维药鹰嘴豆金属硫蛋白的提取检测

目的 检测维药鹰嘴豆中功能性活性成分金属硫蛋白的含量及分子量大小.方法 采用镉-血红蛋白饱和法与聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)检测金属硫蛋白含量及分子量.结果 鹰嘴豆中金属硫蛋白含量为0.16 mg/g:分子量大约为14 KD.结论 鹰嘴豆中含有金属硫蛋白,生物活性物质金属硫蛋白可能与鹰嘴豆的抗炎抗氧化功能有一定的关系.     

金属硫蛋白与肝主疏泄

金属硫蛋白(MT)是一类主要合成于肝脏的低分子量金属结合蛋白,主要参与体内必需金属元素的储存、代谢、转运和解毒等过程,近年发现MT同时是一种很强的内源性细胞保护物质,尤其在精神应激等损伤中发挥重要保护作用。结合中医“肝主疏泄”理论,探讨MT与肝脏的密切联系及其与中医调肝治法和抗应激损伤的关系,对于阐明肝主疏泄的实质有一定启示。     

MTs在肝癌发生和发展中的作用及中医药防治机制

本文简要综述了近十多年来,本项目组探索金属硫蛋白家族（Metallothioneins,MTs）在肝癌发生与发展中的作用及其中医药防治机制。研究发现,MTs对于肝癌细胞恶性增殖是必要的,在不同应激状态下肝癌细胞MTs表达会显著增加,MTs可能通过上调肝癌细胞核糖体蛋白等基因的表达发挥促进其恶性增殖的作用。MTs在肝癌细胞中的过表达,可能直接改变了细胞核内离子的平衡,并通过与多基因的相互作用,发挥促进肝癌细胞恶性增殖基因表达的作用。中医药防治肝癌常用治法方药可以不同程度地减轻和缓解由二乙基亚硝胺（Diethylnitrosamine,DEN）所造成的肝毒性和损伤作用,降低MTs表达,提示在肝脏保护、抑制其异常增生和肝癌发展方面十分重要。     

中医药治疗原发性肝癌作用机理实验研究进展

原发性肝癌是我国常见的恶性肿瘤 ,占各种恶性肿瘤死亡率的第二位。中医中药在治疗原发性肝癌方面占有重要地位 ,有关中药治疗原发性肝癌作用机理的基础研究 ,国内外科研工作者做了大量的工作 ,现就近年来实验研究进展作一综述。1　抑制肝癌细胞生长抑制肝癌细胞生长实验研究是抗肝癌药物作用机理最基础的研究。实验研究主要从抑制实体瘤或培养细胞两个方面。闰智勇等[1] 观察发现 ,瘤肿宁对荷实体型肝癌 (Ｈ2 2 )小鼠肿瘤能显著抑制其生长作用 ,其最高抑瘤率达 5 6 6 6 %。郭振球等[2 ] 研究表明 ,抗纤灵有抑制肝癌细胞生长的作用 ,含抗纤…     

金属硫蛋白（MT）的诱导、分离纯化与特性研究进展

回顾了近几年来金属硫蛋白（MT）的诱导、分离纯化方法及其在物种间分子进化与特性比较，以期研究者在进行相关研究时选择和建立适宜的诱导和分离纯化方法。     

丹参功能基因组学研究Ⅲ——丹参金属硫蛋白MT-2基因的分析

目的：获得丹参金属硫蛋白基因序列,并进行生物信息学分析和初步的表达特性研究。方法：利用cDNA芯片技术,从不同时期毛状根中获得目的基因。利用BLAST进行序列比对,ORF finder寻找开放读码框,Prosite分析蛋白质的基本结构域。用半定量RT-PCR检测其在丹参组培苗根、茎、叶中的表达情况。结果：得到2个MT基因全长序列,分别编码80和79个氨基酸,具有Type 2型金属硫蛋白的典型特征,分别命名为SmMT-2a和SmMT-2b,两者具有71.25%的同源性。半定量RT-PCR表明,MT基因在丹参组培苗根、茎、叶中均有转录水平的表达,叶中表达量高于根和茎。结论：首次得到丹参金属硫蛋白基因,为其功能研究提供了基础。     

