分枝杆菌多糖促人LAK细胞增殖及对喉癌HEP－2细胞杀伤活性的研究

为探讨分枝杆菌多糖（ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａｌｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ，ＭＰＳ）在体外对ＬＡＫ细胞（ｌｙｍ－ｐｈｏｋｉｎｅａｃｔｉｖａｔｅｄｋｉｌｅｒｃｅｌｋｉｎｅ）活性的影响，以提高ＬＡＫ细胞杀瘤活性、减少ＩＬ－２（白细胞介素－２）用量和毒副作用。通过ＭＴＴ法测定不同浓度ＩＬ－２、不同浓度ＭＰＳ对ＬＡＫ细胞促增殖能力的影响；以细胞计数法测定不同浓度ＩＬ－２、ＭＰＳ对ＬＡＫ细胞扩增倍数的影响；应用乳酸脱氢酶法测定不同条件刺激的ＬＡＫ细胞对喉癌ＨＥＰ－２细胞杀伤活性的作用。结果证明小剂量ＩＬ－２（２×１０５Ｕ／Ｌ）诱导ＬＡＫ细胞过程中加入ＭＰＳ０．４ｍｇ／Ｌ能显著增强ＬＡＫ细胞的增殖和杀伤喉癌ＨＥＰ－２细胞的活性。其扩增倍数及杀伤活性均显著超过单纯应用ＩＬ－２（１０６Ｕ／Ｌ）诱导的ＬＡＫ细胞。通过检测不同条件下诱导的ＬＡＫ细胞表型，显示ＭＰＳ联合ＩＬ－２诱导的ＬＡＫ细胞ＣＤ２５百分率明显增高，提示ＭＰＳ可能通过促进ＬＡＫ细胞表面ＩＬ－２膜受体表达，提高ＬＡＫ细胞增殖及杀伤活性。因此，ＭＰＳ可望作为一种新型免疫调节剂用于抗肿瘤治疗     

两种免疫调节剂辅助LAK细胞杀伤喉癌细胞的体外研究

为探讨如何提高白细胞介素－２（ＩＬ－２）／ＬＡＫ细胞过继免疫治疗的抗肿瘤作用，应用免疫调节剂分枝杆菌多糖（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａｌｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ，ＭＰＳ）或ＣＤ３单克隆抗体协同ＩＬ－２诱导的健康人外周血淋巴细胞来源的ＬＡＫ细胞在体外扩增，测定其对喉癌ＨＥＰ－２细胞杀伤活性。实验结果：①不同免疫调节剂对ＬＡＫ细胞扩增的影响：实验组三组细胞于体外扩增均明显高于对照组（Ｐ＜０．０１）；ＭＰＳ组或ＣＤ３组细胞的扩增倍数比单纯应用ＩＬ－２组为高（Ｐ＜０．０１）；其中扩增倍数最高者为ＭＰＳ组，与ＣＤ３组相比，Ｐ＜０．０５。②不同免疫调节剂诱导的ＬＡＫ细胞对喉癌ＨＥＰ－２细胞的杀伤活性比较：在培养一周时，实验组三组对ＨＥＰ－２细胞的杀伤活性均高于对照组，以ＣＤ３组及ＭＰＳ组杀伤活性最高，其杀伤活性均为５５．５％；于培养第二周，ＣＤ３组杀伤ＨＥＰ－２细胞活性仍较高，其他实验组细胞杀伤活性均明显下降。结论：免疫调节剂ＭＰＳ和ＣＤ３单克隆抗体均可通过增强ＬＡＫ细胞体外增殖和杀瘤活性而提高肿瘤过继免疫治疗效果。     

两种免疫调节剂辅助LAK细胞杀伤喉癌细胞的体外研究

为探讨如何提高白细胞介素－２（ＩＬ－２）／ＬＡＫ细胞过继免疫治疗的抗肿瘤作用，应用免疫调节剂分枝杆菌多糖或ＣＤ３单克隆抗体协同ＩＬ－２诱导的健康人外周血淋巴细胞来源的ＬＡＫ细胞在体外扩增，测定其对喉癌ＨＥＰ－２细胞杀伤活性。实验结果：（１）不同免疫调节剂对ＬＡＫ细胞扩增的影响。实验组三且细胞于体外扩增均明显高于对照组（Ｐ〈０．０１）；ＭＰＳ组或ＣＤ３组细胞的扩增倍数比单纯应用ＩＬ－２组为高（Ｐ〈０     

