HIV外膜蛋白的结构与功能研究进展

人免疫缺陷病毒 (ｈｕｍａｎｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙｖｉｒｕｓ ,ＨＩＶ)ｅｎｖ基因编码的前体分子 ｇｐ16 0 (ＨＩＶ 1)或ｇｐ140 (ＨＩＶ 2 )经蛋白酶剪切加工后 ,成为成熟的外膜蛋白ｇｐ12 0 (ＨＩＶ 1) ｇｐ10 5 (ＨＩＶ 2 )和跨膜蛋白 ｇｐ41(ＨＩＶ 1) ｇｐ36 (ＨＩＶ 2 )。在病毒表面 ,外膜蛋白和跨膜蛋白以非共价键结合成Ｅｎｖ异二聚体 ,3个异二聚体组成包膜超分子结构 ,形成病毒表面的突起[1 ] 。ＨＩＶ外膜蛋白是激发体液免疫和细胞免疫应答的最重要蛋白抗原。自从 1984年Ｋｌａｔｚｍａｎｎ等发现ＨＩＶ与ＣＤ4+细…     

HIV-1 p24抗原检测的应用研究

目的：用抗ＨＩＶ－１ｐ２４单克隆抗体和多克隆抗体和多克隆抗体构建的间接ＥＬＩＳＡ试剂,检测ＨＩＶ－１抗体阳性及其它样品,探讨应用的可行性。方法：采用单克隆抗体固相、兔抗ＨＩＶ－１ｐ２４抗体夹心,羊抗兔ＨＲＰ结合物的间接ＥＬＩＳＡ法。结果：显示试剂盒ＨＩＶ－１ｐ２４抗原检出灵敏度为５０ｐｇ／ｍｌ（基因工程抗原）;特异性９９．４６％;ＨＩＶ抗体阳性血样性率３．２％;抗体阴性的特殊人群血样阳性率３．９＆     

抗人类免疫缺陷病毒gp41和丙型肝炎病毒NS3杂交瘤细胞株的建立

目的为检测血清中人类免疫缺陷病毒（ＨＩＶ）和丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）抗原提供血清学指标。方法用纯化的重组ＨＩＶ（ｇｐ４１）和ＨＣＶ（ＮＳ３）抗原蛋白作为联合免疫原，免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取脾细胞与Ｓｐ２／０小鼠骨髓瘤细胞融合，并采用挑单个细胞的方法进行一次克隆。结果分别获得４株和６株能稳定分泌高效价抗ＨＩＶ（ｇｐ４１）和ＨＣＶ（ＮＳ３）抗原蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株。初步建立了双抗体夹心法检测ＨＩＶ（ｇｐ４１）和ＨＣＶ（ＮＳ３）抗原的酶联免疫吸附试验。结论本方法是建立单抗杂交瘤细胞株的快速方法，所建杂交瘤细胞株特异性强，效价高，分泌抗体性能稳定，有推广价值。     

佐剂白细胞介素2对乙型肝炎病毒核酸疫苗免疫效应的影响

核酸免疫是指将编码外源蛋白的核酸表达载体直接导入机体以激发机体产生特异性免疫应答。由于核酸疫苗可诱导机体产生较强的细胞免疫应答 ,故有望应用于慢性病毒性感染如乙型肝炎的治疗。探讨如何增强乙型肝炎病毒核酸疫苗的免疫效应 ,尤其细胞免疫效应具有重要意义。为此 ,我们构建了编码乙型肝炎病毒 (ＨＢＶ ,ｈｅｐａｔｉｔｉｓＢｖｉｒｕｓ)表面抗原蛋白的重组真核表达质粒ｐＣＲ3 1 Ｓ作为ＨＢＶ核酸疫苗 ,研究了人白细胞介素 2 (ｒｈＩＬ 2 ,ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｈｕｍａｎｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ 2 )对ＨＢＶ核酸疫苗诱导ＢＡＬ…     

酶联免疫吸附法同时检测血清中的HIV和HCV抗体

用酶联免疫吸附试验检测病毒抗体 ,多为对单一抗体的检测 ,我们将人类免疫缺陷病毒 (ＨＩＶ 1 2 )和丙型肝炎病毒 (ＨＣＶ)抗原包被于同一载体 ,同时检测这两种病毒的抗体 ,取得了与单测法基本一致的效果。ＨＩＶ 1 2抗原和ＨＣＶ抗原为加拿大Ｙｅｓ生物技术研究有限公司产品 ;ＨＩＶ酶联免疫检测试剂盒批号 96 0 5 15 ,ＨＣＶ酶联免疫诊断试剂盒批号 96 0 72 3,均为厦门新创科技有限公司产品。ＨＩＶ和ＨＣＶ抗体阴、阳性国家参照品由卫生部药品生物制品检定所制备 ,批号分别为 96 0 1、96 0 4。 112 0份血清样品取自山东医科大学附属医院…     

