微球蛋白1对胃癌细胞侵袭和迁移的影响及其机制

目的：探讨微球蛋白1（MCRS1）在胃癌细胞中的过表达对胃癌细胞侵袭和迁移的影响,并阐明其可能的作用机制。方法：选择胃癌BGC-823细胞、SGC-7901细胞和正常胃黏膜上皮GES-1细胞进行培养,采用Western blotting法检测MCRS1在3种细胞中表达情况,并选择MCRS1蛋白表达低的胃癌BGC-823细胞进行后续实验。构建MCRS1重组质粒,选取处于对数生长期的胃癌BGC-823细胞,设立空白组、空载体转染组和MCRS1转染组,利用Lipo3000将质粒转染入BGC-823细胞,采用Western blotting法检测侵袭相关蛋白上皮型钙黏蛋白（E-cadherin）、神经型钙黏蛋白（N-cadherin）及Snail的表达水平,采用细胞划痕实验和Transwell小室实验检测各组胃癌细胞的迁移和侵袭能力。结果：与正常胃黏膜上皮GES-1细胞比较,MCRS1在胃癌BGC-823细胞中表达水平较低（P<0.01）,而在胃癌SGC-7901细胞中表达水平较高（P<0.01）。PCR鉴定和测序分析,MCRS1重组质粒构建成功。与空白组和空载体转染组比较,MCRS1转染组MCRS1和E-cadherin蛋白表达水平明显升高（P<0.01）,N-cadherin和Snail蛋白表达水平明显降低（P<0.01）,细胞迁移率明显降低（P<0.01）,侵袭细胞数明显减少（P<0.01）。结论：过表达MCRS1能抑制胃癌BGC-823细胞的迁移和侵袭,其机制可能与E-cadherin蛋白表达增加、N-cadherin和Snail蛋白表达降低有关。     

芦荟苷通过下调HMGB1的表达抑制乳酸诱导的胃癌细胞增殖和迁移

目的 探讨芦荟苷对乳酸诱导胃癌细胞增殖和迁移的抑制作用及可能的分子机制。方法 胃癌BGC-823细胞常规培养,实验分为对照组、乳酸组、不同浓度芦荟苷和乳酸联合组,分组处理后的BGC-823细胞,EdU实验检测胃癌细胞的增殖;克隆形成实验检测细胞克隆形成能力;划痕实验和tranwell 实验检测细胞迁移能力;Western blot检测CyclinD1、CyclinE1、PCNA、N-cadherin、E-cadherin、MMP-2、MMP-9和HMGB1的表达;ELISA检测HMGB1的释放。HMGB1干扰质粒和阴性对照质粒分别转染BGC-823细胞,转染48 h后用乳酸刺激细胞24 h,EdU和划痕实验分别检测细胞的增殖和迁移能力。结果 EdU结果表明,芦荟苷明显抑制乳酸诱导的胃癌细胞增殖;克隆形成结果表明,芦荟苷和乳酸联合处理的胃癌细胞,细胞克隆数目显著少于乳酸处理组（P<0.05）;划痕和transwell结果均表明,芦荟苷能够抑制乳酸诱导的胃癌细胞迁移（P<0.05）;Western blot结果表明,芦荟苷能够下调乳酸诱导的Cyclin D1,E1,PCNA,N-cadherin,MMP-2,MMP-9和HMGB1的表达;逆转乳酸对E-cadherin表达的抑制作用;ELISA结果发现,芦荟苷有效阻止了乳酸诱导的HMGB1释放（P<0.05）。EdU和划痕结果表明,敲除HMGB1的BGC-823细胞,乳酸诱导的增殖和迁移与阴性质粒转染组相比明显下降。结论 芦荟苷通过下调乳酸诱导的HMGB1表达、释放以及增殖和迁移相关蛋白的表达,抑制乳酸诱导的胃癌细胞的增殖和迁移。     

