微囊化兔坐骨神经组织细胞移植对大鼠损伤脊髓 P 物质表达的影响

目的:探讨微囊化异种坐骨神经组织细胞移植对脊髓半横断损伤大鼠的脊髓修复作用.方法:免疫组织化学方法结合图像分析检测微囊化兔坐骨神经组织细胞移植后,脊髓半横断损伤大鼠脊髓后角内 P 物质(SP)的阳性神经元数和平均光密度.结果:脊髓半横断损伤后第1、2周脊髓后角内 SP 阳性神经元数和平均光密度均降低,至第4、8周时逐渐同升,微囊组 SP 的表达明显高于同时间点的细胞悬液组、单损组.细胞悬液组与单损组比较,除移植后第1周 SP 的含量差异有显著性外,其余各时间点的比较差别无统计学意义.结论:微囊化兔坐骨神经组织细胞移植能使脊髓半横断大鼠脊髓后角内 SP 的表达上调,对脊髓半横断损伤后的感觉神经元有保护作用.     

微囊化异种坐骨神经组织细胞移植脊髓损伤大鼠核因子κB的表达

背景:核因子κB是一种重要的转录因子,在炎症反应中起重要作用。目的:观察微囊化异种坐骨神经组织细胞移植于脊髓损伤大鼠后核因子κB的表达及活性变化。方法:家兔用于制备异种坐骨神经组织细胞悬液。SD大鼠120只随机被分为4组。假手术组,建立大鼠脊髓半横断伤模型后分微囊组、细胞组、单损组。于损伤处分别植入明胶海绵吸附的10μL微囊化异种坐骨神经组织细胞、明胶海绵吸附的10μL异种坐骨神经组织细胞以及明胶海绵吸附的10μL生理盐水。术后6,12,24h,3,7,14d,苏木精-伊红染色观察脊髓组织的病理学改变及免疫组织化学染色观察核因子κB的表达情况。结果与结论:脊髓损伤大鼠神经元细胞浆及细胞核内核因子κB表达增加,24h达高峰水平,3d后开始逐渐降低,7d基本降至正常。微囊组脊髓核因子κB阳性细胞的体积密度和表面积密度值均少于单损组、细胞组(P0.05)。结果提示,微囊化异种坐骨神经组织细胞移植对脊髓损伤后核因子κB的活性表达起抑制作用,有益于减轻核因子κB介导的炎性反应。     

微囊化兔坐骨神经组织移植对大鼠脊髓损伤神经元的影响

目的：观察大鼠脊髓半横断损伤后植入微囊化兔坐骨神经组织对一氧化氮合酶(NOS)表达的影响。方法：尼氏染色和NADPH-d组织化学染色。利用图像分析系统检测染色标记细胞数和阳性细胞平均面积、平均光密度。结果：脊髓损伤后神经元数量减少,尼氏体脱失、溶解。术后3d,微囊组NOS阳性细胞数、阳性细胞平均面积及平均光密度均明显高于单损组;术后7d微囊组NOS阳性细胞数和阳性细胞平均面积较细胞组高;术后14d,细胞组NOS阳性细胞数急剧增高超过微囊组,但微囊组仍平稳上升。结论：微囊化兔坐骨神经组织移植能诱导早期NOS表达增加及抑制后期NO过量产生,减轻脊髓继发性损伤,有利于损伤脊髓的修复和再生。     

