多囊卵巢综合征患者颗粒细胞AQP9的表达

目的:研究多囊卵巢综合征(polycystic ovarian syndrome,PCOS)卵巢组织中窦状卵泡和在超促排卵(COH)周期黄素化颗粒细胞AQP9的表达,探讨颗粒细胞AQP9表达水平与COH周期卵泡液中甾体激素水平的关系。方法:行体外受精-胚胎移植的PCOS患者18例,对照组18例。收集卵泡(直径≥1.8 cm)液,测定甾体激素E2、P和T水平;取卵时分别收集大卵泡(直径>1.6 cm)和小卵泡(直径<1.4 cm)的黄素化颗粒细胞。用RT-PCR检测COH周期黄素化颗粒细胞AQP9mRNA的表达,免疫组化定位AQP9在PCOS卵巢内窦状卵泡和COH周期的黄素化颗粒细胞的表达。结果:RT-PCR检测证实黄素化颗粒细胞有AQP9 mRNA表达,PCOS组AQP9 mRNA表达水平与对照组比较差异无显著性(P>0.05),PCOS组大卵泡的颗粒细胞AQP9表达高于小卵泡,但无统计学差异。免疫组化显示PCOS患者卵巢的窦状卵泡内颗粒细胞和COH周期的黄素化颗粒细胞均有AQP9的表达,染色定位于胞浆和胞膜。在COH周期,颗粒细胞AQP9 mRNA表达水平与卵泡液中E2、P和T均无显著性相关。结论:PCOS患者卵巢组织中窦状卵泡的颗粒细胞及在COH周期黄素化颗粒细胞均有AQP9表达,推测AQP9可能通过水转运介导卵泡发育和窦卵泡形成。在COH周期,PCOS的大卵泡AQP9的表达有高于小卵泡的趋势,可能与卵泡发育有关。在COH周期,颗粒细胞AQP9 mRNA表达水平与甾体激素的分泌无相关性。     

大鼠卵巢颗粒细胞IGF-Ⅰ、TGFβ、Fas-L表达与卵泡闭锁发生的研究

为研究ＩＧＦ－Ⅰ,ＴＧＦβ和Ｆａｓ－Ｌ在维持卵泡颗粒细胞存活和介导颗粒细胞凋亡中的作用,探讨卵泡闭锁的局部分子机理,将ＳＤ大鼠卵巢石蜡切片,用ＴＵＮＥＬ法和ＰＣＮＡ免疫组化法区别闭锁和生长卵泡,用免疫组化法标记这三种因子以及它们的膜受体在卵泡内的表达。结果显示：无腔和有腔生长卵泡内大多数颗粒细胞为ＰＣＮＡ阳性;早期有腔闭锁卵泡有５个以上颗粒细胞被ＴＵＮＥＬ法标记,部分颗粒细胞为ＰＣＮＡ阳性;晚期有腔闭锁卵泡剩余颗粒细胞多数被ＴＵＮＥＬ法所标记,但为ＰＣＮＡ阴性。有腔生长卵泡颗粒细胞ＩＧＦ－Ⅰ、ＩＧＦ－ＩＲ、ＴＧＦβ、ＴＧＦβＲ、Ｆａｓ、Ｆａｓ－Ｌ均为阳性。早晚期有腔闭锁卵泡的颗粒细胞为Ｆａｓ、ＴＧＦβ和ＴＧＦβＲ阳性。结果提示：ＴＵＮＥＬ法和ＰＣＮＡ免疫组化联合运用有利于区分闭锁卵泡和生长卵泡。ＩＧＦ－Ⅰ仅对有腔生长卵泡颗粒细胞有促进增殖和维持存活的作用,其表达的下降和消失为有腔卵泡闭锁的重要诱因。ＴＧＦβ、Ｆａｓ－Ｌ和Ｆａｓ可能介导有腔卵泡颗粒细胞的凋亡,参与闭锁过程,但在有ＩＧＦ－Ⅰ存在的条件下,其介导作用可能受到抑制     