Nd-YAG激光汽化结合光动力学治疗对鼻咽癌患者SIL-2R、IL-2水平及NK活性的影响

应用双抗体夹心ＥＬＩＳＡ法、３Ｈ－ＴｄＲ掺入法和１２５Ｉ－ＵｄＲ释放法对２４例鼻咽癌（ＮＰＣ）患者ＹＡＧ激光汽化结合光动力学治疗前后外周血可溶性ＩＬ－２受体（ＳＩＬ－２Ｒ）、白细胞介素２（ＩＬ－２）水平和自然杀伤细胞（ＮＫ）活性分别进行测定。结果表明鼻咽癌患者在接受激光光动力学治疗后ＳＩＬ－２Ｒ水平呈明显下降（Ｐ＜０．０００５），而ＩＬ－２水平和ＮＫ活性显著上升（Ｐ＜０．０００５）。结果提示激光光动力学治疗对恢复鼻咽癌患者免疫功能起促进作用。     

人LAK细胞在体外和裸鼠体内抗头颈部肿瘤细胞的研究

报道人ＬＡＫ细胞对头颈疗肿瘤细胞的影响。结果发现：①ＬＡＫ细胞，在体外对人喉鳞癌细胞系ＨＥＰ－２、人鼻鳞癌细胞系ＣＮＥ－２和人口腔鳞癌细胞系ＫＢ均表现出明显的杀伤活性，与对照组比较差异有显著性（Ｐ＜０．０５）。②ＬＡＫ细胞在移植瘤裸鼠体内同样具有很强的抑瘤作用。本实验结果提示临床上运用ＬＡＫ细胞治疗头颈部肿瘤可能是一种较新的有效方法。     

CD3A细胞体内,外抗喉鳞癌细胞株（Hep—2）的实验研究

为探索理理想的过继免疫治疗手段，对由健康人外周血分离、经ＣＤ３单克隆抗体与白细胞介素－２共同诱导激活的ＣＤ３Ａ细胞的体外扩增情况及其杀２务喉癌细胞Ｈｅｐ－２的活性水平进行了观察和研究，并与ＬＡＫ细胞作了比较。研究发现，ＣＤ３ＡＫ细胞除具有体外扩增能力强，存活时间长、ＩＬ－２依赖性等特点外，其体内、外抗喉癌作用亦十分显著。培养早期，ＣＤ３ＡＫ细胞的抗瘤活性与常规培养的ＬＡＫ细胞相似，延长培养时间至７     

肿瘤过继免疫疗法新进展

ＬＡＫ／ＩＬ－２疗法是目前临床上最常应用的肿瘤过继免疫疗法，ＴＩＬ／ＩＬ－２疗法也在一定范围内得到应用。但这两种方法都尚存在一些不足。ＣＤ３ＡＫ细胞是一种集ＬＡＫ，ＴＩＬ优点于一身的新型肿瘤免疫杀伤细胞。基础试验已表明它具有细胞前体来源丰富，扩增及杀伤力强，ＩＬ－２依赖性低等诸多优点，不失为一种安全可靠，经济有效的免疫细胞。     

豚鼠壶腹嵴毛细胞内钙离子活动及ATP的影响

目的 探讨离体前庭毛细胞（ＶＨＣ）去极化时细胞内钙离子活动特征及内耳活性物质ＡＴＰ对离体ＶＨＣ内钙离子浓度的影响及其机制。方法 采用酶孵育后机械分离法分离豚鼠壶腹嵴ＶＨＣ,６μｍｏｌ／Ｌ钙荧光探针Ｆｌｕｏ－３染色,利用激光扫描共聚焦显微镜（ＬＳＣＭ）记录静息状态下、加入高Ｋ＾＋液及不同浓度ＡＴＰ时代表ＶＨＣ内［Ｃａ＾２＋ｉ的荧光强度相对值的变化。结果 细胞外有Ｃａ＾２＋存在时,７５ｎｍｏｌ／ＬＫ＾     