微囊化兔许旺细胞移植脊髓损伤大鼠:碱性成纤维细胞生长因子表达和后肢运动功能的变化

背景:研究表明微囊化兔许旺细胞移植于大鼠损伤脊髓后,能减轻炎症反应,促进脊髓再生,但具体作用途径尚不完全清楚。目的:观察微囊化兔许旺细胞移植于损伤大鼠脊髓后,碱性成纤维细胞生长因子的表达以及后肢运动功能的恢复。方法:取家兔坐骨神经以双酶消化法制成许旺细胞悬液后,再用气体喷入法制成海藻酸钡-许旺细胞微囊。同法制备不包被许旺细胞的空囊。SD大鼠随机分为4组:细胞组、空囊组、微囊组建立脊髓半横断损伤模型,分别于损伤处植入明胶海绵吸附的10μL许旺细胞悬液、10μL空囊、10μL海藻酸钡-许旺细胞微囊;正常组不做任何干预。采用BBB评分观察大鼠后肢运动功能恢复情况,制作脊髓标本切片通过苏木精-伊红染色和尼氏染色行病理学检查,免疫组织化学染色观察碱性成纤维细胞生长因子的表达变化。结果与结论:造模后即刻大鼠右后肢出现瘫痪;材料移植后7,14,28d,微囊组大鼠后肢运动功能明显恢复,BBB评分明显优于细胞组、空囊组(P0.05或P0.01)。碱性成纤维细胞生长因子阳性细胞主要见于神经元细胞的胞浆及胶质细胞的胞核内。材料移植后第1,3,7天,胶质细胞主要在脊髓损伤附近处表达,其中第3天表达量最大;第14天在神经元细胞的胞浆内可见碱性成纤维细胞生长因子表达,微囊组表达程度明显高于细胞组、空囊组;之后各组表达程度均明显下降。提示微囊化兔许旺细胞移植于损伤大鼠脊髓后,可以抑制异种移植后免疫排斥,减轻炎症反应,增加碱性成纤维细胞生长因子表达,促进后肢功能恢复和脊髓再生。     

微囊化异体坐骨神经组织细胞移植对大鼠脊髓损伤后c-fos表达的影响

目的探讨微囊化异体坐骨神经组织细胞移植对大鼠脊髓损伤后c-fos表达的影响。方法95只SD大鼠随机分为4组,A组为微囊化坐骨神经细胞移植组（30只）;B组为坐骨神经细胞移植组（30只）;C组为单纯损伤对照组（30只）,仅用明胶海绵填塞SCI腔隙;D组为正常对照组（5只）,仅打开椎管,暴露脊髓不作移植。用免疫组织化学的方法观察移植术后6h-14d脊髓中c-fos基因的表达情况。结果脊髓半横断损伤后对照组脊髓中6h、12h内表达c-fos阳性的神经元数增多,平均光密度值升高,至24h又明显增强。而A组脊髓后角内的c-fos表达明显低于同时间点的B组和C组（P〈0．05）。结论微囊化坐骨细胞移植可能降低c-fos的表达,并在一定程度上减轻脊髓的继发性损伤。     

异种细胞移植对大鼠损伤脊髓降钙素基因相关肽表达的影响

目的:观察微囊化异种坐骨神经组织细胞移植对脊髓损伤大鼠降钙素基因相关肽(CGRP)表达的影响.方法:取家兔预变性处理1周的坐骨神经制成组织细胞悬液,与1.5%海藻酸钠溶液混合并喷入20mmol/L氯化钡溶液中制成微囊化的组织细胞悬液.将其植入SD大鼠脊髓损伤处,通过免疫组织化学显色观察CGRP的表达情况.结果:SCI后各组大鼠右侧脊髓前角CGRP阳性细胞数减少,1周后均不同程度地逐渐恢复.SCI后1周,细胞组和微囊组间右侧脊髓前角CGRP阳性细胞数差异无统计学意义,但两者较损伤组差异有统计学意义;SCI后2、4、8周,与损伤组和细胞组比较,微囊组右侧脊髓前角CGRP阳性细胞数增多.结论:微囊化异种坐骨神经组织细胞移植促进了大鼠损伤脊髓CGRP的表达,有利于脊髓神经元的再生.     

