内脂素通过PI3K/Akt/FoxO1信号通路对糖尿病KKAy小鼠骨骼肌糖脂代谢及胰岛素抵抗的影响

目的探讨内脂素对糖尿病KKAy小鼠骨骼肌糖脂代谢及胰岛素抵抗的影响,初步分析其通过PI3K/Akt/FoxO1途径对糖尿病小鼠骨骼肌组织可能的作用机制。方法 8周龄雄性C57BL/6J小鼠随机分为普食(ND)组、普食+内脂素(ND+V)组、高脂(HFD)组和高脂+内脂素(HFD+V)组,同周龄雄性KKAy小鼠成模后随机分为糖尿病(DM)组和糖尿病+内脂素(DM+V)组,其中ND+V组、HFD+V组和DM+V组连续3 d腹腔注射内脂素重组蛋白。检测各组小鼠空腹血糖(FBG)、餐后血糖(PBG)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、游离脂肪酸(FFA)及空腹胰岛素(FIns),并进行葡萄糖耐量实验(GTT)、胰岛素耐量实验(ITT),计算曲线下面积(AUC)及稳态模型评估的胰岛素抵抗指数(HOMA-IR); RT-qPCR及Western blot检测磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、叉头框转录因子1(FoxO1)、丙酮酸脱氢酶激酶4(PDK4)和磷酸烯醇丙酮酸羧激酶(PEPCK)等相关分子的表达水平。结果分别与ND组和HFD组比较,DM组小鼠的体重、摄食、FBG、PBG、TC、TG、FFA、FIns、AUC_(GTT)、AUC_(ITT)及HOMA-IR水平均显著增高(P0.05)。与DM组相比,DM+V组FBG、TC、TG、AUC_(GTT)、AUC_(ITT)及HOMA-IR水平均显著降低(P0.05)。分别与ND组和HFD组比较,DM组PI3K、Akt的mRNA表达水平均显著降低(P0.001),而FoxO1的mRNA表达水平显著增高(P0.05);与DM组比较,DM+V组PI3K及Akt的mRNA表达均显著增高,FoxO1的mRNA表达显著降低(P0.01)。与ND组比较,DM组PI3K_(110α)、p-Akt蛋白表达水平显著降低,FoxO1、p-FoxO1和PDK4的蛋白表达水平均显著增高(P0.05);与HFD组相比,DM组的p-Akt、p-FoxO1的蛋白表达水平均显著降低,FoxO1、PDK4和PEPCK的蛋白表达水平均显著增高(P0.05);与DM组比较,DM+V组中PI3K_(110α)、p-Akt及p-FoxO1的蛋白表达均显著增高,而FoxO1、PDK4和PEPCK的蛋白表达水平均显著降低(P0.05)。结论内脂素可能通过PI3K/Akt/FoxO1途径下调糖尿病小鼠骨骼肌PDK4的表达,发挥改善糖脂代谢和胰岛素抵抗的作用。     

