HPV、HSV2感染及C—cerbB—2表达与宫颈癌关系

目的：探讨汕头地区宫颈癌的发生与HPV，HSV2感染以及C-cerbB-2表达的相关性。方法：采用PCR技术检测宫颈癌（84例）组织与正常宫颈（13例）组织的HPV－DNA，HSV2－DNA，并用免疫组化SP法检测同一宫颈癌组织标本与正常宫颈组织标本的C-cerbB-2表达情况。结果：（1）宫颈癌组织HPV－DNA，HSV2－DNA阳性率为47．6％，46．4％，正常宫颈组织则为7．7％，15．4％，宫颈癌组织的HPV，HSV2感染率均显著高于正常宫颈组织（P＜0．01，P＜0．05）。（2）宫颈癌组织中，HPV，HSV2双阳性24例，经统计学处理，HPV和HSV2间的感染有显著相关性（P＜0．05）。（3）宫颈癌组织的C-cerbB-2表达率为34．5％，显著高于正常宫颈组织（0／13，P＜0．05）。（4）75．9％的C-cerbB-2阳性患者（22／29）与HPV与HPV和（或HSV2）同时呈现阳性。结论：汕头地区宫颈癌的发生与较高的HPV，HSV2感染率和C-cerbB-2表达率密切相关，三者的共同作用可能是宫颈癌发生发展的重要因素。     

FQ—PCR方法检测女性尖锐湿疣（CA）患者HPV的基因分型

目的探讨女性尖锐湿疣（CA）患者感染人类乳头瘤病毒（HPV）的基因类型和分布。方法采用荧光定量聚合酶链反应（FQ．PCR）方法检测256例CA患者疣体组织或分泌物中的HPV类型。结果HPV6、11型阳性率为93％（238／256）,HPV16、18型阳性率为15．2％（39／256）,HPV6、11型和HPV16、18同时阳性为10．9％（28／256）。定量检测病毒载量最高为1．0×10^8eopies／ml,最低为2．2×10^4eopies／ml。结论本地区尖锐湿疣患者感染以HPV6、11低危型为主,少数为HPV16、18高危型;荧光PCR检测技术具有灵敏度高、特异性强及检测时间短等特点,能够及时准确的为HPV患者临床治疗及预后判断提供可靠的依据。     

HPV各亚型在新疆各地区维吾尔族宫颈癌患者中的分布研究

目的：探讨HPV（Human papiloma virus,人乳头瘤病毒）各亚型在新疆维吾尔族宫颈癌患者中的分布情况,及HPV感染与新疆维吾尔族宫颈癌临床分期、病理类型及分化程度的关系,从而为新疆维吾尔族宫颈癌疫苗的研究及使用提供理论依据。方法：通过凯普导流杂交HPVDNA检测法（flow-through hybridization and genechip,简称HybriMax）,对350例维吾尔族宫颈癌患者宫颈组织进行21种HPV亚型的检测。结果：（1）新疆各地区维吾尔族宫颈癌HPV总阳性率为83．14％;HPV各亚型在新疆HPV阳性的宫颈癌组织中出现的频率排序为：HPV16（91．75％）、18（6．19％）、68（3．44％）、45（3．44％）、58（3．09％）、39（1．72％）、31（1．37％）、56（1．37％）、59（0．34％）、53（0．34％）、6（0．34％）,其它亚型未检测出。（2）喀什等三个南疆地区宫颈癌HPV阳性率及HPVl6阳性率与乌鲁木齐等其他地区宫颈癌HPV阳性率及HPV16阳性率之间差异无统计学意义（P〉0．05）。（3）临床Ⅰ～Ⅱ期及Ⅲ～Ⅳ期宫颈癌和各分化程度之间的HPV阳性率差异无显著性（P〉0．05）。鳞癌及其它病理类型宫颈癌HPV阳性率明显高于腺癌,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：新疆宫颈癌各地区均有较高的HPV阳性率,各地区HPV及HPV16阳性率之间无差异,HPV16在各地区均排在首位,HPV18虽然在第二位,但阳性率明显低于文献报道,排在第三位的HPV68及HPV45与国内外各亚型的分布状况有所不同。HPV感染与维吾尔族宫颈癌的临床分期、分化程度无关,与病理类型有关。     

