17β-雌二醇及Wnt/β-catenin信号通路对人成骨肉瘤细胞基质Gla蛋白表达的影响

目的观察17β-雌二醇(17β-E2 17β-estradiol)对骨肉瘤细胞(osteosarcoma MG 63)基质Gla蛋白(MGP Matrix GLA protein)表达的影响及Wnt/β-catenin信号通路在其中的作用,探讨MGP在骨质疏松症发病过程中的可能机制。方法 17β-E2 10~(-10)、10~(-8)、10-6mol/L及雌激素受体抑制剂氟维司群(Faslodex简称ICI)10-7mol/L,ICI 10-7mol/L+17β-E2 10~(-8)mol/L干预MG63细胞48 h。用10~(-8)mol/L的17β-E2及200 ng/m L Wnt/β-catenin信号通路阻断剂Dickkopf1分泌蛋白-1(DKK-1)干预MG63细胞48 h。用10~(-8)mol/L17β-E2及MGP抑制剂华法林10μmol/L干预MG63细胞48 h。干预后的细胞提取蛋白及总RNA,后用荧光定量PCR及Western blotting观察MGP、β-catenin、Runx2、LRP5蛋白及基因的表达。结果 17β-E2能上调MGP的表达,10~(-10)、10~(-8)、10-6mol/L 17β-E2干预后,MGP mRNA的表达是对照组的4.63、7.16、2.95倍(P0.05),MGP蛋白的表达分别是对照组的1.17、1.58、1.28倍(P0.05),以10~(-8)mol/L 17β-E2的作用最明显。ICI能阻断17β-E2对MGP的上调作用,与单用17β-E2相比,差异有统计学意义(P0.05)。17β-E2能增加Wnt/β-catenin经典信号通路中相关蛋白的表达,β-catenin及Runx2 mRNA及蛋白的表达与对照组相比,差异有统计学意义(P0.05)。DKK-1则阻断17β-E2对MGP、β-catenin、Runx2、LRP5的上调作用,与对照组相比,差异有统计学意义(P0.05)。华法林可阻断17β-E2的作用,与对照组相比MGP、β-catenin、Runx2、LRP5的表达均下调,差异有统计学意义(P0.05)。结论 17β-E2调节成骨肉瘤细胞内Wnt/β-catenin信号通路同时也调节MGP表达,该作用可能是骨质疏松症发病的机制之一。     

RNA干扰抑制雌激素受体α亚基对雌激素诱导人成骨样细胞护骨素表达的影响

目的 探讨RNA干扰抑制人成骨样细胞株MG63中雌激素受体α亚基(estrogen receptor α subunit ERα)后，对17β-雌二醇(E2)诱导护骨素(OPG)表达的影响。方法 利用计算机辅助设计ERα特异性siRNA，体外合成siRNA基因，并将其定向克隆入真核表达载体pSilencer4．1-CMV。以脂质体法转染ERα siRNA载体至人的成骨样细胞株MG63中，鉴定后分别用不同浓度的雌激素或G蛋白抑制剂苏拉明干预经ERα siRNA转染的MG63细胞或未经ERα siRNA转染的MG63细胞，RT-PCR法检测OPG mRNA的表达水平。结果 双酶切法鉴定重组质粒后，RT-PCR法鉴定ERα siRNA载体可特异地抑制MG63细胞中ERα的表达。不同浓度的17β-E2上调MG63细胞OPG mRNA的表达，其中以10^-7mol／L的作用最强。但经ERα siRNA载体抑制MG63细胞ERα亚基后，17β-E2上调MG63细胞OPG mRNA表达的作用消失。结论 17β-E2主要经ERα亚基上调MG63细胞OPG的表达。     

