外周血完整淋巴细胞β受体饱和性质的研究

用放射配基测定法探讨人和大鼠血淋巴细胞β受体与[~3H]DHA结合的饱和性质。试验表明:人及大鼠血淋巴细胞β受体存在高亲和力低容量及低亲和力高容量两个结合部位,在测定有生理活性的高亲和力低容量位点时,正常人完整血淋巴细胞β受体密度(Bmax)为548.64±79.71fmol/10~7细胞,平衡解离常数(Kd)为6.80±1.40nM。正常SD大鼠完整血淋巴细胞β受体Bmax为285.21±32.71 fmol/10~7细胞,Kd为5.94±1.47nM。     

糖皮质激素对兔淋巴细胞β受体的影响

作者用自行标记的~(125Ⅰ)-(±)心得静作特异配基测定家兔外周血淋巴细胞β-肾上腺素能受体(β-AR)在糖皮质激素作用前后的变化情况。实验测得正常情况下家兔血淋巴细胞β-AR最大结合容量Bmax=1.36±0.36 fmol/10~6cells,KD=0.16±0.04nM,n=5。注射氢化泼尼松后Bmax=2.11±0.36fmol/10~6cells,KD=0.17±0.02nM,T检验表明两组Bmax值有显著差异,而KD无显著差异;停药三周复测,Bmax=1.22±0.22fmol/10~6cells,KD=0.18±0.07nM,表明已恢复到用药前的水平。     

肺内M受体异质性的研究Ⅰ——豚鼠肺内两种不同亲和性M受体结合部位的检定

以~3H-QNB为标记配基,应用放射性配基结合法,对豚鼠肺组织内的M受体进行了检定。发现在豚鼠肺内的M受体对~3H-QNB表现出两种不同的亲和性,其中高亲和性M受体结合部位的平衡解离常数Kd=1.58±0.71nM,最大结合容量Bmax=28.29±5.98fmol/mg蛋白质;低亲和性M受体结合部位的Kd=16.29±3.89nM,Bmax=68.64±12.58fmol/mg蛋白质。高、低亲和性结合占总结合部位的比例分别约为29%和71%,二者的比值(H/L)约为1∶2.4。     

用^125I—（±）心得静测定人淋巴细胞β受体方法的建立

作者报道用自行标记的~(125Ⅰ)-(±)心得静作为放射配基建立人外周血淋巴细胞β-肾上腺素能受体(β-AR)的测定方法,并用该方法测得正常人血淋巴细胞β-AR的最大结合容量(Bmax)为1.777±0.382fmol/10~6 cells,KD=0.141±0.066nM。作者还将结合试验单点法与多点法的Bmax值进行比较,两者呈良好相关性,前者较后者为低,但稳定在60～70%的范围内。     

^125I（±）心得静的制备及其与小鼠肺,脑β受体的结合特性

用氯胺-T氧化法制备[125Ⅰ]-心得静(125Ⅰ-IPIN)为探针,研究其与小鼠脑、肺组织β-肾上腺素能受体(β-adrenergic receptor,β-AR)的结合特性。平衡结合试验、结合解离动力学试验及竞争抑制试验结果表明:125Ⅰ-IPIN与上述组织β-AR的结合具有可饱和性、可逆性和特异性。其平衡解离常数(KD)为0.143±0.042nM(脑,n=14),0.180±0.072nM(肺,n=13);最大结合容量(Bmax)为37.04±6.68 fmol/mg蛋白(脑),370.05±86.36 fmol/mg蛋白(肺);Hill系数接近1.当配基浓度在0.01～0.3nM的范围内。Scatchard分析呈一直线。     

妊娠高血压综合征患者外周血肾上腺素受体表达以及环磷酸腺？…

目的　探讨肾上腺素β2 受体 环磷酸腺苷 (β2 AR cAMP)系统活性在妊娠高血压综合征(简称妊高征 )患者外周血中的变化。方法　采用放射性配基结合实验的方法测定 32例妊高征患者和 32例正常孕晚期孕妇 (正常对照组 )的外周血淋巴细胞 β2 AR的最大结合量 (Bmax)并观察血浆cAMP含量的变化。结果　妊高征患者产前淋巴细胞 β2 ARBmax为 2 5 9fmol/10 6细胞± 2 2fmol/10 6细胞 ,正常对照组为 2 47fmol/10 6细胞 (2 3fmol/10 6细胞 ,但二者差异显著意义 ;而妊高征患者产前血浆cAMP含量为 2 .94nmol/4 0 μl± 0 .91nmol/4 0 μl,正常对照组为 0 .19nmol/4 0 μl± 0 .0 5nmol/4 0 μl,两者比较差异有显著意义 (t=17.19,P <0 .0 0 1)。结论　妊高征患者的发生发展可能与 β2 AR—cAMP系统活性变化有一定关系。     