HPV6b L1蛋白在昆虫细胞中的表达及其作为特异性诊断抗原的初步研究

目的：研究人乳头瘤病毒6b结构蛋白（HPV6b L1)在昆虫细胞系统的表达及其作为特异性诊断抗原的可行性,为HPV感染的血清学诊断及基因工程疫苗研究作准备。方法：采用HPV6b L1重组杆状病毒感染sf-9昆虫细胞制备HPV6b L1,经氯化梯度离心纯化,Western blot分析及电镜观察鉴定;用1μg、5μg和20μg三种剂量免疫小鼠,以检测小鼠血清抗体反应;并用HPV6b L1作为诊断抗原检测HPV感染者（尖锐湿疣及宫颈癌）和健康对照者共112例血清特异性抗体。结果：HPV6b L1在昆虫细胞中得到表达,并可自行组装形成VLPs,且予1μg剂量免疫小鼠就能产生阳性血清抗体反应,HPV6b L1 VLPs特异性抗体对HPV6感染的敏感性和特异性分别为78．6％和97．1％。结论：HPV6b L1 VLPs具较强的免疫原性和抗原性,血清中检测到的HPV6b L1抗体对HPV6感染具较高的特异性,可进一步用于HPV感染的血清学诊断及防治尖锐湿疣的基因工程疫苗研究。     

新疆南部维吾尔族妇女HPV16E6，E7基因突变与宫颈癌及癌前病变的相关性研究

目的：本研究检测HPV16E6,E7基因突变在新疆南部地区雏吾尔族妇女宫颈癌及癌前病变组织中的发生情况,探讨HPV16E6,E7基因突变与宫颈痛变及宫颈癌的关系。方法：以德国标准株HPV16DNA为原型对新疆南部维吾尔族妇女宫颈癌40例及癌前病变80例组织提取HPV16DNA,对其E6E7PCR扩增产物进行测序后进行对比,分析其突变情况．结果：HPV16阳性率分布：宫颈癌85％（34／40）,CINⅡ～Ⅲ42．5％（17／40）,CINⅡ10％（4／40）,对照组0（0／40）。HPV16E6突变率：宫颈癌中突变40％（16／40）,CINⅡ—Ⅲ中突变15％（6／40）。（x^2=0．023,P=0．011,r=0．998,P=0．038）,HPVE7突变率：宫颈癌中突变7．5％（3／40）,CINⅡ—Ⅲ组中突变率7．5％（3／40）．CINⅠ中突变率0（x^2=0．413,P=0．520）,E6E7同时突变率：宫颈癌组中突变率15％（6／40）;CINⅡ—Ⅲ中突变率7．5％（3／40）,CINⅠ中0（0／40）,（x^2=6．342,P=0．011）。结论：1．HPV16在宫颈癌,癌前病变的突变以单一的E6突变和E6,E7同时突变为主。2．随着宫颈病变向宫颈癌发展其发生突变率也随之增加。     

新疆喀什伽师县农村维吾尔族男性HPV感染分布研究

目的探讨新疆喀什伽师县农村维吾尔族男性HPV感染的分布及亚型特点,为新疆维吾尔族妇女HPV干预及宫颈癌预防提供理论依据。方法采用凯普导流杂交芯片技术对新疆宫颈癌高发区新疆喀什伽师县克孜勒博依乡430例维吾尔族男性进行21种HPV亚型的检测。结果（1）430例男性HPV阳性率为26．28％,HPV阳性的男性中HPV16是最常见的类型,与其他类型比较阳性率差异有统计学意义（P〈0．05）。（2）HPV感染的类型主要为16、58、31型;多重感染者15例,占HPV感染者的13．27％（15／113）,多重感染以HPV16型合并感染为主,占86．67％（13／15）。结论新疆喀什伽师县克孜勒博依乡维吾尔族男性HPV阳性率较高,HPV感染的类型以HPV16为主,维吾尔族男性在维吾尔族宫颈癌发生中可能起一定作用。     