γ-生育三烯酚抑制SGC-7901细胞上皮间质转化作用机制探讨

目的 观察γ-生育三烯酚(γ-T3)对转化生长因子(TGF-β1)诱导人胃癌SGC-7901细胞发生上皮间质转化(EMT)细胞迁移和侵袭能力的调控作用,探讨其可能的抑制机制.方法 用浓度为10ng/ml TGF-β1和10ng/ml TGF-β1+30μmol/L γ-T3分别作用于SGC-7901细胞24 h;利用倒置显微镜观察细胞形态学变化,并采用体外划痕实验、细胞侵袭实验和蛋白印迹等技术,检测γ-T3对TGF-β1诱导的胃癌细胞迁移和侵袭能力,以及E-cadherin和vimentin蛋白表达的影响.结果 γ-T3抑制TGF-β1诱导人胃癌SGC-7901细胞发生EMT.10ng/ml TGF-β1组细胞多数呈梭型,细胞边界模糊,细胞间间隙大;10ng/ml TGF-β1+30μmol/L γ-T3组细胞呈不规则多边形,细胞边界较清晰,间隙小.γ-T3抑制由TGF-β1诱导的SGA7901细胞的迁移能力(F＝74.106, P<0.05).γ-T3抑制由TGF-β1诱导的SGA7901细胞的侵袭能力(F＝181.921,P=0.000).γ-T3抑制TGF-β1诱导的E-cadherin蛋白表达降低(F=305.818,P=0.000);γ-T3也抑制TGF-β1诱导的vimentin蛋白表达增强(F=456.036, P=0.000).结论 γ-T3可能通过上调E-cadherin和下调vimentin蛋白表达,抑制TGF-β1诱导的人胃癌SGC-7901细胞发生EMT,降低胃癌细胞的迁移和侵袭能力.     

抑制组织蛋白酶B表达对胃癌BGC-823细胞黏附、增殖和侵袭的影响

目的 探讨抑制组织蛋白酶B表达对胃癌BGC-823细胞黏附、增殖和侵袭的影响.方法 构建针对CB的siRNA表达载体,脂质体LipofectAmineTM2000转染胃癌细胞株BGC-823.荧光定量RT-PCR和免疫印迹检测CB在各组胃癌细胞中的表达水平;细胞黏附实验检测各组胃癌细胞的黏附能力;细胞侵袭性实验检测各组胃癌细胞的侵袭能力;细胞增殖实验检测各组胃癌细胞的增殖能力.结果 与空白对照组和无关siRNA对照组相比,沉默1组和沉默2组细胞中,CB mRNA的相对表达量显著降低(P ＜0.01);CB蛋白表达被显著抑制;纤维粘连蛋白和基质胶黏附的胃癌细胞数目以及穿透基质胶的胃癌细胞数显著降低(P＜0.05);并且在2d、3d、4d及5d细胞孔内的吸光度值亦显著减少,差异有显著性(P＜0.05).而在无关siRNA对照组和空白对照组之间,CB mRNA的相对表达量、两组的黏附细胞数目以及两组穿透基质胶的细胞数都无显著性差异(P＞0.05).结论 设计针对CB基因的siRNA片段构建的siRNA载体能够有效干扰胃癌BGC-823细胞中CB mRNA和蛋白的表达.抑制胃癌BGC-823细胞CB基因表达,可以降低胃癌细胞的生长速度、降低胃癌细胞与基质黏附能力、降低胃癌细胞侵袭和转移的能力.     