抗HIV核心蛋白p24单克隆抗体的研制及鉴定

抗ＨＩＶ核心蛋白ｐ２４单克隆抗体的研制及鉴定王宏伟金宁一刘仔郭军庆郭志儒毛春生李萍殷震（解放军农牧大学研究所病毒室，长春１３００６２）人Ｉ型免疫缺陷病毒（ＨＩＶ１）是导致人获得性免疫缺陷综合征（ＡＩＤＳ）的主要病原［１］。对ＨＩＶ１感染的诊断，常...     

SARS-CoV核衣壳蛋白单克隆抗体识别抗原位点的分析

SARS CoV主要的结构蛋白包括刺突糖蛋白(spikeglycoprotein ,S)、包膜小蛋白 (smallenvelope ,E)、膜蛋白 (membrane ,M)和核衣壳蛋白 (nucleocap sidprotein ,N)。研究发现 ,N蛋白诱导机体产生很强的免疫应答〔1〕,我们用SARS CoV全病毒免疫小鼠制备的单克隆抗体 ,发现有 80 %是针对N蛋白的抗体 ,证明N蛋白具有很强的免疫原性 ,这与以往对动物冠状病毒N蛋白研究结果是一致的〔2〕。本研究通过对SARS CoVN蛋白单克隆抗体结合抗原位点分析 ,以及用SARS CoV抗体阳性血清与单抗对N蛋白进行竞争抑制试验 ,分析自然状态下机体对N蛋…     

人类免疫缺陷病毒1型云南株外膜蛋白原核表达克隆的构建

目的为研究我国云南１型人类免疫缺陷病毒（Ｈｕｍａｎｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙｖｉｒｕｓｔｙｐｅ１，ＨＩＶ－１）流行株外膜蛋白（ｇｐ１２０）的有关抗原表位。方法采用套式聚合酶链式反应，以来自云南流行区ＨＩＶ－１感染者的外周血单核巨噬细胞基因组为模板，进行云南流行株外膜蛋白基因（ｅｎｖ）片段的扩增，并将ｅｎｖ基因片段与原核表达载体ｐＢＶ２２０进行重组，构建成质粒ｐＹＮｅｎｖ并在大肠杆菌（Ｅ．ｃｏｌｉＤＨ１０ｂ）中获得表达。采用限制性内切酶分析进行重组质粒的鉴定。结果含重组质粒的宿主菌经３０℃２０小时培养后，转入４２℃培养５小时，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ蛋白电泳分析有重组蛋白的表达。经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ反应证实，该重组蛋白可与来自该流行区的ＨＩＶ－１感染者血清（含多克隆抗体）发生特异反应。结论该重组膜蛋白可作为抗原用于ＨＩＶ－１膜蛋白抗体的检测，并为进一步研究ＨＩＶ－１ｇｐ１２０的病理机制奠定了基础。     

HIV核心抗原p24检测方法的建立及应用

ＨＩＶ感染的检测在预防ＡＩＤＳ传播方面有重要作用。本研究以重组抗原ｐＧ１免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，应用淋巴细胞杂交瘤技术建立了５株识别ＨＩＶ核心抗原ｐ２４的杂交瘤细胞株Ｄ３，１Ｈ１，２Ｇ１０，３Ｈ５和４Ｈ６。经鉴定这５株ＭｃＡｂ与其它病毒抗原无交叉反应，分别识别３个不同的抗原表位。应用两株识别不同表位的ＭｃＡｂ２Ｇ１０和３Ｈ５建立了检测ＨＩＶｐ２４抗原的夹心ＥＬＩＳＡ法，并初步检测了２４份ＨＩＶ抗体阳性血清。     

pPIC3.5-HPV16L1重组质粒在酵母菌中表达L1蛋白的初步结果

人乳头瘤病毒(Ｈｕｍａｎｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓ,ＨＰＶ)能引起人类多种良性皮肤和粘膜乳头状瘤或疣,且许多型别可导致癌变。诸多研究表明,ＨＰＶ16型与宫颈癌等癌症发生密切相关,所以预防ＨＰＶ感染对防止宫颈癌的发生具有重大意义。ＨＰＶ基因功能区包括早期区(Ｅ区)、晚期区(Ｌ区)和长调控区(ＬＣＲ)。Ｅ区与病毒转化细胞有关,Ｌ区包括Ｌ1和Ｌ2,Ｌ1基因编码病毒主要衣壳蛋白,表达蛋白能刺激机体产生保护性抗体,为此Ｌ1基因是制备基因工程疫苗的理想基因。为获得ＨＰＶ16Ｌ1蛋白,构建了ｐＰＩＣ35ＨＰＶ16Ｌ1重组质粒并在ＧＳ115酵…     