HPV16／18型病毒感染与宫颈癌的关系研究

目的探讨高危型人乳头瘤病毒（human papilloma—virus,HPV）16／18型感染与宫颈癌的关系。方法应用实时荧光定量PCR（FQ—PCR）检测176例宫颈癌患者及218例宫颈炎症患者的宫颈分泌物,计算两组HPV16／18型阳性率及各组中HPV—DNA病毒载量拷贝对数值。结果宫颈癌患者组HPVl6／18型阳性率78．41％（138／176）,宫颈炎患者组HPVl6／18型阳性率29．82％（65／218）,两组阳性率经）（2检验,有显著性差异（Х^2=92．06,P〈0．01）;病毒载量前者也显著高于后者（t=2．42,P〈0．01）。结论HPVl6／18型病毒感染与宫颈癌关系密切,实时荧光定量PCR检测可以早期发现、旱期治疗。是预防宫颈癌的有效手段。     

多重PCR技术检测宫颈癌组织中HPV16、18和11／6E6基因的研究

目的：研究宫颈癌发病与HPV16、18E6基因的关系。方法：采用多重PCR技术检测83例宫颈癌组织中HPV16、18及11／6E6基因。结果：（1）新疆地区36例宫颈癌中HPVE6基因检出率为86.11％（31／36）,其中HPV16E6占构成比80.56％（25／31）。（2）山西地区宫颈癌中HPV DNA阳性检出率51.06％（24／47）,其中HPV16E6占构成比50.00％（12／24）。（3）两组HPVE6阳性检出率比较P＜0.01,差异有显著性。两组HPV16E6构成比比较,P＞0.05,差异无显著性。结论：宫颈癌发生与HPV感染的关系密切,且新疆地区比山西地区更为密切。两组HPV感染以HPV16为主。     

HPV感染在高发区与低发区宫颈癌中的检测

收集宫颈癌高发区湖北省五峰县宫颈癌活检组织25例，宫颈炎22例，低发区的宫颈癌活检组织40例，宫颈炎15例由湖北医科大学附二医院妇瘤科提供。应用GP－PCR（generalprimers-PCR)技术检测多型HPV感染，发现宫颈癌高发区阳性率为88．0％（22／25），低发区为87．5％（35／40），宫颈炎高发区为36．4％（8／22），低发区为6．7％（1／15）。同时同一份样品进行HPV16型E7基因的检测，在宫颈癌高发区中检出率为60．0％（15／25），低发区为52．5％（21／40），宫颈炎中为22．7％（5／22），而在低发区宫颈炎中没有检测到HPV16E7基因，结果表明：HPV感染在高发区宫颈炎组织中明显高于低发区，两者差异具有显著性。     

高危型HPV-DNA染色体整合状态与宫颈上皮内瘤变及宫颈癌关系研究

目的研究高危型HPV—DNA染色体整合状态与宫颈上皮内瘤变及宫颈癌之间的关系。方法应用原位杂交和免疫组化方法检测95例宫颈上皮内瘤变（CINI、CINII、CINm级分别21,18,16例）及宫颈癌组织中HPV感染情况,观察阳性杂交病例中HPV-DNA染色体整合状态与宫颈上皮内瘤变及宫颈癌关系。结果免疫组化检测CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ级阳性率分别为14％,16．6％,37．5％,宫颈鳞癌阳性率46．6％（P〈0．05）;原位杂交检测CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ级阳性率分别为19％,27．7％,37．5％,宫颈鳞癌阳性率70％（P〈0．05）;在CINⅠ、CINⅡ级中HPV—DNA以染色体外游离状态存在,在CINⅢ级及宫颈鳞癌中出现HPV—DNA整合状态。结论HPV．DNA染色体整合状态与宫颈上皮内瘤变及宫颈癌有关,在一定程度上HPV—DNA染色体整合状态对宫颈上皮内瘤变的恶性转归具有提示意义。     

