37 nm非计量点氧化铁颗粒致HepG2细胞凋亡的研究

本研究以肝癌细胞HepG2细胞为对象,观察37 nm粒径磁性纳米非计量点氧化铁颗粒(FeOx)在外加磁场作用下对其增殖,凋亡的影响,旨在为FeOx用于治疗肝癌提供理论依据.     

37 nm非计量点氧化铁颗粒致HepG2细胞凋亡的研究

本研究以肝癌细胞HepG2细胞为对象,观察37 nm粒径磁性纳米非计量点氧化铁颗粒(FeOx)在外加磁场作用下对其增殖,凋亡的影响,旨在为FeOx用于治疗肝癌提供理论依据.     

5-HT再摄取抑制剂氟西汀诱导HepG2细胞凋亡

目的通过观察5-HT再摄取特异性抑制剂氟西汀对人肝癌细胞系HepG2细胞凋亡的影响,探索氟西汀治疗肝细胞癌的可能性。方法采用不同浓度氟西汀(5μmol、7.5μmol、10μmol、12.5μmol、15μmol)分别处理HepG2细胞24 h、48 h,AnnexinV-FITC/PI流式细胞术和蛋白水解酶3免疫荧光法检测细胞凋亡。结果 10μmol、12.5μmol氟西汀处理24 h早期凋亡率分为(14.41±5.40)%、(19.43±5.91)%,与对照组(4.05±1.90)%相比差异均具有统计学意义(均P0.05),5μmol氟西汀处理48 h早期凋亡率为(20.32±6.23)%,与对照组(12.40±4.18)%相比差异有统计学意义(P0.05),10μmol及12.5μmol氟西汀处理24 h活化caspase 3阳性细胞显著增加。结论氟西汀具有促进HepG2细胞凋亡的作用,为临床上应用氟西汀治疗肝细胞癌患者提供了依据。     

三氧化二砷诱导肝癌HepG2细胞凋亡作用

目的 探讨三氧化二砷（As2O3）诱导肝癌HepG2细胞凋亡作用。方法 应用普通光学显微镜、荧光显向镜和流式细胞仪观察As2O3对HepG2细胞株的形态学改变和诱发凋亡率。结果 As2O3作用于细胞后,可看到较典型的细胞凋亡形态学改变,细胞体积缩小,染色质固综合成斑块状,呈半月型紧贴于核膜周边,核碎裂,凋亡小体形成等,AO/EB荧光染色法显示。细胞凋亡率为4.3%-9.1%.As2O3诱导HepG2细胞凋亡作用呈时间依赖性,最佳浓度为2umol/L。流式细胞仪DNA直方图上呈现典型的亚二倍体凋亡峰。As2O3主要作用于细胞周期的G2/M期。结论 As2O3具有诱导HepG2细胞凋亡作用,存在治疗肝癌的潜在价值。     

肺癌抑癌基因1对HepG2细胞生长的抑制效应

目的探讨肺癌抑癌基因1（TSLC1）对人肝癌细胞株HepG2生长的影响。方法RT-PCR法制备TSLC1全长cDNA并克隆至真核表达载体pCI-neo，稳定转染至肝癌细胞系HepG2中。以转染空质粒pCI-neo的HepG2细胞为对照组，野生型HepG2细胞为空白组，显微镜下观察细胞形态，MTT法检测细胞增殖，FACSort流式细胞仪检测细胞周期，AnnexinV／PI双染法检测细胞凋亡情况。结果实验建立了高表达TSLCI蛋白的稳定细胞株。实验组细胞呈多角形，聚集成团，细胞之间的黏附非常紧密，对照组和空白组细胞呈梭形，细胞与细胞之间较疏散。与对照组和空白组相比，实验组细胞株细胞生长速度减慢，增殖受到明显抑制，G0／G1期细胞为63．66%±3．83％，高于对照组（47．45％±0．91％）和空白组（54．47％±0．96％）；S期细胞数为22．90％±6．04％，低于对照组（36．58％±0．61％）和空白组（33．61％±2．99％），P〈0．01，实验组细胞周期发生了G0/G1期阻滞。实验组细胞早期凋亡率和晚期凋亡率分别为17．09%±0．20％和16．11％±0．40％，与对照组和空白组细胞相比均明显升高（P〈0．01）。结论TSLC1基因明显抑制HepG2细胞生长，并诱导细胞发生凋亡。     