γ—干扰素对喉癌细胞株HEP—2增殖活性的影响

用单克隆抗体Ｋｉ－６７（抗ＰＣＮＡ），以链霉菌素－生物素技术（ＬＳＡＢ）检测喉癌细胞株ＨＥＰ－２增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）表达。人重组γ－干扰素（ｒｈｕ－ＩＦＮ－γ）抑制ＰＣＮＡ表达（即抗增殖活性）强弱与其剂量有关；雌激素对ｒｈｕ－ＩＦＮ－γ抗增殖作用无影响。提示：ｒｈｕ－ＩＦＮ－γ对喉癌细胞株ＨＥＰ－２有抗增殖作用，因而在喉癌的治疗中具有应用价值的。     

喉癌患者不同来源淋巴细胞毒性的对比研究

应用细胞生物学方法，从１２例喉癌患者分离的外周血淋巴细胞（ＰＢＬ）、肿瘤引流淋巴结淋巴细胞（ＴｄＬＮＬ）和肿瘤浸润淋巴细胞（ＴＩＬ）在体外经重组务细胞介素２（ｒＩＬ－２）诱导５－７天后，成为具有杀瘤活性的淋巴因子激活的杀伤细胞（ＬＡＫ细胞）或激活的ＴＩＬ。采用＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入法，检查它们对Ｋ５６２靶细胞的杀伤能力。实验结果显示：加入ｒＩＬ－２栖外培养的ＰＢＬ、ＴＤＬＮＬ和ＴＩＬ细胞体积增大，呈不     

变应性鼻炎患者可溶性白细胞介素-2受体的测定

为探讨可溶性白细胞介素－２受体（ｓｏｌｕｂｌｅｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ２ｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＳＩＬ－２Ｒ）在变应性鼻炎中的作用机理，采用双抗体夹心酶联免疫吸附测定（ＥＬＩＳＡ）法测定３９例变应性鼻炎患者、１９例慢性鼻炎患者和１５例健康人血清及鼻分泌物ＳＩＬ－２Ｒ水平。结果发现变应性鼻炎患者血清ＳＩＬ－２Ｒ水平高于慢性鼻炎患者及健康人（Ｐ＜０．００１）。提示ＳＩＬ－２Ｒ在变应性鼻炎的发病中起重要作用     

血管内皮生长因子及其受体对喉癌细胞生长的影响

为探讨血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）在喉癌中的作用及可能的作用方式，用抗ＶＥＧＦ抗体及其受体ｆｌｔ抗体通过微波处理暴露抗原后，进行标准化的ＥｌｉｔｅＡＢＣ染色；将不同浓度的抗ＶＥＧＦ及抗ｆｌｔ抗体分别加入ＨＥＰ－２细胞的培养液中，培养５ｄ后测ＨＥＰ－２细胞的活性（ＭＴＴ法）。结果：免疫组化染色显示ＶＥＧＦ及其受体ｆｌｔ主要在喉癌细胞和血管内皮细胞表达；不同浓度的ＶＥＧＦ抗体及抗ｆｌｔ抗体对ＨＥＰ－２     

