利用大肠埃希菌分泌表达乙型肝炎病毒核心抗原

目的:研究乙型肝炎病毒核心(C)基因在大肠埃希菌(E.coli)中的表达,以期获得分泌表达的具有良好免疫反应性和特异性的HBcAg。方法:构建重组质粒pET-3c-cAg、pET-30a-cAg、pGEX-4T-1-cAg,转入E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达HBcAg。SDS-PAGE、ELISA和Western blot对表达产物进行分析。结果:限制性内切酶酶切和DNA序列分析证实HBV C基因正确克隆到E.coli各表达载体中。ELISA和Western blot分析表明,以pET-3c和pET-30a为表达载体能在E.coli分泌表达HBcAg,而以pGEX-4T-1为载体只能胞内表达,其中以pET-3c为载体的分泌表达量最高,培养上清中其效价为1∶128;用分泌表达的HBcAg作为诊断抗原检测抗-HBc阴阳性血清及国家参考品,符合率为100%。结论:成功获得HBcAg在E.coli的分泌表达,且其具有较高的特异性和免疫反应性。     

乙型肝炎病毒前S1抗原检测的临床意义

为了判断乙肝病毒在体内的传染性及复制性,临床根据HBeAg( )或抗-HBe( ),来作判断,至于传染性及复制程度,要通过HBV-DNA定量来确诊.针对这一现状,目前我院开展乙肝前S1抗原合并乙肝三系检测来判断其临床意义.     

用乙型脑炎组织培养病毒制备ELISA抗原检测特异性IgG

用C6/36细胞增殖流行性乙型脑炎(乙脑)病毒制备抗原,在ELISA间接法中检测特异性IgG抗体。用此法检测了本市临床疑似乙脑病人77例,阳性检出率为61.04%(47/77),与补体结合试验(cF)比较,cF阳性率仅为33.77%(26/77)。x²=10.43,P<0.01。与捕捉法ELISAIgM比较,后者阳性率为64.94%(50/77)。x²=0.25,P>0.05。当检测标本达合适的稀释度时,与其他病毒抗原无交叉反应。本法重复性良好,可用于流行病学调查、疫苗效果考核以及乙脑的诊断。     

丙型肝炎病毒抗体阴性献血人群中丙型肝炎病毒核心抗原检测的研究

目的观察丙型肝炎病毒(HCV)抗体阴性献血人群HCV核心抗原的流行情况,初步评估经HCV抗体检测后输血传播HCV的潜在风险. 方法 抗HCV抗体和HCV核心抗原检测采用ELISA试剂盒,丙氨酸氨基转移酶检测采用速率法,HCV RNA检测采用实时荧光PCR检测试剂盒. 结果在抗HCV检测阴性的1 758份无偿献血者标本中,HCV核心抗原检测有3份阳性,阳性率为0.17%;HCV核心抗原阳性的3份样本HCV RNA检测为阴性. 结论结果提示抗HCV检测后,经血液传播HCV的潜在风险已经很低.     

乙型肝炎病毒前S1抗原的检测及其临床意义

目的探讨乙型肝炎病毒前S1抗原(PreS1Ag)在临床上的应用价值.方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和聚合酶链反应(PCR)方法,对319例乙型病毒性肝炎(以下简称乙肝)患者和30例健康人分别检测HBV标志、PreS1抗原和乙肝病毒-脱氧核糖核酸(HBV-DNA).结果 319例乙型肝炎患者中PreS1抗原和HBV-DNA的检出率分别为51.7%和56.1%,两种方法符合率为92.1%;PreS1Ag在HBeAg阳性(1/3/5)和HBeAg阴性(1/4/5)中的阳性率分别为88.4%、31.1%,HBV-DNA在HBeAg阳性(1/3/5)和HBeAg阴性(1/4/5)中的阳性率分别为91.1%、34.1%,HBV-DNA检出率稍高于PreS1抗原的检出率,但两者的检出率差异无显著性(P＞0.05).结论乙肝病毒PreS1抗原与HBeAg阳性、HBV-DNA阳性呈高度相关,PreS1抗原可与HBeAg、HBV-DNA同时作为HBV存在复制和传染性的重要检测指标.     