慢病毒介导的Bcl-2基因对磷酰胺氮芥诱导人原代卵巢颗粒细胞凋亡的保护作用

目的探讨携带Bcl-2基因的慢病毒对磷酰胺氮芥诱导体外培养的原代人卵巢颗粒细胞凋亡的保护作用。方法利用分子生物学技术,成功构建携带Bcl-2基因慢病毒载体,包装成高滴度慢病毒,将重组慢病毒体外感染人卵巢原代颗粒细胞,再加入浓度30μmol/L的磷酰胺氮芥诱导细胞凋亡。分为4组进行实验:(a)实验组:pGC-FU-Bcl-2+磷酰胺氮芥(PM);(b)空载对照组:pGC-FU-EGFP+PM;(c)实验对照组:只加PM;(d)空白对照组:不加PM及病毒。采用流式细胞仪、Hoechst 33258染色检测卵巢颗粒细胞凋亡情况;利用Western blot检测Bcl-2蛋白的表达情况。结果空白对照组(GCs),凋亡峰不明显,颗粒细胞凋亡率为(1.93±0.28)%,实验组(GCs+PM+pGC-FU-Bcl-2)出现微弱的凋亡峰,颗粒细胞凋亡率为(6.99±0.55)%,比实验对照组(GCs+PM)及空载对照组(GCs+PM+pGC-FU-EGFP)显著低,但显著高于空白对照组(P<0.05)。实验组Bcl-2蛋白的表达明显增高,显著高于其余各对照组(P<0.05)。结论携带Bcl-2基因的慢病毒感染靶细胞后可以过度分泌Bcl-2蛋白,显著抑制卵巢颗粒细胞的凋亡,保护PM对颗粒细胞的理化损伤。     

大鼠卵巢颗粒细胞IGF—I,TGFβ,Fas—L表达与卵泡闭锁发生？…

为研究ＩＧＦ－Ｉ,ＴＧＦβ和Ｆａｓ－Ｌ在维持卵泡颗粒细胞存活和介导颗粒细胞凋亡中的作用。探讨卵泡闭锁的局部分子机理,将ＳＤ大鼠卵巢石蜡切片,用ＴＵＮＥＬ法和ＰＣＮ免疫组地区别闭锁和生长卵泡,用免疫组分法标记言之有理三种因子以及它们的膜受体在卵泡内的表达,结果显示,无腔和有腔生长卵泡内大多数颗国ＰＣＮＡ阳性,早期有腔闭锁卵泡有５个以上颗粒细胞被衍标记,部分颗粒细胞为ＰＣＮＡ阳性;晚期有腔闭锁卵泡剩余     

大鼠卵巢发育过程中Smad4的表达

OBJECTIVE: To clarify the signal transduction pathway of transforming growth factor-betasuperfamily (TGF-betas) in the regulation of follicle growth by investigating the expressions of Smad4 protein and mRNA in rat ovaries in different developmental stages. METHODS: Rat ovaries of different developmental stages were obtained to determine the expression of Smad4 protein by immunohistochemistry and image analysis system, with Smad4 mRNA measured by semi-quantitative RT-PCR. Specific primers of Smad4 and GAPDH (internal control) were used for amplification by RT-PCR, and the ratios of their integrated optical densities were calculated to estimate the relative quantity of Smad4 mRNA expression. RESULTS: Smad4 protein was widely expressed in the ovary, mainly in the follicles, and the location and intensity of Smad4 expression varied with the degree of maturation of the ovary. In the early developmental stages, Smad4 protein expressed mainly in the primordial and preantral follicles, but little in the stromal cells, and its expression intensity in the stroma increased gradually in the course of ovarian maturation. After sexual maturity, Smad4 expression intensity varied only insignificantly among the granulosa cells, theca cells and stromal cells of the antral and mature follicles (P>0.05). The staining intensity of Smad4 in the follicles also underwent changes in relation with their development, being less intense in the oocytes of the antral and matured follicles as compared to the preantral follicles (P<0.05 and P<0.01, respectively) but markedly greater in the theca cells of the antral and matured follicles than in the preantral follicles (P<0.01). No significant difference in Smad4 expression was found in the granulosa cells of different developmental stages (P>0.05). RT-PCR demonstrated that Smad4 mRNA was expressed in all the developmental stages of the rat ovary; and from the 3rd week on, the integrated optical density of Smad4 and GAPDH was significantly higher than that in 1-day-old neonatal rats. CONCLUSION: The expression patterns of Smad4 protein and mRNA in rat ovary in the course of its development indicate that Smad signal transduction may play a role in the folliculogenesis.     

