3种提取接触性检材脱落表皮细胞DNA方法的实验研究

目的对3种提取接触性检材脱落表皮细胞DNA的方法进行实验研究和比较,以获得最佳的方法.方法分别采用Chelex-100小体系法、磁珠法、改良磁珠法法对脱落表皮细胞的DNA进行提取,并对检测结果进行分析比较,探讨提取接触性检材脱落表皮细胞DNA的方法.结果磁珠法和改良磁珠法均能获得较高质量的细胞核DNA STR基因座分型,且后者的分型效果更好.Chelex-100小体系法的STR基因座分型效果不佳.结论磁珠法和改良磁珠法均能有效检测接触性检材脱落细胞DNA,故在法医检案中遇到接触性检材时考虑选择改良磁珠法.     

接触性生物检材提取DNA方法的比较

目的 建立提取接触性生物检材DNA的新方法.方法 用PrepFiler ExpressTM法医DNA提取试剂盒提取各类接触性生物检材DNA并STR分型;将检验成功并可以重复的检材各取5份,用Chelex-100法、M48磁珠法和Chelex-100+纯化法3种方法提取接触性检材DNA,洗脱体积为50 μL,用Identifiler Plus复合扩增,并对检验结果分析比较.结果 对于接触性生物检材,采用PrepFiler ExpressTM法医DNA提取试剂盒STR分型的成功率最高,并将该方法加以实际应用.结论 PrepFiler ExpressTM法医DNA提取试剂盒是提取接触性生物检材DNA的一种新方法,可应用于法医实际案件检验.     

微量口腔粘膜脱落细胞检材STR位点的法医学检测分型

微量生物性检材的DNA多态性检测分型是法医物证学研究热点和难点。随着STR PCR技术出现 ,除了血痕、混合斑等微量检材 ,指纹、汗渍、头屑等特殊极微量生物性检材已经进入法医学科研应用领域。口腔粘膜脱落细胞多为有核的鳞状上皮细胞 ,含有完整的二倍体的核DNA基因组 ,利用该类     

汽车安全气囊上微量检材DNA检测方法的探讨

目的探讨汽车安全气囊上微量人体脱落上皮细胞DNA检测的有效方法.方法分别采用棉线载体直接扩增法、小体积Chelex-100法和磁珠法对汽车安全气囊上提取的微量人体脱落上皮细胞的DNA进行检测,并对检测结果进行分析比较,以获得有效方法.结果棉线载体直接扩增法和磁珠法均能得到满意的人体脱落上皮细胞核DNA STR基因座分型结果,小体积Chelex-100法不能获得STR基因座分型结果.结论棉线载体直接扩增法和磁珠法均能有效地检测微量人体DNA,获得STR基因座分型结果,提高DNA检出率,操作简单、节约时间和试剂成本,特点在法医物证学实际检案工作中具有较高的应用价值.     

线粒体单核苷酸多态性复合扩增体系在疑难检材中的法医学应用研究

目的应用线粒体单核苷酸多态性(SNPs)的复合PCR扩增体系应用于法医检验案件中的陈旧血痕、脱落细胞检材、腐败降解检材及骨组织等疑难检材,为解决法医学检验疑难检材的难题提供一种新的方法。方法用IdentifilerTM试剂盒进行目前使用的STR分型及已建立的18个线粒体SNPs(16个位于编码区和2个控制区)位点复合扩增毛细管电泳荧光检测体系,并行对照检验案件中的陈旧血痕、脱落细胞、腐败肌肉、软骨以及牙齿、骨等各种疑难检材。结果对于上述检材,STR与线粒体SNPs的检验成功率均达到80%以上,线粒体SNPs高于STR。对于高度腐败的肌肉及软骨、骨骼检材,线粒体SNPs的检验成功率明显高于STR。结论所建立的线粒体SNPs复合PCR扩增体系在疑难检材检验中具有良好的应用前景。     

血浆游离DNA的STR分型检测研究

目的：探讨利用血浆中游离DNA进行短串联重复序列（short tandem repeat,STR）分型检测,解决法医学个体识别和亲权鉴定问题的可行性。方法采集36例无关健康个体EDTA-Na2抗凝血样,分离血浆,采用经典酚-氯仿法分别处理血浆和血细胞,对提取的DNA进行15个STR基因座常规PCR扩增和荧光标记复合扩增,采用聚丙烯酰胺凝胶电泳和毛细管电泳检测2种STR分型方法进行检测。结果常规PCR扩增银染检测和荧光标记复合扩增毛细管电泳检测两种STR分型方法的结果表明,同一个体的血浆游离DNA和血细胞DNA STR分型一致,且分型效果接近。结论血浆游离DNA可作为一种有效的生物学样本进行STR分型检测,应用于法医个体识别和亲权鉴定。     

