NOD/SCID小鼠人源化TCR Vβ亚家族T细胞分布与克隆性分析

目的 应用脐血CD34 细胞移植NOD/SCID鼠所建立的人源化SCID模型,分析人源化TCR Vβ亚家族T淋巴细胞分布与克隆性.方法 磁珠分选法分离脐血中CD34 细胞,分别经尾静脉输入亚致死剂量照射的NOD/SCID小鼠.第6周处死小鼠提取外周血、骨髓、胸腺的RNA,RT-PCR扩增人TCR Vβ亚家族基因,并用基因扫描进行T细胞克隆性分析.结果 采用RT-PCR技术在模型小鼠骨髓中检测到部分人TCR Vβ亚家族基因Vβ1、2、9、13、19.经进一步基因扫描分析,发现部分TCR Vβ亚家族基因Vβ9、13、19呈寡克隆表达.结论 在NOD/SCID模型可重建分化成熟的TCR Vβ亚家族T细胞.未能检测到全部人TCR VβT细胞的原因可能与免疫重建不完全或存在移植物抗宿主的反应有关.人源T淋巴细胞在模型鼠骨髓中分化成熟.     

基因扫描分析AML-M_(2a)病人外周血的TCR Vβ亚家族T细胞的克隆性增殖

目的　了解AML -M2a患者外周血中TCRVβ亚家族T细胞的分布和克隆性情况 .方法　利用RT -PCR扩增 14例AML -M2a患者外周血单个核细胞中 2 4个TCRVβ亚家族基因的CDR3,了解TCRVβ亚家族T细胞的分布 .阳性产物进一步经基因扫描分析了解其克隆性 .结果　 14例AML -M2a患者选择性表达 3～ 10个Vβ亚家族 ,其中部分Vβ亚家族呈寡克隆增殖 .结论　AML -M2a患者TCRVβ亚家族T细胞的倾斜性分布和克隆性增殖 ,可能是机体对M2a细胞刺激所产生的特异性免疫反应 .     

脐血中TCR Vβ亚家族T细胞的增殖特点

目的：了解脐血T细胞体外诱导后TCR Vβ亚家族的分布和克隆性增殖特点。方法：利用T淋巴细胞液体培养法，在不同刺激源（rhIL-2、抗CD3单抗、PHA、AML-M5细胞和bcr-abl多肽）条件下诱导脐血T细胞扩增，并利用RT-PCR分别扩增培养前后脐血T细胞的TCR Vβ24个亚家族基因的CDR3片段，了解各Vβ亚家族的表达情况，阳性的PCR产物进一步经荧光素标记和基因扫描分析产物的CDR3长度，了解T细胞克隆性。结果：脐血T细胞仅表达部分Vβ亚家族，但经体外培养后，可检测到绝大多数TCR Vβ亚家族T细胞，而经AML-M5细胞和bcr-abl多肽诱导后，TCR Vβ亚家族T细胞呈限制性表达和Vβ亚家族克隆性增殖。结论：脐血T细胞具备产生各TCR Vβ亚家族T细胞的潜能，在白血病相关抗原诱导下，具有限制性和克隆性增殖的能力。     

脐血中TCR Vβ亚家族T细胞的增殖特点

目的了解脐血T细胞体外诱导后TCR Vβ亚家族的分布和克隆性增殖特点. 方法利用T淋巴细胞液体培养法,在不同刺激源(rhIL-2、抗CD3单抗、PHA、AML-M5细胞和bcr-abl多肽)条件下诱导脐血T细胞扩增,并利用RT-PCR分别扩增培养前后脐血T细胞的TCR Vβ 24个亚家族基因的CDR3片段,了解各Vβ亚家族的表达情况.阳性的PCR产物进一步经荧光素标记和基因扫描分析产物的CDR3长度,了解T细胞克隆性. 结果脐血T细胞仅表达部分Vβ亚家族,但经体外培养后,可检测到绝大多数TCR Vβ亚家族T细胞,而经AML-M5细胞和bcr-abl多肽诱导后,TCR Vβ亚家族T细胞呈限制性表达和Vβ亚家族克隆性增殖. 结论脐血T细胞具备产生各TCR Vβ亚家族T细胞的潜能,在白血病相关抗原诱导下,具有限制性和克隆性增殖的能力.     