大鼠脑血管紧张素Ⅱ放射配基膜受体测定法

本文报道了一种分离脑内血管紧张素Ⅱ结合位点的受体放射分析法。~3H-血管紧张素Ⅱ在37℃与大鼠皮层下脑组织膜受体结合是可饱和的,饱和点大约在配基浓度7nM,最大结合能力(Bmax)是104fmol/mg(蛋白),平衡解离常数(KD)是5.9nM,在KD浓度时特异结合是总结合的72.2％,并且是可逆的。孵育30分钟后,特异结合基本达到平衡稳定状态。证明大鼠皮层下突触膜有血管紧张素大鼠脑Ⅱ的高亲和力结合部位,这可能就是血管紧张素受体存在的部位。     

表皮细胞生长因子受体测定及在肠癌的表达

本文报道灵敏、准确的表皮细胞生长因子(EGF)受体~(125)碘结合测定法.检测30例肠癌、癌周及正常肠组织 EGF 受体的表达。肠癌、癌周、正常肠组织 EGF 结合量分别为8.21±2.60(n=10),4.35±1.38(n=10)和1.41±0.43(n=10)fmol/mg膜蛋白,差异非常显著(P<0.01).Scatchard 作图,~(125)I-hEGF 结合是一条直线,肠癌 EGF 受体 KD 值25～315 fmol(n=9).     

家兔心肌M型乙酰胆碱能受体的测定

应用特异性标记配体〔~3H〕QNB 测定家兔心肌蕈碱型(Muscarine M)乙酰胆碱能受体。固定〔~3H〕QNB 浓度,特异性结合值随心肌膜制剂浓度(0.25～3.7mg/ml)而呈线性增加。由Scatchard 作图可得平衡解离常数Kd 为0.57±0.07nM(n=14),正常家兔心肌M 受体的最大结合值Bmax 为305±20fmol/mg 蛋白。在37℃时作动力学测定,得结合常数k_1 为0.03M~(-1)min~(-1)解离常数k_2为0.0158min~(-1)。由动力学计算所得Kd(0.53nM)与饱和曲线所得值一致。胆碱类药物东茛菪碱、阿托品、乙酰胆碱、氨甲酰胆碱、匹鲁卡品等抑制特异结合的IC_(50)分别为0.01、0.019、2.5、10、40μM。     

冬凌草甲素对β-肾上腺素受体及腺苷酸环化酶活性的影响

本研究采用放射性配体结合分析法和腺苷酸环化酶(AC)活性测定,观察了冬凌草甲素(Oridonin)对大鼠外周血淋巴细胞β受体的结合作用和北京鸭虹细胞膜中AC活性的影响。结果表明,Oridonin和普萘洛尔(Propranolol)一样能与标记配基竞争与β受体结合,其IC_(50)分别为6.7×10~(-5)mol/L,6.0×10~(-8)mol/L。KI值分别为1.9×10~(-5)mol/L,1.7×10~(-8)mol/L。阻断肾上腺素对膜制剂中AC活性的激动作用,从而证明Oridonin是一种较弱的β受体拮抗剂。     

急性缺血时大鼠心肌β_1AR变化及意义

用亚型选择性标记配基~3H-CGP_(12177)观察了急性缺血时大鼠心肌β_1AR的变化。急性缺血60分钟后,大鼠β_1AR密度为 97.5 fmol/mg蛋白,较正常对照组(49.6fmol/mg蛋白)增高 96.6％(P<0.01);较手术对照组(61.7fmol/mg蛋白)增高58.5%(P<0.05)。     

雌性大鼠动脉中雌激素受体的表达及意义

目的 :从整体及细胞水平观察雌性成年大鼠动脉中雌激素受体的存在情况并探讨其存在意义。方法 :用放射配体结合分析法检测雌性成年大鼠主动脉及培养的血管内皮细胞中雌激素受体的含量。结果 :雌性成年大鼠动脉ER的结合容量及平均解离常数 (Kd值 )为 37.37± 7.85fmol/mgpro .和 2 .96± 0 .71× 10 -9mol;培养的血管内皮细胞中ER的结合容量及Kd值为 17.5 5± 1.2 5fmol/10 6细胞和 3.5 3± 1.2 5nmol。结论 :雌性大鼠主动脉壁及血管内皮细胞中存在雌激素受体 ,这为解释和探讨雌激素对心血管保护作用的机制提供了重要的分子基础。     

