兔青光眼术后成纤维细胞内结缔组织生长因子的调节

目的观察青光眼滤过手术后滤过泡瘢痕内成纤维细胞中反义寡核苷酸（ASODN）对结缔组织生长因子（CTGF）的调节,为抗青光眼术后滤过泡区瘢痕形成提出新的解决思路。方法取兔眼小梁切除术后第5天的手术区结膜及板层巩膜行成纤维细胞的原代培养。培养的细胞根据干预方式的不同分为CTGFASODN-脂质体复合物组、CTGFASODN对照组、CTGF随机序列寡核苷酸（SCODN）-脂质体复合物组和空白对照组。利用脂质体介导,将经异硫氰酸荧光素（FITC）标记的CTGFASODN转染至兔抗青光眼滤过手术后滤过泡瘢痕组织成纤维细胞中,利用半定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测CTGFmRNA在成纤维细胞中的表达,采用Westernblot法检测CTGF蛋白的合成量,以相对灰度值为指标,观察CTGFASODN对CTGF在手术区结膜及板层巩膜行成纤维细胞中表达的抑制效果。结果组织块培养法培养的成纤维细胞在13～14d达到融合。CTGFASODN-脂质体复合物组转染6h后可见培养的细胞质中出现少量黄绿色荧光,12h后荧光依然存在;CTGFmRNA在成纤维细胞中表达的相对灰度值明显低于空白对照组（0.457±0.035vs0.790±0.037）,差异有统计学意义（P〈0.01）;CTGF蛋白水平表达也呈相同趋势（0.177±0.022vs0.557±0.024）（P〈0.01）。CTGFASODN对照组、CTGFSCODN-脂质体复合物组CTGF在成纤维细胞中的表达与空白对照组相比差异均无统计学意义（P〉0.05）。结论脂质体能有效地将CTGFASODN转染进入体外培养的成纤维细胞;CTGF在青光眼滤过手术后的瘢痕形成过程中发挥重要作用;CTGFASODN能在脂质体介导下抑制CTGF在成纤维细胞中的表达。     

CTGF在兔眼小梁切除术后滤过泡瘢痕形成中的表达

目的:以兔为动物模型,观察结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)在兔眼小梁切除术后滤过泡瘢痕形成过程中的表达,初步探讨CTGF在滤过泡瘢痕形成机制中的作用。方法:健康成年家兔28只,随机选取1眼行小梁切除术,另1眼不手术作为对照,分别于术后第1,3,5,7,10,14,21d分批处死,另取2只兔不手术作为正常对照,于术前处死。摘除眼球,剪取滤过泡区域组织,制成病理切片,行常规HE染色及免疫组织化学检测(SABC法),光镜下观察并行图像定量分析。结果:CTGF在对照组织标本中几乎无阳性表达,手术后表达上调,主要表达于成纤维细胞胞浆中,手术后第5d达高峰。结论:在滤过泡瘢痕形成过程中,CTGF发挥了重要的作用,阻断CTGF的基因表达或抑制其活性,可能为防止青光眼滤过手术的失败提供一个新的治疗途径。     

外源性结缔组织生长因子在兔眼小梁切除术后滤过泡瘢痕形成中的作用

目的 以兔为动物模型,比较外源性结缔组织生长因子(CTGF)和生理盐水在兔眼小梁切除术后对滤过泡瘢痕形成的影响,初步探讨CTGF在滤过泡瘢痕形成机制中的作用.方法 健康成年家兔8只(16只眼),双眼行小梁切除术,16只眼随机分成2组,每组8只眼,滤过泡内分别注入外源性CTGF和生理盐水,术后观察滤过泡形态及眼压变化.结果 滤过泡内注入CTGF后,滤过泡失败时间为(12.00±0.82)d,与生理盐水组比较,差别有统计学意义(P<0.01);与术前眼压比较,CTGF组和生理盐水组术后在第1、7天,差别均有统计学意义(P<0.01),术后第14、21天,CTGF组差别均无统计学意义(P>0.05),而生理盐水组术后第14天,差别仍有统计学意义(P<0.05);CTGF组眼压术后第7天与第1天相比,差别有统计学意义(P<0.01),而生理盐水组差别无统计学意义(P>0.05);术后第7天,CTGF组眼压与生理盐水组比较,差别有统计学意义(P<0.01).结论 外源性CTGF注入滤过泡内,可以促进滤过泡瘢痕形成,眼压迅速回升,导致手术提前失败,其在滤过泡瘢痕形成过程中发挥了重要作用.     