全反式视黄酸衍生物逆转高水平胰岛素对胃癌细胞BGC-823迁移的作用研究

目的 探讨高水平胰岛素条件下全反式视黄酸衍生物4-氨基-2-三氟甲基-苯基-维甲酸酯(ATPR)对人胃癌细胞BGC-823迁移能力的影响及其潜在的分子机制.方法 首先采用不同浓度胰岛素刺激BGC-823细胞,CCK-8法检测胰岛素对细胞增殖能力的影响;然后采用等同人高胰岛素血症水平(≥0.5 ng/ml)而对BGC-823增殖能力没有影响的胰岛素剂量(＜ 10.0 ng/ml),联合ATPR处理BGC-823细胞后,通过细胞划痕实验和Transwell实验明确BGC-823细胞迁移能力的改变;Western blot检测与细胞迁移能力相关蛋白的表达水平.结果 CCK-8结果显示,与对照组比较,0.5、5.0 ng/ml胰岛素作用48 h后对BGC-823细胞的增殖无影响,而10.0 ng/ml胰岛素能够促进BGC-823细胞增殖;细胞划痕和Transwell实验显示,5.0 ng/ml胰岛素明显促进BGC-823细胞的迁移能力;但是,联合ATPR后能够抑制胰岛素对BGC-823迁移的促进作用,作用与肌球蛋白轻链激酶(MLCK)抑制剂ML-7类似;Western blot结果显示胰岛素促进MLCK蛋白表达且下调胃特异性紧密连接蛋白Claudin 18的表达,而ATPR联合处理后能抑制MLCK并促进Claudin 18蛋白的表达.结论 ATPR可逆转高水平胰岛素对胃癌细胞BGC-823迁移的促进作用,可能与其抑制胰岛素对MLCK和Claudin 18的调控密切相关.     

miR-149-5P调控β-catenin/MMP2/E-cadherin介导胃癌BGC-823和MKN28的细胞迁移

目的 观察miR-149-5P对胃癌细胞BGC-823和MKN28迁移的影响。方法 采用qRT-PCR方法检测miR-149-5P在胃粘膜上皮细胞(GES-1)与BGC-823和MKN28细胞中的表达。分别转染miR-149-5P mimics、NC、inhibitor和inhibitor-NC,采用qRT-PCR方法验证转染效率,采用细胞划痕实验和Transwell实验检测过表达或抑制miR-149-5P后胃癌细胞BGC-823和MKN28迁移能力。采用Western Blot检测转染miR-149-5P mimics或inhibitor后BGC-823和MKN28细胞中β-catenin、MMP2、E-cadherin蛋白表达水平。结果 qRT-PCR实验结果显示:与GES-1相比,miR-149-5P在BGC-823和MKN28细胞中表达显著降低;转染mimics后,BGC-823和MKN28细胞中miR-149-5P表达水平显著升高,而转染inhibitor后,BGC-823和MKN28细胞中miR-149-5P表达水平下降。细胞划痕实验和Transwell实验结果显示:转染mimics后可以抑制BGC-823和MKN28细胞迁移,而转染inhibitor后,可以促进BGC-823细胞迁移,MKN28细胞并无明显变化。Western Blot实验结果显示:在BGC-823和MKN28细胞中过表达miR-149-5P可上调E-cadherin的蛋白表达,抑制β-catenin和MMP2蛋白表达,而抑制miR-149-5P的表达可下调E-cadherin的蛋白表达,促进BGC-823细胞中β-catenin和MMP2蛋白表达,但转染inhibitor后MKN28细胞中E-cadherin、β-catenin和MMP2蛋白表达水平并无明显变化。结论 miR-149-5P可以抑制胃癌细胞BGC-823和MKN28迁移。     