胰岛素通过Akt/FoxO/SVV信号通路抑制缺血再灌注损伤诱导心肌微血管内皮细胞凋亡的作用研究

目的 探讨胰岛素（INS）在抑制缺血再灌注损伤（IRI）诱导的心肌微血管内皮细胞（CMECs）凋亡中的作用及其分子机制。方法 分离和培养大鼠CMECs,建立模拟缺血再灌注（SI/R）模型,分别选用INS、磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）特异性抑制剂渥曼青霉素（Wort）和FoxO1/3a干扰RNA处理细胞。采用随机数字表法对大鼠CMECs进行分组：SI/R组（5只大鼠的CMECs）,SI/R+INS组（5只大鼠的CMECs）,SI/R+INS+Wort组（5只大鼠的CMECs）,SI/R+INS+FoxO1 siRNA组（6只大鼠的CMECs）,SI/R+INS+FoxO3a siRNA组（4只大鼠的CMECs）。采用末端转移酶标记技术（TUNEL）检测各组CMECs凋亡率,ELISA法检测各组Caspase-3活性,Western blotting法检测各组p-Akt（Ser473）、p-FoxO1（Ser256）、p-FoxO3a（Thr32）、生存素（SVV）蛋白表达水平。结果 与SI/R组比较,SI/R+INS组、SI/R+INS+FoxO1 siRNA组、SI/R+INS+FoxO3a siRNA组CMECs凋亡率及Caspase-3活性均降低（P＜0.01）;而SI/R+INS+Wort组CMECs凋亡率及Caspase-3活性与SI/R组比较,差异无统计学意义（P＞0.05）;与SI/R+INS组比较,SI/R+INS+FoxO1 siRNA组、SI/R+INS+FoxO3a siRNA组CMECs凋亡率及Caspase-3活性升高（P＜0.01）;且SI/R+INS+FoxO1 siRNA组CMECs凋亡率高于SI/R+INS+FoxO3a siRNA组（P＜0.01）。Western blotting检测结果显示:SI/R+INS组p-Akt、p-FoxO1、p-FoxO3a、SVV蛋白表达水平均高于SI/R、SI/R+INS+Wort组、SI/R+INS+FoxO1siRNA组以及SI/R+INS+FoxO3a siRNA组（P＜0.01）;且SI/R+INS+FoxO3a siRNA组SVV蛋白表达水平低于SI/R+INS+FoxO1siRNA组（P＜0.01）。结论 NIS可显著抑制IRI诱导的CMECs凋亡,其机制可能与激活Akt/FoxO/SVV信号通路相关,且主要通过FoxO3a的激活上调SVV蛋白表达水平,从而抑制CMECs凋亡。     

野黄芩素经Akt/FoxO1信号通路抑制视网膜神经节细胞凋亡

目的探讨野黄芩素经Akt/叉头状转录因子O1(FoxO1)信号通路抑制视网膜神经节细胞(RGC)凋亡的机制。方法构建视网膜神经RGC-5细胞氧化应激损伤模型,野黄芩素组分别给与25和100 μmol/L野黄芩素,阳性对照组给予25 μmol/L拉坦前列素,设模型组和阴性对照组。检测各组细胞增殖和凋亡情况,以及RGC-5细胞活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)及凋亡相关蛋白的水平。结果与阴性对照组比较,其他组细胞增殖率、SOD、p-Akt/Akt、p-FoxO1/FoxO1和B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)水平降低,细胞凋亡率、ROS、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和Caspase-3水平增加(P＜0.05)。与模型组比较,野黄芩素组和阳性对照组细胞增殖率、SOD、p-Akt/Akt、p-FoxO1/FoxO1和Bcl-2水平增加,细胞凋亡率、ROS、Bax和Caspase-3水平降低;且随野黄芩素剂量增加差异更为显著,但阳性对照组作用最明显(P＜0.05)。结论野黄芩素可以抑制RGC-5细胞凋亡,其机制可能与激活Akt/FoxO1信号通路有关。     

FoxO1在高糖诱导小鼠胰岛β细胞去分化中的作用机制研究

目的探讨FoxO1在高糖培养诱导小鼠胰岛β细胞去分化中的作用机制。方法将小鼠胰岛β细胞MIN-6细胞分为4组：常规糖浓度组（葡萄糖浓度25mmol/L）、高张浓度组（葡萄糖浓度25mmol/L+甘露醇35mmol/L）、高糖浓度组（葡萄糖浓度60mmol/L）、高糖浓度+FoxO1磷酸化酶抑制剂渥曼青霉素干预组（葡萄糖浓度60mmol/L+渥曼青霉素50nmol/L）。采用Westernblot法检测磷酸化FoxO1（p-FoxO1）（位点：256、319）、FoxO1、前β细胞标志物八聚体转录因子4（Oct4）、β细胞标志物胰腺十二指肠同源盒-1（PDX1）蛋白表达水平;qRT-PCR法检测FoxO1mRNA表达水平。结果在一定时间范围内,高糖能刺激MIN-6细胞FoxO1256及319位点磷酸化;高糖培养后,MIN-6细胞内FoxO1mRNA和蛋白水平无明显变化;高糖培养后,MIN-6细胞Oct4蛋白表达水平升高,PDX1蛋白表达水平降低,表明MIN-6细胞去分化;用渥曼青霉素干预后,MIN-6细胞Oct4蛋白表达水平降低,PDX1蛋白表达水平升高。结论高糖可能通过FoxO1256和319位点磷酸化而参与诱导体外培养小鼠胰岛β细胞发生去分化。     

