红景天甙对缺氧状态下鼠肺动脉平滑肌细胞增殖和〔Ca~(2+)〕i的影响

目的研究红景天甙 (Salidroside)对缺氧状态下大鼠肺动脉平滑肌细胞 (PASMC)增殖、DNA合成和〔Ca2 +〕i的影响 ,探讨其防治缺氧的可能作用机制。方法应用离体培养的大鼠肺动脉平滑肌细胞 ,采用四唑蓝比色试验 (MTT)测定细胞生长数 ,3H -胸腺嘧啶核苷 (3H -TdR)掺入测定DNA合成 ,和fura - 3/AM测定细胞内钙离子浓度〔Ca2 +〕i。PASM的缺氧培养采用自制缺氧装置 (含 5 %CO2 + 95 %N2 混合气体 ) ,并置于 37℃培养箱内。结果红景天甙可显著抑制缺氧状态下PASMC的增殖和DNA的合成 ,以单纯缺氧组为对照 ,加入 32× 10 - 5mol·L- 1红景天甙后 ,PASMC的吸光值下降 4 5 % ,3H -TdR掺入量下降 2 8% ;常氧状态下PASMC细胞内〔Ca2 +〕i为(14 8± 14 )nmol·L- 1,当培养液充以 5 %CO2 + 95 %N2 气体时 ,细胞内荧光强度明显增强 ,PASMC内〔Ca2 +〕i迅速上升为 (42 2± 2 4 )nmol·L- 1,此时 ,加入红景天甙 6 4× 10 - 5mol·L- 1可见细胞内荧光强度变弱 ,〔Ca2 +〕i迅速下降到 (2 98± 18)nmol·L- 1。结论红景天甙可抑制缺氧状态下鼠肺动脉平滑肌细胞的增殖和DNA合成 ,其机制可能与抑制PASMC内〔Ca2 +〕i有关。     

p38丝裂原活化蛋白激酶在低氧鼠肺动脉平滑肌细胞增殖中的表达

目的探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)在低氧引起的鼠肺动脉平滑肌细胞增殖中的作用。方法采用细胞培养方法,免疫印迹技术,流式细胞仪方法测定在低氧情况下p38 MAPK的表达及其细胞周期的变化。结果低氧情况下细胞中p38 MAPK表达增加,细胞呈现增殖性变化。结论p38 MAPK在低氧情况下参与了鼠肺动脉平滑肌细胞增殖,具有重要的病理生理学意义。     

铝对大鼠海马[Ca2+]i和PKC生物活性影响

目的通过观察不同浓度慢性铝暴露对海马长时程增强（long-termpotentiation,LTP）的影响,检测海马细胞内Ca^2＋浓度和蛋白激酶C（PKC）生物活性,研究慢性铝暴露损伤学习记忆的机制。方法选择断乳后Wistar大鼠,以含有不同浓度AlCl3的蒸馏水进行饲养。3个月后,测定脑铝、血铝、海马细胞内Ca^2＋,测量记录大鼠海马LTP,用改良的Takai法测定PKC活性的变化。结果（1）各染铝组的[Ca^2＋]i与对照组比较,差异有统计学意义（P〈0.01）,但各染铝组间差异无统计学意义。（2）各染铝组PKC活性与对照组比较均降低,差异有统计学意义（P〈0.01）。结论慢性铝暴露引起大鼠海马细胞内[Ca^2＋]i下降,使PKC活性降低,导致下游分子的活性受到影响,破坏LTP的形成,损害学习记忆功能。     

保健食品中红景天甙的提取和测定方法研究

〔目的〕建立保健食品中红景天甙样品的前处理和高效液相色谱检测方法。〔方法〕保健食品中的红景天甙经 70 %乙醇超声波提取 ,聚酰胺柱净化后 ,以甲醇 -0 .0 1mol LNH4 Ac为流动相 ( 2 0∶80 ) ,用C1 8柱 ,紫外 2 15nm检测。〔结果〕优化了含红景天保健食品中红景天甙的提取、净化和测定条件 ,有效去除样品中的干扰成分 ,定量检测红景天甙。方法检出限为 0 .5 μg ml,样品测定的相对标准差 (RSD)小于 2 .5 % ,加标回收率为 97.1% -10 2 .4%。〔结论〕本方法操作简便 ,灵敏、可靠 ,适用于红景天原料和保健食品中红景天甙的分析测定。     