环磷酰胺作用下成年大鼠卵巢干细胞因子和mRNA的表达

目的 探讨化疗药物对卵巢的损伤及其可能机制.方法 将成年SD大鼠分为两组:生理盐水组和环磷酰胺组.大鼠腹腔注射环磷酰胺;8周后处死,固定一侧卵巢,连续切片,观察卵巢形态学改变并计数卵泡数目.免疫组化方法检测干细胞因子(SCF)蛋白在卵巢的表达,RT-PCR半定量法检测对侧卵巢SCFmRNA的表达.结果 环磷酰胺可引起卵巢间质的严重损害和局部纤维化的发生.SCF可表达于大鼠卵巢原始卵泡和初级卵泡的卵母细胞,次级卵泡和早期窦卵泡的颗粒细胞也可见SCF的表达.环磷酰胺组注射后8周卵泡颗粒细胞SCF蛋白显著升高,卵母细胞SCF蛋白显著减少(P＜0.05);卵巢SCF mRNA显著升高(P＜0.05).结论 SCF在化疗卵巢表达的变化有助于进一步阐释化疗药物损伤卵巢的机制.     

PGC-1ɑ在多囊卵巢综合征模型大鼠卵巢组织的表达变化

  目的  探讨多囊卵巢综合征（polycystic ovary syndrome, PCOS）大鼠模型及肥胖PCOS大鼠模型卵巢组织过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅助活化因子1α（PGC-1α）的表达,以及PCOS 发生的可能机制。  方法  SD大鼠30只,随机分为对照组、PCOS组及肥胖PCOS组,PCOS两组大鼠每日一次予脱氢表雄酮〔DHEA,60 mg/（kg·d）〕溶于0.2 mL注射用大豆油中皮下注射,共21 d,制备PCOS模型,肥胖PCOS模型组大鼠在DHEA制模基础上加入高脂饮食,每组大鼠各10只。造模前（0 d）和造模后第22天称体质量,取腹主动脉血检测血清睾酮（testosterone,T）水平,取大鼠卵巢组织,HE染色观察组织形态学改变,免疫组织化学染色和Western blot检测PGC-1ɑ蛋白表达。  结果   造模前3组大鼠体质量差异无统计学意义,造模后第22天,大鼠增加的体质量以及大鼠血清 T 质量浓度,均为肥胖PCOS组>PCOS组>对照组,差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。大鼠卵巢组织HE染色结果显示,对照组大鼠卵巢组织镜下可见不同发育时期的卵泡和少量黄体,颗粒细胞排列多为4～6层;PCOS组及肥胖PCOS组大鼠卵巢组织中未成熟的小卵泡数量明显增加,颗粒细胞1～3层排列、较松散,部分卵泡闭锁,肥胖PCOS组大鼠卵巢闭锁卵泡直径增大,颗粒细胞层数减少,卵母细胞消失等现象更明显。免疫组化染色结果显示,对照组大鼠卵巢组织PGC-1ɑ蛋白阳性表达主要分布于卵丘及颗粒细胞。从PGC-1ɑ蛋白在卵巢组织的表达平均灰度均值来看,PCOS组（0.53±0.06）和肥胖PCOS组（0.36±0.03）均低于对照组（0.75±0.03）,差异有统计学意义（P<0.05）,肥胖PCOS组PGC-1ɑ表达低于PCOS组（P<0.01）。Western blot检测结果与免疫组化染色结果一致。  结论  PGC-1ɑ表达降低与高脂环境下卵巢颗粒细胞损伤有关。PGC-1ɑ在卵巢卵泡的颗粒细胞中表达降低可能是PCOS发生发展的重要原因。     