结缔组织生长因子在兔视网膜增生膜中的表达

目的观察结缔组织生长因子（CTGF）在实验性增生性玻璃体视网膜病变（PVR）增生膜中的表达,探讨CTGF在PVR视网膜增生膜形成过程中的作用。方法采用Nobuyo的方法从兔视网膜中分离视网膜色素上皮（RPE）细胞并进行体外培养和传代。第3代RPE细胞制备密度为1.1×10^5/mL的细胞悬液。32只日本大耳白兔,取8只作为正常对照组,其余24只采用玻璃体腔内注入RPE细胞悬液的方法建立PVR动物模型。动物分别于造模后7、30、60d处死并摘除眼球,每次处死8只动物。光学显微镜下观察视网膜增生膜的组织学改变,免疫组织化学法检测PVR视网膜增生膜中CTGF的表达。结果造模后5d检眼镜下可见视网膜增生组织开始形成,增生膜随时间的推移逐渐增厚。组织学检查显示,造模后7d兔视网膜表面可见红染的条索状和网状胶原纤维,并可见大量的增生细胞分布其中。光学显微镜下可见视网膜内界膜变厚、粗糙、断裂或结构不清,视网膜各层结构欠清。免疫组织化学法检测表明,正常对照组在玻璃体及视网膜内未见CTGF的特异性染色。造模后7d,CTGF主要表达于视网膜表面增生细胞;造模后30d,CTGF主要表达于增生的细胞及增生的胶原纤维组织中;造模后60d,CTGF主要表达于增生的胶原纤维组织中。结论 CTGF在实验性PVR动物模型中呈高表达,提示CTGF参与了PVR增生膜的形成。     

兔眼小梁切除术后结缔组织生长因子的表达

目的 研究结缔组织生长因子(CTGF)在兔眼小梁切除术后滤过泡中的表达及意义.方法 对照实验研究.将49只健康家兔分为5组:正常眼未手术组(A组),高眼压未手术组(B组),高眼压模型小梁切除术组(C组),正常眼小梁切除术组(D组),正常眼假手术组(E组),并分别在术后第2、5、7、14及21天,取右眼滤过泡部位的球结膜和浅层巩膜组织,A组和B组作为对照组.采用RT-PCR法检测CTGF mRNA的相对表达量,应用免疫组织化学方法 检测CTGF蛋白表达水平,HE染色行组织病理学检查.采用SAS 9.1.3统计学软件,对逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学检测结果 采用析因设计定量资料方差分析.结果 C、D、E组术后CTGF表达水平高于A组和B组,术后第5天CTGF表达水平达到高峰,与其他时间点的表达差异有统计学意义(F=19.54,P<0.05);术后第2和5天,CTGF mRNA表达水平,C组高于同期D组(t=2.300,5.140;P<0.05);术后第2、5、7、14天,D组高于同期E组(t=-2.927,-6.424,-4.176,-4.997,P<0.05).CTGF蛋白表达水平,术后第2、5、7、14天,C组高于同期D组(t=-7.147,-10.955,-9.900,-6.385,P<0.05);术后第2、5、7、14天,D组高于同期E组(F=68.33,P<0.05).组织病理学检查结果 显示,术后第5天,C、D、E组局部炎性反应达高峰,表现为中性粒细胞、单核细胞及巨噬细胞浸润,成纤维细胞增殖达高峰.结论 小梁切除术后家兔CTGF表达水平的变化趋势表明,CTGF在伤口愈合及瘢痕形成过程中可能起重要作用,高眼压状态可促进CTGF表达水平上调.(手华眼科杂志,2009,45:168-174)     

结缔组织生长因子在青光眼方面的研究进展

结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)是转化生长因子-β的下游作用因子,其生物学作用包括促进创伤修复、骨骼形成以及诱导新生血管的发生等.已有大量研究证实,CTGF与许多眼病的发生、发展密切相关.本文就CTGF在青光眼眼压升高、视盘损害及抗青光眼术后滤过泡瘢痕化方面的研究进展进行综述.     