溶癌水泡性口炎病毒体外诱导人肝癌细胞HepG2凋亡的作用机制

目的:研究一株实验室减毒水泡性口炎病毒(VSV)对HepG2细胞的凋亡诱导作用,并探讨其可能的作用机制.方法:首先将水泡性口炎病毒以1.0感染复数(MOI)的接种密度感染HepG2细胞,同时设接种相同体积培养液的Mock感染组,在不同时间点收集细胞,MTT法检测细胞增殖活性;AO/EB结合Hoechst/PI染色观察细...     

脂筏介导的内源性大麻素对HepG2细胞的作用及其机制

目的 研究内源性大麻素(AEA)以脂质为基础的信号途径对肝癌细胞株HepG2的作用机制,探讨AEA在肝癌发生和发展中的作用.方法 免疫荧光检测脂肪酸水解酶、大麻素受体(CB)1和CB2在胎肝细胞株L02和肝癌细胞株HepG2中的定位.以不同浓度的AEA及膜胆固醇耗竭剂甲基-β-环糊精(MCD)处理,分为AEA 10 μmol/L组、AEA 20 μmol/L组、AEA40 μmol/L组,MCD 10 mmol/L+AEA 10 μmol/L组、MCD 10 mmol/L+AEA 20 μmol/L组和MCD 10 mmol/L+AEA 40 μmol/L组,分别孵育L02细胞和HepG2细胞,流式细胞术碘化丙啶单染法检测细胞的坏死率.Western Blot检测L02和HepG2细胞中脂肪酸水解酶、CB1和CB2的蛋白表达及其下游信号通路磷酸化P38促分裂原活化蛋白激酶(p-P38MAPK)和磷酸化c-Jun氨基端激酶(P-JNK)的表达变化.组间均数的比较采用独立样本t检验或单因素方差分析.结果 AEA可有效地导致肝癌细胞坏死,以浓度为AEA 40 μmol/L组达到最大效应,F=108.594,P<0.05,差异有统计学意义.MCD 10mmol/L预孵育后的HepG2细胞坏死率在AEA 10 μmol/L组、AEA 20 μmol/L组和AEA 40 μmol/L组分别为7.83%±2.13%,16.30%±0.94%,43.09%±5.10%,MCD处理前AEA 10 μmol/L组、AEA 20 μmol/L组、AEA 40 μmol/L组分别为13.64%±1.69%、20.28%±0.91%,52.71%±4.29%,处理前后比较,t值分别为3.702,5.274和3.503,P值均<0.05,差异均有统计学意义.同时,AEA能激活HepG2细胞中P38 MAPK和JNK,以AEA 40 μmol/L组作用明显,F值分别为11.908和26.054,P值均<0.05,差异均有统计学意义,MCD作用前p-P38 MAPK和p-JNK/β-肌动蛋白灰度值分别为1.63±0.06,1.60±0.31,MCD作用后p-P38 MAPK/β-肌动蛋白、p-JNK灰度值分别为1.14±0.01、1.17±0.29,作用前后相比,t值分别为2.801和12.829,P值均<0.05,差异均有统计学意义.结论 AEA可以有效地导致HepG2细胞坏死而对L02细胞无影响,AEA激活了HepG2细胞p-P38 MAPK和P-JNK相关信号传导途径,且此过程与脂筏有关.     