PCOS大鼠窦状卵泡卵母细胞超微结构变化

目的:探讨多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠的窦状卵泡卵母细胞超微结构的变化。方法:建立PCO 大鼠模型,分别取模型组与对照组双侧卵巢组织,光镜下剔除闭锁及囊状卵泡,选择发育正常窦状卵泡卵母细 胞进行透射电镜观察,比较两组窦状卵泡的一般情况,以及卵母细胞中出现异常的例数,并进行统计分析。结 果:正常卵泡发育到窦状卵泡时,卵母细胞体积逐渐达到最大,胞浆中细胞器丰富,透明带均匀,微绒毛由垂直 细长变粗,并逐渐退出透明带。PCOS组多数窦状卵泡卵母细胞胞浆中出现局部细胞器变性、聚集成块,局部胞 浆板层样结构消失,透明带呈不均质状等异常现象。PCOS组卵母细胞异常的发生率显著高于对照组(χ2= 7.2487,P<0.05)。结论:PCOS大鼠窦状卵泡卵母细胞呈现早期细胞凋亡的特征,是卵泡开始退化的标志,也 是卵泡未能发育成熟为优势卵泡的原因之一。     

Fkbp38基因缺失导致小鼠早发性卵巢功能不全：基于激活mTOR通路并诱导细胞凋亡

目的 探讨他克莫司结合蛋白38（Fkbp38）在卵泡发育中的作用及其缺失导致早发性卵巢功能不全（POI）的机制。方法 采用Cre-loxp系统构建卵母细胞特异性敲除Fkbp38转基因小鼠,并应用PCR鉴定小鼠基因型,然后在蛋白水平上验证Fkbp38在卵母细胞中的敲除效果。通过HE染色在显微镜下计数敲除小鼠与同窝对照小鼠卵巢原始卵泡、初级卵泡、次级卵泡及窦卵泡数量分析卵母细胞缺失Fkbp38基因对小鼠卵泡发育的影响。通过繁殖实验及ELISA实验检测小鼠繁殖能力及血清性激素水平,明确卵母细胞敲除Fkbp38基因对卵巢功能的影响。TUNEL法检测敲除小鼠与同窝对照小鼠卵巢颗粒细胞凋亡情况。检测雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路下游靶蛋白磷酸化核糖体S6（PS6）活性验证Fkbp38基因对mTOR信号通路的影响。IF检测凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）及Bcl2-Associated X（BAX）表达明确Fkbp38基因敲除对卵母细胞发育的影响。结果 卵母细胞特异性敲除Fkbp38转基因小鼠模型构建成功。敲除小鼠较对照小鼠表现出生育力下降,性激素水平紊乱,卵巢内原始卵泡、初级卵泡和次级卵泡数均显著减少（P<0.05）,引起POI样改变。卵母细胞特异性敲除Fkbp38基因后,mTOR信号通路激活,颗粒细胞凋亡增加,卵母细胞内BAX蛋白表达增强,Bcl-2蛋白表达减弱,BAX/Bcl-2蛋白比值显著升高（P<0.05）。结论 Fkbp38在卵泡发育中发挥重要作用,其缺失致POI发生的机制可能是通过激活mTOR信号通路诱导细胞凋亡而引起的。     