用Chelex-100方法提取肋软骨DNA105例

目的研究尸体所处环境、死亡时间的条件下,用Chelex-100方法提取肋软骨DNA。方法对案件中不同条件腐败尸体，采用Chelex-100方法提取肋软骨DNA，进行PCR扩增及STR分型。结果提取肋软骨均可获得STR分型。结论肋软骨是法医检案中的一类具有实用价值的检材。     

法医DNA试剂盒在人员血样检验中应用

目的 验证法医DNA试剂盒在人员血样检验中的分型效果.方法 提取DNA扩增或直接扩增,AB公司3500XL或3130测序仪电泳检测,GeneMapperID-X软件进行等位基因分型.结果 7种商业化的法医DNA试剂盒在人员血样DNA检验中均获得满意的STR分型.结论 使用文中介绍DNA试剂盒,可以满足法医DNA人员血样检验需求.     

低模板量DNA的分型方法及其相关问题

随着法医DNA分析技术的发展,越来越多低模板量DNA的生物检材被提取,并要求进行STR分型。在此对快速发展的各种低模板量DNA STR分型方法如增加聚合酶链反应(PCR)循环数、纯化PCR扩增产物、激光捕获显微切割和PCR扩增前的全基因组扩增等予以介绍,并就LT-DNA法庭科学应用中存在的相关问题予以论述。     

不同载体上人体脱落细胞富集方法的比较

目的 对不同载体上人体脱落细胞的富集方法进行比较研究.方法 选取使用过的口罩、衣服、手套, 分别采取负压吸附、粘取、剪取和擦拭4种方法富集脱落细胞.用QIAGEN QIAamp DNA Investigator Kit提取DNA, 用AB Identifiler系统进行PCR扩增, 用AB 3130 XL自动遗传分析仪进行扩增产物的电泳分离, 用Genemapper ID v3.2软件进行STR分型.结果 口罩、手套类体积小的载体, 采取负压吸附、粘取、剪取、擦拭的方法, 均能得到完整的STR分型图谱;而对于大件的衣服载体, 采用负压吸附和直接剪取明显斑迹处可得到完整的STR分型图谱.结论 对于纺织类渗透性载体, 体积较大时可采用负压吸附法富集人体脱落细胞;对于有明显斑迹的, 可直接剪取可疑斑迹进行检测;体积较小的载体, 可采用脱落细胞富集器粘取, 富集尽可能多的人体脱落细胞.     

汗潜指印STR分型的初步研究

目的:探讨遗留在签字笔上的汗潜指印DNA分型的可行性及其保存时间对分型的影响。方法:119支签字笔按照使用后保存时间分为7组,17名志愿者分别使用7支签字笔,每天20min,为期1个月,分别保存1d、3d、5d、7d、14d、21d和28d,运用Chelex-100法提取签字笔上遗留汗潜指印中的DNA,应用荧光标记PCR-STR技术进行DNA分型。同时采集上述17名志愿者口腔拭子进行DNA分型对照。分析签字笔作为检材进行DNA分型的可行性,及保存时间对DNA分型的影响。结果:以基因座检出个数为指标,签字笔上汗潜指印和口腔拭子随保存时间变化进行DNA分型的差异具有统计学意义(P<0.01)。使用后签字笔保存1d、3d、5d、7d、14d、21d和28d后进行DNA分型检出的基因座个数与对应的口腔拭子DNA分型检出的基因座个数相比差异均有统计学意义(P<0.01)。签字笔使用后保存1d进行DNA分型,可明确判读12个以上基因座的占11.8%。结论:签字笔上汗潜指印可作为一种法庭生物检材进行DNA分型,但其保存时间会影响DNA分型。     