牛磺酸脱氧胆酸诱导HepG2细胞凋亡及坏死的研究

目的:探讨牛磺酸脱氧胆酸(TDCAO)对HepG2细胞凋亡和坏死的影响。方法:应用台盼蓝拒染试验判断细胞坏死,应用HE染色、Hoechst 33 258染色、电镜和DNA电泳对细胞凋亡定性;应用流式细胞仪对细胞凋亡定量。结果:TDCA 200 μmol/L孵育15 h可抑制细胞生长及增殖;400 μmol/L孵育 12 h可诱导显著 HepG2细胞凋亡,凋亡率为50.35±2.20％;600μmol/L孵育6 h即显著抑制细胞生长和增殖,随孵育时间延长脱落坏死细胞明显增多;800μmol/L细胞不能增殖,孵育6 h即可引起细胞坏死。结论:TDCA与HepC2细胞孵育时,即可引起细胞坏死,又可诱导细胞凋亡,取决于浓度及孵育时间的长短;在低浓度,TDCA对细胞的毒性主要表现在为抑制细胞生长增殖和诱导细胞凋亡,在高浓度则以引起细胞坏死为主。     

南蛇藤乙酸乙酯提取物诱导HepG2细胞凋亡的实验研究

目的探讨南蛇藤乙酸乙酯提取物对HepG2细胞增殖和诱导凋亡的机制。方法采用CCK-8法检测细胞增殖;使用流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡;采用分光光度计检测凋亡细胞胞浆caspase-3的活性变化。结果不同浓度的南蛇藤提取物能抑制HepG2细胞增殖,呈剂量效应和时间效应关系;药物作用24h时,其IC50为111.8μg/ml,作用48h时,其IC50为99.7μg/ml,作用72h时,其IC50为43.0μg/ml;药物干预24h时,HepG2细胞停滞在G0-G1期,并产生细胞凋亡亚二倍峰。在药物为15μg/ml、30μg/ml和60μg/ml时,细胞凋亡率分别为44.91%、31.95%和21.94%,与对照组比较,均有显著性差异（F=5.449,P〈0.05）;在药物浓度为30μg/ml、60μg/ml和120μg/ml并分别作用24h和48h时,Caspase-3活性逐渐增强。结论南蛇藤乙酸乙酯提取物抑制HepG2细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用可能与其增强Caspase-3活性有关。     

NS-398对HepG2细胞的放射增敏作用及其机制

有研究显示环氧合酶-2(COX-2)在许多肿瘤中高表达,推测与肿瘤的发生、发展、转移密切相关.研究还发现抑制COX-2的表达和(或)对抗COX-2的活性可以阻滞COX-2的促癌作用[1],提示COX-2可能成为肿瘤诊治的一个新靶点.本研究采用COX-2选择性抑制剂NS-398处理人肝癌细胞株HepG2细胞,旨在探讨其对肝癌放射敏感性的影响及其可能作用机制.     

辛伐他汀抑制HepG2细胞增殖作用的机制

目的 体外观察辛伐他汀对人肝癌细胞HepG2增殖、细胞周期及细胞周期蛋白依赖激酶抑制因子p21蛋白表达的影响.方法 采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法观察辛伐他汀对HepG2细胞增殖的影响,用流式细胞仪检测辛伐他汀对细胞周期的作用,用免疫细胞化学法观察辛伐他汀对细胞周期蛋白依赖激酶抑制因子p2l蛋白表达的影响.对数据进行析因设计与单因素方差分析.结果 体外辛伐他汀可抑制HepG2细胞的增殖(F浓度=1264,P＜0.001 ;F时间=17.466,P＜0.001;F浓度*时间=35.053,P＜0.001).辛伐他汀处理组G0/G1期细胞增多,但细胞凋亡不明显;体外辛伐他汀可增强HepG2细胞周期蛋白依赖激酶抑制因子p21蛋白的表达(F=512.133,P＜0.001).结论 体外辛伐他汀对HepG2细胞增殖有抑制作用,该作用可能与其使细胞生长阻滞于G0/G1期及增强细胞周期蛋白依赖激酶抑制因子p21蛋白表达有关.     