大鼠卵巢发育过程中Smad4的表达

目的 了解转化生长因子-β超家族(TGF-βs)在调节卵泡发育过程中的信号转导模式,以探讨在不同发育阶段大鼠卵巢中Smad4蛋白及mRNA的表达。方法 选择不同发育时期大鼠卵巢,运用免疫组化方法检测卵巢中Smad4蛋白表达,并进行图像分析;采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测Smad4mRNA在卵巢中的表达,以GAPDH作为内对照与特异性Smad4同时进行扩增,并计算Smad4和GAPDH的RT-PCR产物积分吸光度比值来表示Smad4mRNA的含量。结果 Smad4广泛表达于卵巢组织,但主要表达在卵泡中,其表达部位和强度随卵巢的成熟度不同而变化;在卵巢发育早期,Smad4主要在原始卵泡和窦前卵泡中表达,而在间质中的表达较弱;随着卵巢的发育成熟,Smad4在间质中的表达逐渐增强,性成熟后,在窦状及成熟卵泡颗粒细胞和卵泡膜的表达与间质细胞比较无显著差异(P>0.05)。Smad4在卵泡中的表达强度也发生了变化,即随着卵泡的发育,Smad4在窦状及成熟卵泡卵母细胞的表达明显减弱,与窦前卵泡卵母细胞比较有显著差异(P<0.05,P<0.01);与窦前卵泡比较,Smad4在卵泡膜细胞的表达逐渐增强(P<0.01),而在各级卵泡颗粒细胞中的表达无显著差异(P>0.05)。RT-PCR结果显示各阶段卵巢均有mRNA的表达,从第3周起Smad4mRNA的表达明显增强,Smad4和GAPDH积分吸光度比值与出生后1 d的差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 卵巢内存在Smad4,提示TGF-β家族对卵泡发育的调节是通过Smad信号转导模式实现的。     

cathpsin D在多囊卵巢综合征卵巢组织中的表达

目的:检测cathepsin D蛋白在多囊卵巢综合征(polycystic ovarian syndrome,PCOS)患者卵巢组织中的表达。方法:采用Western blot免疫印迹法检测卵巢组织中cathepsin D蛋白的表达,并进行半定量分析;免疫组织化学法观察cathepsin D蛋白的分布定位。结果:PCOS组患者卵巢中cathepsin D蛋白表达显著低于对照组(2.06±0.39 vs 4.76±1.43,P<0.05);cathepsin D在卵泡和卵巢间质细胞上均有表达,其中在卵泡颗粒细胞上染色最深,主要定位在胞浆和胞膜。结论:cathepsin D蛋白在PCOS患者卵巢组织中表达水平显著下调,这可能是PCOS卵泡发育异常的机制之一。     

多囊卵巢综合征与卵泡抑素关系的初步研究

目的检测卵泡抑素(FS)mRNA在人卵巢组织囊状卵泡中的表达，初步探讨FS与PCOS的关系。方法应用组织原位杂交技术，检测Fs mRNA在15例PCOS患者及10例非PCOS对照妇女卵巢组织囊状卵泡中的表达情况。结果PCOS患者卵巢囊状卵泡颗粒细胞中Fs mRNA的表达呈阳性；卵泡膜细胞无信号表达。非PCOS妇女卵巢囊状卵泡的颗粒细胞和卵泡膜细胞中均无信号表达。结论与非PCOS妇女相比，FSmRNA在PCOS患者卵巢囊状卵泡颗粒细胞中的表达增强，提示FSmRNA的异常表达表达可能与PCOS发病相关。     

Role of TGF-β1 in the Formation of Ovarian Interstitial Fibrosis in PCOS Rat

Objective To study the role of TGF-β1 in the formation of interstitial fibrosis and capsular thickening in the PCOS rats.
Methods PCOS rat model were established by subcutaneous injection DHEA. Estradiol （E2）, testosterone （T）, follicular stimulating hormone （FSH）, luteinizing hormone （LH）, LH/FSH and fasting insulin （FINS） hormone values of the model were tested by microparticle enzyme immunoassay, the pathohistology of PCOS rat ovaries was observed by HE staining, and their ultrastructure was tested by transmission electron microscope （TEM）. The expressions of TGF-β1 in PCOS group （n =20）, and control group（n=20） were detected and evaluated by immunohistochemistry and image analysis system.
Results The results of serum E2, T, LH/FSH, FINS, the ovarian pathological-histology and the ultrastructure showed that the model was established successfully. Compared with control group： there was no significant difference of TGF-β1 expression intensity in oocytes, granulosa cells of the different developing stages of follicle in PCOS （P〉0.05）. But it was markedly higher expressed in the theca cells of antral follicles （P〈0.01）, and stromal cells （P〈0.05） in PCOS group than in control group.
Conclusion The abnormal expression of TGF-β1 in PCOS is the main cause of capsular thickening and interstitial fibrosis. TGF-β1 also takes part in regulating PCOS follicle development and atresia.     