生物素化HPV16DNA探针与人宫颈癌组织DNA分子杂交的研究

Biotin-labelled human papillomavirus (HPV) 16 type DNA probe was prepared by the techniques of molecular biology. And dot hybridization technique was used to detect the HPV 16 homologous sequences in the tissues DNA of human cervical carcinoma. The results indicated that 16 cases out of 28 of the human cervical carcinoma tissues were positive. The positive rate was 57%. The other 4 cases of normal uterine cervix tissues were negative. Only 1 in 4 chronic cervicitis tissues showed positive. The HPV 16 plasmid DNA, as the positive control group, showed strong positive, while lambda-phage DNA was negative. The results have shown that the genome of the HPV actually exists in the tissue of the cervical carcinoma and that there is a close relationship between the cervical carcinoma and HPV infection. This experiment adopted the Biotin-labelled HPV 16 DNA probe. And it may provide us with a quick and sensitive method for investigation of the infection of HPV and its role in the carcinogenesis of cervical carcinoma.     

HPV16E6与吲哚胺2，3-二氧化酶在宫颈病变组织中的表达

  目的   检测高危HPV感染的正常宫颈组织、宫颈癌前病变组织、宫颈癌组织HPV16E6和IDO的表达,分析二者在宫颈病变组织恶化过程中的关系,探讨其作为宫颈癌肿瘤标志物的可能性。   方法   把经第二代杂交捕获（HC-2）法行HPV DNA检测为高危型HPV感染的宫颈病变者120例为实验对象,正常宫颈组织、宫颈癌前病变组织、宫颈癌组织各40例。免疫组化染色法检测各组织中HPV16E6和IDO的表达情况。   结果   40例正常宫颈组织中HPV16E6和IDO阳性表达率分别为7.5%、0%;40例宫颈癌前病变组织中HPV16E6和IDO阳性表达率分别为37.5%、22.5%。40例宫颈癌组织中HPV16E6和IDO阳性表达率分别为90%、80%。在宫颈病变组织恶化过程中HPV16E6和IDO的阳性表达呈正相关（r_s = 0.710,P = 0.000）。   结论   HPV16E6和IDO的表达随宫颈病变的进展而呈现出阳性程度逐渐递增趋势,HPV16E6和IDO可考虑成为预测宫颈病变组织恶化的肿瘤标志物。      

高危HPV16 E4基因的表达纯化及临床应用

目的:构建人乳头瘤病毒(HPV)16 E4重组表达体并表达纯化获得HPV16 E4重组蛋白,用于检测不同人群血清相应抗体,初步探讨本地区HPV16 E4血清抗体反应与宫颈癌的相关性.方法:将HPV16 E4基因与pRSET-A融合表达载体连接,获得E4表达重组体,转化大肠杆茵BL21(DE3)并用IPTG诱导表达.表达的包涵体变性后经Ni柱纯化,复性并经活性鉴定后,用以包被酶联免疫吸附实验(ELISA)板,检测正常女性、慢性宫颈炎和宫颈癌患者血清抗体.结果:pRSET-16E4表达重组体的工程茵经IPTG诱导后可表达M15×103的HPV16 E4组氨酸融合蛋白,表达量占菌体蛋白的30%.表达形式为包涵体,重组蛋白经Ni-NTA琼脂糖树脂纯化后,纯度达95%以上,其活性经ELISA法证实.80例正常女性、46例慢性宫颈炎和32例宫颈癌患者中,其血清抗体阳性率分别为10.00%,39.13%和28.13%,宫颈癌患者HPV16 E4血清抗体阳性率显著高于正常人,且慢性宫颈炎患者HPV16 E4血清抗体阳性率也显著高于正常人,但宫颈癌组HPV16 E4血清抗体阳性率与慢性宫颈炎组间的差异无统计学意义.结论:在pRSET-A/BL21中表达获得的HPV16 E4融合蛋白,可用于宫颈癌相关HPV的血清学研究;宫颈癌和慢性宫颈炎患者HPV16 E4血清抗体阳性率均明显高于正常人.     