超抗原SEA联合PML-RARа对外周血T细胞TCR Vβ亚家族基因表达的影响

目的 探讨超抗原SEA联合PML-RARa多肽对外周血T细胞TCR Vβ亚家族基因表达的影响.方法 分别将SEA、PML-RARa多肽以及SEA联合PML-RARa多肽与正常人外周血单个核细胞共同培养,20 d后收集增殖细胞,利用RT-PCR及基因扫描技术分析诱导后增殖T细胞TCR Vβ亚家族的利用和克隆性增殖的特点.结果 单纯SEA诱导后,T细胞表达了11个TCR Vβ亚家族,且仍为多克隆增殖.单纯PML-RARa多肽诱导后,T细胞限制性表达8个Vβ亚家族,其中、Vβ13、Vβ14表现出寡克隆或寡克隆趋势.PML-RARa多肽联合SEA共同诱导,其T细胞表达TCR Vβ亚家族依然呈明显的限制性,且Vβ13、Vβ14亚家族呈寡克隆、双克隆及寡克隆趋势.结论 SEA能协同PML-RARa多肽诱导的T细胞克隆性活化与增殖.     

超抗原SEA联合PML-RARα对外周血T细胞TCR Vβ亚家族基因表达的影响

目的探讨超抗原SEA联合PML-RARα多肽对外周血T细胞TCR邯亚家族基因表达的影响。方法分别将SEA、PML-RARα多肽以及SEA联合PML-RARα多肽与正常人外周血单个核细胞共同培养，20d后收集增殖细胞，利用RT-PCR及基因扫描技术分析诱导后增殖T细胞TCR Vβ亚家族的利用和克隆性增殖的特点。结果单纯SEA诱导后，T细胞表达了11个TCR Vβ亚家族，且仍为多克隆增殖。单纯PML-RARα多肽诱导后，T细胞限制性表达8个Vβ亚家族，其中Vβ13、Vβ14表现出寡克隆或寡克隆趋势。PML-RARα多肽联合SEA共同诱导，其T细胞表达TCR Vβ亚家族依然呈明显的限制性，且Vβ13、Vβ 14亚家族呈寡克隆、双克隆及寡克隆趋势。结论SEA能协同PML-RARα多肽诱导的T细胞克隆性活化与增殖。     

基因扫描分析AML-M2a病人外周血的TCR Vβ亚家族T细胞的克隆性增殖

目的了解AML-M2a患者外周血中TCR Vβ亚家族T细胞的分布和克隆性情况.方法利用RT-PCR扩增14例AML-M2a患者外周血单个核细胞中24个TCR Vβ亚家族基因的CDR3,了解TCR Vβ亚家族T细胞的分布.阳性产物进一步经基因扫描分析了解其克隆性.结果 14例AML-M2a患者选择性表达3～10个Vβ亚家族,其中部分Vβ亚家族呈寡克隆增殖.结论 AML-M2a患者TCR Vβ亚家族T细胞的倾斜性分布和克隆性增殖,可能是机体对M2a细胞刺激所产生的特异性免疫反应.     

T-ALL及T细胞株相关TCR Vβ基因谱系和克隆性分析

目的了解T细胞-急性淋巴细胞白血病(T-ALL)患者外周血中的T细胞及T细胞株的TCR Vβ基因谱系及其克隆性增殖情况。方法利用RT-PCR方法扩增6个不同的T细胞株和6例初发未治T-ALL病人外周血单个核细胞中24个TCR Vβ基因的互补决定区3(CDR3)，PCR产物进一步经荧光标记和基因扫描分析CDR3长度而确定T细胞的克隆性，部分T细胞株的单克隆PCR产物进一步进行序列分析。结果与正常人外周血表达全部24个Vβ亚家族不同，6例T-ALL病人分别表达5～12个Vβ亚家族。6例病人均存在1个或多个Vβ亚家族的寡克隆或双克隆增殖T细胞，另外，还有一些Vβ亚家族多克隆模式发生改变，呈现寡克隆性增殖的趋势。T细胞株多显示为表达一个Vβ亚家族的单克隆T细胞，不同T细胞株的CDR3长度和序列不尽相同。结论T-ALL患者外周血T细胞的TCR Vβ谱系出现限制性改变，均可检测到克隆性增殖T细胞，尚需进一步鉴定其性质(肿瘤性或抗原特异性增殖)，对于检测微小残留病变和设计抗白血病独特型疫苗均有一定的意义。     