Expression of Leptin Long-form Receptor mRNA in Luteinized Granulosa Cells of Obese Women with Polycystic Ovary Syndrome

To investigate the expression of mRNA of leptin long-form receptor(OB-Rb) in lu-teinized granulosa cells of obese women with polycystic ovary syndrome(PCOS),and to determine the role of leptin in the physiopathology of PCOS,luteinized granulosa cells were collected from the follicle fluid of 10 obese women who met the diagnostic criteria for PCOS and their BMI was equal to or greater than 25 kg/m2,and at the same time,granulosa cells were collected from 10 normal women undergoing IVF-ET who served as the control group.Some luteinized granulosa cells were taken from normal women for in-vitro culture,into which human leptin of different concentrations was added(0,10,100 and 1000 ng/mL).After stimulation with leptin for 48 h,RT-PCR was em-ployed for the detection of the expression of OB-RLmRNA in the luteinized granulosa cells.Our re-sults showed that the level of OB-RLmRNA in luteinized granulosa cells of obese PCOS women was higher than those in the control(P<0.05).In luteinized granulosa cells cultured in vitro and stimulated by human leptin for 48 h,the level of OB-RLmRNA was higher than those without leptin stimulation(P<0.01),and when leptin concentration was at 100 ng/mL,and the level of OB-RLmRNA reached a peak.It is concluded that in obese PCOS women,the level of serum leptin is increased,which pro-motes the expression of OB-RL in luteinized granulosa cells and increases the sensitivity of the granulosa cells to leptin.Leptin may contribute to anovulation in obese women with PCOS     

氨茶碱对哮喘大鼠肺组织TRAIL的表达及支气管肺泡灌洗液中T淋巴细胞凋亡的影响

目的 研究哮喘大鼠肺组织TRAIL的表达及支气管肺泡灌洗液（BALF）中T淋巴细胞凋亡情况．以及氨茶碱对其的影响。方法 将大鼠分为4组：正常对照组、哮喘组、氨茶碱组及地塞米松组。应用免疫组织化学结合图像定量分析方法对TRAIL蛋白表达进行检测。急性分离大鼠BALF中T淋巴细胞．在植物凝聚素-P（PHA-P）的刺激下培养2h，经流式细胞仪检测大鼠BALF中T淋巴细胞凋亡率。结果 大鼠肺组织TRAIL呈组成性表达，哮喘时．其表达明显增加（P〈0．05）．氨茶碱可以减少哮喘大鼠肺组织TRAIL。表达（P〈0．05）。哮喘大鼠BALF中的，T淋巴细胞凋亡率较正常大鼠明显下降（P＜0．05），氨茶碱可以促进哮喘大鼠BALF中的T淋巴细胞凋亡（P＜0．05）。结论 氨茶碱可能通过抑制肺组织TRAIL的表达来抑制TRAIL的促炎作用，同时还可以通过促进哮喘大鼠气道的T淋巴细胞凋亡发挥抗炎作用。     

补肾促排卵汤对PCOS模型大鼠颗粒细胞芳香化酶的影响

目的 通过观察补肾促排卵汤对多囊卵巢综合征（PCOS）模型大鼠卵巢颗粒细胞芳香化酶的影响,探讨其对PCOS卵巢局部的影响及作用机制。方法 应用补肾促排卵汤作用于以脱氢表雄酮诱导的PCOS大鼠模型,采用RT-PCR法及免疫组化,检测PCOS模型大鼠颗粒细胞芳香化酶mRNA及蛋白的表达。结果 补肾促排卵汤能显著提高PCOS模型大鼠颗粒细胞芳香化酶mRNA及蛋白表达（P<0.05）。结论 补肾促排卵汤能提高PCOS模型大鼠卵巢颗粒细胞芳香化酶的表达,可能是补肾促排卵汤促进卵泡发育及排出的作用机制之一。      