微小RNA-221对HepG2细胞增殖及其凋亡的影响

目的 探讨微小RNA-221(miR-221)对肝癌细胞株HepG2细胞增殖与凋亡的影响.方法 将miR-221阻遏物及模拟物转染至HepG2后,用实时荧光定量RT-PCR检测miR-221的表达水平;用细胞增殖试剂盒、Hoechst 33342及碘化丙啶(PI)双重染色、流式细胞仪及caspase3/7活性试剂盒检测HepG2细胞增殖与凋亡情况.对数据进行多样本的单因素方差分析,两两比较采用LSD法;相关性比较用Pearson检验.结果 RT-PCR结果显示,转染miR-221阻遏物后其表达受到抑制,而转染miR-221模拟物可促进其表达.细胞增殖试剂盒及Hoechst 33342/PI染色结果显示,48 h后miR-221阻遏物明显抑制HepG2细胞增殖(P＜0.05),而miR-221模拟物促进HepG2细胞增殖(P＜0.05),两种方法结果呈正相关(r=0.993,P＜0.01).流式细胞仪检测细胞周期显示,miR-221模拟物组G1期细胞比例(47.6%±1.53%)明显低于空白对照组(59.00%±1.00%)及阴性对照组(58.00%±1.00%,F=81.77,P＜0.01); S期细胞比例(20.33%±1.15%)明显高于空白对照组(11.00%±1.00%)及阴性对照组(12.00%±1.00%,F=70.90,P＜0.01).Hoechst 33342/PI染色、流式细胞仪膜联蛋白V凋亡试剂盒检测均显示,转染miR-221阻遏物48 h后,细胞凋亡和坏死增加(P＜0.05),差异有统计学意义.Caspase-3/7试剂盒检测caspase-3/7活性变化结果显示,转染miR-221阻遏物24 h后,细胞caspase3/7活性明显增高(P＜0.05),差异有统计学意义.结论 miR-221可促进肝癌细胞生长增殖,抑制miR-221表达可诱导细胞凋亡.miR-221有望成为治疗肝癌新的分子靶点之一.     

磁性纳米氧化铁颗粒在人肝癌Bel7402细胞裸鼠模型中的定向浓集及其生物学效应

目的 研究37 nm左右磁性纳米氧化铁颗粒(MNPs)在外加极低频交变磁场(EMF)作用下对人肝癌细胞株Bel 7402细胞抑制的效果及其机制.方法 用共沉淀法制备粒径为37 nm的MNPs,用尾静脉注射法注入Bel 7402细胞裸鼠模型,用静磁场定位MNPs于荷载肿瘤区,定位完成后用EMF照射病灶区,用磁共振检测静磁场定位MNPs的效果,用流式细胞仪检测肿瘤细胞凋亡及死亡情况,用Western blot方法检测细胞凋亡相关蛋白Bcl蛋白质组的表达.数据处理用单因素方差分析.结果 磁性纳米粒子在肿瘤部位的含量达到98.9%.经EMF照射静磁场定位MNPs裸鼠模型存活时间延长至(27.4±0.7)d,肿瘤抑制率为37.5%±0.8%,此种条件下肿瘤细胞早期凋亡明显,凋亡率为18.1%±0.6%.EMF照射能导致肿瘤细胞凋亡相关Bcl蛋白质组表达明显,EMF照射MNPs静磁场定位细胞Bcl2/Bax的比值(0.07±0.01)与未进行静磁场定位的细胞(0.23±0.02)比较,差异有统计学意义(F=0.016,P＜0.05).结论 EMF照射静磁场MNPs定向浓集人肝癌Bel 7402细胞裸鼠模型能很好的抑制肿瘤增殖,并导致肿瘤细胞发生大量凋亡从而延长裸鼠肿瘤模型存活时间.     