雌激素受体α在睾酮影响人脐静脉内皮细胞衰老中的重要作用

目的观察睾酮对过氧化氢(H2O2)诱导衰老的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的影响,并初步探讨其作用机制。方法将内皮细胞分为正常对照组、H2O2对照组、不同浓度睾酮组(3×10-9～3×10-6mol/L)、ICI182,780组和氟他胺组。用SA-β-半乳糖苷酶细胞化学检测法观察各组细胞衰老情况,Western blot法检测细胞中雌激素受体α(ERα)水平。结果与正常对照组比较,H2O2对照组可以引起HUVECs衰老细胞明显增加。3×10-9mol/L、3×10-8mol/L、3×10-7mol/L睾酮组均具有延缓H2O2诱导HUVECs衰老的趋势,3×10-6mol/L睾酮组却具有相反的作用。3×10-9～3×10-6mol/L睾酮组ERα各条带吸光度值分别为113.54±8.09、165.69±7.09、143.63±6.84、80.81±5.29。结论睾酮对H2O2诱导HUVECs衰老的影响与其剂量有关,而且睾酮还呈剂量相关性调节H2O2诱导HUVECs的ERα表达。     

雌二醇对去卵巢小鼠脾细胞雌激素受体表达和辅助性T细胞1和2平衡的影响

目的研究不同浓度雌二醇(E_2)对去卵巢小鼠脾细胞雌激素受体(ER)及辅助性T细胞1(Th1)和辅助性T细胞2(Th2)之间平衡的影响。方法将小鼠脾细胞分为7组:青年组、假手术组、去卵巢对照组及去卵巢+E_2(10~(-11)mol/L、10~(-10)mol/L、10~(-9)mol/L、10~(-8)mol/L)组。逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测ERα、ERβmRNA的表达;酶联免疫吸附法(ELISA)法检测细胞因子干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-2(IL-2)和白细胞介素-4(IL-4)水平,以了解Th1与Th2的平衡关系。结果去卵巢对照组ERα、ERβmRNA水平分别为0．68±0．15和0．70±0．17,较青年组(0．95±0．21和0．93±0．1 9)及假手术组(0．98±0．28和0．94±0．20)下降(P＜0．05和P＜0．01);去卵巢+E_2(10~(10)mol/L)组ERα、ERβ的表达分别为0．95±0．19和0．90±0．29,较去卵巢对照组升高(P＜0．05和P＜0．01)。去卵巢对照组IFN-γ、IL-2分别为(360．36±8．64)ng/L和(1485．49±5．01)ng/L,较青年组[(93．46±4．81)ng/L和(704．37±5．32)ng/L]及假手术组[(92．47±2．95)ng/ L和(716．84±1 6．48)ng/L]升高(均为P＜0．01);而去卵巢对照组IL-4水平[(258．11±6．00)ng/L]低于青年组[(269．77±8．44)ng/L]和假手术组[(270．18±10．34)ng/L](均为P＜0．05)。去卵巢+ E_2(10~(10)mol/L)组的IFN-γ、IL-2分别为(94．05±7．17)ng/L和(712．15±13．84)ng/L,低于去卵巢对照组(均为P＜0．01),IL-4为(269．76±2．05)ng/L,高于去卵巢对照组(P＜0．05)。结论不同浓度E_2对去卵巢小鼠脾细胞ERα、ERβ基因表达起不同的调节作用:在生理范围内为正向调节,超生理范围为负向调节。小鼠去卵巢后影响脾细胞Th1和Th2的平衡,表现为Th1漂移。生理浓度的E_2能部分逆转Th1漂移,部分恢复Th1和Th2的平衡。     

17β-雌二醇下调人成骨样MG63细胞结缔组织生长因子表达机制的研究

10-8mol/L雌二醇可明显下调人成骨样MG63细胞结缔组织生长因子(CTGF)mRNA及蛋白的表达;蛋白激酶A(PKA)阻断剂H-89可完全阻断雌二醇对CTGF的降调节作用。PKA活化剂forskolin可模拟雌二醇作用,明显下调人成骨样MG63细胞CTGF mRNA、蛋白的表达。17β-雌二醇下调人成骨样MG63细胞CTGF表达由PKA介导。     

