转化生长因子β对骨形成蛋白-2基因转染细胞生物学行为的影响

目的:探讨骨形成蛋白-2(BMP-2)和转化生长因子β(TGFβ)对细胞增殖分化的调控作用及其机制。方法:构建含有人BMP-2基因的噬菌粒表达载体pBK-B2,利用脂质体转染方法将其导入NIH3T3细胞,通过G-418筛选获得阳性细胞克隆。细胞原位杂交、免疫组化法检测BMP-2基因的稳定转染及表达,并检测了外源性TGFβ对转染细胞增殖活力及碱性磷酸酶活性和骨钙素含量的影响。结果:TGFβ(50ng/ml)促进BMP-2转染细胞的增殖,但是抑制其碱性磷酸酶活性和骨钙素的含量。结论:TGFβ的生物学效应与多种因素密切相关,BMP和TGF-β在细胞生长分化过程中具有协同作用     

bFGF、TGF-β对人牙髓干细胞增殖和分化能力的影响

目的：探讨bFGF和TGF-β对体外培养的人牙髓f细胞增殖和分化能力的影响。方法：采用MTT法分别测定了bFGF和TGF-β作用不同浓度、不同时间单独或联合作用对人牙髓干细胞增殖能力的影响。通过碱性磷酸酶活性检测、细胞形态学观察及DSP、DMP-1免疫组化染色来检测这两种因子对人牙髓十细胞分化能力的影响。结果：0～40ng／mL范围内，bFGF单独作用能显著促进人牙髓干细胞的增殖，EL具有浓度和时间依赖性，而TGF～8促增殖作用较弱；两肯联合作用，促增殖作用无显著提高，而促分化作用显著增强，不仪细胞形态明显改变，而且碱性磷酸酶活性显著提高，DSP、DMP-1呈阳性表达，向成牙本质细胞样细胞分化。结论：bFGF和TG-β对体外培养的人牙髓干细胞增殖和分化具有重要作用，为对探讨影响人牙髓干细胞增殖和分化的因素提供参考依据。     

脑源性神经营养因子在人牙髓干细胞中的表达及其对细胞增殖分化的影响

目的:检测脑源性神经营养因子(brain-derived neurtrophie factor,BDNF)在人牙髓干细胞中的表达,初步观察其对细胞增殖和分化的影响.方法:采用酶消化法分离培养人牙髓干细胞;RT-PCR检测细胞中BDNF mRNA表达;MTT和碱性磷酸酶活性检测观察其对细胞增殖分化的影响.结果:RT-PCR反应扩增出BDNF mRNA阳性产物;与对照组相比,25 ng/mL BDNF可显著促进牙髓干细胞的增殖(P<0.05);100 ng/mL时可显著提高碱性磷酸酶活性(P<0.05).结论:BDNF可表达于人牙髓于细胞,对细胞增殖分化有一定促进作用.     

白细胞介素-10对体外培养人牙囊细胞增殖和碱性磷酸酶活性的影响

目的:研究白细胞介素-10(Interleukin-10,IL-10)对体外培养人牙囊细胞增殖和牙囊细胞碱性磷酸酶活性的影响。方法:体外培养人牙囊细胞,取生长状态良好的第5代细胞,用四甲基偶氮唑蓝法(MTT法)检测IL-10对细胞增殖的作用;用碱性磷酸酶试剂盒检测IL-10及其抑制剂对细胞碱性磷酸酶活性的作用。结果:0、1、10、25、50、100ng/mLIL-10对人牙囊细胞的增殖影响无显著性差异(P>0.05);10ng/mLIL-10作用0、1、3、5、7d对人牙囊细胞的增殖影响无显著性差异(P>0.05)。10ng/mLIL-10作用3～7d降低人牙囊细胞的碱性磷酸酶活性(P<0.05),10ng/mLIL-10抑制剂作用5～7d增加人牙囊细胞的碱性磷酸酶活性(P<0.05)。结论:IL-10对人牙囊细胞的增殖无影响。IL-10降低人牙囊细胞的碱性磷酸酶活性,说明IL-10抑制人牙囊细胞向成骨方向分化。     