小干扰RNA干扰高迁移率族蛋白1对HepG2细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨小干扰RNA(siRNA)抑制高迁移率族蛋白1(HMGB1)基因对人肝癌细胞株HepG2细胞增殖和凋亡的影响. 方法设计并化学合成针对HMGB1的3对siRNA分子序列(siRNAH1、siRNH2、siRNAH3),同时设未转染对照组(Lipo组)及转染阴性siRNA组(阴性siRNA对照组).脂质体法瞬时转染HepG2细胞,通过PCR法和Western blot检测细胞中HMGB1基因在mRNA水平和蛋白质水平的变化,利用四甲基偶氮唑盐法检测转染HMGB1-siRNA的HepG2细胞增殖情况,TdT酶介导的缺口末端标记法检测细胞凋亡情况.两组数据间比较用t检验,组内数据比较用方差分析,细胞增殖数据采用可重复双因素方差分析.结果 3对特异性HMGB1-siRNA转染后,HMGB1 mRNA相对表达量分别为1.147±0.024、1.014±0.042和0.435±0.055,较Lipo组的1.411±0.065明显减少(t值分别为7.187、9.018和20.689,P值均＜0.01);HMGB1蛋白相对表达量分别为0.369±0.035、0.340±0.028和0.097±0.020,较Lipo组的0.553±0.051明显减少(t值分别为6.678、7.919和17.287,P值均＜0.01),其中以siRNAH3抑制效果最好,抑制率可达到80%.转染siRNAH3后HepG2细胞的增殖能力受到明显抑制,与Lipo组相比,72、96、120h时F值分别为34.651、540.550、3778.197,P值均＜0.01,HepG2细胞凋亡指数明显增高(F=130.696,P＜0.01).结论 靶向HMGB1基因的siRNA分子片段可以有效地抑制HepG2细胞生长,促进HepG2细胞凋亡,其作用与下调HMGB1的表达有关,HMGB1可能是肝癌治疗的一个潜在靶点.     

载紫杉醇超声微泡造影剂对人肝癌HepG2细胞周期及形态的影响

目的 探讨超声辐照紫杉醇微泡造影剂,对人肝癌细胞株HepG2细胞周期的影响和形态学变化.方法 体外培养人肝癌HepG2细胞,将细胞分4组,即空白对照组,紫杉醇组,超声空白微泡组,超声载紫杉醇微泡组.流式细胞仪检测不同处理组细胞周期分布,透射电镜观察不同处理组形态学变化. 结果 超声载紫杉醇微泡组细胞阻滞在G2/M期;超声载紫杉醇微泡能够诱导肿瘤细胞发生凋亡,并有凋亡小体形成.结论 超声辐照载紫杉醇微泡造影剂对人肝癌细胞株HepG2有明显阻滞作用,并诱导肿瘤细胞发生凋亡.     

乙型肝炎病毒HBx蛋白抑制阿霉素诱导的HepG2细胞凋亡

目的探讨乙型肝炎病毒HBx蛋白对阿霉素诱导的肝癌细胞凋亡的影响。方法将adr亚型HBx基因片段定向插入绿色荧光蛋白（GFP）真核表达载体pEGFPCl，构建重组体pGFP—HBx。将pEGFPCl、pGFPHBx转染HepG2细胞，采用G418筛选抗性克隆、荧光显微镜观察及RT—PCR检测HBx基因表达情况以建立稳定表达细胞株HepG2／GFP、HepG2／GFPHBx。用阿霉素（2．5μg／m1）分别处理HepG2、HepG2／GFP、HepG2／GFPHBx细胞，处理后不同时间在显微镜下观察细胞形态变化，并用锥虫蓝染色计数死亡细胞；流式细胞仪检测阿霉素处理36h后细胞凋亡率。结果HepG2／GFP、HepG2／GFPHBx细胞传70代后，仍表达强的GFP；RTPCR检测显示在HepG2／GFP—HBx细胞有HBx基因转录表达。锥虫蓝染色检测表明阿霉素处理的HepG2、HepG2／GFP细胞发生了明显的时间依赖性细胞死亡，而在HepG2／GFPHBx和对照组细胞未见明显细胞死亡；流式细胞仪检测显示阿霉素处理36h后，HepG2／GFP—HBx细胞凋亡率为3．94％，明显低于HepG2（59．03％）、HepG2／GFP细胞（61．38％）（P〈0．01），而与未处理对照组细胞凋亡率（2．12％，2．78％，2．55％）差异无统计学意义（P〉0．05）。结论成功建立了稳定表达GFP、GFPHBx的HepG2细胞株；HBx能够抑制阿霉素诱导的HepG2细胞凋亡。