vMIP-Ⅱ对SIV感染的食蟹猴TCRVβ基因表达的影响

目的检测感染SIV初期用病毒巨噬细胞炎症蛋白-Ⅱ（vMIP—Ⅱ）治疗的食蟹猴外周血T细胞TCRVβ优势表达,分析特异性Vβ亚家族表达水平的变化及T细胞克隆性质的改变。方法11只食蟹猴感染前后外周血PBMC样本共22例通过半定量RT-PCR技术分析其中14个TCRVβ亚家族T细胞的表达情况,运用基因扫描技术分析用药组与感染组差异表达的T细胞TCRVβ亚家族基因中CDR3的长度了解其克隆性。结果与感染前正常食蟹猴外周血T细胞的14个TCRVβ亚家族中表达（除去表达量极低的10个亚家族）相比较,感染后SIV组中部分样品Vβ7、8、14、16的表达量与感染前比较有上升趋势;vMIP-Ⅱ组中TCRVβ亚家族的表达量上升更加明显。基因扫描结果显示感染前、后标本中Vβ7亚家族的表达由多克隆向寡克隆变化的趋势。结论体内实验研究表明,SIV感染初期的食蟹猴体内部分TCRVβ亚家族有特异性的增生,且克隆性发生改变。vMIP—Ⅱ对此种Vβ亚家族的表达的增生有促进的作用,推测其促使特异性应答的免疫细胞的增生。     

CML细胞诱导自体和脐血T细胞TCR Vβ谱系和杀伤性分析

目的 了解慢性粒细胞白血病(CML)细胞诱导T细胞的TCR Vβ亚家族限制性利用和克隆性增殖情况，及其对CML细胞的杀伤活性。方法 采用混合淋巴细胞/肿瘤细胞培养(MLTC)方法，利用CML细胞体外诱导脐血或患者的T细胞增殖，用RT-PCR和基因扫描分析MLTC前后T细胞的24个TCR Vβ亚家族基因的互补决定区(CDR3)，了解各Vβ亚家族的利用和T细胞克隆性特点。并利用LDH方法检测MLTC后T细胞的细胞毒性。结果 脐血T细胞表达8～11个TCR Vβ亚家族，经MLTC后，2～3个Vβ亚家族呈克隆性增殖，CML细胞诱导的自体T细胞的TCR Vβ亚家族也类似。经MLTC后T细胞对原诱导细胞有较强的杀伤活性。结论 CML细胞可诱导脐血T细胞和自体T细胞TCR Vβ优势利用和克隆性增殖，诱导后T细胞具有特异性杀伤CML细胞的作用。     

基因扫描分析AML—M2a病人外周血的TCR Vβ亚家族T细胞的克隆性增殖

目的 了解AML－M2a患者外周血中TCR Vβ亚家族T细胞的分布和克隆性情况。方法 利用RT－PCR扩增14例AML－M2a患者外周血单个核细胞中24个TCR Vβ亚家族基因的CDR3,了解TCR Vβ亚家族T细胞的分布。阳性产物进一步经基因扫描分析了解其克隆性。结果 14例AML－M2a患者选择性表达3－10个Vβ亚家族,其中部分Vβ亚家族呈寡克隆增殖。结果 AML－M2a患者TCR Vβ亚家族T细胞的倾斜性分布和克隆性增殖,可能是机体对M2a细胞刺激所产生的特异性免疫反应。     

苯中毒工人外周血TCR Vβ克隆性T细胞利用特点

目的:分析苯中毒工人外周血中克隆性增殖T细胞及其CDR3序列的特点.方法:利用RT-PCR方法扩增11例苯中毒工人外周血单个核细胞中24个TCR Vβ基因的CDR3, 阳性产物进一步经荧光标记和基因扫描分析CDR3长度而了解其克隆性.结果:健康者外周血中可检测到24个Vβ亚家族, 11例苯中毒工人仅检测到2～10个Vβ亚家族.11例苯中毒工人均存在1个或多个Vβ亚家族T细胞出现寡克隆及寡克隆趋势.Vβ2、4、5、6和Vβ21的寡克隆T细胞出现频率较高.结论:苯中毒工人外周血TCR Vβ亚家族T细胞出现倾斜性分布和克隆性增殖, 这可能是机体苯中毒后所引起的特异性免疫反应.     