渥曼青霉素对高糖培养小鼠胰岛β细胞去分化的影响

目的探讨渥曼青霉素对高糖培养小鼠胰岛β细胞去分化的影响及其作用机制。方法高糖培养小鼠胰岛β细胞后,采用蛋白质印迹法检测细胞内磷酸化叉头转录因子1（p-FoxO1）表达水平,确定高糖诱导细胞FoxO1磷酸化最佳时间。小鼠胰岛β细胞根据培养条件分为4组：（1）常规糖浓度组：用含25mmol/L葡萄糖浓度的DMEM培养液培养;（2）高张浓度组：用含25mmol/L葡萄糖浓度和35mmol/L甘露醇的DMEM培养液培养;（3）高糖浓度组：用含60mmol/L葡萄糖浓度的DMEM培养液培养;（4）高糖浓度+渥曼青霉素干预组：用含60mmol/L葡萄糖浓度和50nmol/L渥曼青霉素的DMEM培养液培养。培养12h后采用蛋白质印迹法检测各组小鼠胰岛β细胞p-FoxO1、FoxO1蛋白表达水平;培养72h后采用蛋白质印迹法和实时荧光定量聚合酶链式反应法检测各组小鼠胰岛β细胞神经元素3（ngn3）、胰岛十二指肠同源盒-1（PDX1）蛋白和mRNA表达水平。结果在一定时间范围内,高糖能刺激FoxO1蛋白磷酸化;高糖培养小鼠胰岛β细胞后细胞ngn3蛋白和mRNA表达水平均增加,PDX1蛋白和mRNA表达水平均减少。渥曼青霉素同步干预后,FoxO1磷酸化减少,细胞ngn3蛋白和mRNA表达水平均减少,PDX1蛋白和mRNA表达水平均增加。结论渥曼青霉素能抑制高糖诱导的小鼠胰岛β细胞去分化,渥曼青霉素可能通过抑制FoxO1的磷酸化而产生该抑制作用的。     

瑞舒伐他汀对高糖导致的血管形成障碍的影响

目的 探讨瑞舒伐他汀对高糖导致的血管形成障碍的影响。方法 培养原代心肌微血管内皮细胞,取1代细胞分为四组：低糖组（5.6 mmol/L葡萄糖）、高糖组（33.3 mmol/L葡萄糖）、瑞舒伐他汀组（33.3 mmol/L葡萄糖+1 μmol/L瑞舒伐他汀）和LY294002组（33.3 mmol/L葡萄糖+1 μmol/L瑞舒伐他汀+10 μmol/L LY294002）,其中LY294002为磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）的抑制剂。采用Matrigel、Transwell和MTT法分别观察四组微血管内皮细胞的管腔形成、迁移及增殖能力。采用Western blotting技术检测蛋白激酶B（Akt）、磷酸化Akt（Ser473）（p-Akt）、内皮一氧化氮合酶（eNOS）和磷酸化eNOS（Ser1117）（p-eNOS）蛋白的表达。结果 与低糖组相比,高糖组的内皮细胞管腔形成、迁移及增殖能力均明显降低（P<0.05）;瑞舒伐他汀组的内皮细胞管腔形成、迁移及增殖能力均明显高于高糖组及LY294002组,但仍低于低糖组,差异均有统计学意义（P<0.05）。瑞舒伐他汀组p-Akt和p-eNOS蛋白的相对表达量均明显高于高糖组和LY294002组（P<0.05）,并基本恢复至低糖组水平（P>0.05）。结论 瑞舒伐他汀可明显改善高糖导致的内皮细胞的血管形成障碍,其机制可能与激活PI3K/Akt/eNOS通路相关。     

