牵张力与雌激素对兔鼻软骨细胞增殖效应调节的初步研究

目的：探讨牵张力与雌激素对兔鼻软骨细胞增殖效应的影响。方法：1）采用MTT四唑盐比色法,检测不同剂量的17~β雌二醇（E2）（10^-12-10^-6mol/L）对第4代新生及6周龄新西兰白兔兔鼻软骨细胞增殖活性的影响。2）将第4代新生及6周龄新西兰白兔兔鼻软骨细胞在细胞膜式牵张力施加装置上培养,检测不同浓度17-β雌二醇（10^-10-10^-8mol/L）及5 kPa牵张力联合应用0、12 h后,对兔鼻软骨细胞增殖活性（PI值）的影响。结果：（1）10^-10-10^-8mol/L17-β雌二醇体外培养新西兰白兔兔鼻软骨细胞生长具有刺激作用,且呈剂量依赖性,最大效应浓度为10^-8mol/L,进一步增加E2浓度则刺激作用减弱。10^-6mol/L具有明显抑制性。（2）5 kPa牵张力联合17-β雌二醇培养较17-β雌二醇的单独作用具有更强的促兔鼻软骨细胞增殖作用。结论：牵张力与雌激素可以调节兔鼻软骨细胞增殖活性。     

不同牵张力对成骨细胞增殖与合成功能的影响

目的:观察周期性牵张应变对成骨细胞增殖与合成功能的影响。方法:体外分离和培养新生大鼠颅顶骨成骨细胞,应用Flexcell 4000TM加力系统施加力学刺激,频率为0.5 Hz,牵张应变大小分别为1.5%、3%、6%及9%,作用时间分别为12、24及48 h。检测成骨细胞的增殖以及合成功能的变化。采用SAS 8.0软件包对结果进行统计分析。结果:①1.5%、3%的牵张应变可以促进成骨细胞I型胶原、骨钙素和总蛋白的分泌量增加,以3%牵张应变增加最为明显。同时,在3%牵张应变的初期可以促进成骨细胞的增殖,而促进成骨细胞的分化成熟的作用大于促进增殖的作用;②6%牵张应变下,成骨细胞骨钙素、I型胶原和总蛋白的分泌量减少,但在6%牵张应变作用的各时间段均使细胞增殖活性明显增高;③9%牵张应变下,成骨细胞增殖和分化功能均受抑制。结论:适度的牵张应变可促进成骨细胞的生长,较小的牵张应变促进分化成熟的作用较明显,较大的牵张应变促进增殖的作用较明显,但过大的牵张应变对细胞的增殖和分化均有抑制。     

培养状态下兔鼻软骨细胞生物学特性的研究

目的 :探讨体外培养的正常兔鼻软骨细胞分离培养方法及生物学特性。方法 :体外分离培养兔鼻软骨细胞 ,观察原代及传代培养的细胞形态学变化 ;测定细胞数量的变化及其生长曲线 ,观察细胞的增殖 ;借助特殊染色 ,免疫组织化学的方法了解葡萄糖胺聚糖 ,Ⅱ型胶原的合成情况 ;测定冷冻复苏后的细胞存活率。结果 :原代体外培养的新西兰白兔兔鼻软骨细胞初始接种时为圆形 ,细胞贴壁后逐渐变为多角形 ;组织学 ,免疫组化显示细胞培养 4代以内可以保持表型的稳定 ;冷冻复苏存活率为 93 %。结论 :体外培养的兔鼻软骨细胞表型能保持 4代稳定 ,具有正常的生长增殖能力 ,并可经深低温冷冻长期保存。     

牵张力对大鼠髁突软骨细胞增殖及相关因子表达的影响

目的:观察牵张力对大鼠髁突软骨细胞增殖、炎性因子及Hedgehog通路基因的表达影响,探讨牵张力对软骨细胞的调控。方法:体外培养软骨细胞并鉴定。用Flexcell 4000TM加力板对细胞施加0.5 Hz,0%、3%和15%的牵张应变,作用4 h后检测细胞增殖情况,对比PCNA、Caspase-3、COL II、IL-1β、TNF-α及Hedgehog通路基因Ihh、Ptc和Smo的表达变化。结果:与对照组相比,3%组细胞增殖速度增加,PCNA、COLII、Ihh、Ptc和Smo的mRNA表达增加,15%组Caspase-3、IL-1β和TNF-α表达增加,而PCNA、Smo表达降低。与3%组相比,15%组细胞增殖速度降低,PCNA、COL II、Ihh和Smo表达降低,而Caspase-3、IL-1β表达增高。结论:不同强度牵张力对大鼠髁突软骨细胞增殖活性及炎性因子表达作用不同。Hedgehog通路对牵张力敏感,可能参与了力学刺激对软骨细胞的调控。     