过氧化氢上调白细胞介素1β诱导人肺上皮细胞表达环氧合酶2

目的探讨过氧化氢(H2O2)对白细胞介素1β(IL-1β)诱导人肺上皮细胞(HPEC)环氧合酶2(COX-2)表达的影响.方法应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)半定量法和酶联免疫吸附试验 (ELISA)测定IL-1β、H2O2或二者联合干预后HPEC COX-2 mRNA表达量及前列腺素E2(PGE2)释放量的变化, 以不加任何试剂的细胞为对照组.结果 (1)COX-2 mRNA表达量1、5、10 mg/L 的IL-1β处理组COX-2 mRNA表达量分别为(143.1±7.2)%、(179.9±9.0)%、(190.0±9.5)%,对照组为(32.9±1.7)%,1、5、10 mg/L 的IL-1β处理组与对照组比较差异有显著性(P均<0.05); (2)培养基上清液PGE2浓度5、10 mg/L 的IL-1β处理组培养基上清液PGE2浓度分别为 (20.86±5.23)×10-6 g/L、(31.16±2.64)×10-6 g/L,对照组为(10.49±0.36)×10-6 g/L, 5、10 mg/L 的IL-1β处理组与对照组比较差异有显著性(P<0.05);(3) COX-2 mRNA表达量 0.10、0.25、0.50 mmol/L 的H2O2和IL-1β共处理组COX-2 mRNA表达量分别为 (149.2±7.5)%、(189.6±9.5)%、(239.1±12.0)%, IL-1β单独处理组为(66.1±3.7)%, 对照组为(41.6±2.1)%, 0.10、0.25、0.50 mmol/L 的H2O2和IL-1β共处理组与IL-1β单独处理组比较,差异有显著性 (P<0.05); (4)培养基上清液PGE2浓度0.10、0.25、0.50 mmol/L的H2O2和IL-1β共处理组,培养基上清液PGE2浓度分别为 (27.01±5.16)×10-6 g/L、(32.79±3.01)×10-6 g/L、(41.13±3.41)×10-6 g/L,对照组为(10.49±0.36)×10-6 g/L,0.10、0.25、0.50 mmol/L的H2O2和IL-1β共处理组与对照组比较差异有显著性(P<0.05).0.25、0.50 mmol/L的 H2O2和IL-1β共处理组PGE2浓度均与IL-1β单独处理组[(20.86±5.23)×10-6 g/L]比较差异有显著性 (P<0.05). 结论过氧化氢上调IL-1β对HPEC COX-2的诱导表达,其调节机制可能发生在转录水平.     

RNA干扰基因敲低雌激素受体β对雌激素诱导人成骨样细胞护骨素表达的影响

RNA干扰敲低人成骨样细胞株MG63中雌激素受体β后，RT-PCR法发现不同浓度的17β-雌二醇均能上调MG63细胞中的护骨素mRNA表达水平，其中以10^-7mol／L的作用最强。而这种作用不能被G蛋白抑制剂suramin所抑制。提示雌激素受体β可能不涉及雌激素上调MG63细胞护骨素表达的调控作用。     