PI3K/Akt信号通路在转录水平调控VCAM-1表达

目的 探讨PI3K/Akt信号通路是否调控脂多糖诱导的人内皮细胞VCAM-1表达及机制.方法 脂多糖(LPS) 10μg/mL刺激人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)0、6、12、24 h,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测VCAM-1蛋白表达,刺激0、4、8、12 h行RT-PCR检测VCAM-1 mRNA;LPS(10μg/mL,后同)刺激HUVEC 0、30、60、120 min后,Western blot检测PI3K(磷脂酰肌醇-3激酶)、磷酸化PI3K (p-PI3K)、Akt、磷酸化Akt (p-Akt)表达;PI3K抑制剂LY294002(10、50 μmol/L)、Akt抑制剂A6730(2、10 μmol/L)预处理细胞1h后LPS刺激12 h,Western blot检测VCAM-1蛋白表达,刺激8h行RT-PCR检测VCAM-1 mRNA;加或不加抑制剂,LPS刺激8h加入放线菌素D抑制转录,于0、1、2、3、4h收细胞行RT-PCR检测VCAM-1 mRNA,计算mRNA半衰期.结果 LPS刺激HUVEC(6、12、24 h)后VCAM-1蛋白表达增加(P＜0.05),12h达峰值,VCAM-1 mRNA在刺激后也增加(P＜0.05),8h达峰值;LPS刺激HUVEC后p-PI3K、p-Akt增加,p-PI3K在刺激30 min达峰值(P＜0.05),以后逐渐下降,120 min与0h接近(P＞0.05),p-Akt在刺激30 min明显增加,60 min达峰值,120 min仍高于0 h(P＜0.05);LY294002下调了p-Akt表达(P＜0.05),同时降低VCAM-1蛋白、mRNA合成(P＜0.05);Akt抑制剂也抑制VCAM-1蛋白、mRNA(P＜0.05);PI3K、Akt抑制剂均不影响VCAM-1 mRNA稳定性(P＞0.05).结论 PI3K/Akt信号途径在转录水平调控VCAM-1表达.     

miRNA-195抑制剂对高糖培养血管内皮细胞生物学行为的影响及机制

目的：探讨高糖环境下miRNA-195 抑制剂对血管内皮细胞行为的影响及机制。方法：培养人脐静脉血管内皮细胞（HUVECs）ECV304,分别用高糖（HG）、miRNA-195模拟质粒（mimic）、miRNA-195抑制质粒（inhibitor）、Sirt1激动剂白藜芦醇（RES）处理细胞株,CCK-8试剂盒检测增殖活力,RT-PCR检测miRNA-195及Sirt1 mRNA水平,Western blot检测Sirt1、p-FoxO1、FoxO1、Caveolin-1、血管内皮生长因子（VEGF）蛋白表达水平,划痕实验检测HUVECs的迁移能力,transwell小室实验检测细胞侵袭能力,Matrigel胶检测HUVECs的成管能力。结果：HG促进HUVECs的增殖、迁移、侵袭,增强成管能力（P ＜0.05）;而miRNA-195inhibitor则明显抑制HUVECs的增殖、迁移,降低成管能力（P ＜0.05）。结论：miRNA-195 inhibitor或许通过miRNA-195/Sirt1/FoxO1/Caveolin-1/VEGF通路影响HG环境下HUVECs的生物学功能。     

鼻咽癌中p-PTEN、P-Akt、P-FoxO1的表达及意义

目的检测鼻咽癌组织中p-PTEN、P-Akt和p-FoxO1的表达,探讨P11EN/Akt/FoxO1信号传导通路在鼻咽癌发生发展中的作用。方法应用Western Blot法检测p-PTEN、P．Akt和p-FoxO1在38例鼻咽癌组织与20例鼻咽部慢性炎症组织中的表达水平。结杲38例鼻咽癌组织中,p-PTEN的灰度值为0．53±0．04。明显低于慢性炎症组织（P〈0．05）;p-Akt的灰度值为1．72±0．31,明显高于慢性炎症组织（P〈0．05）;p-FoxO1的灰度值为1．35±0．20,明显高于慢性炎症组织（P〈0．05）。经Pearson相关性分析,P-PTEN的表达水平与P-AKt呈负相关（r=-0．39,P〈0．05）,与P-FoxO1呈负相关（r=-0．51,P〈0．05）。结论PTEN/Akt/FoxO1信号转导通路可能在鼻咽癌的发生发展中起重要的作用。鼻咽癌中PTEN的磷酸化水平降低,对Akt的负调控作用下降,高的Akt磷酸化水平使通路下游FoxO1磷酸化水平升高,导致细胞异常增殖,抑制细胞凋亡,促进细胞的恶性转化。     