结缔组织生长因子在兔眼结膜下组织创伤愈合过程中的表达

目的 观察结缔组织生长因子(CTGF)在兔眼结膜下组织创伤愈合过程中的表达,探讨其在结膜下组织瘢痕形成过程中的作用.方法 新西兰白兔15只,随机选取一眼建立结膜瘢痕化模型,另一眼作为对照,分别于术后1、5、9d摘除眼球,剪取手术部位结膜及结膜下组织.将所取标本分为两部分,一部分行免疫组织化学检测;另一部分用于半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR).结果 免疫组织化学染色显示,术后第1d,CTGF染色增强;术后5d时,染色进一步增强;术后9d阳性染色开始减弱,但仍较正常组高.半定量RT-PCR结果 显示,术后第1d CTGF mRNA的表达升高,在术后5d时表达最强,至9d时表达水平下降,但仍较对照组高,差异具有统计学意义(P＜0.01).结论 在创伤愈合过程中兔眼结膜下组织中CTGF蛋白及其mRNA表达同期增高,提示阻断或抑制CTGF的基因表达或蛋白合成,可能为防止青光眼滤过手术的失败提供一个新的治疗途径.     

Cataract after glaucoma filtration surgery

PURPOSE: We reviewed the evidence regarding cataract incidence and progression after glaucoma surgery. DESIGN: Evidence-based review of available literature. METHODS: We performed a systematic review of relevant studies published in English. RESULTS: Reports of visually significant cataract after glaucoma surgery are supported by data from randomized clinical trials and large case series. CONCLUSIONS: Patients undergoing glaucoma surgery are at increased risk for the development and progression of cataract.     

兔眼不同青光眼滤过手术模型术后并发症的评价研究

目的　评价兔眼全层巩膜咬切术、小梁切除术和植管引流手术三种青光眼滤过手术模型的优缺点。方法　健康新西兰白兔７２只９６眼,分别接受全层巩膜咬切术（３０只,３０眼）、小梁切除术（１８只,１８眼）和植管引流手术（２４只,４８眼）,观察三种滤过手术术中虹膜周边切除后是否出血,术中是否玻璃体脱出,术后第１天眼压、滤过泡、前房炎症反应和前房积血情况。结果　全层巩膜咬切术、小梁切除术中虹膜周边切除后出血发生率分别为９０．０％、５０．０％,差异有统计学意义（χ２ ＝６５．２８０,Ｐ＜０．０５）。全层巩膜咬切术、小梁切除术中玻璃体脱出率分别为１００．０％、２７．８％,差异有统计学意义（χ２＝８０．４１２,Ｐ＜０．０５）。三种手术模型术前和术后第１天眼压分别为（１３．４８±１．７３）ｍｍＨｇ（１ｋＰａ＝７．５ｍｍＨｇ）和（１０．５８±３．１２）ｍｍＨｇ（全层巩膜咬切术）,（１０．０３±１．０３）ｍｍＨｇ和（８．７１±４．６５）ｍｍＨｇ（小梁切除术）,（１１．９４±１．１９）ｍｍＨｇ和（６．９６±３．２５）ｍｍＨｇ（植管手术）;各滤过模型术后第１天降眼压幅度之间差异有统计学意义（Ｆ＝５．９４０,Ｐ＜０．０５）。全层巩膜咬切术、小梁切除术和植管引流手术后第１天滤过泡直径在３ｍｍ以上分别为２８眼、１８眼、４８眼,差异有统计学意义（χ２＝１１．４６０,Ｐ＝０．０１２）;前房炎症反应在１级以上分别为３０眼、１８眼、２９眼,差异有统计学意义（χ２＝４６．６０４,Ｐ＝０．０００）;前房积血分别为１１眼、３眼、１眼,差异有统计学意义（χ２＝１６．８２０,Ｐ＝０．０００）。结论　植管手术模型术中并发症少,术后滤过泡形成好,眼压控制低,前房炎症反应轻,前房出血发生率低,是三种青光眼滤过手术模型中最为理想的模型。     