15-脱氧前列素2抑制MG63细胞活性并诱导其凋亡的机制

目的研究过氧化物酶体增殖活化受体(PPAR)γ的内源性配体15-脱氧前列素2(15d-PGJ2)对骨肉瘤细胞株MG63的增殖活性的影响及诱导其凋亡可能的作用机制。方法采用人骨肉瘤细胞MG63,分别用终浓度为0.1、1、5、10和50μmol/L15d-PGJ2处理,对照组不给予药物,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定药物作用24 h、48 h、72 h及96 h细胞增殖的变化;流式细胞术(FCM)结合Annexin V/PI双染色观察终浓度5μmol/L和20μmol/L15d-PGJ2作用48 h和72 h MG63细胞周期变化及诱导细胞凋亡和坏死情况;逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测终浓度20μmol/L15d-PGJ2处理48 h对MG63细胞中PPARγm RNA的表达影响;通过免疫细胞化学技术检测终浓度20μmol/L15d-PGJ2作用48 h,MG63细胞中凋亡相关蛋白caspase3,p53和Bax/bcl-2的表达情况。结果 MTT结果显示:1各浓度15 d-PGJ2作用24 h、48 h、72 h及96 h,对MG63细胞增殖均有抑制作用,48 h达到最佳抑制效果。48 h、72 h及96 h抑制率两两比较均无差异(P>0.05),且50μmol/L对细胞的抑制率几乎达100%;2在各时间点,各浓度组间比较均有差异(P=0.000),在0.1⁵0μmol/L浓度组区间,相同时间点的抑制率有随浓度升高而递增的趋势。流式细胞术检测结果显示:不同浓度的各细胞周期分布差异有统计学意义(P=0.000)。加药组G0/G1期细胞比例均高于对照组,S和G2/M期相应减少,且细胞凋亡率增高,表明加药组可使细胞G0/G1期阻滞且诱导细胞凋亡;RT-PCR检测PPARγm RNA的表达,并同时逆转录稳定的内参片段β-actin,以二者的面积灰度值比值作为该m RNA的相对表达量,20μmol/L 15d-PGJ2作用48 h,PPARγm RNA的相对表达量(2.06±0.35)与对照组(0.94±0.23)比较有差异(P<0.05);免疫细胞化学结果显示:药物干预组凋亡相关蛋白caspase3和Bax表达与对照组比较显著增加,而p53和bcl-2表达下降(P<0.05)。结论 1PPARγ激动剂15d-PGJ2能明显抑制人骨肉瘤MG63细胞的生长,引起细胞G1期阻滞并诱导细胞凋亡。215d-PGJ2可能通过增加PPARγm RNA表达,上调凋亡相关蛋白caspase3和Bax及下调p53和bcl-2表达而诱导细胞凋亡。     

雌二醇和孕酮对人成骨细胞胰岛素受体底物基因表达的时间与剂量依赖性

目的观察雌二醇和孕酮对人成骨细胞和人成骨肉瘤MG63细胞胰岛素受体底物(IRS)mRNA表达的影响。探讨雌、孕激素参与骨代谢的作用机制。方法用半定量RTPCR检测人成骨细胞和人成骨肉瘤细胞IRS1、IRS2mRNA的表达量。结果雌二醇或孕酮均诱导MG63细胞IRS2mRNA的表达上调,具有剂量依赖性(P<0.05)和时效依赖性(P<0.05)。其中分别以10-8mol/L的雌二醇干预24h和10-8mol/L的孕酮干预12h作用最明显,分别为对照组的(421±68)%和(327±54)%(均P<0.01)。雌二醇或孕酮共同干预进一步促进MG63细胞和人成骨细胞IRS2mRNA表达的上调,分别为对照组的(496±54)%和(452±58)%(均为P<0.01)。雌二醇和孕酮不影响人成骨细胞和MG63细胞IRS1mRNA的表达(P>0.05)。结论雌二醇或孕酮均可使人成骨细胞和MG63细胞的IRS2mRNA表达上调,且存在剂量与时间依赖性;但不影响IRS1mRNA的表达。     