Y染色体STR基因座DYS385等位基因分型标准物的制备及群体遗传学研究

目的　采用分子克隆技术大量制备优质标准 STR基因座等位基因分型标准物 ,解决长期困扰STR分型上存在的准确性和标准化问题。方法　先用 PCR扩增出 Y染色体上 DYS385基因座的 9个等位基因片段 ,将其插入 p U C重组质粒中 ,经 DNA测序分析证实插入片段的结构及大小 ,按国际标准将插入的等位基因片段进行命名 ,最后经转染、扩大培养、扩增及再鉴定后制备出标准的 DYS385等位基因分型标准物。结果　应用此法制备出大量的 DYS385等位基因分型标准物 ,并将其成功地应用于该基因座在中国成都地区汉族及德国美茵茨地区高加索人群体中的基因型分布频率调查。结论　该法制备的 STR基因座等位基因分型标准物在法科学实践中应用价值极高 ,DYS385基因座是一个适合我国群体分析和法科学应用的遗传标记     

Y染色体STR基因座DYS385等位基因分型标准物的制备及群体遗传学研究

目的 采用分子克隆技术大量制备优质标准STR基因座等位基因分型标准物,解决长期困扰STR分型上存在的准确性和标准化问题,方法 先用PCR扩增出Y染色体上DYS385基因座的9个等位基因片段,将其插入pUC重组质粒中,经DNA测序分析证实插入片段的结构及大小,按国际标准将插入的等位基因片段进行命名,最后经转染、扩大培养、扩增及再鉴定后制备出标准的DYS385等位基因标准物。结果 应用此法制备出大量的DYS385等位基因分型标准物,并将成功地应用于该基因座在中国成都地区汉族及德国美茵茨地区高加索人群体中的基因型分布频率调查。结论 该法制备的STR基因座等位基因分型标准物在法科学实践中应用价值极高,DYS385基因座是一个适合我国群体分析和法科学应用的遗传标记。     

二联体亲子鉴定中常染色体STR基因座检测

目的：探讨常染色体STR基因座检测在二联体亲子鉴定中的应用价值。方法：应用PCR同步扩增24个常染色体STR基因座,PAGE电泳分型,完成二联体亲子鉴定66例。结果：认定亲生关系38例(57．58％),排除亲生关系28例(42．42％)。结论：经24个常染色体STR基因座检测,能确切地认定或排除亲生关系,得出正确的鉴定结论。     

用样本工作站批量提取全血中DNA方法的建立

目的 建立一种用斯达尔样本工作站提取全血中DNA的方法,并评价DNA的纯度和产量.方法 使用斯达尔样本工作站提取全血DNA;DNA的纯度和含量用紫外分光光度法测定,并与手工提取方法进行比较.结果 斯达尔样本工作站与手工提取的DNA相比,在纯度与得率方面无差异,但更快速、简单.结论 本方法可以快速、高效地从大批量全血中提取较高质量的DNA,所得DNA适用于HLA的分型实验.     

人类白细胞Ⅰ、Ⅱ类抗原的中分辨度基因芯片分型技术研究

目的 应用基因芯片技术进行北方汉族人群人类白细胞抗原（HLA）Ⅰ、Ⅱ类中分辨度分型研究.方法 根据中国北方汉族人群HLA-Ⅰ、Ⅱ类常见的基因位点以及临床应用中对分型分辨度的实际需要,设计特异性寡核苷酸中分辨度分型探针,制成基因分型芯片.采用带荧光标记的引物,用合适的PCR方法扩增HLA-Ⅰ、Ⅱ类抗原上的多态性区域,产物与芯片上探针杂交.杂交结果经荧光扫描并用特定软件分析判断阳性探针,以此确定样品基因型.共检测30份临床样本.结果 所有样本的HLA-Ⅰ、Ⅱ类抗原基因分型均获成功.此中分辨度探针可分辨出598个Ⅰ类抗原等位基因,511个Ⅱ类抗原等位基因,可捡出Ⅰ抗原特异性57个,Ⅱ抗原特异性30个.结论 基因芯片用于HLA-Ⅰ、Ⅱ类抗原分型可行.     

DNA多态性分析凝胶干胶保存法及其法医学应用价值

目的：探讨凝胶干胶保存法及其在法医学中的应用价值。方法：采用饱和酚／氯仿抽提法提取血祥DNA，STR—PCR进行扩增，6％变性聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳，聚丙烯酰胺凝胶经银染显色后，采用玻璃纸处理制成干胶。结果：将银染后的聚丙烯酰胺凝胶及时进行拍照同时将其制成干胶，用Marker做对照通过测量DNA带的位置发现所得干胶同原始胶及拍照获取胶的结果一致。结论：通过玻璃纸干胶保存法可使原始资料永久而真实的保存，此方法对法医物证的保存具有极其重要的意义。