湖北省五峰县宫颈癌高发区HPV16/18 DNA的检测及相关危险因素的研究

目的:探讨湖北省五峰县宫颈癌高发区人群宫颈癌发生的高危因素.方法:对1 010例健康人群及59例宫颈癌患者进行巴氏细胞学及人乳头瘤病毒(HPV)16/18 DNA的检测,并采用问卷形成获取相关的个人资料,在此基础上按年龄进行病例-对照(1∶4)研究.结果:健康人群与宫颈癌患者HPV的感染率分别为23.4％、88.1％(P＜0.001),健康人群中30-34岁,＞50岁出现两个HPV感染峰值,HPV16、HPV18感染及第一次性行为年龄＜18岁是宫颈癌发生的高危因素,相对危险度分别为OR=27.227(95％CI 12.489-59.335),OR=47.959(95％CI 6.000-383.330),OR=32.2(95％CI 7.87-131.75).结论:HPV感染的高峰病毒的再度活化,HPV16、HPV16+ HPV18的感染是该地区宫颈癌发生的关键因素,避免性行为年龄过早,定期追踪高危人群,研制高发区型别特异性疫苗是预防高发区宫颈癌的有效措施.     

宫颈病变中HPV16/18感染与P16^INK4A蛋白表达的关系

目的通过检测宫颈癌及其癌前病变组织中HPVl6／18感染和P16^INK4A蛋白表达的情况，探讨两者之间的关系以及它们在病理诊断中的意义。方法应用荧光定量PCR技术对宫颈组织进行HPV DNA定性检测，采用Envision两步免疫组织化学染色方法检测P16^INK4A蛋白表达。结果268例宫颈组织中HPVl6／18的总检出率为53．73％（144／268），其检出率随CINI级、CINⅡ～Ⅲ级和宫颈鳞癌病变程度的加重而显著增高（P〈0．05）。P16^INK4A“蛋白表达的阳性率在慢性宫颈炎、CINI级、CINⅡ一Ⅲ级和宫颈鳞癌组织中两两比较均有显著性差异（P〈0．05）。HPVl6／18感染与P16^INK4A蛋白的表达呈正相关关系（r8=0．689，P〈0．01）。结论HPV16／18感染可能通过影响P16^INK4A“蛋白的过表达与宫颈癌及其癌前病变的发生发展密切相关，二者联合检测对宫颈癌的筛查和预防具有重要意义。     

应用荧光定量聚合酶链方法检测宫颈组织中人乳头瘤病毒16E6基因

目的　建立荧光定量聚合酶链 (FQ PCR)方法检测宫颈细胞中人乳头瘤病毒 16型(HPV16 )E6基因的方法。方法　以 2 2 0例新疆妇女宫颈不同病变组织DNA作为样本 ,人乳头瘤病毒 16型 (新疆株 )E6基因 (HPV16E6 ,AF32 785 1)作为扩增的靶基因 ,同时以人 β 肌动蛋白基因片段作为内参照 ,借助于设计的目的基因引物 ,两个特异的荧光探针 ,在筛选的FQ PCR优化反应体系中 ,同时对两个基因片段进行扩增 ,得到HPV16E6的相对含量。结果　对 β 肌动蛋白阳性的宫颈不同病变组织中HPV16E6阳性率及其相对含量进行统计分析 ,新疆妇女宫颈脱落细胞标本 96例中 ,HPV16E6阳性 3例 (3 3% ) ;宫颈癌蜡块组织 5 9例中HPV16E6阳性 4 9例 (83 0 % ) ;宫颈上皮内瘤变 (CIN)蜡块组织 6 5例中 ,HPV16E6阳性 2 8例 (75 7% ) ;宫颈炎蜡块组织 33例 ,HPV16E6阳性 2 8例 (93 3% )。HPV16E6的相对含量随病情加重呈上升趋势 ,二者呈显著正相关 ,相关系数为 0 83。结论　建立的FQ PCR检测宫颈不同病变组织内HPV16E6基因的方法 ,能反映单位细胞人乳头瘤病毒的复制情况 ,筛查宫颈癌患者 ,并可能应用于宫颈癌的风险评估和疗效观察。     

The association between cervical carcinoma and human papilloma virus (HPV) in Xiangyuan County.