正常清醒豚鼠的畸变产物耳声发射特性

目的 研究正常清醒豚鼠的畸变产物耳声发射（ＤＰＯＡＥ）的特性。方法 采用ＣＥＬＥＳＴＡ ５０３型耳声发射分析仪对２６只正常清醒豚鼠（３５耳）进行ＤＰ图及ＤＰ输入／输出曲线（ＤＰ－Ｉ／Ｏ）的测试，随机选择１１只正常清醒豚鼠（２０耳）进行ＤＰＯＡＥ的重复测试，用ＳＰＳＳ１０．０对数据进行统计分析。结果 在ＤＰ图中，当初始音强度Ｌ１／Ｌ２为 ７０／６５ ｄＢ ＳＰＬ时，正常清醒豚鼠的 ＤＰＯＡＥ幅值随测试频率ｆ０从０．７５－８ｋＨｚ的增加而逐渐升高（２７．９０±１．９６－5０．６５±０．７１）。在 ＤＰ－Ｉ／Ｏ中，当ｆ０分别为４、６、８ ｋＨｚ时，正常清醒豚鼠的ＤＰＯＡＥ幅值随Ｌ１／Ｌ２从７０／６５以５ｄＢ－挡降至１５／１０ ｄＢ ＳＰＬ而呈线性下降（Ｐ＜０．０１），在Ｌ１／Ｌ２为５５／５０或６０／５５ ｄＢ ＳＰＬ处出现饱和或低谷，同一Ｉ／Ｏ曲线上Ｌ１／Ｌ２分别从７０／６５及５５／５０ ｄＢ ＳＰＬ递减至阈值的Ｉ／Ｏ斜率（分别记为ＫＴ及ＫＬ）均接近于１，且ＫＬ大于ＫＴ（Ｐ＜０．０１）。重复测试的ＤＰＯＡＥ幅值差异小（＜ １ｄＢ ＳＰＬ）且无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。结论 正常清醒豚鼠ＤＰＯＡＥ测试充分表现了其捡出率高、反应幅值大     

嗅神经母细胞瘤的临床与免疫组化研究

嗅神经母细胞瘤系发生于鼻腔上部或筛板的罕见的恶性肿瘤，病理组织学诊断较困难。配方报告１１例，采用免疫组化进行了ＮＳＥ，ＮＦ－Ｓ－１００，ＧＦＡＰ，ＬＣＡ和Ｋａｒａｔｉｎ抗体联合标记结果显示，ＮＳＥ阳性率１１／１１，ＮＦ５／１１，Ｓ－１００３／１１；而ＧＡＦＰ，ＬＣＡ和Ｋａｒａｔｉｎ均为阴性；为５例光镜下病理确诊困难者明确诊断。     

变应性鼻炎患者可溶性白细胞介素—2受体的测定

为探讨可溶性白细胞介素－２受体在变应性鼻炎中的作用机理，采用双抗体夹心酶联免疫吸附测定（ＥＬＩＳＡ）法测定３９例变应性鼻炎患者，１９例慢性鼻炎患者和１５例健康人血清及鼻分泌物ＳＩＬ－２Ｒ水平。结果发现变应性鼻炎患者血清ＳＩＬ－２Ｒ水平高于慢性鼻炎患者及健康人（Ｐ〈０．００１）。提示ＳＩＬ－２在变应性鼻炎的发病中起重要作用。     

分泌性中耳炎患儿腺样体免疫状态的探讨

本文通过体外细胞培养的方法，研究了１０例分泌性中耳炎（ＯＭＥ）患儿腺样体的免疫状态，测定体外腺样体淋巴细胞自发性ＤＮＡ合成（ＳＤＳ）及在植物血凝素（ＰＨＡ）刺激下可溶性白细胞介素－２受体（ＳＩＬ－２Ｒ）释放，并以阻塞性睡眠性呼吸暂停综合征患儿作对照。结果，ＯＭＥ患儿腺样体淋巴细胞ＳＤＳ（１７３３５±７０１２ｃｐｍ）较对照组（９３８２±４５５４ｃｐｍ）明显增高（Ｐ＜０．０５），ｓＩＬ－２Ｒ的释放（８６４±２４１ｕ／ｍｌ）也较对照组（４３８±１４５ｕ／ｍｌ）增高（Ｐ＜０．０５），说明ＯＭＥ患儿腺样体淋巴细胞活性较高，可能导致局部免疫异常而引起ＯＭＥ。     

初始音强度差对听力正常青年人畸变产物耳声发射的影响

目的 探讨初始音强度差对听务正常青年人畸变产物耳声发射（ＤＰＯＡＥ）幅值的影响,为临床应用ＤＰＯＡＥ提供最佳的刺激强度组合。方法 用ＩＨＳ Ｖｅｒｓｉｏｎ ３．２型耳声发射仪对听务正常青年人３９耳进行了ＤＰＯＡＥ测试,分别记录Ｌ１为７５,６５,５５ｄＢ ＳＰＬ,强度差Ｌ１－Ｌ２为０,５,１０,１５,ｄＢ ＳＰＬ时,不同Ｌ１－Ｌ２值对ＤＰＯＡＥ幅值的影响。     