机械牵张力对成骨细胞的影响

针对上颌骨横向发育不足的患者．临床上常采用扩弓的方法以促进其上颌骨横向发育。当对患者进行上颌骨扩弓时,机械牵张力作用于上颌骨,上颌骨组织中的成骨细胞（尤其是腭中缝区的成骨细胞）发生变化,从而促进骨的改建。许多实验研究证明机械牵张力能促进骨组织新生．而成骨细胞是骨组织内骨形成的效应细胞,该细胞在骨改建的机制中处于“中心调控地位”．     

间歇性机械牵张力对人牙周膜成纤维细胞增殖动力学的影响

目的　观察间歇性机械牵张力作用下,人牙周膜成纤维细胞(hPDLFs)增殖动力学的变化,探究机械力介 导的牙周组织改建的可能机制。方法　体外培养hPDLFs,取第4~7代细胞,通过四点弯曲细胞力学加载仪对细胞 加载不同力值大小的间歇性机械牵张力(1 000,2 000,3 000μstrain),分别在不同时间点收集细胞,流式细胞仪测定 细胞DNA含量,计算增殖指数(PI)。结果　机械牵张力影响hPDLFs增殖活性。1 000μstrain和2 000μstrain机械牵 张力组与对照组相比,均能促进细胞增殖,hPDLFs DNA含量增多(P<0·05),增殖指数升高(P<0·05);3 000μstrain 机械牵张力组与对照组比较,增殖指数无差异(P>0·05),但抑制细胞DNA合成(P<0·05)。结论　一定力值范围 的机械牵张力能促进hPDLFs的增殖活性,过大力值的机械牵张力反而抑制细胞增殖。     

小鼠鼻软骨细胞的培养

目的 天空小鼠鼻软骨细胞体外培养方法及形态特征。方法 取Balb/c小鼠子鼠的鼻中隔软骨，随机分为4组分别消化4h,8h,12h及16h，观察体外培养软骨细胞的生长状况，并用Ⅱ型胶原抗体进行细胞来源鉴定。结果 经Ⅱ型胶原酶孵育消化4h的组织，细胞量少，生长缓慢，无法进行正常传代。而消化8h的软骨组织、细胞于1d后即开始贴壁、伸展，9d第一次传代，传代细胞生长稳定，形态多样，Ⅱ型胶原抗休染色体阳性。消化2h及16h的细胞几乎不贴壁。结论 采用酶消化法可获得体外培养的小鼠鼻软骨细胞，消化时间以8h为佳。     

应力对体外培养软骨细胞影响的研究

软骨细胞是软骨生长改建的细胞基础,而应力对软的生长起特殊重要的调控作用。本文就应力对软骨细胞的增殖及代谢的影响及机制作一综述。     

应力对体外培养软骨细胞影响的研究

软骨细胞是软骨生长改建的细胞基础,而应力对软骨的生长起特殊重要的调控作用。本文就应力对软骨细胞的增殖及代谢的影响及机制作一综述。     

不同大小机械牵张力对成骨细胞MMP-13/TIMP-1表达的影响

目的:研究不同大小机械牵张力对成骨细胞MMP-13/TIMP-1表达的影响.方法:通过自制的多通道细胞牵张应力加载系统对小鼠成骨样细胞MC3T3-E1同时施加0%、6%、12%和18%的机械牵张力,作用24h后,用RT-PCR方法检测细胞受力后MMP-13/TIMP-1 mRNA表达的变化,用免疫印迹法检测其蛋白表达的变化.结果:细胞受力后,MMP-13 mRNA/TIMP-1 mRNA及蛋白表达随牵张力值的增大明显增加.结论:不同大小机械牵张力可以影响成骨细胞的MMP-13/TIMP-1表达,进而影响骨改建.     

