IL-17调控IL-6/IL-6R/JAK1/STAT3信号通路影响喉癌细胞的侵袭和转移

目的 研究白介素(IL)-17通过IL-6/1L-6R/JAK1/STAT3信号通路调控人源性高分化喉癌细胞(Hep-2)侵袭、转移.方法 以Hep-2细胞为研究对象,设IL-17刺激剂0、1、50、100 ng/ml浓度组,Westem blot法检测不同分组在IL-17的刺激下,Hep-2细胞中IL-6、IL-6R、JAK1、p-JAK1、STAT3、p-STAT3的表达变化.迁移、侵袭实验观察IL-17的刺激对Hep-2细胞侵袭、迁移的影响.结果 Western blot实验中,在IL-17刺激下,1、50、100 ng/ml浓度组较0 ng/ml浓度组Hep-2细胞的IL-6、IL-6R、p-JAK1、p-STAT3的表达明显增加(p＜0.01),50、100 ng/ml浓度组较1 ng/ml浓度组Hep-2细胞的IL-6、1L-6R、p-JAK1、p-STAT3的表达明显增加(P＜0.01),100 ng/ml浓度组较50 ng/ml浓度组Hep-2细胞的IL-6R、p-JAK1、p-STAT3的表达明显增加(P＜0.01);各组间JAK1、STAT3的表达无明显变化.侵袭与迁移实验显示IL-17可以促进Hep-2细胞的侵袭和迁移.结论 IL-17可能通过IL-6/IL-6R/JAK1/STAT3信号通路促进Hep-2细胞的侵袭和转移.     

黄芩多糖通过调节JAK2/STAT3通路和IL-23/IL-17炎性轴改善DSS诱导的UC模型小鼠的炎症

【目的】研究黄芩多糖对溃疡性结肠炎小鼠（UC）肠道炎症的影响及其机制。【方法】选用C57BL/6小鼠随机分为正常组、模型组、美沙拉嗪组以及黄芩多糖低、中、高剂量组（10只/组）。观察小鼠日常状态并记录疾病活动指数（DAI）评分。酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测血清中细胞因子白细胞介素-6、17、23(IL-6、IL-17、IL-23)的表达。处死小鼠,HE观察小鼠肠黏膜损伤情况记录结肠组织损伤指数（TDI）评分,Western blot法和免疫组化法检测Janus激酶2(JAK2)、信号转导因子和转录激活因子（STAT3）、p-JAK2、p-STAT3蛋白的表达水平。【结果】与空白组相比,模型组小鼠DAI评分升高,血清中IL-6、IL-17、IL-23含量升高,结肠组织p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3比值升高,p-JAK2、p-STAT3表达量升高。与模型组相比,各给药组小鼠DAI评分降低;血清中IL-6、IL-17、IL-23含量降低,TDI评分降低,结肠组织p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3比值降低,p-JAK2、p-STAT3表达量降低。【结...     

JAK2/STAT3通路在肝癌细胞侵袭及血管生成拟态中的作用

目的 探讨JAK2/STAT3通路在肝癌细胞QGY-7701侵袭及血管生成拟态中的作用.方法 JAK2抑制剂AG490(5、10 μmol/L)处理肝癌细胞48 h,Transwell小室、体外成管实验分别检测各组细胞的体外侵袭能力和成管能力,RT-PCR检测Twist1及MMP-2 mRNA表达差异,Western blot检测STAT3、p-STAT3、Twistl和MMP-2蛋白表达差异.结果 与对照组相比,Transwell小室穿膜细胞数减少,形成管道结构数目减少,Twist1及MMP-2 mRNA表达减少,Twist1、MMP-2和p-STAT3蛋白表达减少,差异均有统计学意义(P＜0.05),STAT3蛋白表达无差异(P＞0.05).结论 AG490能有效抑制肝癌细胞侵袭及成管的能力,JAK2/STAT3通路在肝癌细胞侵袭及血管生成拟态中起促进作用.     