金属硫蛋白介导附子多糖对缺氧复氧心肌细胞的保护

目的:以金属硫蛋白为着眼点,探讨附子多糖对缺氧复氧后心肌细胞的保护机制.方法:建立乳鼠心肌细胞缺氧/复氧模型,将乳鼠心肌细胞分为正常对照组、缺氧/复氧组、附子多糖组.缺氧/复氧组给予心肌细胞缺氧3h后复氧6h;附子多糖组分别给予10.0,1.0,0.1 g·L-1的附子多糖预处理心肌细胞24 h后再予缺氧3h后复氧6h.ELISA检测金属硫蛋白的含量,流式细胞仪检测细胞的凋亡率,测定心肌细胞内丙二醛( MDA)的含量和细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)的含量.结果:与缺氧/复氧组相比较,附子多糖可以呈剂量依赖形式地增加金属硫蛋白的合成,减少MDA的生成与LDH的的释放,抑制心肌细胞凋亡,在10.0 g·L-1时作用达到峰值.结论:附子多糖对于缺氧复氧心肌细胞损伤具有保护效应,其机制与附子多糖促进金属硫蛋白的合成,对抗氧化应激损伤,抑制心肌细胞凋亡有关.     

金属硫蛋白(MT)的诱导、分离纯化与特性研究进展

回顾了近几年来金属硫蛋白 (MT)的诱导、分离纯化方法及其在物种间分子进化与特性比较 ,以期研究者在进行相关研究时选择和建立适宜的诱导和分离纯化方法     

铂化金属硫蛋白与羟自由基反应速率常数的测定

 目的:测量铂化金属硫蛋白(Pt₇Th)与羟自由基(OH^·)的反应速率常数?方法:脉冲辐解N₂O饱和的Pt₇Th及其KSCN竞争体系的水溶液?结果:Pt₇Th中的巯基(RS^-)与羟自由基(OH^·)反应生成巯基自由基(RS^·)的反应速率常数为1.6×10¹¹L·mol^-1·s^-1,RS与RS^·生成阴离子自由基RSSR^·-的正反应速率常数为8.2×10⁹L·mol^-1·s^-1,逆反应速率常数为1.2×105s^-1?结论:Pt₇Th具有较强的清除OH^·的能力,对含铂抗癌药物的临床应用具有重要意义?     

金属硫蛋白2基因在红花中表达的初步研究

目的 获得转金属硫蛋白2(metallothionein 2,MT2)红花植株,为MT药用蛋白的生产奠定基础。方法采用Nco I/HindⅢ酶切pEASY-oleosin-MT获得oleosin-MT融合基因,将其插入到植物油体高效表达载体pOP上,构建重组质粒pOP-oleosin-MT,进行PCR和双酶切鉴定。采用冻融法将重组质粒pOP-oleosin-MT转入根瘤农杆菌EHA105中,通过农杆菌介导法转化红花,对转MT基因红花植株进行PCR检测及Southern blotting检测。结果成功构建了MT基因的植物油体表达载体pOP-oleosin-MT,获得了3株PCR检测呈阳性的转MT基因红花植株。结论建立了完善的红花再生体系,获得了转MT基因的红花植株。     

白花蛇舌草抑制肝癌H22小鼠淋巴管转移的实验研究

目的:观察白花蛇舌草对小鼠肝癌淋巴管转移的影响。方法:在小鼠右下肢爪垫内侧皮下注射接种腹水型肝癌H22瘤株,复制淋巴管转移模型。将模型小鼠随机分为5组,空白组每天灌生理盐水,大、中、小剂量组每天灌白花蛇舌草水煎液,对照组给予环磷酰胺腹腔注射。观察小鼠体质量、免疫器官、肺部转移率、爪垫移植瘤、淋巴结转移瘤等指标变化。结果:白花蛇舌草作用组的小鼠,体质量和免疫器官胸腺质量明显增长,肺部瘤结节数和肺部转移瘤生长指数均下降,且淋巴结转移数明显减少。结论:白花蛇舌草对H22肝癌淋巴管转移有一定抑制作用。     