AML-M5患者外周血naive T细胞水平和TCR Vβ谱系利用特点

目的　了解急性髓性白血病M5亚型 (AML -M5 )患者T细胞受体重排删除DNA环 (TRECs)的含量和TCRVβ基因谱系利用和克隆性 ,从而了解AML患者的胸腺近期输出功能和TCRVβ亚家族T细胞增殖特点 .方法　利用实时定量PCR(TaqMan)方法检测 5例M5患者外周血单个核细胞TRECs的水平 ,并根据外周血中CD3阳性率计算CD3细胞中TRECs水平 .利用RT -PCR和基因扫描分析患者外周血单个核细胞的TCRVβ2 4个亚家族基因表达和克隆性 .9例正常人外周血作为对照 .结果　M5患者外周血中TRECs含量为 0 .76± 1.2 1/ 10 0 0CD3 细胞 ,明显低于正常人TRECs水平 (6 .84± 4 .71/ 10 0 0CD3 细胞 ,p <0 .0 5 ) .5例患者外周血T细胞表达不同数量Vβ亚家族 (2 - 16个 ) .基因扫描分析显示 4例病人外周血中的一些Vβ亚家族出现克隆性T细胞 ,Vβ1,Vβ15和Vβ2 1克隆性T细胞均分别见于 3例病人中 .结论　率先报道了AML -M5型患者胸腺近期输出naiveT细胞功能明显降低 ,尽管整体T细胞免疫功能低下 ,患者仍存在优势利用和克隆性增殖Vβ亚家族T细胞 ,提示其具有一定地对白血病细胞相关抗原产生特异性免疫反应的能力     

结核胸液中结核抗原刺激后CD4~+T细胞克隆性分析

目的检测结核抗原刺激后结核性胸膜炎病人胸液细胞中CD4+T细胞受体的表达情况,了解CD4+T细胞在结核局部细胞免疫应答中的作用。方法分离结核性胸膜炎病人胸液细胞(PFCs),对比BCG和结核特异性抗原(ESAT-6/CFP10混合单肽)刺激前后CD4+T细胞受体表达特征,并对刺激后部分PCR产物序列进行分析。结果 3例结核性胸膜炎患者胸液细胞未经任何刺激的条件下分别表达17~21个TCR Vβ亚家族,各存在1~2个Vβ亚家族呈现寡克隆增殖趋势。经BCG或ESAT-6/CFP10混合单肽刺激后,患者均出现4~5个寡克隆Vβ亚家族。不同患者选择性刺激的Vβ亚家族不同。结论 BCG和ESAT-6/CFP10混合单肽可分别诱导结核性胸膜炎患者不同TCR Vβ亚家族细胞寡克隆增殖,此优势表达的克隆性T细胞可能与不同结核抗原介导的特异性细胞免疫反应有关。     

AML-M1相关TCR Vβ克隆性增殖T细胞的研究

目的：了解急性髓细胞白血病M1亚型（AML－M1）患者外周血TCR Vβ亚家族T细胞的克隆性分布特点。方法：采用RT－PCR扩增9例M1患者外 周血的单个核细胞的TCR Vβ24个亚家族基因，分析其TCR Vβ亚家族的利用情况。PCR产物进一步经基因扫描分析，了解其CDR3长度以判断T细胞的克隆性。结果：不同标本中可检测到2－5个Vβ亚家族T细胞，以Vβ2、Vβ3、Vβ17和Vβ19为常见，并在Vβ2、Vβ3、Vβ5、Vβ8、Vβ9和Vβ19中发现克隆性生长T细胞。结论：M1病人外周血TCR Vβ亚家族T细胞表达呈现明显的选择性和克隆性增殖情况，这可能与M1细胞相关抗原有关，且克隆性增殖Vβ亚家族分布以个体特异性为主。     

CML患者CD4+和CD8+T细胞的TCR Vβ基因谱系和克隆性分析

目的：了解慢性粒细胞白血病慢性期（CML-CP）患者外周血CD4^＋和CD8^＋T细胞中TCR Vβ亚家族T细胞的基因表达和克隆性.方法：利用RT-PCR分别扩增19例CML-CP患者外周血单个核细胞（PBMCs）、CD4^＋和CD8^＋细胞TCR Vβ亚家族基因的CDR3,阳性产物进一步经基因扫描分析其克隆性.结果：CML患者外周血CD4^＋和CD8^＋细胞分别表达部分（1～21个）Vβ亚家族,均以Vβ13的表达率最高,其次为Vβ9,多数患者的一些Vβ亚家族T细胞呈克隆性增殖,主要出现于CD8^＋细胞中,分别以Vβ21（CD4^＋）和Vβ11（CD8^＋）亚家族的克隆性增殖多见.结论：CML患者外周血CD4^＋和CD8^＋细胞的TCR Vβ谱系均存在限制性分布,患者存在的克隆性增殖CD4^＋和CD8^＋T细胞可能与宿主抗CML抗原反应有关,它们可能在抗CML效应中起主要作用.     