Tmub1沉默提高Akt蛋白活性促进肝细胞增殖

目的 探讨Tmub1沉默对Akt磷酸化和肝细胞增殖及生长能力的影响.方法 应用RNAi技术对BRL-3A细胞株Tmub1基因进行沉默,采用qRT-PCR和Western blot分别检测Tmub1、Akt、p-Akt、Cyclin D1、c-myc等基因的mRNA和蛋白表达水平;采用平板集落形成实验和CCK-8检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞周期.结果 与对照组相比,Tmub1基因沉默后,Cyclin D1和c-myc基因mRNA表达增强(P＜0.05),p-Akt磷酸化水平以及Cyclin D1和c-myc蛋白的表达增高(P＜0.05);BRL-3A细胞的增殖及生长能力增强(P＜0.05);且处于细胞周期S+G2/M期的细胞比例明显增加(P＜0.05).通过MK2206抑制Akt磷酸化后,可显著抑制上述基因的mRNA及蛋白的表达水平,细胞的增殖及生长能力明显降低(P＜0.05),且处于S+ G2/M期的细胞比例下降(P＜0.05).结论 Tmub1沉默通过增加Akt蛋白的磷酸化及Cyclin D1、c-myc的表达水平从而促进BRL-3A细胞的增殖和生长.     

PI3K/Akt通路在内吗啡肽-1后处理减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用

目的 探讨内吗啡肽-1对心肌缺血再灌注损伤中PI3K/Akt信号通路的作用以及对细胞凋亡的影响。方法 将50只SD雄性大鼠随机分为5组：假手术组（S组）、缺血再灌注组（IR组）、内吗啡肽-1后处理组（EM50组）、内吗啡肽-1+渥曼青霉素后处理组（EM50+Wort组）和PI3K/Akt信号通路抑制剂渥曼青霉素后处理组（Wort组）。采用结扎大鼠心脏左冠状动脉前降支30 min,再灌注120 min复制心肌缺血再灌注模型,实验期间动态监测大鼠心率、平均动脉压;再灌注结束后检测大鼠血浆乳酸脱氢酶、肌酸激酶、肌钙蛋白I、白介素-6、肿瘤坏死因子-α、氧化应激指标超氧化物歧化酶和丙二醛等生化指标,RT-PCR检测Bax和Bcl-2基因的表达情况,Western blot检测心肌组织中凋亡相关蛋白cleaved caspase-3、磷酸化Akt蛋白和总Akt蛋白的表达。结果 与S组比较,IR组心率和血压降低（P<0.05）;与IR组比较,EM50组心率和血压有所增高（339.94±26.65 vs 284.01±34.99;75.02±14.45 vs 55.83±20.98,P<0.05）;血浆中乳酸脱氢酶、肌酸激酶、肌钙蛋白I、白介素-6、肿瘤坏死因子-α和丙二醛含量或活性下降（P<0.05）,氧化应激指标超氧化物歧化酶活性增加（132.77±8.25 vs 84.10±12.42,P<0.05）;p-Akt蛋白表达水平较高（0.61± 0.06 vs 0.38±0.04,P<0.05）,Bax基因和cleaved caspase-3蛋白表达量降低（1.70±0.39 vs 3.78±0.71;0.30±0.08 vs 0.53±0.07,P< 0.05）,Bcl-2基因的表达量升高（1.20±0.44 vs 0.55±0.25,P<0.05）;与EM50组比较,EM50+Wort组心率和血压降低（P<0.05）;血浆中乳酸脱氢酶、肌酸激酶、肌钙蛋白I、白介素-6、肿瘤坏死因子-α和丙二醛含量或活性增加（P<0.05）,氧化应激指标超氧化物歧化酶活性降低（P<0.05）;p-Akt蛋白表达水平较低（P<0.05）,Bax基因和cleaved caspase-3蛋白表达量升高（P<0.05）,Bcl-2基因表达量降低（P<0.05）。结论 EM-1后处理可调节细胞凋亡,减轻心肌缺血再灌注损伤。PI3K/Akt信号通路可能对EM-1后处理产生的心肌保护效应发挥一定的介导作用。     