脂多糖对人牙髓细胞增殖和碱性磷酸酶活性的影响

目的:了解脂多糖(LPS)对人牙髓细胞的增殖和碱性磷酸酶活性的影响。方法:Ⅰ型胶原酶消化组织块法体外培养牙髓细胞,检测细胞表面LPS受体CD14(mCD14);流式细胞术观察不同浓度LPS(0.1μg/ml、1μg/ml和10μg/ml)对牙髓细胞细胞周期的影响,测定不同浓度LPS对牙髓细胞碱性磷酸酶活性的影响,采用χ2检验以及单因素方差分析对实验数据分别进行统计学分析。结果:人牙髓细胞不表达mCD14,LPS在浓度为0.1μg/ml、1μg/ml和10μg/ml时可以抑制牙髓细胞增殖(P<0.01)及碱性磷酸酶活性(P<0.05)。结论:LPS具有抑制牙髓细胞增殖及牙髓细胞分化的作用。     

神经生长因子对人牙髓细胞增殖与分化作用的研究

目的 研究神经生长因子对体外培养的人牙髓细胞增殖和分化作用的影响。方法 组织块法行人牙髓细胞的原代培养后，采用四唑盐比色法和酶动力学方法，测定不同浓度（1、10、100U／mL）的神经生长因子对体外培养的第5-8代人牙髓细胞增殖及碱性磷酸酶活性的作用。结果 与对照组相比，10U／mL的神经生长因子可显著促进人牙髓细胞的增殖（P〈0．05）；100U／mL的神经生长因子可显著促进碱性磷酸酶的活性（P〈0．01）。结论 不同浓度的神经生长因子可显著促进人牙髓细胞的增殖与分化。     

促红细胞生成素对人牙髓细胞增殖和成骨分化的影响

目的：探讨促红细胞生成素（EPO）对体外培养的人牙髓细胞（hDPCs）增殖和成骨分化的影响。方法：体外培养鉴定人牙髓细胞。使用 EPO 对在成骨诱导培养基中培养的牙髓细胞进行刺激,CCK-8检测 EPO 对牙髓细胞增殖的影响;20 U ／ml EPO 培养 hDPCs 7 d 和14 d,采用碱性磷酸酶活性（ALP）检测和茜素红染色观察 EPO 对牙髓细胞矿化的影响;利用 Real-time PCR 检测加入 EPO 后牙髓细胞成牙本质向分化相关基因的表达情况。结果：EPO 以时间和剂量依赖性方式促进牙髓细胞的增殖;20 U ／ml 的 EPO 后作用,牙髓细胞碱性磷酸酶活性显著提高（P ＜0．05）,钙结节形成明显增多;成牙本质向分化相关基因 DSPP、OCN、OSTERIX、RUNX2的表达明显上调（P ＜0．05）。结论：EPO 能促进人牙髓细胞的增殖和分化。     

IGF-1通过PI3K/AKT信号通路促进牙髓细胞增殖及碱性磷酸酶活性的研究

目的:研究IGF-1对牙髓细胞增殖和碱性磷酸酶(ALP)活性及PI3K/AKT信号通路的影响。方法:采用酶消化法分离培养原代人牙髓细胞。Western blot检测牙髓组织中IGF-1蛋白表达,不同浓度的IGF-1处理牙髓细胞7d,CCK8法检测细胞增殖。用IGF-1(100 μg/L)及LY294002(10 μmol/L)分别单独或同时处理牙髓细胞,培养7 d后MTT实验检测细胞增殖;在培养第3、5、7、14天时检测细胞ALP 活性;在培养第7天时用Western blot检测AKT和p-AKT蛋白表达情况。结果:IGF-1在牙髓炎组织中低表达, IGF-1在20~100 μg/L浓度范围内从作用第3天开始能够显著促进牙髓细胞增殖(P<0.05或P<0.01),且具有剂量和时间依赖效应。LY294002能够抑制牙髓细胞的增殖和碱性磷酸酶活性,具有时间依赖性。IGF-1能促进p-AKT蛋白表达,而 LY294002能减低IGF-1对p-AKT蛋白表达的促进作用。结论:IGF-1可以促进牙髓细胞增殖和碱性磷酸酶活性,且具有浓度和时间依赖性,作用机制可能与PI3K/AKT信号通路相关。[关键词] 牙髓细胞 细胞增殖 碱性磷酸酶     