慢病毒介导长链非编码RNA BACE2-IT1过表达抑制胃癌细胞的增殖和侵袭

目的 观察长链非编码RNA(long-chain non-coding RNA,lncRNA) BACE2-IT1在胃癌组织和细胞株中的表达,分析慢病毒介导BACE2-IT1过表达对胃癌细胞增殖和侵袭影响的作用机制。方法 实时定量聚合酶链反应(qPCR)检测26例胃癌组织和5种胃癌细胞株中BACE2-IT1的表达。以BACE2-IT1表达最低的胃癌细胞株感染载有BACE2-IT1的慢病毒(实验组)和空载慢病毒(对照组)。通过CCK-8实验和Transwell侵袭实验分析慢病毒介导BACE2-IT1过表达对胃癌细胞株增殖能力和侵袭能力的影响。qPCR和蛋白质印迹法(Western blot法)检测过表达BACE2-IT1后HECT家族E3泛素连接酶1(HACE1)的表达水平及Wnt/β-catenin信号通路的活化程度。结果 与癌旁组织比较,BACE2-IT1 在胃癌组织中呈低表达(P<0.01)。与永生化胃黏膜上皮细胞比较,BACE2-IT1在5种胃癌细胞株中呈低表达(P<0.05),在BGC-823细胞中的表达量最低(P<0.01)。与对照组比较,实验组过表达BACE2-IT1在体外可抑制BGC-823细胞的增殖能力(P<0.05)。对照组和实验组侵袭细胞数分别为87.82 ± 9.57和36.65 ± 5.78,BACE2-IT1在体外可抑制BGC-823细胞的侵袭能力(P<0.01)。与对照组比较,BACE2-IT1过表达导致BGC-823细胞中HACE1 在mRNA和蛋白水平的表达上调(P<0.01)。Wnt/β-catenin信号通路的活化被抑制。结论 BACE2-IT1在胃癌组织和细胞株中均呈低表达,BACE2-IT1过表达能抑制胃癌BGC-823细胞的增殖能力和侵袭能力,其分子机制可能是促进HACE1蛋白的表达,抑制Wnt/β-catenin信号通路的活化。     

RNAi沉默中期因子基因表达对胃癌细胞黏附和侵袭力的影响

目的:探讨中期因子(midkine,MK)基因小干扰RNA对胃癌细胞生物学行为的影响.方法:培养人胃癌BGC-823、HGC-27、MGC-803及SGC-7901细胞株,以荧光实时定量PCR方法检测中期因子基因mRNA表达;筛选出中期因子表达最高者.采用中期因子基因小干扰RNA转染胃癌细胞株,分别以荧光实时定量PCR和免疫荧光方法观察中期因子基因mRNA和蛋白水平,然后以四唑蓝(MTT)比色法检测细胞黏附性,以Boyden方法检测癌细胞侵袭力.结果:4株胃癌细胞中,中期因子均有不同程度的表达,以胃癌BGC-823细胞最高;以MK siRNA转染胃癌BGC-823细胞后,癌细胞中期因子基因mRNA和蛋白水平明显下降,且呈浓度依赖性;转染组细胞黏附数量明显下降,细胞侵袭力明显下降.结论:中期因子基因在胃癌细胞黏附和侵袭中发挥着重要作用;以siRNA转染胃癌细胞,可抑制胃癌细胞黏附和侵袭能力.     

蛋白激酶D1甲基化对胃癌细胞株BGC-823增殖侵袭的影响

目的:检测蛋白激酶D1(PKD1)在胃癌细胞中的表达,并探讨其对胃癌细胞增殖侵袭的影响。方法:体外培养胃癌细胞系BGC-823,使用PKD1甲基化特异性阻断剂5-杂氮-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)处理胃癌细胞,Western Blot法检测胃癌细胞中PKD1蛋白的表达情况,MTT法检测胃癌细胞的增殖,Transwell实验检测胃癌细胞的侵袭力。结果:5-Aza-CdR作用后,胃癌细胞中PKD1蛋白表达明显增加(P<0.05),细胞增殖速度减慢,侵袭能力减弱(P<0.05)。结论:胃癌细胞中PKD1表达的下调在胃癌的发病过程中可能起重要作用,并可能与胃癌细胞增殖侵袭能力改变有关。     