同型半胱氨酸调控脂肪组织PDK1的表达与糖代谢的关系

目的研究同型半胱氨酸对脂肪组织PDK1表达的影响,探讨PDK1是否抑制p-Akt（Thr-308）,影响PI3K/Akt信号通路,降
低脂肪组织对葡萄糖的摄取和利用。方法40只6周龄小鼠（n=10只）随机分为：空腹正常对照组;进食正常对照组;空腹高同型
半胱氨酸血症组和进食高同型半胱氨酸血症组。利用小鼠饮用水中加入1.5%的甲硫氨酸饲养3个月制作高同型半胱氨酸血症
的动物模型。测定各组血糖和血胰岛素。利用RT-PCR 检测PDK1 和Akt 的mRNA 表达水平,Western blotting 检测PDK1、
p-Akt（Thr-308）和Akt的表达。结果与空腹和进食对照组相比,空腹和进食高同型半胱氨酸组小鼠血糖和血胰岛素的含量增加
（P<0.05）,PDK1的mRNA表达水平下调,PDK1、p-Akt（Thr-308）蛋白质表达降低（P<0.05）,而Akt在mRNA和蛋白质的表达水
平差异无统计学意义。结论在脂肪组织中,同型半胱氨酸可能通过调控PDK1表达的下调,影响PI3K/Akt信号通路,导致对葡
萄糖的摄取能力降低。这可能是同型半胱氨酸引起糖代谢紊乱的原因之一。
     

黄芩苷对脂多糖诱导人牙龈成纤维细胞表达炎症因子的影响

  目的  从PI3K/Akt/NF-κB信号通路探讨黄芩苷对脂多糖(LPS)诱导的人牙龈成纤维细胞(HGFs)损伤的影响及机制。  方法  运用LPS诱导建立人牙龈成纤维细胞损伤模型,设置正常对照组、模型组和模型+黄芩苷(1、10和20μg/mL)组,每组设3个复孔,经不同浓度的黄芩苷干预后,Western blotting检测p-Akt、Akt、NF-κB p65等蛋白的表达,采用qPCR法检测炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6等基因的表达。用PI3K抑制剂LY294002作用半小时后,再用黄芩苷干预,qPCR和Western blotting法检测Akt、p-Akt、NF-κB p65、TNF-α、IL-1β、IL-6等基因和蛋白的表达。  结果  与模型组比较,黄芩苷低、中、高剂量能有效降低TNF-α、IL-6、IL-1β mRNA的表达水平,促进p-Akt蛋白表达,抑制NF-κB p65核蛋白表达,并呈剂量依赖性(均P < 0.05)。与模型组比较,模型+黄芩苷组p-Akt表达升高(P＜0.05),NF-κB p65表达降低(P＜0.01)。PI3K抑制剂LY294002作用后,模型+黄芩苷组p-Akt/Akt表达量(0.63±0.18)较模型组(0.56±0.14)升高(P＜0.05),模型+黄芩苷组NF-κB p65、IL-6、IL-1β、TNF-α表达量较模型组降低(均P＜0.01)。黄芩苷对LY294002作用后,p-Akt/Akt、NF-κB p65、IL-6、IL-1β、TNF-α表达量与模型组比较,差异无统计学意义。  结论  黄芩苷可抑制LPS诱导的人牙龈成纤维细胞损伤引起的炎症反应,其作用机制可能与促进Akt的磷酸化,抑制NF-κB p65核转录和炎性因子的释放有关。      

人参皂苷Rg3抑制急性白血病骨髓基质细胞HIF-1α及VEGF的表达及其机制探讨

目的探讨人参皂苷Rg3对急性白血病骨髓基质细胞HIF-1α及VEGF表达的作用及其可能的机制。方法培养正常人及急性白血病患者的骨髓基质细胞,MTT法检测人参皂苷Rg3对正常及急性白血病骨髓基质细胞增殖的抑制作用;RT-PCR检测人参皂苷Rg3处理前后急性白血病骨髓基质细胞HIF-1α及VEGF mRNA表达的变化;Western blot、免疫荧光检测人参皂苷Rg3处理前后急性白血病骨髓基质细胞HIF-1α、VEGF、p-Akt、p-ERK蛋白表达的变化。结果人参皂苷Rg3对骨髓基质细胞增殖抑制的最适作用时间为24h,最适作用浓度为40μg/ml;处理24h后,急性白血病骨髓基质细胞HIF-1α、VEGF mRNA表达及蛋白表达均明显减少(P<0.05);p-Akt及p-ERK蛋白表达亦较处理前明显减少(P<0.05)。结论人参皂苷Rg3可明显抑制急性白血病骨髓基质细胞HIF-1α、VEGF mRNA及蛋白水平的表达,同时可抑制与血管形成密切相关的MAPK、PI3K/Akt途径中Akt、ERK蛋白的磷酸化,提示人参皂苷Rg3可能通过阻断PI3K/Akt、MAPK信号途径抑制急性白血病骨髓的血管生成。     