HI-SIV和HIVgp120干预CD_3/CD_4信号转导通路的研究

目的和方法 :在ＨＩＶ感染的早期及无症状的病毒携带者体内ＣＤ 4Ｔ淋巴细胞对抗原和有丝分裂原刺激缺乏ＩＬ - 2表达和增殖反应 ,甚至在ＣＤ 4Ｔ淋巴细胞进行性减少之前就已经有明显的免疫缺陷。形成这一损伤的确切机制尚不十分清楚 ,但已有研究证实ＨＩＶｇｐ1 2 0和ＣＤ4分子结合 ,从而抑制Ｔ淋巴细胞抗原受体 (ＴＣＲ)信号转导有关。本研究采用ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ及电泳迁移率改变检测法 (ＥＭＳＡ)观察了ＨＩＶｇｐ1 2 0多肽片段和灭活ＳＩＶ病毒 (ＨＩ-ＳＩＶ)对ＣＤ3/ＣＤ4活化刺激诱导的ＴＣＲ信号转导通路的影响 ,了解病毒蛋白…     

IL-12的真核表达载体促进小鼠对DNA疫苗的免疫应答

慢性乙型肝炎及其病毒携带者细胞免疫功能明显低下。ＤＮＡ疫苗可被体细胞摄取并表达相应抗原 ,激发出保护性免疫应答 ,包括特异性ＣＴＬ应答及特异性抗体的产生〔1〕。ＩＬ 12是目前发现对体内免疫活性细胞诱导和调节作用最强、范围最广的细胞因子。我们将ＨＢＶＤＮＡ疫苗 (ｐＣＲ3.1 Ｓ)与编码鼠ＩＬ 12的真核表达载体 (ｐＷＲＧ316 9,简称ＩＬ 12 )共同免疫小鼠后 ,观察其对小鼠免疫应答的影响。材料与方法材料 :5～ 8周龄雌性ＢＡＬＢ/ｃ小鼠购自本校实验动物中心 ,体重 15～ 2 0ｇ ;Ｐ815小鼠肥大细胞瘤细胞系 ,编码ＨＢＶＳ抗原的真…     

人免疫缺陷病毒1型生物学性状变异的体外研究

高度的变异性是人免疫缺陷病毒 1型的 (ＨＩＶ 1 )显著特征之一 ,也是ＨＩＶ 1逃脱机体免疫监视的主要原因和ＨＩＶ 1疫苗研制的主要障碍。了解体外传代ＨＩＶ 1基因型别、感染毒力及病毒产量等生物学形状的变异 ,对评估机体内环境在ＨＩＶ 1变异中的作用及评价体外长期传代ＨＩＶ 1毒种的实用性具有重要意义。为此 ,我们对军事科学院Ｐ3实验室保存的ＨＩＶ 1毒种进行长期传代培养 ,观察ＣＰＥ ,分析病毒的感染毒力和病毒产量的变异 ,并进行了基因亚型变异鉴定。1　材料和方法1 1　材料及来源　ＨＩＶ 1ⅢＢ亚型病毒株引自美国 ,用ＭＴ4细…     

丙肝病毒(HCV)基因免疫实验研究

目的：探讨ＨＣＶ核心区基因疫苗在Ｂａｌｂ／ｃ小鼠的免疫应答。方法：将与ＨＣＶ核心区基因互补的ｃＤＮＡ定向克隆于真核表达载体ｐｃＤＮＡ３（ｐｃＤＮＡ－ＨＣＶ）,免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠,观测小因清抗－ＨＣＶ抗体及小鼠脾细胞对ＨＣＶ核心抗原的特异性增殖反应。结果：５只经皮下注射的免疫鼠中有４只出现抗－ＨＣＶ抗体,经肌肉注射的免疫鼠全部出现抗体阳转,而对照组全阴性,肌肉注射的免疫组抗体水平高于皮下注射的免疫     