ALG3通过JAK/STAT通路促进三阴性乳腺癌增殖、侵袭和迁移

目的 探讨ALG3对乳腺癌细胞增殖、侵袭和迁移以及JAK/STAT信号通路的影响。方法 Western blot检测正常人乳腺上皮细胞HBL-100和乳腺癌细胞株SKBr3、MCF-7、MDA-MB-231中ALG3的表达情况。Western blot检测过表达和敲减序列的转染效率。先将实验分为control组(Lip 2000)、NC-KD组(Lip 2000+si-NC)和ALG3-KD组(Lip 2000+ALG3-siRNA),CCK-8,集落克隆和体内裸鼠成瘤实验检测乳腺癌细胞增殖能力；划痕实验和Transwell实验检测乳腺癌细胞侵袭和迁移能力；Western blot检测JAK/STAT通路相关蛋白JAK2/p-JAK2、STAT3/p-STAT3、MMP2、Cyclin D1、Bax表达情况。再将实验分为NC-OE组(Lip 2000+mimic-NC)、ALG3-OE组(Lip 2000+ALG3-mimic)和ALG3-OE+WP1066组(Lip 2000+ALG3-mimic+通路抑制剂WP1066),Western blot检测WP1066对JAK/STAT通...     

黄连素对乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响

目的 研究黄连素对人乳腺癌细胞株MCF-7的增殖和凋亡的影响以及机制. 方法 用不同浓度的黄连素 (0、10、20、40) g/ml处理人乳腺癌细胞株MCF-7,细胞培养72 h后,MTT法检测 MCF-7 细胞增殖抑制率;流式细胞术检测MCF-7细胞凋亡的影响;Western blot法检测JAK2、p-JAK2、p-STAT3、STAT3、 Bax、 Bcl-2、 Cleavage-PARP 和 Cleavage-Caspase3表达. 结果 黄连素呈浓度依赖性地诱导MCF-7细胞的增值抑制和凋亡,上调Bax、Cleavage-PARP和Cleav-age-Caspase3表达,下调 p-JAK2、p-STAT3 和 Bcl-2,对 JAK2和STAT3表达无明显影响. 但高表达p-STAT3的MCF-7细胞可以抑制黄连素的减少增殖和促进凋亡作用. 结论 黄连素诱导MCF-7细胞增殖抑制和凋亡的机制可能是通过调节JAK2/STAT3信号通路.     

基于网络药理学探讨健脾益气方治疗DEN肝癌大鼠的分子机制及关键通路的验证

目的 利用网络药理学分析方法探讨健脾益气方治疗肝癌的活性成分与靶点;并在此基础上利用二乙基亚硝胺(DEN)诱导的肝癌大鼠,对其中筛选出的关键通路白介素-6/信号转导和转录激活因子3(IL-6/STAT3)进行验证.方法 采用中药系统药理学数据库和分析平台(TCMSP)数据库、中国知网和Swiss Target Prediction平台获取健脾益气方的活性成分和对应靶点;基于Gene Cards、CTD以及gene数据库获取肝细胞癌(HCC)相关靶点;将疾病相关靶点和药物靶点取交集后得出潜在靶点,导入Cytoscape软件绘制活性成分-靶点网络图;并利用STRING数据库对潜在靶点进行蛋白相互作用(PPI)网络构建与分析,以获取核心靶点.采用腹腔注射DEN[70 mg/(kg·d)]制备肝癌大鼠模型.将大鼠随机分为正常组,模型组,健脾益气方低、中、高剂量组(5.25、10.5、21 g/kg),STAT3抑制组(C188-9,4.5 mg/kg)和糖蛋白130(gp130)抑制组(SC144,4.5 mg/kg),均连续干预4周.采用HE染色法观察大鼠肝脏组织病理形态学变化;采用RT-qPCR法检测大鼠肝脏组织IL-6、gp130、Janus激酶1(JAK1)、Janus激酶2(JAK2)和STAT3的mRNA表达水平;采用ELISA法检测大鼠血清IL-6含量;采用Western Blot法检测大鼠肝脏组织gp130、JAK1、p-JAK1、JAK2、p-JAK2、STAT3和p-STAT3蛋白表达水平.结果 通过网络药理学分析获得64个活性成分和146个潜在靶点,这些分子参与的信号通路主要与IL-6/STAT3有关,且STAT3是其中潜在的核心靶点.动物实验结果显示,与正常组比较,模型组大鼠IL-6和STAT3 mRNA和蛋白质水平,及p-JAK1/JAK1、p-JAK2/JAK2和p-STAT3/STAT3水平均明显上调(P＜0.05或P＜0.01).与模型组比较,健脾益气方中、高剂量组,及STAT3抑制组和gp130抑制组大鼠血清IL-6含量,肝脏组织IL-6、gp130和STAT3 mRNA表达水平,gp130和STAT3蛋白水平,及p-JAK1/JAK1、p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3水平均降低(P＜0.05或P＜0.01).结论 健脾益气方可通过多成分、多靶点、多通路发挥治疗肝细胞癌的作用,而下调IL-6/STAT3炎症信号可能是健脾益气方治疗HCC的重要途径之一.     