Effect of icariin on apoptosis in hippocampal neurons cultured in high glucose

OBJECTIVE

To investigate effect of icariin on apoptosis in hippocampal neurons cultured in high glucose, and the possible mechanism behind the action.

IL-6通过调控miR-152/PIK3R3通路促进胃癌细胞的增殖和上皮-间质转化

目的：探索白细胞介素(interleukin,IL)-6在胃癌中的作用及相关的分子机制。方法：50 ng/mL IL-6刺激 胃癌细胞MGC-803后,利用MTT法检测细胞增殖、划痕实验检测细胞迁移的变化,RT-qPCR实验检测E-钙黏蛋白 (E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、锌指转录因子Snail1和miR-152在mRNA水平的表达, Western印迹检测E-cadherin,N-cadherin,vimentin,Snail1在蛋白水平的表达;IL-6与miR-152模拟物(miR-152 mimics)单 独处理或者共同处理MGC-803细胞后,RT-qPCR检测PIK3R3在mRNA水平的表达,Western印迹检测PIK3R3、蛋白激 酶B(Akt)和磷酸化-Akt(p-Akt)在蛋白水平的表达。结果：外源性IL-6明显促进MGC-803细胞的增殖与迁移(P<0.05),降 低E-cadherin蛋白和mRNA和miR-152 mRNA的表达(P<0.01),增加N-cadherin,vimentin,Snail1,PIK3R3蛋白和mRNA及 p-Akt蛋白的表达(P<0.05)。转染miR-152 mimics后明显降低了PIK3R3和p-Akt蛋白水平的表达(P<0.01)。同时,过表达miR-152 能够降低IL-6诱导的PIK3R3及p-Akt的表达水平(P<0.01)。各组中Akt的表达均无明显变化(P>0.05)。结论：IL-6可能是通过 下调miR-152表达,诱导PIK3R3表达,激活PI3K/Akt信号通路,从而促进胃癌细胞的增殖、迁移和上皮-间质转化。     

高表达PTEN抑制TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞转分化

目的 研究PTEN高表达对TGF-β1诱导肾小管上皮细胞转分化的抑制及其信号传导机制.方法 脂质体介导含人全长PTEN基因或空载体转染人肾小管上皮细胞(HKC细胞)48 h,倒置荧光显微镜检测PTEN转染组及空载体转染组绿色荧光蛋白表达;Western blot检测正常组、PTEN转染组、空载体转染组中PTEN蛋白表达;RT-PCR检测3组中PTEN mRNA表达.然后将实验分为正常组、TGF-β1刺激组(给予TGF-β1刺激)、PTEN+TGF-β1组(PTEN基因转染后给予TGF-β1刺激)、空载体+TGF-β1组(空载体转染后给予TGF-β1刺激),Western blot检测各组细胞E-cad-herin、α-SMA、Akt、p-Akt表达水平.结果 FTEN基因及空载体转染HKC细胞48 h后可见明显绿色荧光蛋白表达;PTEN转染组PTEN蛋白及PTEN mRNA表达较正常组及空载体转染组细胞均显著上升(均P<0.05).在正常组、TGF-β1刺激组、PTEN+TGF-β1组、空载体+TGF-β1组中,TGF-β1刺激组及空载体+TGF-β1组较正常组E-cadherin表达明显下降(均P<0.05),而a-SMA及p-Akt表达显著上升(均P<0.05);PTEN+TGF-β1组较TGF-β1刺激组及空载体+TGF-β1组a-SMA及p-Akt表达明显下降(均P<0.05).而E-cadherin表达上升(均P<0.05);各组细胞Akt表达水平差异不明显(P>0.05).结论 PTEN通过阻止PI3K/Akt通路活化而抑制TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞转分化.