丙型肝炎病毒核心抗原检测的临床应用价值

目的将HCV核心抗原检测与HCV RNA PCR法和抗-HCV检测进行比较,评估HCV核心抗原检测的临床应用价值。方法采用ELISA法检测121份怀疑为HCV感染患者血清中的HCV核心抗原,并以HCV RNA PCR法和抗-HCV检测结果作为比较。结果121份样本中,PCR法测HCV RNA,阳性56例,阴性65例,ELISA法测HCV核心抗原,阳性52例,阴性69例,ELISA法测抗-HCV,阳性44例,阴性77例;HCV RNA PCR、HCV核心抗原、抗-HCV阳性率分别为46.28%、42.97%、36.36%。同HCV RNA PCR检测结果比较:HCV核心抗原检测符合率90.08%、假阳性率3.31%、假阴性率6.61%;抗-HCV检测符合率81.81%、假阳性率4.13%、假阴性率14.05%。结论HCV核心抗原检测与PCR检测的符合率较高。说明PCR法与HCV核心抗原检测都可以对抗-HCV出现前的感染进行早期诊断,从而缩短窗口期。     

生物素酶标法检测乙肝e系统的研究

生物素、亲合素和 ELISA 结合,成为较普通法敏感、特异的检测法。实验中,生物素最佳标记用量为150μg/mg 抗-HBe,IgG 包被抗体、标记抗体最适应用浓度为10μg/ml。本法和普通ELISA 进行比较,检测 HBeAg、抗-HBe 的阳性率均较普通法高,检测 HBeAg 时,本法阳性、普通法阴性85份;检测抗-HBe 时,本法阳性、普通法阴性149份,经关联及相差分析,p<0.01。本法的特异性较好,检测 e 系统时批内、批间 CV 平均<10％。     

丙型肝炎病毒核心抗原检测对缩短抗体检测窗口期作用的研究

目的探讨HCV Core Ag缩短Ab检测窗口期的作用。方法通过询问病史筛选存在丙肝危险因素人群35例,通过cAg、Ab检测结果研究缩短窗口期情况。结果 HCV cAg早期辅助临床诊断丙肝比Ab检测(2011年前)方法缩短约36.5天,Ab检测(2011年后)方法缩短约33.7天。结论 HCV Core Ag实验可有效缩短窗口期,为临床提供可信结果。     

乙型肝炎病毒敏感性指标检测的临床意义

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)前S1抗原(PreS1)、HBV-DNA、乙型肝炎病毒标志物(HBV-M)在临床中的应用价值及PreS1与病毒复制的关系。方法对583例乙型肝炎患者血清标本,采用酶联免疫法(ELISA)检测前S1抗原和乙型肝炎两对半(HBV-M),荧光PCR探针检测HBV-DNA。结果在190例HBsAg、HBeAg阳性的标本中,前S1抗原阳性为166例,HBV-DNA阳性为173例,阳性率分别为87.36%和91.05%,两种阳性率比较,差异无统计学意义;393例HBsAg阳性、HBeAg阴性的标本中,前S1抗原阳性为195例,HBV-DNA阳性为212例。阳性率分别为49.62%和53.94%,两种阳性率比较,差异无统计学意义。结论乙型肝炎病毒前S1抗原与HBV-DNA有较高的符合率,可作为判断乙型肝炎病毒早期感染、复制的敏感性指标;三者联合检测互相补充,更有助于临床疾病的诊治。     