17β-雌二醇及代谢产物对大鼠肝星状细胞功能的影响

目的 探讨17β-雌二醇(β-Est)及其主要代谢产物2-羟雌二醇(2OHE)、2-甲氧雌二醇(2MeOE)对肝星状细胞(HSC)功能的影响及其可能的作用途径。方法 采用原位酶灌注法和密度梯度离心法分离HSC。初次传代后，HSC随机分成10组，分别加入不同浓度β-Est、2OHE、2MeOE，加药后72h，采用MTT、ELISA及免疫组化法分别检测HSC增殖、培养液中透明质酸(HA)和Ⅳ型胶原(VⅣ)含量及细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、雌激素受体(ER)表达。结果 在10^-9～10^-7mol／L浓度范围内，β-Est、2OHE、2MeOE能抑制活化HSC增殖、分泌细胞外基质(ECM)，呈剂量依赖关系，10^-7mol／Lβ-Est、2OHE、2MeOE能抑制活化HSC表达α-SMA，生物学活性依次为2MeOE＞20HE＞β-Est。10^-7mol／L β-Est能促进HSC表达ERβ蛋白，而相同浓度2OHE、2MeOE对HSC表达ERβ蛋白无影响。结论 在生理条件下，雌激素抑制肝纤维化形成可能通过其代谢产物发挥作用。     

高钙拮抗氟对人牙乳头间充质细胞毒性的体外试验研究

目的观察高浓度钙对氟细胞毒性的影响.方法体外培养的人牙乳头间充质细胞给予不同浓度氟10～2 630 μmol/L处理,将有明显氟细胞毒性的实验组同时予高浓度钙(4.1,10 mmol/L)处理,用S四唑盐(MTT)比色法和透射电镜观察细胞活性和超微结构.结果 263,1 315,2 630×10-6mol/L氟对人牙乳头间充质细胞毒性明显,10×10-3mol/L和4.1×10-3mol/L钙对1 315×10-6mol/L浓度以下氟毒性有明显拮抗作用,对2 630×10-6mol/L氟毒性作用不确定.结论氟细胞毒性在一定范围内可被高钙拮抗.     

17β-雌二醇对脂肪细胞促酰化蛋白受体和下游信号蛋白表达的影响

目的观察17β-雌二醇对3T3-L1(前)脂肪细胞促酰化蛋白受体C5L2 mRNA、细胞表面C5L2蛋白和促酰化蛋白下游信号蛋白表达的影响。方法体外培养3T3-L1细胞,"鸡尾酒"方法诱导细胞分化,用不同浓度17β-雌二醇作用于3T3-L1(前)脂肪细胞,孵育过夜后收获细胞,采用RT-PCR和流式细胞仪检测促酰化蛋白受体mRNA和蛋白表达情况;采用Western Blot法检测基础状态和促酰化蛋白刺激时Gαq/11、Gβ、p-PKCα和p-PKCζ蛋白表达。结果10-8mol/L17β-雌二醇轻度增加3T3-L1成熟脂肪细胞和前脂肪细胞C5L2 mRNA和蛋白的表达,10-6mol/L时3T3-L1成熟脂肪细胞C5L2 mRNA和蛋白表达分别下降了40%(P<0.05)和21%(P<0.05)。但前脂肪细胞C5L2mRNA和蛋白表达水平差异均无显著性。高浓度(10-6mol/L)17β-雌二醇组在一定程度上抑制促酰化蛋白刺激的成熟脂肪细胞Gαq/11、Gβ、p-PKCα和p-PKCζ的表达,促酰化蛋白刺激的蛋白表达分别减少了17%、23%、15%和15%(P均>0.05);在前脂肪细胞,10-6mol/L17β-雌二醇仅抑制促酰化蛋白刺激的Gαq/11蛋白表达24%(P<0.05),对Gβ、p-PKCα和p-PKCζ的表达无明显差异。但17β-雌二醇作用后,在一定程度上"中和"促酰化蛋白对Gαq/11、Gβ、p-PKCα和p-PKCζ的促进作用。结论高浓度雌激素可诱导促酰化蛋白抵抗发生,促酰化蛋白抵抗可能参与了高浓度雌激素引起的脂肪细胞胰岛素抵抗状态的病理生理过程。     