鼠肾皮质中血管紧张素-(1-7)受体的测定

目的研究大鼠肾皮质中血管紧张素-(1-7)[Ang-(1-7)]的特异受体存在情况.方法采用受体的放射配基结合分析法,检测自发性高血压大鼠肾皮质Ang-(1-7)的特异受体,并与正常血压大鼠对比分析.结果大鼠肾皮质含有Ang-(1-7)特异受体,其受体密度,自发性高血压大鼠(SHR)为(21.99±3.74)fmol/mg protein,正常血压大鼠(WKY)为(11.85±0.45)fmol/mg protein(P＜0.05).[d-Ala7]-Ang-(1-7) (A-779)能选择性竞争Ang-(1-7)受体(IC50=216.68nmol/L).结论鼠肾皮质含有Ang-(1-7)特异受体,SHR的受体密度比WKY的明显升高,A-779是Ang-(1-7)的拮抗剂.     

动情周期中大鼠子宫β肾上腺素能受体测定的初步研究

用放射配体结合技术测定了大鼠子宫肌细胞膜上β肾上腺素能受体的数目与亲和力。动情前期与动情期子宫肌β肾上腺素能受体的数目(由最大结合容量R_T表示)为126.84±54.69fmol/mg蛋白质,明显高于动情后期与动情间期子宫中的数目77.98±30.66fmol/mg蛋白质(P<0.05),由此表明子宫的激素状态可影响受体从而再影响子宫收缩。动情周期中各期间的受体亲和力(用解离常数K_D反映)未见显著差别     

大鼠窒息心脏骤停期间心脏和肺脏β肾上腺素能受体的变化

目的 :研究心脏停搏期间机体 β肾上腺素能受体的变化。 方法 :采用放射性配基结合分析方法 ,检测大鼠在窒息心脏停搏期间心、肺 β肾上腺素能受体 (β受体 )的变化。动物随机分为正常对照 (A)、手术对照 (B)、窒息 10min (C)、2 0min (D)和 30min (E) 5组。结果 :心、肺C组 β受体分别为 (34 5 1± 3 2 5 )fmol/mgpr和(2 89 4 6± 19 96 )fmol/mgpr。心、肺D、E组 β受体分别为 (4 0 96± 2 91)和 (6 4 4 4± 3 2 0 )fmol/mgpr及 (4 2 6 33± 12 0 8)和 (4 5 5 6 7± 2 8 77)fmol/mgpr,与C组比较 ,差异极其显著 (P <0 0 1)。心、肺各窒息组间受体亲和力无明显变化。结论 :在窒息心停早期 ,心、肺β受体数量无明显变化 ,随着心脏停搏时间延长 ,其数量明显增加。     

角质细胞N-甲基-D-天冬氨酸受体在Ⅰ型复杂区域疼痛综合征中的作用

目的观察大鼠慢性缺血后疼痛(CPIP)模型术后皮肤中N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体表达的细胞来源,探讨NMDA受体在Ⅰ型复杂区域疼痛综合征中的作用。方法成年雄性SD大鼠42只,采用随机数字表法随机分为假手术(Sham)组(n=12)、CPIP组(n=12)、CPIP+生理盐水(NS)组(n=6)、CPIP+NMDA组(n=6)和CPIP+NMDA受体拮抗剂(MK801)组(n=6)5组。Sham组随机取6只和CPIP组于造模后1 d深麻醉下处死,取术侧足底皮肤和L3～L5脊髓组织用于NMDA受体NR1亚基免疫荧光检测和NR1、白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α蛋白免疫印迹检测。其余大鼠在造模后2、6、10、14 d记录大鼠机械刺激缩足阈值(MTW)并从造模后第6天开始皮下注射相应药物,于第14天取材皮肤和L3～L5脊髓,检测方法同前。结果与Sham组相比,CPIP组在造模后第1天的皮肤中NR1表达量(1.708±0.064)(t=12.12,P<0.001)、IL-1β表达量(2.575±0.305)(t=5.158,P=0.003)、TNF-α表达量(...     