基于IL-6、JAK2/STAT3信号通路探讨复方当归注射液在缺血性卒中炎性反应中的作用

目的基于IL-6和JAK2/STAT3信号通路,探讨复方当归注射液在缺血性卒中炎性反应中的作用。方法将大鼠随机分为空白对照组、假手术组和造模组。采用线栓法建立大脑中动脉栓塞致局灶性缺血损伤模型,造模成功后,再将造模大鼠随机分为模型组、复方当归注射液组和依达拉奉组,各组给予相应药物干预7 d,于末次给药24 h后处死取脑组织,采用TTC染色法观察各组大鼠的脑梗死情况;采用HE染色法观察各组大鼠脑组织病理学情况;采用ELISA法检测各组大鼠血浆中IL-6的含量;采用Western Blot法检测各组大鼠脑组织中p-JAK2、JAK2、p-STAT3、STAT3的表达情况。结果复方当归注射液组可缩小缺血性卒中大鼠的脑梗死区域,减轻脑组织神经元的异常形态变化;复方当归注射液组IL-6的含量及p-JAK2/JAK2和p-STAT3/STAT3水平均低于模型组(P<0.01)。结论复方当归注射液可通过降低缺血性卒中大鼠IL-6及p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3的表达,抑制炎性反应,发挥神经保护作用。     

大承气汤对重症急性胰腺炎大鼠回肠组织JAK2/STAT3信号通路的影响

【目的】基于Janus激酶2(JAK2)/信号传导及转录激活因子3(STAT3)信号通路探讨大承气汤对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肠道的保护作用。【方法】采用3.5%牛磺胆酸钠逆行胆胰管内注射制备SAP大鼠模型。将造模成功的大鼠随机分为模型组、JAK2抑制剂组(术前2 h给予鲁索替尼灌胃)、STAT3抑制剂组(术前2 h给予Stattic腹腔注射)、大承气汤组(术前2 h给予大承气汤灌胃),另设假手术组(逆行胆胰管内注射生理盐水);再将各组大鼠分为造模后3、6、12、18 h亚组。采用苏木素—伊红染色观察末端回肠组织的病理改变,逆转录—定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测回肠组织JAK2 mRNA、STAT3mRNA表达,蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测回肠组织p-JAK2蛋白、p-STAT3蛋白表达。【结果】SAP大鼠肠组织病理损害严重,JAK2 mRNA、STAT3 m RNA、p-JAK2蛋白和p-STAT3蛋白过度表达;大承气汤、JAK2抑制剂和STAT3抑制剂可明显保护肠道结构,抑制JAK2 m RNA、STAT3 m RNA、p-JAK2蛋白和p-STAT3蛋白过度表达。【结论】活化的JAK2/STAT3通路在SAP肠损害中起重要作用。大承气汤可能通过抑制活化的JAK2/STAT3通路保护SAP大鼠肠道。     