GDNF及HSV—GDNF对坐骨神经损伤大鼠脊髓运动神经元Bcl—2表达的影响

目的：观察胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）及单纯疱疹病毒（HSV）载体介导的GDNF（HSV－GDNF）对坐骨神经损伤大鼠脊髓运动神经元了Bcl-2表达的影响。方法：分别取坐骨神经损伤后4d、7d和14d大鼠（）分成对照组、GDNF组和HSV－GDNF组）的腰段脊髓）L4－6）,行石蜡包埋,切片、;用抗Bcl-2抗血清进行免疫组织化学染色,观察Bcl-2免疫反应（Bcl-2－IR）神经元数目,并在图像分析仪Bcl-2－IR阳性神经元作光密度的色谱分析。结果：1．坐骨神经损伤后4d、7d,GDNF组和HSV－GDNF组损伤侧脊髓运动神经Bcl-2－IR阳性神经元的数量和平均光密度均明显高于对照组损伤测,2．坐骨神经损伤后14d时,对照组、GDNF组和HSV－GDNF组损伤侧脊髓运动神经元对Bcl-2的表达已无明显差别。结论GDNF与HSV－GDNF能够增强坐骨神经扣内务 大鼠脊髓运动神经元Bcl-2的表达,减少神经元的退化死亡。     

微囊化兔嗅球细胞悬液移植对脊髓损伤大鼠GFAP及NF200表达的影响

目的:探讨微囊化兔嗅球组织细胞移植对脊髓损伤大鼠胶质原纤维酸性蛋n(GFAP)及神经丝蛋白200(NF200)表达的影响.方法:SD大鼠分为正常组、损伤对照组、细胞悬液组、微囊化移植组.用免疫组织化学染色方法观察损伤脊髓内GFAP及NF200表达,变化.结果:脊髓损伤后NF200及GFAP表达均呈进行性增高,二者有显著的相关性;微囊组术后7、14、21 d胶质原纤维酸性蛋白的表达显著低于损伤对照组;但微囊组脊髓内NF200表达显著升高.结论:微囊化兔嗅球细胞悬液移植可促进损伤脊髓内的NF200表达并抑制GFAP表达,有可能有助于脊髓功能的恢复.     

微囊化兔雪旺细胞移植对大鼠损伤脊髓胶质纤维酸性蛋白表达的影响

目的:观察大鼠脊髓损伤后及进行微囊化兔雪旺细胞移植后胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的变化.方法: 130只成年SD大鼠随机分为微囊组、细胞悬液组、损伤对照组和正常对照组4组,术后3、 7、 14及28d,冰冻切片行免疫组织化学显色观察GFAP表达的变化.结果:大鼠脊髓损伤后3～14d, GFAP阳性细胞数及平均光密度均增加;至第28天时则减少,但仍高于正常组.其中阳性细胞数和平均光密度在第7天开始,微囊组与细胞悬液组、损伤组比较均有明显降低.结论: 微囊化异种雪旺细胞移植能抑制损伤脊髓GFAP的表达,减轻由反应性胶质化所形成的胶质瘢痕.     

微囊化异种嗅球组织细胞悬液移植脊髓损伤大鼠核因子κB表达的变化

背景：研究发现,微胶囊包裹异种嗅球组织细胞可以减少免疫排斥反应,促进损伤脊髓的功能修复,但其作用途径尚不清楚。 目的：观察微囊化异种嗅球组织细胞移植于脊髓损伤大鼠后核因子κB的表达及活性变化。 方法：家兔用于制备异种嗅球组织细胞悬液。SD大鼠分为4组,即假手术组、微囊组、细胞组及单纯损伤组,后3组在建立大鼠脊髓半横断损伤模型后分别于损伤处植入明胶海绵吸附的10 μL微囊化异种嗅球组织细胞、10 μL异种嗅球组织细胞以及10 μL生理盐水。采用苏木精-伊红染色观察脊髓组织的病理学改变,免疫组织化学染色观察核因子κB的表达变化。 结果与结论：脊髓损伤后大鼠神经元细胞浆及细胞核内核因子κB表达增加,24 h达高峰水平,3 d后开始逐渐降低,7 d基本降至正常。微囊组脊髓核因子κB阳性细胞数少于单纯损伤组及细胞组(P < 0.05)。提示微囊化异种嗅球组织细胞移植对脊髓损伤后核因子κB的活性表达起抑制作用,有益于减轻核因子κB介导的炎性反应。     