30例乳腺癌AR、ER和PR的研究

研究了30例乳腺癌的性类固醇激素受体含量和阳性检出率。乳癌组织胞液与~(3H)-睾酮,~(3H)-雌二醇和~(3H)-孕酮的最大特异结合量分别是154.2,121.6和159.0 fmol/mg胞液蛋白;它与三种标记配基的结合亲和力各为0.21,4.65和1.03nM。30例乳腺癌AR、ER和PR的阳性检出率分别是33.3%,70%和60%。不同病理类型乳腺癌间的AR、ER和PR阳性检出率差异有统计学意义。二元线性回归分析结果表明同时含有三种受体的乳腺癌AR的含量与ER和PR的含量无明显的相关关系。     

BRL-37344对豚鼠心肌细胞ICa-L、Ito的影响

目的 为研究β3肾上腺素能受体介导的心脏生物学效应--β3肾上腺素能受体激活后心肌细胞电生理活动的变化.方法 以原代培养的豚鼠心肌细胞为对象, 采用全细胞膜片钳技术记录心肌细胞孵育β3肾上腺素能受体激动剂4-[-[2-hydroxy-(3-chlorophenyl)ethyl-amino]propyl]phenoxyacetate(BRL-37344; BRL)5~10 min前后ICa-L,Ito(L型钙离子通道和瞬时外向钾通道)的变化.结果 显示10-6 mol/L的BRL显著增强豚鼠心肌细胞的Ito,上移I-V曲线;去极化刺激到+80 mV时,电流密度从(6.11±1.03) pA/pF上升到(8.46±2.07) pA/pF(n=6,P=0.013064).10-6 mol/L的BRL显著增强豚鼠心肌细胞的ICa-L,为对照组的(2.30±0.75)倍(n=5,P=0.0063);去极化刺激到+10 mV时,电流幅度从(89.25±17.83) pA上升到(205.00±72.24) pA.结论 BRL-37344可增强豚鼠心肌瞬时外向钾电流和L型钙电流,进而调控心脏的活动.     

新合成的阿片受体配基对稳定转染μ阿片受体的CHO细胞的受体结合特性

目的：研究新合成的阿片受体配基对稳定表达于CHO细胞的μ阿片受体的结合特性。方法：采用细胞生物学和放射性配基结合的方法,以能稳定表达μ阿片受体的CHO细胞为模型,检测阿片受体配基[^3H]diprenorphine(^3H-dip)与μ阿片受体的饱和性结合特征及一系列新合成阿片配基的竞争性结合特征。结果：(^3H-dip)结合μ阿片受体的平衡解离常数Kd值为1.06nmol/L;受体最大容量Bmax为930fmol/mg蛋白。竞争性结合实验表明3^#和12^#配基对μ阿片受体的亲和力高于BAMGO和吗啡。2^#、6^#、8^#和9^#配基对μ受体的亲和力低于BAMGO和吗啡。结论：新配基3^#和12^#对μ亚型的阿片受体有良好的亲和力。2^#、6^#、8^#和9^#配基对μ受体的亲和力较低。     

慢性阻塞性肺疾病患者气道炎症细胞肾上腺素能β2受体的表达及意义

目的 探讨COPD患者炎症细胞肾上腺素能β2受体(β2-AR)表达水平的变化及与气道炎症、气流受限的关系.方法 37例COPD稳定期患者根据气流阻塞的严重程度分组,Ⅱ级组11例,Ⅲ级组12例,Ⅳ级组14例;分别收集外周血单个核细胞(PBMC)和诱导痰细胞,进行细胞计数和分类,并制备细胞粗制膜标本,进行放射性配基结合试验,以β2-AR与拮抗剂的最大饱和容量(Bmax)和平衡解离常数(Kd)表示β2-AR的密度和亲和性.以13名健康志愿者为正常对照组.结果 3个COPD组与正常对照组间外周血白细胞计数、分类和诱导痰细胞计数差异无统计学意义,而诱导痰中性粒细胞计数差异有统计学意义(P=0.00).在正常对照组、COPDⅡ级、Ⅲ级和Ⅳ级组,PBMCβ2-AR密度分别为(106±52)、(156±72)、(135±57)和(123±58)fmol/mg(F=1.45,P=0.24),亲和性分别为(548±267)、(343±144)、(297±150)和(375 4-95)pmol/L(F=4.84,P=0.01);诱导痰细胞β2-AR密度分别为(126±46)、(116±54)、(106±36)和(76 4-30)fmol/mg(F=3.46,P=0.02),亲和性分别为(570±290)、(405±197)、(404±139)和(347±123)pmol/L(F=2.97,P=0.04).COPD患者第1秒用力呼气容积占预计值的百分比与诱导痰细胞β2-AR密度呈正相关(r=0.43,P=0.01).PBMC β2-AR密度与诱导痰细胞β2-AR密度呈正相关(r=0.40,P=0.02).结论 COPD患者PBMC和诱导痰细胞β2-AR表达均下降,且随病情加重而呈进一步下降趋势,诱导痰细胞β2-AR水平变化较PBMC更明显,提示在COPD病情进展中,气道内炎症细胞β2-AR变化可能具有更重要的作用.