Postoperative care after glaucoma filtration surgery

Scarring of the filtering bleb is the main complication after glaucoma filtration surgery. Postoperative care most importantly determines success or failure of the operation. Both, preoperative antiinflammatory treatment and reduction or discontinuation of topical medication have a positive effect on postoperative conjunctival wound healing. After conventional postoperative care only about 40% of patients reach target pressures in the long-term without topical medication. Intensified postoperative care (IPC) increases the success rate by 25% after 5 years. Central to the concept of IPC is a wound modulating therapy which is adapted to the phases of wound healing of the filtering bleb. Evaluation of filtering bleb morphology is a prerequisite for the application of topical steroids and 5-fluorouracil. In addition, dedicated counseling of the patient and close follow-up are mandatory. In order to further increase the success rate of penetrating glaucoma surgery and decrease the side effects of the current antimetabolite therapy more research on wound healing as well as specific therapy to prevent scarring are necessary.     

转化生长因子-β与青光眼术后滤过泡瘢痕化的关系

青光眼滤过术后滤过泡瘢痕化是手术失败的最主要原因.转化生长因子-β( TGF-β)能诱导人Tenon囊成纤维细胞表型转化,进一步迁移、增殖,合成细胞外基质,与滤过泡瘢痕化有重要关系.近年来在细胞因子及基因水平抗纤维化方面的研究取得一定进展,通过TGF-β抗体(如重组抗人TGF-β2单克隆抗体、CAT-152)、TGF-β抑制剂(如Decorin、糜酶抑制剂、SB-431542等)以及基因水平(如TGF-β的反义寡核苷酸等)来抑制TGF-β信号通路(如ALK5/Smad2/Smad3通路、MAPK通路、Rho-ROCK通路、PI3 K-AKT通路等)的重要靶点或蛋白表达,从而达到调控滤过泡瘢痕形成的作用.但目前很多药物的应用均缺乏临床试验支持,同时也缺少不同药物比较的研究.探索TGF-β细胞信号转导不同通路之间的关系,并寻找调控滤过道瘢痕化的最佳靶点是今后的研究方向.     

兔视网膜光凝术后GFAP和CTGF蛋白的表达

目的：探讨色素家兔视网膜光凝术后Müller细胞胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)和结缔组织生长因子（connective tissue growth factor,CTGF）)在激光斑的表达。 方法:采用倍频532nm绿激光光凝色素家兔视网膜后极部30点（光斑效应为Tso分级Ⅲ级）,建立色素兔视网膜光凝Ⅲ级光斑效应动物模型。24只有色家兔右眼为视网膜光凝眼、左眼为正常对照眼。按术后观察时间1,3,7,14,21,28d分为6个亚组,各组动物于光凝术后相应的时间点处死,取出眼球进行免疫组织化学方法测定GFAP和CTGF的表达,Pearson直线相关分析两者之间有无相关性。 结果:GFAP蛋白在色素家兔正常对照眼神经节细胞层弱表达,光凝后3d,激光斑Müller细胞表达GFAP,表达持续增强到光凝术后28d。光凝后3d,CTGF在光斑处弱表达,持续增强至术后28d,CTGF阳性表达在视网膜光凝斑的视网膜神经节细胞层（GCL）、成纤维细胞、视网膜色素上皮层（RPE）细胞和无定形的胶原基质。CTGF蛋白在正常对照眼无表达。 Pearson直线相关分析：视网膜光凝斑GFAP与CTGF表达强度在时序上呈密切正相关（r=0.786,P<0.01）。 结论: CTGF与GFAP参与了视网膜光凝术后激光斑损伤修复的调控过程。可能是视网膜神经胶质瘢痕形成的一个重要的病理学基础。     