OCT4基因在胃癌细胞系中的表达及其意义

【摘要】 目的 检测八聚体结合蛋白-4（octamer-binding protein-4,OCT4）基因在不同分化程度的胃癌细胞株（MKN-28、SGC-7901、BGC-823）及正常胃黏膜细胞株GES-1中的表达情况,研究OCT4基因表达水平与胃癌细胞分化程度和侵袭力的相关性。方法 RT-PCR确定GES-1、MKN-28、SGC-7901、BGC-823中OCT4基因的表达水平,OCT4 siRNA转染BGC-823细胞,分别通过荧光定量PCR和Western blot检测干扰OCT4基因表达的效果,并利用Transwell小室法研究OCT4在BGC-823细胞侵袭力中的作用。结果 正常人胃黏膜细胞中未检测到OCT4的表达,人胃癌细胞系分化程度越低,OCT4基因表达量越高,低分化人胃癌细胞系BGC-823中OCT4基因表达最高,转染OCT4 siRNA的BGC-823细胞内的OCT4 mRNA和OCT4蛋白表达量明显下降（P＜0．05）。干扰胃癌细胞BG-823中OCT4基因的表达,穿膜细胞数量减少（P＜0．05）,侵袭力下降。结论 OCT4基因表达量与胃癌细胞的分化程度有关,OCT4基因可能在胃癌细胞的分化中起重要作用,影响胃癌细胞的侵袭能力,其表达程度有望成为胃癌患者恶性度预测的参考指标之一。     

TGF-β_1作用下JEG-3绒癌细胞Smad7蛋白表达的定量分析

目的:研究转化生长因子β1(TGF-β1)作用下JEG-3绒癌细胞中Smad7蛋白的表达情况,探讨TGF-β/Smads信号通路在绒癌中的功能作用.方法:分别用0ng/ml、100ng/ml及200ng/ml的TGF-β1处理JEG-3绒癌细胞48h,采用蛋白印迹法定量检测JEG-3细胞Smad7的表达.结果:JEG-3绒癌细胞系可明确表达Smad7;不同浓度TGF-β1作用下JEG-3细胞Smad7蛋白的表达无明显差别(P＞0.05).结论:绒癌细胞系JEG-3中Smad7对于外源性TGF-β1的刺激无应答反应.     

TGIF对胃癌BGC-823细胞的凋亡作用及机制

目的:探讨TGIF对胃癌BGC-823细胞的凋亡作用及机制。方法:构建TGIF质粒,利用脂质体将质粒pcDNA3.1-TGIF转染入胃癌BCG-823细胞,建立稳定高表达TGIF蛋白的细胞克隆,TGF-β1诱导胃癌BGC-823细胞凋亡。流式细胞术分析细胞的凋亡率。Western Blot和免疫细胞化学分析转染细胞内caspase3、caspase8、caspase9的表达。结果:TGF-β1作用后,各组细胞的凋亡率明显增加,但与对照组相比,PcDNA3.1-TGIF转染细胞的凋亡率增幅明显降低(P<0.05)。同时伴有caspase9的激活,但不伴caspase8的激活。结论:TGIF可抑制TGF-β1诱导的BGC-823细胞凋亡;TGF-β1通过caspase9途径诱导BGC-823细胞的凋亡。     

TGF-β_1 PI3K E-cadherin N-cadherin在胃癌中的表达及相关性研究

相关研究发现在胃癌中可能存在E-cadherin向N-cadherin转化,而TGF-β1、PI3K可能参与转化过程,本文采用免疫组织化学方法对76例胃癌组织及60名健康者正常胃组织中TGF-β1、PI3K、E-cadherin及N-cadherin的表达进行检测,以探讨其在胃癌组织中的表达及相关性。     