黄连素预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨黄连素(Berberine,BBR)预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的作用及其机制。方法建立大鼠心肌缺血再灌注损伤模型。30只雄性SD大鼠随机均分为假手术组(Sham)、心肌缺血/再灌注损伤组(IRI)和黄连素组(BBR)。检测各组大鼠心肌功能、病理形态、JAK2、STAT3、p-JAK2、p-STAT3、p-NF-KB、NF-KB、白介素-6(IL-6)、白介素1(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达。结果与Sham组相比,IRI组心肌失功,心肌病理改变,p-JAK2,p-STAT3,p-NF-KB,IL-6,IL-1和TNF-表达明显增加,而JAK2,STAT3和NF-KB表达无明显差异。与IRI组相比,BBR组IRI组心肌失功,心肌病理改变,p-JAK2,p-STAT3,p-NF-KB,IL-6,IL-1和TNF-表达明显减少,而JAK2,STAT3和NF-KB表达依然无明显差异。结论黄连素预处理可通过抑制JAK2/STAT3/NF-KB信号通路激活而减少炎症反应,从而减轻心肌缺血再灌注损伤。     

基于IL-6/JAK2/STAT3信号通路研究氯雷他定对过敏性鼻炎大鼠的保护作用

目的研究氯雷他定对过敏性鼻炎(AR)模型大鼠IL-6/JAK2/STAT3通路的影响和保护作用。方法将45只雄性SD大鼠随机均分假手术组、AR模型组、氯雷他定(LORA)组[氯雷他定1 mg/(kg·d)B.W.]、孟鲁司特(MONT)组[孟鲁司特10 mg/(kg·d)B.W.]、联合干预组[氯雷他定1 mg/(kg·d)B.W.和孟鲁司特10 mg/(kg·d)B.W.]。使用含卵清蛋白工作液(生理盐水)对各组大鼠进行体内和体外致敏处理(对照处理)构建过敏性鼻炎大鼠模型。建模完成后随即按照对应剂量进行14 d腹腔注射药物干预,假手术组和模型组代以2 mL生理盐水。对各组大鼠外鼻及部分鼻腔进行组织切片并经过碘酸希夫碱(PAS)染色检测上皮杯状细胞增生情况,酶联免疫吸附(ELISA)法测定血清白介素6(IL-6)水平,RT-qPCR测定粘膜组织中IL-6、Janus型酪氨酸激酶2(JAK2)、信号传导蛋白和转录激活因子3(STAT3)mRNA水平,Western blot检测总JAK2和STAT3水平和其磷酸化(p-JAK2、p-STAT3)水平。结果假手术组鼻上皮组织染色浅,杯状细胞无增生;模型组上皮组织染色最深,杯状细胞增生最严重,上皮细胞群排列异常;LORA组鼻上皮组织染色程度和杯状细胞增生比模型组略有减轻;MONT组鼻上皮组织杯状细胞增生好于LORA组;联合干预组上皮细胞增生程度在单个用药基础上进一步减轻,上皮组织染色程度接近假手术组。与假手术组相比,模型组、LORA组、MONT组血清中IL-6、鼻粘膜中IL-6和STAT3 mRNA水平、p-JAK2、STAT3和p-STAT3蛋白水平,联合干预组鼻粘膜中STAT3蛋白水平显著升高(P0.05);与模型组相比,LORA组、MONT组和联合干预组血清中IL-6、鼻粘膜中IL-6 mRNA、p-JAK2蛋白水平,MONT组、联合干预组鼻粘膜中p-STAT3蛋白水平显著降低(P0.05);与LORA组相比,联合干预组血清中IL-6水平、鼻粘膜中IL-6 mRNA、p-JAK2、p-JAK3蛋白水平,MONT组鼻粘膜中p-JAK2、p-STAT3蛋白水平显著降低(P0.05);与MONT组相比,联合干预组血清中IL-6水平、鼻粘膜中IL-6和STAT3 mRNA水平、p-JAK2和p-STAT3蛋白水平显著降低(P0.05)。结论氯雷他定可能通过抑制AR大鼠IL-6转录水平,从而下调IL-6/JAK2/STAT3通路,抑制鼻粘膜组织杯状细胞增生,是治疗过敏性鼻炎的机制之一。     