不同浓度氢溴酸槟榔碱对结肠平滑肌细胞钙离子移动和收缩力的影响

[目的]观察不同浓度的氢溴酸槟榔碱(Ah)对结肠平滑肌细胞钙离子(Ca2+)移动的影响,以探讨其对平滑肌收缩力的作用。[方法]取培养大鼠结肠平滑肌细胞,以荧光指示剂Fluo-3/AM负载,通过激光共聚焦显微镜(LSCM)动态观察不同浓度Ah对培养的结肠平滑肌细胞Ca2+移动的作用。[结果]Ah在1×10-10、1×10-9、1×10-8、1×10-7、1×10-6、1×10-5、1×10-4mol/L浓度刺激下可使结肠平滑肌细胞[Ca2+]i荧光强度(FI)逐渐升高(P<0.05),而在未加药以及1×10-13、1×10-12、1×10-11mol/L浓度刺激下对[Ca2+]iFI无影响(P>0.05);在1×10-3mol/L浓度刺激下细胞膜迅速发生破裂;应用阿托品预处理,则FI从4.28±1.51降至3.83±1.40(P>0.05)。[结论]Ah可使结肠平滑肌细胞内[Ca2+]i逐渐升高,阿托品可阻断Ah对平滑肌的收缩作用。     

蛙皮素对人胰腺癌细胞系CFPAC-1细胞周期蛋白D1/细胞周期蛋白依赖性激酶4的影响

背景:胃肠激素蛙皮素作为一种强有力的有丝分裂原,能刺激多种正常和肿瘤组织生长。目的:探讨蛙皮素对人胰腺癌细胞系CFPAC-1的促生长作用及其对细胞周期调控因子细胞周期蛋白(cyelin)D_1和细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)4的调节作用,以及蛙皮素促生长作用的机制。方法:用四唑蓝(MTT)比色法作为增殖指标,研究蛙皮素对CFPAC-1细胞生长的影响。用流式细胞仪观察蛙皮素对CFPAC-1细胞cyclin D_1表达的影响。用Western印迹和增强化学发光法(ECL)自显影观察蛙皮素对CFPAC-1细胞CDK4蛋白表达的影响。结果:一定浓度的蛙皮素对CFPAC-1细胞的生长具有促进作用,以1×10~(-10)mol/L蛙皮素的促生长作用最为明显(MTT OD_(570nm):蛙皮素1×10~(-10)mol/L组和对照组分别为0.652±0.155和0.359±0.109,n=3,P=0.002)。流式细胞仪检测发现,1×10~(-10)mol/L蛙皮素作用30min对CFPAC-1细胞cyclin D_1的表达有促进作用,但无显著统计学差异(P>0.05)。Western印迹和ECL自显影结果表明,1×10~(-10)mol/L蛙皮素作用15min可使CFPAC-1细胞CDK4蛋白表达升高,而后逐渐下降。结论:蛙皮素对CFPAC-1细胞的促生长作用部分是通过蛙皮素介导的细胞周期调控因子cyclin D_1/CDK4蛋白表达升高,从而促进细胞周期进展而实现的。     

雌二醇对成骨细胞OPG和RANKL的影响

目的探讨不同浓度17β-雌二醇(E2)作用下体外培养大鼠成骨细胞护骨素(OPG)、细胞核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)的表达及雌激素治疗骨质疏松的机制。方法采用不同浓度(10-10、10-9、10-8、10-7mol/L)17β-E2刺激培养的大鼠成骨细胞(OB),RT-PCR方法检测OPG、RANKL mRNA的表达。结果原代OB呈多角形、梭形,传代OB胞核较大,细胞质内见黑色颗粒,细胞形态为多角形或梭形,见突起,三代细胞碱性磷酸酶染色阳性,胞质见大量灰黑色颗粒,细胞鉴定符合成骨细胞特征。不同浓度(10-9、10-8、10-7mol/L)17β-E2对OB OPG mRNA表达具有显著的增强作用(P<0.05),其中10-8mol/L 17β-E2对OB OPG mRNA表达最高,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01),而10-10mol/L 17β-E2对成骨细胞OPG mRNA表达几乎无影响,与对照组比较无显著差异(P>0.05),10-10、10-9、10-7mol/L 17β-E2对成OB RANKL mRNA表达几乎无影响,与对照组比较无明显差异(P>0.05),其中10-8mol/L17β-E2对OB RANKL mRNA的表达具有明显的抑制作用,其与对照组比较差异明显(P<0.05)。结论雌激素治疗骨质疏松的作用可能与其促进成骨细胞OPG表达、抑制RANKL表达相关。     