ALK2对小鼠髁突软骨细胞增殖分化的影响

目的:探讨ALK2对小鼠髁突软骨细胞增殖及成软骨分化的作用。方法:采用酶消化法提取小鼠髁突软骨细胞并鉴定。体外采用siRNA沉默小鼠髁突软骨细胞中Alk2基因的表达,通过MTT法检测细胞增殖。通过实时定量RT-PCR方法检测软骨细胞标志基因的表达。结果:倒置显微镜观察体外培养的小鼠髁突软骨细胞形态。免疫组化染色显示COLⅠ强阳性,AGGRECAN弱阳性,COLⅡ弱阳性。Pellet培养后实时定量RT-PCR检测发现ColⅡ,ColⅩ和ColⅠ表达上调。证实所分离的细胞是髁突软骨细胞。MTT结果显示Alk2沉默后细胞数量增加,实时定量RT-PCR结果显示Alk2沉默后软骨细胞基因表达下调,并有显著统计学意义。结论:ALK2抑制小鼠髁突软骨细胞的增殖,促进小鼠髁突软骨细胞的成软骨分化。     

雌激素及压力对髁突软骨细胞增殖与碱性磷酸酶活性联合效应的研究

目的:探讨雌激素及压力对髁突软骨细胞增殖和碱性磷酸酶活性的联合刺激效应.方法:体外培养髁突软骨细胞分为对照、90kPa/1 h刺激、高、中、低浓度雌激素刺激及压力与各实验浓度雌激素联合刺激组,采用MTT法检测细胞增殖、酶动力学方法检测细胞ALP活性.结果:压力与雌激素都可促进MCCs的增殖与ALP活性,压力的存在并不影响外源性雌激素的促细胞增殖作用,但外源性雌激素可对压力的促增殖作用产生明显的抑制效应,双因素联合作用对ALP活性的促进作用最强.结论:雌激素与压力联合作用对髁突软骨细胞的增殖并不产生叠加效应,但对ALP活性显示出明显的叠加刺激效应.     

Long-Term Effect of Maxillary Distraction Osteogenesis (DO) on Nasal Index in Adult Patients with Cleft Lip and Palate Deformities

Purpose

To test the hypothesis that there is no immediate and long-term effects of maxillary distraction osteogenesis (DO) on nasal index among adult subjects with cleft lip and palate deformities.

Materials and Methods

Twelve adult subjects in the age range of 17–20 years with complete unilateral cleft lip and palate underwent advancement of maxilla by DO. The immediate and long-term effects of maxillary DO on nasal index were evaluated from extra-oral full face frontal photographs recorded prior to DO (T₀), at the end of active DO (T₁) and at least 2-years after the DO (T₂). The ANOVA, Post Hoc test (Bonferroni) and Pearson correlation coefficients were used. The probability value (P value) 0.05 was considered as statistically significant.

Results

SNM angle and Ptm-M distance increased significantly by DO (P < 0.001). The nasal index increased significantly (P < 0.01) by 13.85 % from T₀ value of 85.15 ± 4.49 to 99.02 ± 11.16 % at the end of active distraction (T₁) and by 12.69 to 97.84 ± 9.14 % at the end of long-term follow-up (T₂). The correlation between sagittal maxillary advancement and nasal index was statistically significant (P < 0.001). For each millimeter of maxillary advancement, the nasal index increased by 1.38 % and 1.8 % at the end of active distraction and long-term follow-up respectively.

Conclusion

The advancement of maxilla by distraction osteogenesis among subjects with cleft lip and palate deformities increased nasal index significantly.

     

山羊下颌骨牵张成骨的生物力学研究

目的：探讨下颌骨牵张成骨进程中骨段间张力强度的变化特征。方法：8只山羊右下颌骨行骨皮质切开术并牵张后,对牵张期的每个工作日内的牵张前骨段间张力值、牵张时张力值和牵张后张力值进行测量分析,同时对固定期内的骨段间张力也进行了测量分析。结果：牵张期内骨段间张力值逐日显著增高,牵张期结束时达到峰值;固定期内张力值逐周显著下降,至骨皮质切开术9周后与施加牵张力前正常状态时骨段间张力值无显著性差异。结论：下颌骨牵张成骨进程中骨段间延长区组织所承受的张力值表现为先上升后下降的走势,这可能与骨周组织的适应性增长和新骨强度的逐渐增高有关。     