IL-6通过调控miR-152/PIK3R3通路促进胃癌细胞的增殖和上皮-间质转化

目的：探索白细胞介素(interleukin,IL)-6在胃癌中的作用及相关的分子机制。方法：50 ng/mL IL-6刺激 胃癌细胞MGC-803后,利用MTT法检测细胞增殖、划痕实验检测细胞迁移的变化,RT-qPCR实验检测E-钙黏蛋白 (E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、锌指转录因子Snail1和miR-152在mRNA水平的表达, Western印迹检测E-cadherin,N-cadherin,vimentin,Snail1在蛋白水平的表达;IL-6与miR-152模拟物(miR-152 mimics)单 独处理或者共同处理MGC-803细胞后,RT-qPCR检测PIK3R3在mRNA水平的表达,Western印迹检测PIK3R3、蛋白激 酶B(Akt)和磷酸化-Akt(p-Akt)在蛋白水平的表达。结果：外源性IL-6明显促进MGC-803细胞的增殖与迁移(P<0.05),降 低E-cadherin蛋白和mRNA和miR-152 mRNA的表达(P<0.01),增加N-cadherin,vimentin,Snail1,PIK3R3蛋白和mRNA及 p-Akt蛋白的表达(P<0.05)。转染miR-152 mimics后明显降低了PIK3R3和p-Akt蛋白水平的表达(P<0.01)。同时,过表达miR-152 能够降低IL-6诱导的PIK3R3及p-Akt的表达水平(P<0.01)。各组中Akt的表达均无明显变化(P>0.05)。结论：IL-6可能是通过 下调miR-152表达,诱导PIK3R3表达,激活PI3K/Akt信号通路,从而促进胃癌细胞的增殖、迁移和上皮-间质转化。     

CD40配体激活抑制胃癌细胞生长机制的实验研究

目的 探讨CD40配体激活对胃癌细胞生长、增殖和凋亡的影响。方法MTT法检测不同浓度sCD40L作用后AGS胃癌细胞株存活率，选定最佳干预浓度；流式细胞术检测sCD40L最佳干预浓度作用后胃癌细胞株AGS、BGC-823细胞周期和凋亡的变化。结果sCD40L的最佳干预浓度为2μg／ml；与胃癌细胞株AGS、BGC-823共育48h，sCD40L可使高表达CD40的AGS细胞生长抑制，细胞周期阻滞在G1期。而对CD40低表达的BGC-823细胞生长无明显影响，并且AGS、BGC-823细胞均无明显的凋亡变化。结论sCD40L可明显抑制CD40高表达胃癌细胞的生长。其机制是使细胞周期阻滞。     

CD40配体激活抑制胃癌细胞生长机制的实验研究

目的 探讨CD40配体激活对胃癌细胞生长、增殖和凋亡的影响。方法 MTT检测不同浓度sCD40L作用后AGS胃癌细胞株存活率，选定最佳干预浓度：流式细胞术检测sCD40L最佳干预浓度作用后胃癌细胞株AGS、BGC-823细胞周期和凋亡的变化。结果 sCD40L的最佳干预浓度为2μg／ml；与胃癌细胞株AGS、BGC-823共育48h，sCD40L可使高表达CD40的AGS细胞生长抑制，细胞周期阻滞在G1期，而对CD40低表达的BGC-823细胞生长无明显影响，并且AGS、BGC-823细胞均无明显的凋亡变化。结论 sCD40L可明显抑制CD40高表达胃癌细胞的生长，其机制是使细胞周期阻滞。     