白血病患者异基因造血干细胞移植后T细胞免疫重建的研究

目的通过分析TCR Vβ基因片段选择性扩增,了解白血病患者异基因外周血干细胞移植后T淋巴细胞的免疫重建及其在移植物抗宿主病(GVHD)患者中的表达特点.方法采用RT-PCR扩增10例移植后患者外周血的单个核细胞的TCR Vβ 24个基因片段,分析其TCR Vβ基因的表达情况,GVHD患者的PCR产物进一步经基因扫描分析确定T细胞克隆性.结果经24个Vβ引物所分别进行的RT-PCR检测TCR Vβ各亚家族基因的表达情况,发现 10例病人外周血与正常人表达24个Vβ亚家族有明显的不同,病人的部分Vβ亚家族T细胞仍未能重建,仅表达5～22个亚家族基因;9例GVHD患者外周血仅表达2～8个TCR Vβ亚家族,其中7例均表达Vβ3.对6例GVHD患者的基因扫描显示,均存在克隆性T细胞生长.结论移植后病人外周血淋巴细胞TCR Vβ基因片段部分受抑制,部分基因片段呈选择性扩增.GVHD患者有Vβ3和Vβ8基因的优势表达,并有克隆性T细胞生成.     

HSV-2感染人外周血淋巴细胞后TCRVβ基因片段的选择性扩增

T细胞受体（TCR）Vβ基因 1—20亚家族在识别和杀伤病毒及肿瘤抗原方面各自有着重要的作用。本研究采用单纯性痢疾病毒（HSV-2）感染正常人的外用血淋巴细胞（PBLs）后发现TCR Vβ2,6,7,8基因在体外选择性扩增,而用 HSV-2攻击生殖器单纯疱疹性皮肤病患者不同病程时期的 PBLs时发现 TCRVβ基因的表达水平随病程不同而改变。结果提示Vβ7,8在识别HSV-2时呈选择性扩增而限制 HSV-2的增殖。     

慢性苯中毒患者外周血TCR Vδ亚家族T细胞分布和克隆性研究

目的:了解慢性苯中毒患者外周血T细胞的TCRV8基因谱系及其克隆性增殖情况.方法:利用RT-PCR方法扩增10例慢性苯中毒患者外周血单个核细胞中8个TCR Vδ基因的互补决定区3(CDR3),PCR产物进一步经荧光标记和基因扫描分析CDR3长度而确定T细胞的克隆性.结果:8例健康人平均表达(6.63±0.52)个Vδ亚家族,外周血中未检测到Vδ4和Vδ5亚家族,慢性苯中毒患者工人表达(1.10±0.57)个Vδ亚家族(1例重度苯中毒工人8个Vδ亚家族均未表达),外周血中未检测到Vδ1、Vδ3、Vδ4和Vδ8亚家族,与健康人比较有显著性差异(P<0.01).6例慢性苯中毒患者存在1～2个Vδα亚家族T细胞出现克隆性增殖.结论:慢性苯中毒患者外周血出现TCR Vδ亚家族倾斜性分布和克隆性增殖T细胞,这可能是苯中毒后所引起的机体特异性免疫反应.     

DLI治疗CML病人的克隆性增殖TCR Vβ细胞分析

目的：了解供者淋巴细胞输注（DLI）后,产生GVL效应的克隆性TCR Vβ亚家族T细胞的情况。方法：利用RT－PCR分别扩增2例CML经allo-BMT后复发病人DIL治疗前后不同时间外周血单个核细胞的TCR Vβ24个亚家族基因的CDR3,了解病人各Vβ亚家族的利用情况。阳性的PCR产物进一步经荧光素标记和基因扫描分析产物的CDR3长度,了解T细胞克隆性。结果：DLI治疗前病人外周血仅表达4－11个Vβ亚家族,而DL1治疗后缓解期则可检测到12－21个Vβ亚家族。基因扫描显示DLI后病人外周出血某些新的Vβ亚家族克隆性增殖T细胞。结论：病人的TCR Vβ亚家族T细胞存在倾斜性分布现象,该倾斜现象在完全缓解时逐步恢复正常。DLI治疗病人时,可能通过某些克隆性增殖TCR Vβ亚家族T细胞而发挥GVL作用。