Photodynamic treatment in a rabbit model of glaucoma surgery

PURPOSE: To evaluate the safety and efficacy of postoperative verteporfin photodynamic treatment as an adjunct to glaucoma experimental filtration surgery in rabbits. METHODS: Dutch belted (n = 15) rabbits underwent full thickness sclerectomy in one eye. The experimental group (group 1, n = 7) underwent i.v. injection of verteporfin and subsequent photoactivation at the operative site on postoperative day 1 (POD 1). Control groups of animals received either light exposure (group 2, n = 4) or verteporfin (group 3, n = 2), or no intervention (group 4, n = 2). Intraocular pressure (IOP) was measured prior to the procedure (POD 0) and daily thereafter for the first week after sclerectomy (PODs 1-7) and every other day for the second week (PODs 9, 11, 13, 15). Percentage IOP reductions of operated over contralateral control eyes were compared among the various groups. Success rates (percentage IOP reduction > 15%) were also compared between the experimental and control groups. Eyes were histologically examined for evaluation of fibrosis. RESULTS: Rabbits in the experimental group (group 1) had a mean +/- SEM percentage IOP reduction of 25 +/- 3% during the follow-up period. In contrast, groups 2, 3 and 4 had IOP reductions of 4 +/- 5%, 12 +/- 7% and 4 +/- 6%, respectively (p < 0.005, anova among all four groups). Successful IOP reduction (> or = 15%) over the contralateral eye at POD 15 was achieved in six of seven experimental animals, but only in one of eight control animals (p < 0.02, chi-squared test). Bleb failure occurred significantly earlier in the control eyes compared with eyes receiving PDT (p < 0.003, log rank test). Blebs in the experimental group differed from those in the control groups histologically, lacking significant collagen deposition in the area of the sclerostomy. CONCLUSIONS: Wound healing in glaucoma surgery may be successfully modulated postoperatively using photodynamic therapy with i.v. administered photosensitizer.     

细胞因子对青光眼滤过手术瘢痕化调控的研究进展

手术后瘢痕化是导致青光眼滤过手术失败的主要原因。多种细胞因子,如转化生长因子β（TGF-β）、血管内皮生长因子（VEGF）、结缔组织生长因子（CTGF）、白细胞介素（IL-1）和干扰素（INF）等参与青光眼滤过手术瘢痕化过程的调控。目前已研制出多种针对这些细胞因子的治疗性干预措施,在预防青光眼手术滤过通道瘢痕化方面具有很好的应用前景。本文对参与调控青光眼滤过手术瘢痕化的细胞因子以及针对性治疗措施进行综述。     

结缔组织生长因子在增生性玻璃体视网膜病变增生膜中的表达

目的观察结缔组织生长因子(CTGF)在增生性玻璃体视网膜病变(PVR)增生膜中的表达,并鉴别增生膜中阳性细胞来源。方法采用SABC免疫组织化学方法对玻璃体切割手术获得的43例PVR增生膜进行CTGF蛋白的检测,并采用免疫荧光双标记技术在阳性表达的增生膜和正常人眼球标本中判定CTGF阳性细胞来源。结果免疫组织化学显示PVR增生膜中阳性细胞形态多是一类胞体为长圆形或多角形,胞浆丰富的上皮样细胞。17例C2-C3级膜中12例阳性,26例D1-D3级膜中19例阳性,其染色反应为阴性"-"、弱阳性" "、阳性"2 "和强阳性"3 "的分别有5、3、6、3例和7、5、8、6例,总阳性率分别为70.6%和73.1%。统计学分析CTGF阳性表达与膜分级问无相关性(P>0.1)。免疫荧光双标记法显示PVR增生膜中有RPE、巨噬细胞、神经胶质细胞,CTGF阳性细胞来源于RPE细胞;正常眼球RPE层不表达CTGF。结论正常眼球RPE层不表达CTGF,PVR形成过程中RPE细胞在TGF-β1等生长因子的刺激下,CTGF表达上调,表明CTGF参与了PVR增生膜的形成和发展。     

色素家兔脉络膜新生血管中结缔组织生长因子表达

目的:通过激光诱导色素家兔脉络膜新生血管(choroidalneovascularization,CNV)模型,探讨结缔组织生长因子(connectivetissuegrowthfactor,CTGF)在CNV形成中的作用。方法:用高强度半导体泵浦的倍频Nd:YAG532nm绿激光光凝兔视网膜后极部,诱发CNV。术后1,3,4wk用原位杂交方法检测CTGFmRNA在CNV中的表达。结果:光凝后1wk,CNV膜开始形成,CTGFmRNA主要表达于CNV及其附近;光凝后3,4wk,CTGFmRNA仍明显表达,并有增强的趋势。结论:结缔组织生长因子可能参与了实验性CNV的发生发展。