芪术抗癌方对肝癌细胞上皮间质化的影响

【目的】探讨芪术抗癌方对肝癌HepG2细胞上皮间质化的影响。【方法】将HepG2细胞分为空白对照组,转化生长因子β1(TGF-β1)组,TGF-β1+芪术抗癌方1 mg/mL组,TGF-β1+芪术抗癌方2 mg/mL组等4组,显微镜下观察处理24 h后细胞的形态变化,划痕实验观察24 h细胞迁移能力,蛋白免疫印迹法检测细胞上皮间质化相关蛋白E钙黏蛋白(E-cadherin)、N钙黏蛋白(N-cadherin)、Vimentin、Snail、纤黏蛋白(Fibronectin)的表达情况。【结果】HepG2细胞加入TGF-β1后出现上皮间质化样多形改变,而芪术抗癌方2个治疗组均能抑制这一细胞形态改变。划痕实验结果显示,TGF-β1组划痕愈合百分比较空白对照组显著增加(P 0.05),而芪术抗癌方2个治疗组划痕愈合百分比较TGF-β1组显著减小(P 0.05)。蛋白免疫印迹法结果显示:TGF-β1组E-cadherin表达水平较空白对照组降低,N-cadherin、Vimentin、Fibronectin和Snail表达水平较空白对照组均升高,其中2组的Fibronectin表达水平比较,差异有统计学意义(P 0.05);与TGF-β1组比较,芪术抗癌方2个治疗组E-cadherin表达水平均升高,N-cadherin、Vimentin、Snail和Fibronectin表达水平均降低,其中,芪术抗癌方1 mg/mL组Vimentin、Snail表达水平,与TGF-β1组比较,差异有统计学意义(均P 0.05),芪术抗癌方2 mg/mL组E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、Snail、Fibronectin表达水平,与TGF-β1组比较,差异有统计学意义(P 0.05或P 0.01)。【结论】芪术抗癌方对TGF-β1诱导的HepG2细胞上皮间质化具有抑制作用。     

幽门螺杆菌L型感染与胃癌BGC-823细胞侵袭、转移关系的研究

目的：研究幽门螺杆菌L型（HelicobacterpyloriL—form,Hp—L型）感染对胃癌BGC-823细胞浸润、转移能力的影响,探讨Hp—L型在胃癌发展中的作用和可能机制。方法：将Hp—L型与胃癌BGC-823细胞按不同比例混合培养24h,并设置空白对照组,进行Transwell小室细胞侵袭实验,观察胃癌BGC-823细胞的侵袭能力。应用Western—blotting实验测定胃癌BGC-823细胞中ezrin的表达情况。结果：随胃癌BGC-823细胞与细菌共培养细菌含量增大,穿透重建基底膜的细胞数目明显增多（P〈0．05～P〈0．01）,胃癌BGC-823细胞中ezrin表达量逐渐增加（P〈0．01）。结论：Hp—L型感染增强了胃癌细胞的侵袭和转移能力,其机制可能与胃癌细胞的ezrin表达量增加有关。     

β-catenin在硬皮病皮损中的表达及其对人表皮角质形成细胞上皮-间质转化的影响

  目的  探讨β-连环蛋白(β-catenin)在系统性硬皮病(SSc)患者皮损中的表达及其对人表皮角质形成细胞上皮-间质转化(EMT)的影响。  方法  采用免疫组织化学SP法检测45例SSc患者皮损组织及20例健康成人皮肤组织中β-catenin、Snail1、上皮性钙黏附蛋白(E-cadherin)的表达情况。采用不同质量浓度Wnt10b〔0(空白对照)、2、4 ng/mL〕处理人表皮角质形成细胞HaCaT 48 h,免疫荧光实验检测β-catenin在HaCaT细胞中的定位;实时荧光定量PCR检测HaCaT细胞中Snail1、Snail2 mRNA水平;Western blot法检测HaCaT细胞中β-catenin、波形蛋白(Vimentin)、神经性钙黏附蛋白(N-cadherin)、E-cadherin蛋白表达。  结果  β-catenin、Snail1、E-cadherin阳性率在SSc患者皮损组织中依次为100%、88.89%和2.22%,在健康成人皮肤组织中依次为0%、10.00%和95.00%,两组比较差异均有统计学意义(P < 0.05)。与空白对照组比较,不同质量浓度Wnt10b(2、4 ng/mL)处理可诱导HaCaT细胞中β-catenin表达上调并促进β-catenin由细胞质向细胞核中转位,同时还可以提高HaCaT细胞中Snail1和Snail2 mRNA表达(P < 0.05),并上调Vimentin、N-cadherin蛋白表达和下调E-cadherin蛋白表达(P < 0.05)。  结论  SSc皮损中存在异常活化的Wnt/β-catenin信号通路及异常表达的EMT相关蛋白,且激活Wnt/β-catenin信号通路可促进HaCaT细胞EMT的发生。