H22肝癌荷瘤小鼠最佳中药个体化治疗方案的探索和研究

目的:探索H22肝癌小鼠的中药个体化最佳治疗方案。方法:昆明种雄性小鼠腋下接种H22腹水瘤细胞,将中药个体化辨证论治联合肿瘤局部介入化疗/索拉非尼口服综合治疗方案进行调整:对预判预后可能较差者,给予积极治疗,预后可能较好者缓治,并运用小鼠标准化、计量化辨证方法,观察调整后的方案及肿瘤局部介入化疗/索拉非尼口服单纯西医治疗方案对小鼠带瘤生存时间、抑瘤率和证候的影响。结果:前者延长小鼠带瘤生存时间的作用较好(与对照组比较,P<0.05),然而对气血阴阳证候以及胸腺和脾脏指数等指标的影响,未表现出明显的优势。结论:调整后的中药个体化辨证论治方案为H22肝癌荷瘤小鼠的有效治疗方案,其还有待于进一步的优化以成为最佳治疗方案。     

癌痛消胶囊调节小鼠荷H22移植性肝癌细胞VEGF表达的实验研究

目的 :通过观察癌痛消胶囊对小鼠荷H22 移植性肝癌细胞血管内皮细胞生长因子 (vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)表达的调节作用 ,探讨该药抑制肿瘤的作用是否与抑制肿瘤血管生成有关。方法 :于昆明种雄性小鼠前肢右腋皮下接种0 2mlH22 肿瘤细胞悬液(浓度为1×107/ml)进行造模。利用造模动物观察瘤块重量 ,计算肿瘤生长抑制率 ,用免疫组化法检测瘤细胞中VEGF的表达程度。结果 :与阴性对照组相比 ,癌痛消胶囊组有明显的抑瘤作用(P<0 05) ,抑瘤率为36 34 % ;病理检测显示 ,造模各组VEGF阳性表达率为100% ,但程度不同 ,癌痛消胶囊组可使肿瘤组织VEGF的表达明显下调 ,与阴性对照组比较 ,差异有显著性意义(P<0 01)。结论 :癌痛消胶囊对小鼠荷H22 移植性肝癌细胞的生长有抑制作用 ,能减少血管生成调控基因VEGF的表达。     

槲寄生碱抗肝癌作用实验研究

目的:研究槲寄生碱对小鼠H22瘤体生长的抑制作用.方法:以每只0.2ml肿瘤细胞悬液,接种于小鼠右前肢腋部皮下,24h后将小鼠随机分组,各组分别给不同浓度的槲寄生碱、5-Fu、CMC-Na,均连续给药7d,停药后1～3d将小鼠拉颈处死,剥取瘤块称重,按"抑瘤率=(1-T/C)×100%"公式计算抑瘤率.结果:槲寄生碱在120mg/kg剂量时对小鼠肝癌H22的抑瘤率可达73.8%.结论:槲寄生碱有抗肝癌作用     

豆楮方对小鼠移植性肝癌的体内抑制作用

目的研究豆楮方对小鼠移植性肝癌的体内抑制作用。方法将肝癌Heps肿瘤细胞悬液以0.2mL/只量接种于小鼠右前肢腋部皮下,24h后将已接种的小鼠随机分组。各组分别用药7d,停药后24h将小鼠摘眼球放血检测血液生化指标,剥取瘤块称重,计算抑瘤率。结果豆楮方体内肿瘤抑制率为46.85%,且对荷瘤动物的肝肾功能保护作用明显优于5-Fu阳性对照组。结论豆楮方具有抗肝癌及保护荷瘤动物肝肾功能的作用。     

姜黄素对Raji细胞体外抗癌作用的实验研究

目的研究姜黄素对Raji细胞体外抗癌作用及其机制,对比研究其对RaIi细胞和人单个核细胞的细胞毒性。方法用MTT法检测姜黄素对Raji细胞及人单个核细胞增殖的影响,Annexin—V／PI双标流式术、缺口末端标记法检测姜黄素对Raji细胞及人单个核细胞凋亡的影响,PI单标流式细胞术测定姜黄素对Raji细胞DNA含量分布的影响。结果(1)姜黄素对Raji细胞具有明显的增殖抑制作用。(2)姜黄素可以时间和剂量依赖性方式诱导Raji细胞凋亡。(3)姜黄素组Raji细胞周期发生变化,细胞周期被阻滞于G0／G1和G2／M期,S期比例减少。(4)姜黄素对人单个核细胞无明显抑制增殖和诱导凋亡作用。结论姜黄素能够调控Raji细胞的细胞周期并诱导其凋亡,从而抑制Raji细胞增殖;姜黄素对人单个核细胞无明显细胞毒作用,而选择性作用于肿瘤细胞。     