国产抗乙型肝炎病毒核心抗原抗体免疫球蛋白M检测试剂的比较

目的为中国急性乙型病毒性肝炎（乙肝）监测,筛选合适的抗乙肝病毒核心抗原抗体免疫球蛋白M（Immunoglobulin M Antibody to Hepatitis B Virus Core Antigen,Anti-HBc-IgM）检测试剂。方法选择市场销量较大的三种酶联免疫吸附试验Anti-HBc-IgM检测试剂,平行检测参比系统各3次,比较各试剂的组内相关系数（Intraclass Correlation Coefficient,ICC）、变异系数,以评价试剂的可靠性,绘制受试者工作特征曲线（Receiver Operating Characteristic,ROC）,计算ROC下面积（Area Under Curve,AUC）、部分（Partial）AUC（pAUC）、固定特异度下灵敏度[Sensitivity at a Fix Specificity,Se（FPR=e）],以评价试剂的真实性。结果三种试剂的ICC均接近于1,一致性均好,两两比较中A试剂稳定性最好,变异性最小（Bootstrap法,P〈0.05）。B试剂ROC位于最上方,AUC中位数最大,和A、C比较均有统计学意义（Bootstrap法,P〈0.05）;B和C、A试剂的pAUC中位数和Se（FPR=0.05）中位数差异无统计学意义。结论符合国家标准的三种试剂,以雅培试剂作为参照相比,综合评价结果,B试剂较好。     

乙型肝炎病毒前S1抗原检测在HBsAg阳性献血者中的应用价值

本试验通过用酶联免疫法（EUSA）检测乙型肝炎病毒前S1抗原和H13V血清学标志物及荧光定量PCR法检测HBVDNA,对前S1抗原与HBVDNA,HBV血清学标志物进行相关性分析,探讨pre-S1检测在HBsAg阳性献血者进一步诊断中的应用价值。     

Dot—ELISA检测循环抗原诊断血吸虫病的观察

Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测循环抗原诊断血吸虫病的观察湖北省血吸虫病防治研究所李书华，刘利铭近年来研究表明检测血吸虫循环抗原能反映宿主的活动性感染、虫体负荷量，具有病原学诊断意义，同时尚可评价药物的治疗效果。作者用血吸虫肠相关趋阴极抗原单克隆抗体斑点酶联免...     

乙型肝炎病毒前S1抗原的临床诊断价值

目的:探讨乙型肝炎病毒前S1抗原在诊断乙型肝炎病毒复制时的临床价值。方法:收集本院住院及门诊慢性乙型肝炎患者768例,用PCR定量分析法检测HBV-DNA,用酶免法(ELISA)检测前S1抗原,用时间分辨荧光免疫分析法检测乙型肝炎血清标志物。结果:以HBV-DNA≥103拷贝/ml判断病毒复制标准。在455例HBV-DNA阳性患者中前S1抗原阳性率为85.93%。在313例HBV-DNA阴性患者中,有81例前S1抗原阳性患者可能存在病毒复制,其原因有待进一步研究。HBV-DNA与前S1抗原两组阳性率结果比较,经χ2检验,χ2=282.350,P=0.000,差异有统计学意义。在455例HBV-DNA阳性患者中有123例HBeAg阴性患者存在病毒复制。HBV-DNA与HBeAg两组阳性率结果比较,经χ2检验,χ2=356.321,P=0.000,差异有统计学意义。在425例HBeAg阴性患者中,有210例前S1抗原阳性患者存在病毒复制,两组阳性率结果比较,经χ2检验,χ2=356.321,P=0.000,差异有统计学意义。结论:前S1抗原是诊断乙型肝炎病毒复制的重要指标。     

