494-3p+小干扰RNA阴性对照(si-con)组,甲基噻唑基四唑(MTT)法测定LS1034细胞存活率,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭,Western blot检测相关蛋白细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)的表达.双荧光素酶报告系统验证miR-494-3p和GGNBP2的调控关系.结果 与NCM460细胞相比,结直肠癌细胞T84、LS1034和HCT116中miR-494-3p表达量均显著升高[(1.91±0.11)、(2.23±0.14)、(2.08±0.12)比(1.00±0.04),P<0.001],GGNBP2 mRNA表达量均显著下降[(0.51±0.08)、(0.38±0.06)、(0.45±0.07)比(1.00±0.11),P<0.001],GGNBP2蛋白表达量均显著下降(P<0.001).与anti-miR-con组相比,anti-miR-494-3p组LS1034细胞存活率、迁移数和侵袭数均显著下降[(41.29±3.89)％比(84.36±7.28)％,(132.56±7.56)个比(246.3±10.64)个,(55.64±5.64)个比(145.62±9.56)个,均P<0.001],细胞中Cyclin D1、MMP-2、Vimentin蛋白表达量均显著下降,均P<0.001,E-cadherin蛋白表达升高、蛋白表达降低(P<0.001).与pcDNA-con组相比,pcDNA-GGNBP2组LS1034细胞存活率、迁移数和侵袭数均显著下降,P<0.05,细胞中Cyclin D1、MMP-2、Vimentin蛋白表达均下降,均P<0.001,E-cadherin蛋白表达升高,蛋白表达降低,P<0.001.miR-494-3p靶向负调控GGNBP2的表达.与anti-miR-494-3p+si-con组相比,anti-miR-494-3p+si-GGNBP2组LS1034细胞存活率、迁移数和侵袭数均显著上升,细胞中Cyclin D1、MMP-2和Vimentin蛋白表达均升高,E-cadherin蛋白表达下降,均P<0.001.结论 miR-494-3p通过靶向抑制GGNBP2促进结直肠癌LS1034细胞迁移、侵袭及EMT.