蜂房对H22肝癌荷瘤小鼠抑瘤作用的实验研究

目的：观察蜂房对小鼠移植性肝癌H22肿瘤生长的抑制作用。方法：建立H22肝癌移植瘤小鼠模型,随机分为盐水对照组、氟尿嘧啶组、蜂房高剂量组和蜂房低剂量组共4组。治疗期间记录各组小鼠的体重变化并观察小鼠生存状态,用药14天后取瘤称重,计算抑瘤率、肝/体比、肾/体比、脾脏指数以及用药前后的体重变化等指标。结果：蜂房可抑制小鼠体内肿瘤的生长,蜂房高、低剂量组的抑瘤率分别为31.96%、27.84%,与盐水对照组比较差异有统计学意义（P〈0.01）。经治疗后蜂房各组小鼠体重与盐水对照组及治疗前比较变化不明显（P〉0.05）,蜂房高、低剂量组与氟尿嘧啶组比较,肝/体比、脾脏指数差异有统计学意义（P〈0.01）。结论：蜂房能够抑制小鼠H22肝癌的生长,同时对小鼠重要器官可能具有一定的保护作用。     

华蟾素诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的实验研究

目的:探讨华蟾素诱导人肝癌细胞凋亡及作用机理。方法:采用 MTT 法、AO/EB 荧光染色法、流式细胞仪及免疫组化等方法,观察华蟾素对人肝癌 SMMC-7721细胞株的作用。结果:华蟾素可显著抑制SMMC-7721细胞的生长;经药物处理后,AO/EB 染色时,肝癌细胞在显微镜下呈现出典型的凋亡形态学改变;在流式细胞仪上可见华蟾素能将细胞周期阻断在 S 期;对抗凋亡基因 bcl-2表达有一定的抑制作用。结论:华蟾素能抑制人肝癌 SMMC-7721细胞生长;能诱导人肝癌细胞凋亡;其诱导细胞凋亡的机理与其能阻断细胞周期、抑制 bcl-2基因表达有关。     

蜂房对H_(22)肝癌荷瘤小鼠抑瘤作用的实验研究

目的:观察蜂房对小鼠移植性肝癌H22肿瘤生长的抑制作用。方法:建立H22肝癌移植瘤小鼠模型,随机分为盐水对照组、氟尿嘧啶组、蜂房高剂量组和蜂房低剂量组共4组。治疗期间记录各组小鼠的体重变化并观察小鼠生存状态,用药14天后取瘤称重,计算抑瘤率、肝/体比、肾/体比、脾脏指数以及用药前后的体重变化等指标。结果:蜂房可抑制小鼠体内肿瘤的生长,蜂房高、低剂量组的抑瘤率分别为31.96%、27.84%,与盐水对照组比较差异有统计学意义(P0.01)。经治疗后蜂房各组小鼠体重与盐水对照组及治疗前比较变化不明显(P0.05),蜂房高、低剂量组与氟尿嘧啶组比较,肝/体比、脾脏指数差异有统计学意义(P0.01)。结论:蜂房能够抑制小鼠H22肝癌的生长,同时对小鼠重要器官可能具有一定的保护作用。     

牛蒡子对实验性糖尿病小鼠治疗作用的研究

目的观察牛蒡子对实验性糖尿病小鼠的治疗作用。方法给动物灌胃给药,用四氧嘧啶制备实验性糖尿病小鼠模型;应用免疫组织化学方法观察胰岛B细胞形态学改变,比色分析法检测血糖、胆固醇及甘油三酯的含量。结果牛蒡子对四氧嘧啶性糖尿病小鼠的胰岛B细胞有明显的修复作用,并可以降低血糖、胆固醇及甘油三酯的含量。结论牛蒡子对实验性糖尿病小鼠具有治疗作用。