白藜芦醇通过下调HAX-1的表达提高耐药结直肠癌细胞对TRAIL的敏感性

目的: 探讨天然药物白藜芦醇是否能提高耐药结直肠癌细胞对TRAIL的敏感性并研究其机制。方法: 将TRAIL耐药HT29细胞(TR-HT29细胞)按对照组,白藜芦醇组,TRAIL组,白藜芦醇+TRAIL组及白藜芦醇+TRAIL+HAX-1质粒组进行分组后,CCK-8法检测TR-HT29的细胞活力,流式细胞术检测TR-HT29细胞的凋亡程度和线粒体膜电位,western blot实验检测TR-HT29细胞HAX-1的表达水平、细胞色素c的释放和caspase-3的活化。结果: TR-HT29细胞对TRAIL的半数有效浓度(IC50)(19.4±1.3 ng/ml)显著高于HT29细胞(1.8±0.2, P<0.05)。白藜芦醇处理可显著抑制TR-HT29细胞中HAX-1蛋白的表达水平。白藜芦醇+TRAIL组TR-HT29的细胞活力抑制率(53.6±4.4 %)和凋亡诱导率(39.4±2.9 %)显著高于TRAIL组的细胞活力抑制率(14.3±1.0 %, P<0.05)、凋亡诱导率(9.6±0.7 %, P<0.05)和白藜芦醇+TRAIL+HAX-1质粒组的细胞活力抑制率(19.9±1.5 %, P<0.05)、凋亡诱导率(13.8±1.1 %, P<0.05)。白藜芦醇+TRAIL组TR-HT29的线粒体膜电位显著低于TRAIL组和白藜芦醇+TRAIL+HAX-1质粒组。白藜芦醇+TRAIL组TR-HT29细胞色素c的释放和caspase-3的活化显著高于TRAIL组和白藜芦醇+TRAIL+HAX-1质粒组。结论: 白藜芦醇通过下调HAX-1的表达提高耐药结直肠癌细胞对TRAIL的敏感性。     

TRIM21促进T淋巴细胞凋亡的分子机制及临床应用价值分析

目的 探讨E3连接酶TRIM21在anti-Fas诱导的T淋巴细胞凋亡中的作用及其分子机制,为评价TRIM21在临床上的应用奠定基础.方法 构建TRIM21真核表达载体,设计TRIM21干扰片段,分别将它们过度表达于Jurkat T淋巴细胞中.将流式细胞仪分选的阳性细胞分为空载无药物组、空载药物处理组(anti-Fas 20 ng/mL处理3 h)、TRIM21无药物组和TRIM21药物处理组(anti-Fas 20 ng/mL处理3 h)分别进行药物处理,将转入对照双链小干扰RNA(siRNA)与TRIM21 siRNA的Jurkat T淋巴细胞分为对照siRNA无药物组、对照siRNA药物处理组(anti-Fas 20 ng/mL处理3 h)、TRIM21 siRNA无药物组和TRIM21 siRNA药物处理组(anti-Fas 20 ng/mL处理3 h),并采用Annexin V/碘化丙啶双染法测定Jurkat T淋巴细胞的凋亡率.将分选Jurkat T淋巴细胞分为空载组和TRIM21过表达组,分别采用蛋白质免疫印迹法与实时定量聚合酶链反应检测TRIM21过度表达对抗凋亡蛋白c-FLICE抑制蛋白(FLIP)的蛋白质及mRNA水平表达的影响.结果 空载药物处理组的Jurkat T淋巴细胞凋亡率显著高于空载无药物组(P＜0.001),TRIM21药物处理组的Jurkat T淋巴细胞凋亡率显著高于TRIM21无药物组(P＜0.001).对照siRNA药物处理组的JurkatT淋巴细胞凋亡率显著高于对照siRNA无药物组(P＜0.001),但TRIM21 siRNA药物处理组的Jurkat T淋巴细胞凋亡率大大降低,显著低于对照siRNA药物处理组(P＜0.001).以空载组的c-FLIP(L)蛋白质表达量为100％,TRIM21过表达组则为(31.25±0.25)％.以空载组的c-FLIP(L) mRNA表达量为100％,TRIM21过表达组则为(25.60±3.33)％.结论 TRIM21能抑制抗凋亡蛋白c-FLIP的表达,增强T淋巴细胞对Fas诱导细胞凋亡的敏感性.     