ERK1/2蛋白在17β-雌二醇抑制睾酮诱导的心肌细胞肥大反应中的作用

目的 观察17β-雌二醇对睾酮诱导的心肌肥大反应的影响,探讨细胞外信号调节激酶(ERK1/2蛋白)在性激素对心肌肥大影响中的作用.方法 采用差速贴壁法分离、纯化培养新生SD大鼠心肌细胞,以Bradford法测定心肌细胞蛋白质含量,同位素法分析3H-亮氨酸(3H-Leu)掺入,以免疫印迹法检测心肌细胞ERK1/2蛋白表达水平的变化.结果 10-10 ～ 10-6 mol/L 17β-雌二醇可明显对抗睾酮诱导的心肌细胞蛋白质含量和3H-Leu掺入的增加,其中以10-8 mol/L 17β-雌二醇作用最为明显；预先给予10-6 mol/L雌激素受体拮抗剂他莫昔芬作用2h,可部分取消17β-雌二醇对睾酮诱导的心肌细胞蛋白质含量增加的抑制效应.用50μmol/L ERK1/2上游激酶MEK1/2的特异性抑制剂PD98059预处理2h不能增强17β-雌二醇对睾酮诱导的心肌细胞3H-Leu掺入的抑制作用；10-8 mol/L 17β-雌二醇可以对抗睾酮诱导的心肌细胞ERK1/2蛋白表达增加；10-6mol/L他莫昔芬预处理2 h可部分取消17β-雌二醇对睾酮诱导的心肌细胞ERK1/2蛋白表达增加的抑制作用.结论 17β-雌二醇经雌激素受体介导下调睾酮诱导的心肌细胞ERK1/2蛋白表达,从而抑制由睾酮诱导的心肌细胞肥大反应.     

胃腺癌细胞中血管活性肠肽自分泌调节作用及其机制

目的　研究胃腺癌细胞株SGC7901细胞中是否存在血管活性肠肽(VIP)的自分泌调节作用及其机制。方法　用RT PCR检测SGC7901细胞中VIP及其受体(VIPR1、VIPR2 )mRNA的表达,用免疫组化观察SGC7901细胞蛋白的表达,用放射免疫法测定细胞上清液中VIP含量,用MTT及细胞计数法观察外源VIP和VIP受体拮抗剂 [D p Cl Phe6, Leu17 ] VIP对SGC7901细胞增殖的影响。同时用RT PCR检测外源VIP及其受体拮抗剂孵育前后细胞c myc、鸟氨酸脱羧酶(ODC)mRNA的表达量变化。结果　SGC7901细胞不仅表达VIPmRNA,而且是VIP免疫反应阳性细胞,VIP免疫反应阳性颗粒主要分布在细胞质,少数在细胞核。细胞培养上清液中可检测到VIP蛋白,平均每 106 个细胞可分泌 (13. 15±8. 54)pg的VIP。SGC7901细胞也能表达VIPR1 和VIPR2 mRNA。10-5 ~10-12 mol/L外源性VIP孵育 24h后,细胞增殖无显著影响 (P>0. 05),而 10-5 ~10-8 mol/L拮抗剂显著促进SGC7901细胞增殖(P<0. 05)。10-6 mol/L外源性VIP孵育 24h后,SGC7901细胞c myc及ODCmRNA的表达量显著下降(RM /β: 0. 816±0. 049比 0. 901±0. 054,P<0. 01;RO/β: 0. 737±0. 060比 0. 830±0. 051,P<0. 01);而10-6 mol/L[D p Cl Phe6, Leu17 ] VIP使细胞c myc及ODCmRNA的表达量显著升高 (RM/β: 0. 950±0     