静张应力对大鼠髁突软骨细胞增殖效应调节研究

目的　探讨静张应力环境对髁突软骨细胞增殖效应的影响。方法　将第4代大鼠下颌髁突软骨细胞在细胞膜式张应力施加装置上培养,检测不同血清浓度及持续不同的静张应力(5 kPa、10 kPa)在0~12 h内对髁突软骨细胞增殖活性的影响。结果　低血清培养基中,随培养时间的延长,硅胶膜上髁突软骨细胞的增殖活性受到抑制;短期(2h)的静张应力(5 kPa、10 kPa)对髁突软骨细胞细胞周期的调控影响不大;0~10 h内5 kPa静张应力组软骨细胞增殖指数随着张应力作用时间的延长不断上升,增殖指数峰值位于10 h处;0~8 h内10 kPa静张应力组软骨细胞增殖指数随着张应力作用时间的延长不断上升,增殖指数峰值位于8 h处;5 kPa静张应力组较10 kPa静张应力组对髁突软骨细胞具有更大的促增殖作用。结论　静张应力可以调节髁突软骨细胞的增殖活性。     

bFGF聚乳酸纳米微球对兔成骨细胞增殖的影响

目的：观察碱性成纤维生长因子聚乳酸纳米微球缓释系统（bFGF—PLA—Ns）对体外培养的兔成骨细胞的增殖影响。方法：体外培养兔成骨细胞并鉴定,将bFGF—PLA—Ns和成骨细胞一起培养,采用MTr法检测微球对成骨细胞增殖状况的影响,免疫组化检测增殖细胞核抗原（PCNA）在成骨细胞中表达,并与单纯bFGF的作用进行比较。结果：bFGF—PLA—Ns具有良好的生物活性,能显著促进兔成骨细胞的增殖,其效应高于单纯施加bFGF的效应。结论：制备的bFGF—PLA—Ns比单纯的bFGF有更为显著的生物学效应,在骨创伤的治疗中有良好的前景。     

机械压力对大鼠下颌髁突软骨细胞增殖活性影响的体外研究

目的:建立体外培养细胞加力装置,在细胞水平探讨机械力作用下大鼠髁突软骨细胞功能代谢的变化。方法:采用流式细胞术检测不同时段、不同力值的机械压力对体外培养的大鼠髁突软骨细胞增殖活性的影响。结果:在一定时间、0～2.03×10-4Pa(0～207g/cm2)力值范围内,随着机械压力的增大,受压的下颌髁突软骨细胞增殖活性增高,以持续压力作用6h最为明显;当持续压力作用于下颌髁突软骨细胞24h后,细胞增殖活性则出现下降。结论:在一定时间、一定力值范围内,随着机械压力的增大,受压的下颌髁突软骨细胞增殖活性有逐渐增高的趋势;当持续压力作用超过一定的范围,细胞增殖活性则出现下降趋势     

机械压力诱导髁突软骨细胞c-fos表达的实验研究

目的：探讨机械压力作用下髁突软骨细胞将生物力学信号转变为生物学效应的作用机理。方法：消化法培养2周新西兰白兔的髁突软骨细胞，用自行设计制作的可控液压细胞加载装置在90kPa压强下持续加压360min，利用免疫组化技术对机械压力作用下兔髁突软骨细胞对细胞核内原癌基因c-fos蛋白在翻译水平的表达进行了初步研究。结果：加力组髁突软骨细胞胞核呈棕黄色，圆形，胞浆不着色，细胞轮廓清晰，表现为c-fos阳性反应；对照组所有细胞核均未着色，c-fos免疫组化为阴性反应。结论：90kPa持续360min的机械压力作用可以激活兔髁突软骨细胞核内基因的进一步改变，提示c-fos在髁突将机械力信号向生物学效应转换的过程中可能发挥重要作用。     

颅面骨骨牵引延长动物实验观察

目的 :观察骨牵引延长技术在颌面骨应用过程 ,了解内置式骨牵引器应用效果 ,为临床提供参考。方法 :用 5只犬下颌骨牵引延长模型 ,保留骨膜的单或双侧下颌骨环皮质骨切开术 ,将内置式微型延长器以垂直于截骨线方式固定于下颌骨颊侧。原位固定 7天后 ,牵引 (1次 /天 ,1mm/天 ) 2 0天 ,固定 1～ 2 0周。结果 :经大体测量、X线及组织学观察 ,证实骨延长效果肯定。结论 :颅面骨牵引延长效果肯定 ,有重要临床意义