Ｔｏｌｌ 样受体９ 在宫颈癌细胞中的表达及抗凋亡作用

目的：研究宫颈癌Hela细胞中Toll样受体9（TLR9）的表达情况及TLR9对宫颈癌Hela细胞抗凋亡能力的影响,寻求宫颈癌免疫治疗的新途径。方法体外培养宫颈癌Hela细胞株,应用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测Hela细胞中TLR9 mRNA的表达情况;四甲基偶氮唑盐（MTT）检测不同浓度人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）对Hela细胞生长抑制情况;流式细胞术（FCM）检测CpG-ODN预刺激对Hela细胞抗TRAIL诱导凋亡能力的影响。结果①TLR9 mRNA在Hela细胞中表达,应用CpG-ODN刺激24 h后,TLR9 mRNA的表达增加,与PBS对照组比较,差异具有统计学意义（P＜0．05）。②MTT比色法检测显示, TRAIL蛋白可抑制Hela细胞生长,随着TRAIL蛋白浓度增加,抑制率增加。并且计算半抑制浓度IC50（223．092±3．850）ng／mL。③流式细胞术检测显示,TLR9特异性激动剂CpG-ODN刺激Hela细胞后,TRAIL诱导细胞凋亡率为（15．32±2．46）％,与无CpG-ODN预刺激组[（43．49±2．04）％]相比较,差异具有统计学意义（P＜0．05）。结论 TLR9特异性激动剂CpG-ODN能够增强Hela细胞抵抗TRAIL诱导的细胞凋亡能力,提示TLR9在肿瘤的恶性进程中发挥作用,为宫颈癌的免疫治疗提供新的思路。     

左归丸对磷酰胺氮芥体外诱导损伤颗粒细胞自噬与凋亡的影响

目的探讨磷酰胺氮芥(phosphoramide mustard,PM)诱导卵巢颗粒细胞损伤的机制及左归丸含药血清对受损颗粒细胞自噬与凋亡的影响。方法制备左归丸含药血清,体外培养原代大鼠卵巢颗粒细胞,待细胞生长至底壁的75%-80%时随机分为4组:①对照组(Control);②模型组(M);③左归丸含药血清组(10%ZGW);④模型+左归丸含药血清组(M+10%ZGW)、以PM处理②④组24 h建立化疗源性颗粒细胞损伤模型后,①②组中加入10%正常大鼠血清,③④组中加入10%左归丸含药血清,37℃,5%CO2条件下培养24 h。流式细胞术检测各组颗粒细胞凋亡率,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测卵巢自噬启动因子Beclin-1、微管结合蛋白轻链3(LC3B)、自噬受体蛋白P62、凋亡蛋白Bax、Caspase3的表达。结果与对照组相比:模型组细胞凋亡率明显上升,Beclin-1、LC3B、Bax及Caspase3蛋白表达量增高,P62蛋白表达量下降,差异均具有统计学意义(P<0.05)。10%左归丸含药血清可显著降低模型组颗粒细胞凋亡率,下调受损颗粒细胞中Beclin-1、LC3B、Bax及Caspase3蛋白的表达,上调受损颗粒细胞中P62蛋白的表达,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论 PM诱导了卵巢颗粒细胞损伤,促进了颗粒细胞凋亡,激活了颗粒细胞自噬/溶酶体降解途径;10%左归丸含药血清可降低化疗损伤性颗粒细胞凋亡率,与自噬相关蛋白的表达相关。