温阳消癥方对5/6肾切除小鼠肾纤维化的作用及其机制

目的：观察温阳消癥方对5/6肾切除小鼠残肾功能及肾脏纤维化的影响,并探讨其作用机制。方法：随机从32只小鼠中取24只制作5/6肾切除慢性肾功能衰竭肾纤维化模型,2周后根据血清肌酐值将24只小鼠分为5/6肾切除组、代文组和温阳消癥方组,另8只作为假手术组。治疗8周后,Western blot检测各组小鼠肾组织JAK2、STAT3、p-JAK2、p-STAT3、转化生长因子β1（TGF-β1）、Smad3、I型胶原蛋白（Col-I）、III型胶原蛋白（Col-III）、α-SMA蛋白表达水平,免疫组织化学染色法测定小鼠肾组织Col-I、Col-III、α-SMA水平,用RT-qPCR法测定TGF-β1、Smad3 mRNA水平。结果：治疗8周后,模型组小鼠肾组织JAK2、STAT3、p-JAK2、p-STAT3、TGF-β1、Smad3、Col-I、Col-III、α-SMA蛋白表达均较假手术组上调（P＜0.01）,模型组小鼠肾组织TGF-β1、Smad3 mRNA表达较假手术组上调（P＜0.01）;与模型组比较,代文组、温阳消癥方组JAK2、STAT3、p-JAK2、p-STAT3、TGF-β1、Smad3、Col-I、Col-III、α-SMA蛋白表达和TGF-β1、Smad3 mRNA表达均下调（P＜0.01）;与代文组比较,除TGF-β1、α-SMA外,温阳消癥方组其余指标均下调（P＜0.01）。结论：温阳消癥方能够保护5/6肾切除小鼠残肾功能,减轻肾纤维化病变程度,其机制可能与抑制TGF-β1/Smad3、JAK2/STAT3通路相关。     

大肠癌中自噬相关蛋白与JAK2/STAT3 信号通路的相关性

目的 探讨大肠癌发生、发展过程中自噬相关蛋白LC3、p62 与JAK2/STAT3 信号通路的关系。 方法 采用免疫组织化学法检测93 例大肠癌组织和癌旁组织中LC3、p62、p-JAK2 和p-STAT3 的蛋白表 达,并对其阳性表达率进行比较分析。结果 大肠癌中LC3、p-JAK2 和p-STAT3 阳性表达率高于癌旁组织 （P <0.05）,高中分化大肠癌LC3、p-JAK2 和p-STAT3 蛋白阳性表达率低于低分化大肠癌（P <0.05）,有淋 巴结转移患者LC3、p-JAK2 和p-STAT3 蛋白阳性表达率高于无淋巴结转移（P <0.05）。大肠癌p62 蛋白阳 性表达率低于癌旁组织（P <0.05）,高中分化大肠癌p62 蛋白阳性表达率高于低分化大肠癌（P <0.05）,有淋 巴结转移患者p62 蛋白阳性表达率低于无淋巴结转移（P <0.05）。LC3 蛋白表达与p-JAK2、p-STAT3 蛋白 表达均呈正相关（r s=0.315 和0.295,P <0.05）,而p62 蛋白与p-JAK2、p-STAT3 蛋白表达均呈负相关（r s=-0.320 和-0.326,P <0.05）。结论 LC3、p62 在大肠癌中表达增加可能与JAK2/STAT3 信号通路有关,为大肠癌的 发病机制研究提供可能的理论基础。     