微囊化异种坐骨神经组织移植对脊髓损伤大鼠T淋巴细胞亚群的影响及行为学观察

目的观察移植微囊化兔坐骨神经组织对脊髓损伤大鼠外周血中T淋巴细胞亚群的影响及后肢运动功能恢复情况。方法88只成年Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为微囊组、细胞悬液组和正常对照组。于术后第1、3、7、14、28d,运用流式细胞仪检测大鼠外周血中T淋巴细胞亚群变化及通过BBB评分法进行后肢运动功能评价。结果细胞悬液组大鼠外周血中CD4+T细胞数于术后第3、7、14和28d较正常对照组有升高,于术后第7、14和28d较微囊组有明显升高;该组大鼠外周血中CD8+T细胞数于术后第7、14和28d较正常对照组和微囊组有升高。而术后微囊组各时相CD4+T细胞数与CD8+T细胞数较正常对照组均无明显变化。术后第14及28d时,微囊组大鼠后肢BBB评分高于细胞悬液组。结论微囊化异种坐骨神经组织移植可以有效地阻止大鼠CD4+T细胞和CD8+T细胞的激活和增值,并能促进后肢运动功能恢复。     

GDNF及dvHSV-GDNF对坐骨神经损伤大鼠脊髓前角运动神经元的影响

为了探讨胶质细胞源性神经营养因子及单纯疱疹病毒载体介导的胶质细胞源性神经营养因子 (dv HSV-GDNF)对坐骨神经损伤大鼠脊髓前角运动神经元的作用 ,本实验对成年大鼠造成双侧坐骨神经损伤后 ,于右侧损伤处分别施加胶质细胞源性神经营养因子和 dv HSV-GDNF;左侧损伤处施加生理盐水作为对照。分别取损伤后 4、7、14和 2 8d大鼠的脊髓 L4 ～ L6 节段 ,经石蜡包埋切片后行 Nissl染色 ,计数前角运动神经元数量并进行统计学分析。结果发现 :坐骨神经损伤后 4、7、14和 2 8d,右侧脊髓前角运动神经元的数量明显高于左侧。提示 :胶质细胞源性神经营养因子和 dv HSV-GDNF可减少坐骨神经损伤大鼠脊髓前角运动神经元的死亡     

移植微囊化嗅鞘细胞对神经病理性疼痛及L4-5段脊髓P2X7受体表达的影响

目的 探讨微囊化嗅鞘细胞移植对坐骨神经损伤引起病理性疼痛及L4-5段脊髓P2X7受体的表达影响。 方法 取1只健康SD大鼠,取其嗅球组织并运用差速贴壁方法,在体外进行嗅鞘细胞培养扩增。取48只健康SD大鼠,随机分成4组,即对照组（control）、慢性压迫性坐骨神经损伤组（CCI）、嗅鞘细胞移植组（OECs）及微囊化嗅鞘细胞移植组（MC-OECs）。术后7 d及14 d,运用行为学方法检测各组大鼠机械缩足反射阈值,运用原位杂交方法检测各组大鼠L4-5段脊髓P2X7受体阳性细胞百分比及平均吸光度表达情况。 结果 术后7 d及14 d,与对照组比较,CCI组大鼠机械缩足反射阈值明显减低,L4-5段脊髓P2X7受体阳性细胞百分比及平均吸光度明显增加（P<0.05）;与CCI组比,OECs组大鼠机械缩足反射阈值明显增高,P2X7受体阳性细胞百分比及平均吸光度明显减低（P<0.05）,与OECs组对比,MC-OECs组大鼠机械缩足反射更高。P2X7受体阳性细胞百分比及平均吸光度更低（P<0.05）。 结论 微囊化嗅鞘细胞移植能更好地缓解神经病理性疼痛,减低L4-5段脊髓内P2X7受体的表达水平,修复坐骨神经损伤。     