TGF-β3作用下人牙髓细胞内Smad2、Smad3蛋白表达水平的变化

目的：探讨TGF—B3对人牙髓细胞内Smad2、Smad3蛋白表达的调控作用和差异。方法：取生长良好的第5代人牙髓细胞，分为实验组和对照组，实验组用5ng／mL TGF—β3刺激并培养6、12、24、48h，对照组不予刺激。提取各组总蛋白质，分别用Smad2、Smad3抗体进行Western印迹杂交。结果：与对照组相比，Smad3在TGF—β3刺激后6h、12h，其蛋白表达量无明显变化，而在刺激后24h表达量明显下降，刺激48h后表达十分微弱；Smad2在对照组以及刺激后各时间组，其蛋白表达量无显著变化。结论：人牙髓细胞内存在Smad2、Smad3蛋白的表达，TGF—β3对二者表达的调控方式有所不同，刺激后期Smad3表达水平的下调可能与TGF-β3负反馈调节自身的信号有关。     

TGF-β1对成牙本质细胞系MDPC-23中 Smads mRNA表达的影响

目的：研究TGF—β1对成牙本质细胞系MDPC-23细胞中Smads mRNA表达的影响，探讨成牙本质细胞内Smads分子基因表达调控机制。方法：培养MDPC-23细胞，细胞分为5组，分别用TGF—β1刺激0、0．5h、1．5h、4h、24h，提取总RNA。用半定量RT—PCR观察Smad2、Smad3和Smad7mRNA表达变化。结果：MDPC-23细胞表达Smad2、Smad3和Smad7 mRNA。在TGF—β1作用24h内，MDPC-23细胞内Smad2 mRNA表达水平无明显变化。在TGF—β1作用4h后，Smad3 mRNA表达水平下调。Smad7 mRNA水平在TGF—β1作用下1．5h达到最高峰，以后逐渐下降。结论：在成牙本质细胞内，TGF—β1可能通过不同的方式调控其细胞内信号分子Smad2、Smad3和Smad7的表达，从而使成牙本质细胞对Smad介导的TGF—β1信号得到精确调控。     

Smad2、3在人牙髓组织中的表达及意义

目的：观察转化生长因子β特异的细胞内信号转导分子Smad2、3在牙髓组织中的表达及其变化,探讨Smad2、3在牙髓损伤修复中的作用。方法：用免疫组化方法检测Smad2、3在正常、龋坏及炎症牙髓组织中的表达。结果：Smad2,3在正常和龋环牙髓的成本本质细胞层呈强阳性表达,在下方的多细胞区及中心部牙髓有阳性或弱阳性表达,炎症牙随浸润的炎细胞中Smad2、3呈强阳性表达,各类牙髓中Smad2的表达较Smad3略强。结论：Smad2、3在正常、龋坏及炎症牙髓组织中有表达,提示Smad2、3可能在TGF－β调节牙髓细胞增殖、分化的信号转导途径中发挥一定的作用。     