磷脂酶A2活性对高糖或(和)高胰岛素环境下培养的大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的观察磷脂酶A2(phospholipase A2 ,PLA2)活性变化对高糖或(和)高胰岛素(Ins)环境下培养大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)增殖的影响.方法在含22 mmol.L-1 Glu或(和)100 Mu.L-1Ins的DMEM培养液中加入2～20 μmol.L-1(终浓度)的PLA2抑制剂AACOCF3与VSMC共同孵育72 h后,用[3H]-油酸标记法测定培养上清液中PLA2活性,用细胞计数法和[3H]-胸腺嘧啶核苷掺入实验观察VMSC增殖、DNA合成、用流式细胞仪分析VSMC的细胞周期.结果 AACOCF3浓度为10～20 μmol.L-1时,VSMC的增殖和DNA合成,S期与G0+M期细胞百分比,抑制剂组均显著低于高糖或(和)高Ins组(P＜0.05),AACOCF3浓度为2 μmol.L-1时,抑制剂组上述指标较高糖或(和)高Ins组下降,但差别无显著性(P＞0.05).结论降低PLA2活性可抑制高糖或(和)高Ins介导的VSMC增殖.     

红景天对高原慢性肺心病患者肺动脉压的影响及其作用机制

目的探讨红景天对高原地区慢性肺心病急性加重期患者肺动脉高压(PAH)的影响及其作用机制。方法 60例高原慢性肺心病急性加重期患者随机分为两组,每组30例。红景天治疗组(A组)在常规治疗的基础上,给予口服红景天胶囊,每次2.0g,3/d,共4周。常规治疗组(B组)给予常规治疗。两组在治疗前及治疗4周后分别测血浆内皮素-1(ET-1)、一氧化氮(NO)、动脉血氧分压(PaO2)、平均肺动脉压(mPAP)、右心室流出道(RVOT)、右心室内径(RV),并以40例当地健康人作为对照(C组)。结果治疗后,A组和B组的ET-1、mPAP、RVOT、RV(分别为65.54±11.33ng·L-1、30.45±3.24mmHg、30.22±2.98mm、23.16±2.69mm和82.58±13.30ng·L-1、36.14±4.15mmHg、34.34±3.09mm、26.35±3.04mm)较治疗前(分别为121.62±18.15ng·L-1、48.86±5.72mmHg、39.05±4.65mm、30.14±3.36mm和120.55±19.33ng·L-1、47.56±5.36mmHg、38.71±4.55mm、29.88±3.32mm)显著降低(均P0.01),NO、PaO2(分别为69.23±10.58μmol·L-1、54.57±5.88mmHg和53.77±8.61μmol·L-1、48.26±4.58mmHg)较治疗前(分别为44.02±9.35μmol·L-1、35.98±5.13mmHg和42.92±8.95μmol·L-1、36.77±4.98mmHg)显著升高(均P0.01),A组较B组改善更显著(均P0.01)。ET-1与mPAP、RVOT、RV呈显著正相关(r=0.726、0.735、0.699,均P0.01),与NO、PaO2呈显著负相关(r=-0.816、-0.782,均P0.01)。结论红景天可改善高原地区慢性肺心病急性加重期PAH,其机制可能是通过选择性作用于肺血管,抑制ET-1而增加NO的合成与释放,降低肺动脉压和改善右心功能。     

骨形成蛋白-2对低氧状态下的人肺动脉平滑肌细胞PTEN表达的作用

目的:研究骨形成蛋白-2(BMP-2)对低氧状态下人肺动脉平滑肌细胞(Pu lmonary artery smooth musc le cells,PASMCs)的PTEN(Phosohatase and tensin homolog deleted on chromosom e 10)表达调节作用。方法:将培养的人PASMCSs分为对照组(1%的氧浓度,5%的CO2和94%N2条件下培养)和BMP-2组(另加入BMP-2),培养48 h后通过CyQUANT细胞增殖检测试剂盒测定PASMCs的增殖,定量RT-PCR方法检测PTEN基因表达,W estern b lot方法检测PTEN蛋白的表达。结果:BMP-2组与对照组比较细胞增殖明显降低(P<0.05);定量RT-PCR结果显示,与对照组比较,BMP-2组细胞培养4 h、8 h、24 h后PTEN相对表达量(2-△△ct)均明显升高(P<0.05);进一步的western b lot证实BMP-2组PTEN蛋白表达也明显升高。结论:BMP-2能抑制缺氧状态下的PASMCs的增殖,通过上调PTEN表达可能是其机制之一。     

过氧化氢对老年大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 观察过氧化氢(H202)对老年大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响.方法 主动脉贴块法分别培养3月龄和18月龄大鼠的VSMC,分为3月龄组和18月龄组,吝5只大鼠,比较两组VSMC在不同浓度HZOZ(0、10、20、30、40、50、60、80和100μmol/L)作用6h下的增殖情况.采用四甲基偶氮唑盐微量...     