一氧化氮对鼻咽癌 ＣＮＥ-２细胞株化疗增敏效应的研究

目的　探讨外源性一氧化氮（ＮＯ）在顺铂（ＤＤＰ）作用于 ＣＮＥ-２细胞的过程中是否存在增敏效应，为提高鼻咽癌化疗疗效提供实验和理论依据。方法　分别使用不同浓度 ＮＯ供体药物硝普钠（ＳＮＰ）、ＤＤＰ及二者联合干预ＣＮＥ-２细胞，采用硝酸还原酶法检测 ＮＯ的浓度，镜下观察细胞形态学变化，ＣＣＫ-８法检测细胞增殖抑制率以及流式细胞仪检测细胞凋亡。结果　① ＳＮＰ呈浓度依赖方式抑制 ＣＮＥ-２细胞的增殖、促进凋亡；② 上清液中 ＮＯ浓度与 ＳＮＰ浓度呈正相关，有统计学意义（ｒ＝０．９６８，Ｐ＜０．００１）；③ ＤＤＰ＋ＳＮＰ联合组与 ＳＮＰ组和 ＤＤＰ组相比，ＣＮＥ-２细胞形态学差异显著，漂浮细胞显著增多，贴壁数量逐渐减少并失去原有形态；④ 当 ＳＮＰ６００μｍｏｌ／Ｌ时对细胞增殖无明显影响，然而联合 ＤＤＰ后较单用 ＤＤＰ组细胞抑制率显著提高（ｔ＝９．０４９，Ｐ＜０．００１）；⑤ ＳＮＰ组与ＤＤＰ联用时 ＣＮＥ ２细胞凋亡率上升，较单用 ＳＮＰ、ＤＤＰ组显著增强（ｔ＝－１９．８１６，Ｐ＜０．００１；ｔ＝－５．２４２，Ｐ＝０．０３５）。结论　外源性 ＮＯ能抑制 ＣＮＥ-２的增殖，其抑制效应与 ＮＯ浓度呈正相关；合适浓度的外源性 ＮＯ可在对细胞本身不产生明显毒性的情况下显著增强 ＤＤＰ对 ＣＮＥ-２细胞株的化疗敏感性。     

Nd—YAG激光汽化结合光动力学治疗对鼻咽癌患者SIL…

应用双抗体夹心ＥＬＩＳＡ法、＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入法和＾１２５Ｉ－ＵｄＲ释放法对２４例鼻咽癌患者ＹＡＧ激光汽化结合光动力学治疗前后外周血可溶性ＩＬ－２受体（ＳＩＬ－２Ｒ），白细胞介素２（ＩＬ－２）水平和自然杀伤细胞活性分别进行测定。     

鼻咽癌患者单个核细胞mIL-2R表达和血清sIL-2R水平的检测及意义

目的：探讨ＩＬ－２Ｒ与鼻咽癌发生、发展的关系。方法：应用间接免疫荧光法和ＥＬＩＳＡ法对６２例鼻咽癌、２１例鼻咽良性病变和２６例健康对照者外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）经植物血凝素（ＰＨＡ）刺激后的ｍＩＬ－２Ｒ和血清ｓＩＬ－２Ｒ水平进行检测。结果：１）鼻咽癌患者ｍＩＬ－２Ｒ表达显著低于鼻咽良性病变和健康对照组（Ｐ＜０．０５）;２）鼻咽癌患者血清ｓＩＬ－２Ｒ水平显著高于鼻咽良性病变和健康对照组（Ｐ＜０．０１）;３）与无远处转移的鼻咽癌患者相比,有远处转移的鼻咽癌患者血清ｓＩＬ－２Ｒ显著升高（Ｐ＜０．０１）;４）鼻咽良性病变与健康对照组之间ｍＩＬ－２Ｒ表达和ｓＩＬ－２Ｒ水平无显著差异。结论：结果提示ｍＩＬ－２Ｒ表达低下和ｓＩＬ－２Ｒ异常升高在鼻咽癌患者机体免疫抑制中可能起重要作用。