人牙髓细胞内Smad 2、3在转化生长因子β1信号转导中的作用

目的：探讨人牙髓细胞内Smad 2、3在转化生长因子β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1)信号转导过程中的作用。方法：原代培养人牙髓细胞，用激光共聚焦显微镜观察TGF－β1刺激初期牙髓细胞内Smad 2、3由胞质向胞核转位的现象，同时采用Western blot方法检测刺激后期Smad 2、3蛋白表达的变化。结果：TGF－β1刺激2h内，Smad2、3在胞质中表达渐弱，在胞核内表达渐强，呈现由胞质向胞核逐步转位的趋势。Smad 2蛋白总量在TGF－β1刺激前后几乎无变化，而Smad 3在刺激后24h表达量明显下降，48h后表达十分微弱。结论：Smad 2、3可能是人牙髓细胞内TGF－β1的信号转导分子。TGF－β1刺激初期Smad 2、3通过发生转位参与转导TGF－β1信号至核内，刺激后期Smad 3表达水平的下调可能与TGF－β1负反馈调节自身的信号有关。     

人重组骨形成蛋白-1对牙髓细胞生物学效应的研究

通过细胞培养技术，噻唑盐比色测定，酶动力学方法和放射免疫技术，了解人重组骨形成蛋白－１对体外培养的人牙髓细胞增殖，碱性磷酸酶活性及骨钙素表达的影响。结果表明，ｒｈＯＰ－１牙促进牙髓细胞增殖，提高牙髓碱性磷酸酶活性及骨钙素的表达，在本实验剂量范围内呈浓度依赖关系，具有诱导牙髓细胞中成骨方向转化的趋势。     

体外持续培养对人牙髓细胞分化能力的影响

目的：探讨人牙髓细胞在体外持续培养时，其分化能力的变化趋势。方法：体外持续培养人牙髓细胞，检测不同代次细胞的碱性磷酸酶活性、钙化能力及Ⅰ型胶原表达，并对比分析。结果：随着体外培养细胞代次的增多，在同等刺激分化条件下，人牙髓细胞的碱性磷酸酶活性整体呈下降趋势，钙化结节的数目和面积逐渐减少，Ⅰ型胶原表达合成逐渐减少。结论：人牙髓细胞在体外持续培养时，分化能力逐渐下降，可能与其含有的未分化细胞（人牙髓干细胞）数目逐渐减少有直接关系。     

组蛋白去甲基化酶FBXL11抑制牙髓干细胞成骨和成牙本质分化

目的 研究组蛋白去甲基化酶FBXL11对牙髓干细胞定向分化能力的影响.方法 成骨分化诱导培养基诱导牙髓干细胞体外成骨/成牙本质分化.逆转录病毒转染构建过表达FBXL11的牙髓干细胞稳定转染细胞,进行FBXL11获得性功能研究.碱性磷酸酶活性实验及碱性磷酸酶染色检测成骨/成牙本质分化早期分化指标-碱性磷酸酶活性.茜素红染色及钙离子定量分析检测牙髓干细胞体外成骨/成牙本质分化能力.实时定量RT-PCR检测FBXL11及成骨/成牙本质分化相关基因-骨涎蛋白、骨桥蛋白和骨钙素的表达.结果 成骨诱导牙髓干细胞抑制FBXL11的表达.过表达FBXL11明显抑制牙髓干细胞的碱性磷酸酶活性、牙髓干细胞体外矿化能力以及骨涎蛋白和骨桥蛋白的表达.结论 组蛋白去甲基化酶FBXL11具有抑制牙髓干细胞成骨和成牙本质分化的潜能.     

大鼠牙髓细胞复合β-磷酸三钙多孔陶瓷体外培养的实验研究

目的:研究大鼠牙髓细胞与β-TCP复合培养后的生长情况及细胞活性,探讨β-TCP作为大鼠牙髓细胞支架材料的可行性。方法:实验分两组,实验组为大鼠牙髓细胞与β-TCP复合培养,对照组为大鼠牙髓细胞常规培养。采用相差显微镜、电子显微镜观察细胞生长、贴附情况;采用MTT、细胞蛋白检测、碱性磷酸酶检测的方法评价大鼠牙髓细胞生长情况及细胞活性。结果:大鼠牙髓细胞复合β-TCP后生长良好,贴附于材料表面及孔隙内壁。MTT及细胞蛋白检测复合培养组和对照组无差异,6 d、9 d时复合β-TCP培养的大鼠牙髓细胞碱性磷酸酶活性明显高于对照组。结论:复合β-TCP进行培养的大鼠牙髓细胞生长良好,没有出现生长抑制现象,其细胞活性更明显增强,表明β-TCP完全符合牙髓细胞支架材料的要求,是一个具有很好应用前景的牙髓组织工程支架材料。     