高半胱氨酸对血管平滑肌细胞和胞浆Ca~(2+)的影响

动脉粥样硬化是心、脑血管疾病的常见类型,由此而引起的心绞痛、心肌梗死是发达国家和发展中国家主要的死亡原因。尽管动脉粥样硬化的研究取得了很大的进展,但其危险因素和致病机理目前还不清楚。　　高半胱氨酸（ｈｏｍｏｃｙｓｔｅｉｎｅ,Ｈｃｙ）是甲硫氨酸代谢的一个中间产物。早在１９６４年,Ｍｕｄｄ等［１］报道了高半胱氨酸尿症病人胱硫醚β合成酶缺陷。随着研究的进一步深入,越来越多的研究表明,Ｈｃｙ是引起动脉粥样硬化的一个独立危险因素［２］。　　血管平滑肌增生是动脉粥样硬化的主要病理特征［３］。已有研究表明,Ｈ…     

饮食控制对中老年糖耐量减低者红细胞[Ca2+]i水平的影响

目的 探讨饮食控制对中老年糖耐量减低者红细胞内游离钙浓度([Ca²⁺]i)的影响.方法 对42例中老年糖耐量减低者进行为期10个月的饮食干预.并在干预前后测定空腹血糖(FSG)、2小时餐后血糖(2HSG)、红细胞[Ca²⁺]i、血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、糖化低密度脂蛋白(G-LDL)和体质指数(BMI).结果 与糖耐量正常者比较,IGT患者红细胞[Ca²⁺]i显著升高(P<0.01).饮食干预后,红细胞[Ca²⁺]i显著下降(P<0.01).FSG、2HSG、TG、TC、G-LDL及BMI在干预后均显著下降.结论 饮食控制对IGT患者红细胞[Ca²⁺]i异常升高有明显的抑制作用.推测这一变化与血糖降低有关.     

低氧下冻伤对大鼠骨骼肌水肿程度的影响

观察了低氧条件下冻伤大鼠骨骼肌水肿程度的改变。体重２００±２０ｇ雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠随机分为三组：平原冻伤组（ＦＮ）；急性低氧冻伤组（ＦＡＨ，模拟海拔６０００ｍ缺氧４ｈ后冻伤）和低氧习服冻伤组（ＦＨＡＣ，模拟海拔６０００ｍ每日缺氧４ｈ，连续４周后冻伤）。大鼠的右后肢冻伤后不同时间，用称量法测定冻伤肌肉中的含水量，计算其水肿程度。结果表明，各冻伤组冻后肌肉水肿程度均明显增加，其中以ＦＮ组较为严重，ＦＡＨ组肌肉水肿程度与ＦＮ组无差别，而ＦＨＡＣ组冻伤肌肉水肿程度较轻且消退较快，组织干性坏死出现较早。结果提示单纯急性低氧未加重冻伤损伤程度，而低氧习服则可加重冻伤损伤程度。     

同型半胱氨酸促进血管平滑肌细胞增生的实验研究

目的 :　研究同型半胱氨酸 (homocysteine,Hcy)是否促进平滑肌细胞增生。方法 :　SD大鼠主动脉平滑肌细胞体外培养 ,随机分为 5组 :1 .正常对照组 ,2 .1 .0 mmol/L Hcy组 ,3 .2 .5 mmol/L Hcy组 ,4.5 .0 mmol/L Hcy组 ,5 .1 0 .0 mmol/L Hcy组。培养 72 h后 ,采用细胞毒试验、流式细胞仪检测细胞生长情况。 2 0只 SD大鼠进行体内观察 ,随机分为高蛋氨酸组 (M组 )和对照组 (C组 ) ,M组每日给予含蛋氨酸 3 %的饮食 ,在 1 2 w进行主动脉病理学光镜和电镜检查。结果 :　 1 .细胞毒试验观察到 Hcy促进平滑肌细胞生长与增殖 ;2 .流式细胞仪检测可见 Hcy促进平滑肌细胞由 G1期进入合成的 S期 ;3 .在 4w时 ,高蛋氨酸组大鼠即出现高同型半胱氨酸血症 ,高蛋氨酸血症 ;4.病理检查光镜下可见高蛋氨酸组大鼠主动脉有明显中膜增厚 ,平滑肌细胞增生 ;5 .电镜检查可见平滑肌细胞肿胀 ,内质网扩张 ,线粒体水肿 ,溶酶体增多。结论 :　同型半胱氨酸促进大鼠血管平滑肌细胞增生     