JAK2-STAT3信号通路在白介素-1β经动脉外膜给药致平滑肌细胞增殖迁移中的作用

目的研究白细胞介素-1β经血管外膜给药导致动脉平滑肌细胞发生的改变及其与JAK2-STAT3信号通路的关系,明确JAK2-STAT3信号通路在血管增殖性病变中的作用。方法 6～8周龄SD雄性大鼠24只,分离左侧颈总动脉,实验组(n=18)血管外膜包裹含白介素-1β2.5μg的琼脂缓释悬液,对照组(n=6)包裹不含白介素的琼脂悬液,术后2、8、24、48 h,1、2周分别处死实验组大鼠3只,对照组1只,血管标本经切片HE染色观察形态,Western blot法检测JAK2、STAT3、磷酸化JAK2以及磷酸化STAT3的表达,免疫组化标记定位磷酸化JAK2及磷酸化STAT3;另取SD雄性大鼠9只,分离两侧颈总动脉,左侧滴加JAK2抑制剂AG490缓释凝胶,右侧滴加等量空白凝胶后两侧均包裹等量白介素-1β,术后8、48 h,1周处死动物分别行HE染色及Western blot检测。结果白介素-1β包裹血管外膜后出现血管平滑肌细胞的增殖、迁移,通道蛋白JAK2、STAT3在不同时间点出现不同程度的磷酸化,经Western blot检测并行灰度分析,p-JAK2相对灰度值对照组(0.337±0.216),8 h组(1.764±0.513),1周组(0.451±0.229);p-STAT3相对灰度值对照组(0.125±0.870),24 h组(1.909±0.309),2周组(0.448±0.516),各组间有明显差异(P<0.05)。加用抑制剂后,8 h组p-JAK2相对灰度值实验侧(0.085±0.031),对照侧(1.416±0.468),48 h组p-STAT3相对灰度值实验侧(0.460±0.065),对照侧(2.425±0.638),提示JAK2、STAT3的磷酸化水平被明显抑制(P<0.05),平滑肌细胞变化程度下降。结论炎性因子白细胞介素-1β经动脉外膜给药可致动脉平滑肌细胞增殖、迁移,这种改变与JAK2-STAT3信号通路有直接关系。     

SOCS3经JAK/STAT信号通路调控气道黏蛋白高分泌

目的 研究细胞因子信号转导抑制因子3(SOCS3)在炎症情况下经JAK/STAT通路调控气道黏液高分泌.方法 培养人气道16HBE上皮细胞,设置空白对照组、白介素(IL)-6处理组、IL-6和microRNA (miR)-203处理组,Westernblot法分析细胞中磷酸化JAK激酶(p-JAK1/2)、SOCS3、黏蛋白(MUC) 5AC蛋白水平;Real-time法检测各组细胞中SOCS3、STAT3、MUC5AC mRNA表达量;ELISA法检测各组培养上清液中p-JAK1/2、SOCS3、MUC5AC蛋白含量.结果 在IL-6刺激下,IL-6处理组的p-JAK1/2、SOCS3、MUC5AC蛋白量及SOCS3、STAT3 mRNA含量较空白对照组显著升高(P＜0.05),IL-6和miR-203处理组的p-JAK1/2、MUC5AC蛋白量及STAT3 mRNA含量较IL-6处理组显著升高(P＜0.05),但SOCS3 mRNA与IL-6处理组比较差异无统计学意义,SOCS3蛋白含量较IL-6处理组显著降低(P＜0.05).结论 细胞在IL-6刺激后SOCS3呈现高表达,同时经JAK/STAT信号通路负反馈调控MUC5AC.     

AGEs通过JAK2/STAT3信号通路诱导结肠癌SW480细胞增殖、侵袭及上皮间质转化

目的 观察糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)对结肠癌SW480细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移及上皮间质转化的影响,并探讨其相关机制.方法 将结肠癌SW480细胞分为对照组、AGEs组(200 μg/mL AGEs)、AGEs(200 μg/mL)+AG490(50 μmol/L)组,CCK-8检测细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞周期、凋亡,Transwell实验检测细胞体外侵袭能力,划痕实验检测细胞体外迁移能力.不同浓度(0、50、100、200 μg/mL) AGEs和200 μg/mL AGEs、50 μmol/L AG490单独处理及二者联合处理SW480细胞后,Western blot检测上皮间质转化相关分子标志物E-cadherin、N-cadherin、Vimentin及JAK2/STAT3信号通路相关分子的变化.结果 与对照组比较,AGEs能明显促进结肠癌SW480细胞的增殖,减少G1/S期阻滞,抑制凋亡,增强体外的侵袭、迁移能力(P＜0.05).与AGEs组比较,AGEs+ AG490组结肠癌SW480细胞增殖减少,G1/S期阻滞增加,凋亡增加,侵袭、迁移能力降低,差异有统计学意义(P＜0.05).Western blot检测结果显示,AGEs处理结肠癌SW480细胞后E-cadherin表达降低,N-cadherin、Vimentin、p-STAT3、p-JAK2表达升高,而AG490可逆转AGEs对结肠癌SW480细胞的作用.结论 AGEs能够通过JAK2/STAT3信号通路促进结肠癌SW480细胞的增殖,抑制凋亡,增强侵袭、迁移能力,促进上皮间质转化.