HPV18 L1基因重组DNA构建及其免疫小鼠体内特异抗体的测定

目的：人类乳头瘤病毒１８型（ＬＰＶ１８）感染与宫颈癌的发生高度相关。其晚期基因Ｌ１编码的Ｌ１结构蛋白是刺激机体产生中和抗体的主要抗原。利用ＨＰＶ Ｌ１基因重组质粒进行ＤＮＡ疫苗的初步免疫学实验研究。方法：从ＨＰＶ１８－ｐＢＲ３２２质粒中扩增ＨＰＶ１８ Ｌ１基因,测序证明扩增片段的可靠性,构建了两个真核表达重组质粒ＨＰＶ１８ Ｌ１－ｐｃＤＮＡ３和ＨＰＶ１８Ｌ１－ｐｃＥＰ４。将提纯的质粒ＤＮＡ直接免疫     

丙型肝炎病毒核心区多片段基因在大肠杆菌内表达

用融合蛋白表达质粒ｐＧｅｘ，在大肠杆菌中表达了丙型肝炎病毒核心区不同基因片段，共获得四个表达蛋白，用免疫印染和ＥＬＩＳＡ检测均与ＨＣＶ抗体阳性血清反应而不与正常人血清反应，证明有ＨＣＶ核心蛋白抗原活。本工作为进一步研究ＨＣＶ不同片段核心蛋白多肽功能及发展我国高质量ＨＣＶ临床诊断试剂提供了基础。     

人Ⅱ型免疫缺陷病毒gag基因在大肠杆菌中的表达

目的：表达ＨＩＶ－２基因工程ｇａｇ抗原。方法：将编码ＨＩＶ－２型ｇａｇ的部分和全部ｐ５５ｇａｇ１／２基因,克隆到载体ｐＥＴ－１７ｂ后,分别在Ｅ．Ｃｏｌｉ ＢＩ２１中表达。结果;表达产物为５１和６１ｋＤ融合蛋白,并可与ＨＩＶ－２病人血清发生特异性反应。     

人源抗人免疫缺陷病毒1型噬菌体抗体库的构建及筛选

目的构建人免疫缺陷病毒１型（ＨＩＶ－１）特异性噬菌体抗体库，制备人源抗ＨＩＶ－１ｇｐ１２０单克隆抗体。方法以半巢式聚合酶链反应（ＰＣＲ）从ＨＩＶ－１感染者外周血单个核淋巴细胞中扩增抗体重链Ｆｄ和轻链（ｋ）基因，与噬菌体载体ｐＣｏｍｂ３连接，构建噬菌体抗体Ｆａｂ组合文库。对抗体库进行３轮吸附－洗脱－扩增的亲和选择后，以ＥＬＩＳＡ法筛选抗ＨＩＶ－１ｇｐ１２０噬菌体抗体，并进行ＤＮＡ序列分析和Ｆａｂ的可溶性表达。结果半巢式ＰＣＲ有效地扩增出Ｆｄ和ｋ基因，以此构建成容量为１９５×１０７的噬菌体抗体库。３轮亲和选择使特异性抗体得到高度富集，抗ＨＩＶ－１ｇｐ１２０噬菌体抗体阳性克隆占３２％。对一阳性克隆抗体基因ＣＨ１和ＣＬ部分ＤＮＡ序列进行了测定，并在大肠杆菌表达出可溶性Ｆａｂ。结论抗ＨＩＶ－１特异性噬菌体抗体库的构建和人源抗ＨＩＶ－１ｇｐ１２０单克隆抗体的制备为今后筛选抗ＨＩＶ中和抗体奠定了基础，具有重要的应用价值。     

识别HIV-1 P_(24)蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

以细胞培养的HIV-1全病毒抗原免疫,通过鼠-鼠杂交瘤技术获得3株分泌单克隆抗体(以下简称单抗)的杂交瘤细胞系(21A、51G、47B)。免疫印迹结果显示3株单抗均能识别病毒的核心元原-P_(24)蛋白。ELISA阻断抑制试验提示,3株单抗分别识别两个不同的抗原决定簇。进而为HIV-1病毒抗原的研究和制备以双抗体夹心法检测P_(24)抗原的试剂打下基础。     

5'-RACE法扩增抗人乳头瘤病毒16型L1蛋白单克隆抗体轻链可变区基因及序列分析

目的 获得抗人乳头瘤病毒16型(HPV16)L1蛋白单克隆抗体的轻链可变区(VL)基因并分析序列.方法 从分泌抗HPV16L1蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞中提取总RNA,逆转录形成cDNA,用5'-RACE策略扩增抗体轻链可变区基因,经琼脂糖凝胶电泳鉴定,并测序及进行序列分析.结果 VL基因全长336bp,编码112个氨基酸,基因测序结果符合小鼠抗体轻链可变区特征.结论 5'-RACE法成功获得了抗HPV16L1蛋白的单克隆抗体轻链可变区基因的真实序列,为基因工程抗体研究奠定了良好基础.