ELISA法检测轮状病毒抗原在感染性腹泻中的运用

2005年8月中旬,我市某工业园区居民发生的一起腹泻疫情,我们使用珠海海泰生物制药有限公司生产的快速轮状病毒抗原检测试剂盒检测轮状病毒获得满意效果,现报告如下。     

抗乙型肝炎病毒核心抗原抗体免疫球蛋白M诊断试剂区分急慢性乙型肝炎患者方法的初步探讨

目的调整抗乙型肝炎(乙肝)病毒核心抗原抗体免疫球蛋白M(Immunoglobulin M Antibody to Hepatitis B Virus Core Antigen,Anti-HBc-Ig M)诊断试剂临界值,使该指标能够区分急性乙肝(Acute Hepatitis B,AHB)和慢性乙肝(Chronic Hepatitis B,CHB)急性期患者。方法选择A公司国产和美国雅培(Abbott)公司Anti-HBc-Ig M检测试剂,平行检测2658份疑似AHB患者血清标本。利用R语言程序软件(R Programming Software,R)的VGAM程序包,通过最大似然法求得各自的分布参数和估计的阳性率,采用最大似然法、最大准确率法和固定特异度法,以及试剂说明书提供方法求得两种检测试剂的临界值、估计阳性率、灵敏度及特异度指标进行比较。结果采用最大似然法确定临界值,临界值调整前后A公司试剂阳性率为51.58%、12.23%,雅培试剂为28.37%、10.27%。两种试剂受试者工作特征曲线(Receiver Operating Characteristics Curve,ROC)的曲线下面积(Area Under Curve,AUC)均接近于1,都有较高的灵敏度和特异度。最大似然法、最大准确率法和固定特异度法与试剂说明书参考值比较,前三种方法得到的阳性率较为接近,灵敏度、特异度较高,试剂说明书参考值法,灵敏度均较低,假阳性率过高。结论本研究中调整Anti-HBc-Ig M检测试剂临界值的方法,可以使Anti-HBc-Ig M区分AHB和CHB急性期患者的能力更可靠。     

乙型肝炎病毒（HBV）的ELISA检测及化学发光法检测的诊断价值

目的 本研究探讨化学发光法与酶联免疫吸附法在(HBV)中的诊断价值。方法 收集本院2020年6月—2023年4月收治的300例乙型病毒性肝炎病例的血标本为观察组,另随机选择同期住院的300例非乙型病毒性肝炎病例的血标本为对照组。两组均采用HBV的ELISA检测及化学发光法检测,对比两组检测结果。结果化学发光法对HBV的标准曲线相关系数R²=0.998,平均批内变异系数2.98%,批间变异系数4.20%,优于ELISA检测的平均批内变异系数6.27%及平均批间变异系数7.74%;化学发光法的最低检出浓度为2.5ng/mL,ELISA检测乙型肝炎病毒最低检出浓度为25ng/mL,化学发光法灵敏度优于ELISA检测法。ELISA检测阳性率明显低于化学发光法检测结果,阴性率高于化学发光法。结论 化学发光法有利于早期诊断乙型病毒性肝炎,较ELISA检测具有很高的灵敏度与特异度。     

4种重组抗原ELISA法检测梅毒螺旋体抗体应用和评价

近年来随着分子生物学技术的发展 ,梅毒螺旋体多肽抗原在我国已克隆出 ,采用基因工程重组抗原研制出的ＥＬＩＳＡ试剂盒已有多种。文献报道[1] 检测特异性梅毒螺旋体抗体的ＥＬＩＳＡ法与其它同类方法相比 ,具有操作简单 ,便于大批量标本检测等优点。为了选择特异性好 ,敏感度高的ＥＬＩＳＡ试剂盒应用于梅毒螺旋体抗体筛选 ,我们对国内主要四家公司采用重组抗原生产的梅毒特异性抗体ＥＬＩＳＡ试剂盒进行相关评价 ,现将结果报告如下。1　材料和方法1·1　血清来源　正常人血清标本 10份 ;ＲＦ阳性和ＡＮＡ阳性患者血清标本 17份 ,其中ＲＦ…     

McAb-Dot-ELISA和双McAb夹心ELISA检测包虫病人循环抗原的比较

检测包虫病人循环抗原可判断包虫病的原发感染或继发感染,并可评价药物治疗的效果.单克隆抗体技术的问世,为抗原的检测开创了新的途径.