脂肪源性干细胞移植对糖尿病周围神经病大鼠坐骨神经TNF-α和MBP表达的影响

目的研究脂肪源性干细胞(ADSC)移植对糖尿病周围神经病(DPN)大鼠坐骨神经中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和髓磷脂碱性蛋白(MBP)表达的影响。方法大鼠随机分为正常组、模型组和ADSC组。链脲佐菌素腹腔注射制备实验DPN大鼠模型,ADSC组尾静脉注射ADSC细胞悬液,造模后14 d检测各组血糖及坐骨神经传导速度,实时荧光定量PCR检测坐骨神经TNF-α和MBP mRNA表达。结果与正常组比较,模型组和ADSC组血糖显著增高,神经传导速度显著降低,坐骨神经TNF-α和MBP mRNA表达显著上调。与模型组比较,ADSC组神经传导速度显著增高,坐骨神经TNF-α和MBP mRNA表达显著下降。结论脂肪源性干细胞下调糖尿病周围神经病坐骨神经TNF-α和MBP mRNA表达。     

脐带间充质干细胞移植对脊髓损伤小鼠运动功能的修复和镇痛作用

目的：探讨人脐带间充质干细胞（ hUC-MSCs）移植缓解脊髓损伤神经病理性痛,并促进功能恢复的效果及 其与脊髓损伤小鼠胶质细胞活化及炎症因子水平的调控关系。方法：建立ICR 小鼠脊髓损伤模型,同时构建慢病毒 载体介导绿色荧光蛋白（ GFP）标记体外培养的 hUC-MSCs ;将模型小鼠分为模型组和治疗组,治疗组于脊髓损 伤1 周后采用局部注射 hUC-MSCs 移植到脊髓中,每周进行运动功能（ BBB）评分及机械性痛觉过敏检测,持续8 周后行组织学评价与炎症因子检测。结果：治疗组脊髓组织中 GFP 荧光有表达。BBB检测结果显示,治疗组和模 型组小鼠随时间延长运动功能均逐渐恢复,其中治疗组运动功能恢复速度要显著快于模型组;机械触诱发痛检测显 示,小鼠脊髓损伤后痛阈值降低,随着时间延长痛阈值逐渐升高。同一个时间点治疗组的痛阈值显著高于模型组。 与模型组相比,治疗组小鼠脊髓组织的白细胞介素-6（ IL-6）、肿瘤坏死因子-α（ TNF-α）表达下降,胶质细胞源 性神经营养因子（ GDNF）表达升高,同时脊髓组织巨噬细胞激活抗原1（ ED1/CD68） 荧光表达显著降低。结论： 脊髓损伤小鼠中hUC-MSCs 移植可能通过降低炎症因子 IL-6 和TNF-α 的分泌,提高 GDNF 的表达水平来促进受损 脊髓组织的修复,并发挥镇痛效应。     

微囊化异种嗅球组织移植联合药物干预修复受损脊髓的研究

目的:研究微囊化异种嗅球组织移植联合β-七叶皂甙钠对脊髓继发性损伤的治疗保护作用及机制。方法:健康SD大鼠180只,随机分为损伤对照组、微囊化兔嗅球组织移植组、微囊化兔嗅球组织移植联合β-七叶皂甙钠治疗组,损伤组又设1、3、7、14、28d5个时相点,紫外分光光度计检测脊髓伊文氏蓝含量;免疫组织化学观察血管内皮生长因子(VEGF)的表达;神经功能评分法(BBB法)评价大鼠术后运动功能的恢复情况。结果:脊髓损伤后脊髓伊文氏蓝含量增加、VEGF表达下调,大鼠的运动功能缺失,经微囊化异种嗅球组织移植联合β-七叶皂甙钠治疗后血脊髓屏障的通透性有所改善,VEGF表达上调,大鼠的运动功能有所恢复。结论:微囊化异种嗅球组织移植对脊髓继发性损伤有较好的疗效,联合应用嗅球组织细胞和β-七叶皂甙钠在脊髓损伤修复治疗中具有协同作用。