A mass survey was conducted to investigate the association between cervical carcinoma and human papilloma virus (HPV) infection in a high-risk area, Xiangyuan County, Shanxi Province. Fifty-four cases of cervical cancer in situ (CIS), including severe dysplasia (CIN III), 14 cases of invasive cervical carcinoma, 28 cases of mild cervical dysplasia (CIN I), and 13 cases of moderate cervical dysplasia (CIN II) were identified among 6710 women examined. One hundred and sixty-nine punch biopsies from abnormal cervix and genital tract were examined for the presence of HPV 6B/11, 16 and 18 DNA sequences by dot blot hybridization: The positive rates of HPV infection in cervicitis, CIN I, II, III, CIS and invasive cervical carcinoma specimens were 35.06% (27/77), 25% (2/8), 33.33% (2/6), 40% (2/5), 70.58% (24/34) and 40% (4/10), respectively. Among these groups, there was no regular distribution of HPV types except for HPV 16, the positive rate of which was increased from 25% in CIN I to 46.15% in CIS: HPV 16 was also the only type seen in the invasive cervical cancer group. Distribution analysis of HPV types in HPV-positive cervical cancer tissues uncovered an HPV 16 positive rate of 59.4%; 3.7 and 2.4 times higher than those of HPV 6B/11 and HPV 18, respectively. These data confirm the close association between cervical cancer and HPV 16 infection.     

端粒酶和人乳头病毒16/18在宫颈癌中的表达及其临床意义

目的:探讨端粒酶(hTERC)和人乳头病毒(HPV)16/18在宫颈癌中的表达及其临床诊断意义。方法:随机选择2009年3月～2012年3月,我院妇产科收治的宫颈癌确诊病例40例作为观察组。同时,随机选择在本院门诊就诊的宫颈诊断正常40例病理标本作为对照组。分别采用聚合酶链反应(PCR)技术和重复片段扩增方法银染定性法(TRAP-PCR),对所有样本宫颈组织中hTERC和HPVl6/18的感染和表达情况进行检测。利用SPSS17.0软件运用Logistic分析各组HPVl6/18和hTERC的感染和表达与宫颈病变的关联性。结果:宫颈癌组hTERC阳性率为60.0%,显著高于正常宫颈组的2.5%(P<0.01);HPV-16/18阳性率达到92.50%,显著高于正常宫颈组阳性率7.50%(P<0.01);宫颈癌易感性与hTERC、HPV16和HPV18阳性率关联关联系数分别为3.94、4.022和4.73,均达到显著水平(P<0.05)。结论:hTERC基因表达和HPV16/18感染与宫颈癌宫颈组织病变有密切的关联性,在宫颈癌发生发展中起重要作用,两者可以作为宫颈癌早期诊断的临床指标之一。     

TNF-α基因rs1800629位点多态性与汉族人群宫颈癌发生风险无关

 目的 探讨TNF-α基因rs1800629位点多态性与汉族人群宫颈人乳头瘤病毒（HPV）16型感染风险或HPV16型感染后宫颈癌发生风险的相关性。方法 研究入选了汉族女性679名,共分为3组,分别为HPV16型阳性宫颈癌病人型阳性宫颈癌患者204例,HPV16型阳性正常人群157例和HPV阴性正常对照人群318例。通过限制性片段多态法（PCR-RLFP）对rs1800629位点进行基因分型。结果 每两组间每2组间TNF-α基因rs1800629位点的等位基因和基因型分布均无明显差异（P>0.05）。rs1800629位点多态性与HPV16型感染风险（OR=0.581, 95% CI: 0.211-~1.598, P=0.293）,与宫颈癌发生风险（OR=1.063, 95% CI: 0.371-~3.041, P=0.910）,及与HPV16型感染后宫颈癌发生风险（OR=0.631, 95% CI: 0.206-~1.929, P=0.419）均无明显著相关关联。结论 我们的研究认为,TNF-α基因rs1800629位点多态性与HPV16型感染风险,宫颈癌风险及HPV16型感染后宫颈癌发生风险无关。