氟对人牙乳头间充质细胞及分泌碱性磷酸酶活性的影响

为了明确氟对人牙乳头间充质细胞和分泌碱性磷酸酶活性的影响 ,体外培养人牙乳头间充质细胞 ,给予不同浓度氟处理 :0 μmol,10 μmol(0 .2× 10 - 6 g/ L) ,5 2 μmol (1.0× 10 - 6 g/ L) ,2 6 3μmol(5 .0× 10 - 6 g/ L) ,1315 μmol (2 5×10 - 6 g/ L) ,2 6 30 μmol(5 0× 10 - 6 g/ L) ,用四唑盐比色法 (MTT法 )测定细胞活力 ,酶联免疫法检测碱性磷酸酶活性 ,结果显示 ,当氟浓度为 2 6 3μmol时 ,培养 2 4 h后 ,细胞活性明显抑制 ,AL P活性无明显改变 ;当氟浓度为 1315 μmol和2 6 30 μmol时 ,培养 12 h细胞活性明显抑制 ,分泌的 AL P活性升高 ,培养 72 h时 2 6 30 μmol氟浓度组几乎无活细胞 ,而AL P活性仍较对照组高 ,由此提示 ,氟作用于人牙乳头细胞时 ,细胞活性与 AL P活性升高不一致     

雌激素对Aβ25-35致PC12细胞膜流动性改变的影响

目的观察可溶性Aβ25-35作用下PC12细胞膜流动性的改变及17β-雌二醇(17βE2)对此改变的影响。方法培养的PC12细胞分为空白对照组,Aβ损伤组及雌激素干预组,根据浓度梯度雌激素干预组再分为5个剂量亚组,采用荧光偏振法动态检测不同组PC12细胞不同时间膜流动性的改变。结果Aβ损伤组在加入5μmol/L可溶性Aβ25-35后各时间点,与空白对照组比较,其微黏度η值均明显升高(P<0.01);17βE2干预组在10-10mol/L浓度的条件下各时间点η值与Aβ损伤组比较差异无显著性(P>0.05);而在10-9~10-6mol/L浓度的条件下各时间点η值与Aβ损伤组比较均显著降低(P<0.01),且这种作用具有剂量依赖性,17βE210-91、0-8、10-7、10-6mol/L干预组与Aβ损伤组比较,在24 h时PC12细胞微黏度η值分别降低了36.4%、49.6%、60%及68.4%。结论可溶性Aβ25-35 5μmol/L使PC12细胞微黏度明显升高,膜流动性明显下降;雌激素具有改善膜流动性保护神经元的作用,且这种作用具有剂量依赖性。     

测定抗疟药体外杀恶性疟原虫配子体作用的新方法

本文报道用最小浓度的乙胺嘧啶抑制体外培养的恶性疟原虫无性体增殖,从而获得纯配子体的方法。同时将此培养纯配子体的方法用于观察Ⅲ期配子体对氯喹、卤泛曲林、乙胺嘧啶、奎宁的敏感性。使用的恶性疟原虫为NF54株,它对氯喹、乙胺嘧啶、卤泛曲林、奎宁均敏感。以不同方法配制药液。用蒸馏水配制1×10~(-3)mol/L的氯喹,0.5%乳酸配制1×10~(-2)mol/L乙胺嘧啶,70%乙醇配制2×10~(-3)mol/L卤泛曲林,蒸馏水配制1×10~(-3)mol/L的奎宁。用RPMI 1640完全培养液按不同浓度稀释药液。