辛伐他汀对人牙周膜成纤维细胞增殖和成骨分化的影响

目的:评价辛伐他汀对人牙周膜成纤维细胞增殖和成骨分化的影响。方法:采用组织块法进行人牙周膜成纤维细胞的分离培养。在培养液中加入不同浓度的辛伐他汀,分为对照组(0 mol/L)和5个实验组(10-8、10-7、10-6、10-5和10-4mol/L),检测各组细胞增殖能力和碱性磷酸酶活性。通过矿化结节茜素红染色和RT-PCR,评价辛伐他汀对细胞成骨能力和成骨相关基因表达的影响。结果:辛伐他汀浓度为10-7mol/L时,细胞增殖能力显著提高(P﹤0.05)。辛伐他汀浓度为10-8、10-7、10-6和10-5mol/L时,细胞碱性磷酸酶活性均有显著增强(P﹤0.05),其中,10-7mol/L组增强作用最明显。茜素红染色显示,10-7mol/L辛伐他汀能促进细胞矿化结节形成;RT-PCR结果表明,辛伐他汀促进细胞碱性磷酸酶和骨形成蛋白-2基因表达呈时间依赖性增高。结论:10-7mol/L的辛伐他汀不仅有利于人牙周膜成纤维细胞增殖,而且促进其成骨分化和相关基因的表达。     

羟基磷灰石、氢氧化钙对鼠牙髓细胞碱性磷酸酶活性的影响

目的：检测羟基磷灰石和氢氧化钙颗粒对鼠原代牙髓细胞碱性磷酸酶活性的影响。方法：采用０．５％胰酶－０．１％ＥＤＴＡ消化法获取ＳＤ鼠原代牙髓细胞。细胞接种后，分别加入氢氧化钙和羟基磷灰石颗粒（＜５０μｍ），在７ｄ或１４ｄ分别测定鼠原代牙髓细胞的碱性磷酸酶活性。结果：氢氧化钙抑制牙髓细胞碱性磷酸酶活性与其高浓度抑制细胞生长有关；羟基磷灰石具有良好的生物相容性，但其能够显著抑制牙髓细胞碱性磷酸酶的活性，抑制率（０．６ｍｇ／ｍｌ）在７ｄ时为５４．６％，１４ｄ时为４９．０％。结论：羟基磷灰石颗粒的作用可能与牙髓细胞去分化过程有关，两种材料对牙髓细胞的活性存在着不同的作有机制。     

TGF-β1对人年轻恒牙牙髓细胞的增殖效应

目的:探讨转化生长因子(transforminggrowthfactor,TGFβ1)对培养人牙髓细胞的增殖效应。方法:应用MTT、3H-TdR渗入法观察TGFβ1对人牙髓细胞的增殖效应。结果:TGFβ1浓度在0.1ng/ml～100ng/ml时均可显著促进牙髓细胞的增殖,增殖效应呈现出浓度依赖性。结论:TGFβ1可能通过促进牙髓细胞的增殖参与牙本质—牙髓复合体的修复过程。     

Smad信号调控软骨形成机制的研究进展

转化生长因子(TGF)-β超家族信号通路不但调控胚胎发育、血管生成和伤口愈合等多种生理过程,也在细胞的增殖、分化、成熟和程序性死亡中起到重要的调控作用.此外,TGF-β超家族信号通路还参与调控软骨形成和软骨发育.Smad通过将TGF-β家族信号由细胞表面传递至细胞核来转导TGF-β家族信号.下文就Smad的分类、Smad传递TGF-β家族信号的机制、Smad信号对软骨形成的调控机制和Smad信号的负向调控作一综述.