微小RNA-152介导叶酸对体外血管平滑肌细胞增殖迁移的抑制作用

目的探究叶酸对(folic acid,FA)血小板源生长因子(PDGF-BB)诱导的血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖迁移的影响及其机制。方法体外用PDGF-BB诱导大鼠血管平滑肌细胞系A7r5增殖迁移,分为对照组、PDGF组、PDGF+FA组、PDGF+FA+miRNA-152 inhibitor组、PDGF+FA+miRNA-152 NC组。采用实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组VSMCs内miR-152的表达水平。采用CCK-8试剂盒检测各组VSMCs增殖水平。采用划痕实验检测各组VSMCs迁移水平。采用蛋白印迹法检测细胞增殖核抗原(PCNA)蛋白、基质金属蛋白酶9(MMP-9)的表达水平。结果 RT-PCR结果显示PDGF干预降低VSMCs miR-152表达水平,而PDGF+FA组VSMCs miR-152表达水平显著高于PDGF组(P0.05)。PDGF干预VSMCs的增殖迁移能力显著增强相对于对照组(P0.05),而PDGF+FA组的VSMCs增殖迁移能力低于PDGF组(P0.05),PDGF+FA+miR-152 inhibitor组的VSMCs增殖迁移能力强于PDGF+FA组(P0.05)。结论 miR-152参与介导FA抑制PDGF-BB诱导的VSMCs增殖迁移作用。[营养学报,2017,39(5):484-488]     

阿魏酸对血管平滑肌细胞增殖的抑制作用研究

目的研究阿魏酸对血管平滑机细胞增殖的影响。方法采用贴块法培养人脐动脉血管平滑肌细胞(VSMC);台盼兰染色法检测药物对细胞的毒性;以四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察药物对血清诱导的VSMC增殖及生长的影响;以Bradford法检测细胞总蛋白含量变化;用5溴-2脱氧尿苷(BrdU)免疫酶联吸附法观察对DNA合成的影响。结果阿魏酸可逆性的延迟细胞对数生长期,影响细胞生长;有效抑制细胞的增殖活性,当阿魏酸终浓度为100μmol/L时,对细胞增殖的抑制率达到61.32%;引起细胞总蛋白的合成及BrdU的DNA掺入量下降,影响细胞周期。结论阿魏酸有效抑制血清诱导的VSMCs增殖,对以VSMCs异常增殖为靶标的动脉粥样硬化等心脑血管疾病的预防和治疗具有积极作用。     

姜黄素对TK6细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用研究

目的 :　观察姜黄素 (curcumin)对人的类淋巴母细胞 TK6细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用 ,为进一步探讨其抗诱变、抗肿瘤的机制和开发利用提供理论依据。方法 :　姜黄素处理TK6细胞 ,采用 MTT比色分析法、3 H- Td R掺入法和细胞周期测定以及细胞超微结构观察和流式细胞分析。结果 :　 2 0 μmol/L的姜黄素处理细胞 2 4 h,即可产生显著的细胞增殖抑制作用和凋亡诱导作用 ,且有剂量和时间依赖性。姜黄素引起细胞的凋亡主要在细胞周期的 DNA合成期 (S期 ) ,将细胞周期阻滞在静止期和 DNA合成前期 (G0 /G1期 )。结论 :　姜黄素对 TK6细胞具有显著的增殖抑制作用和凋亡诱导作用。     

A型肉毒毒素对P物质引发的胃离体平滑肌收缩的抑制作用

[目的]观察A型肉毒毒素(BTX-A)对大鼠幽门离体平滑肌自发性收缩和P物质(SP)引发的幽门平滑肌收缩的影响,并初步探讨其机制. [方法]幽门离体平滑肌随机分为对照组、SP组、SP+BTX-A组、SP+NK1受体拮抗剂组,Biolap 420E生物机能实验系统记录胃肌条收缩情况. [结果]① SP引发幽门平滑肌幅度增强(P<0.05),②BTX-A抑制SP引发的幽门平滑肌幅度(P<0.01),NK1受体拮抗剂抑制SP引发的幽门平滑肌张力(P<0.01).[结论]SP增强幽门平滑肌收缩,BTX-A及NK1受体拮抗剂均抑制SP引发的幽门平滑肌收缩.考虑BTX-A可能通过抑制突触前膜递质释放作用,或抑制SP与突触后膜上相应受体结合发挥作用.     

慢性低氧对大鼠肾脏组织COX-1蛋白表达及抗氧化的影响

目的 探讨高原慢性低氧对大鼠肾脏组织氧化损伤情况及组织的抗氧化应激能力,揭示氧化应激反应是否是高原低氧对机体损伤的主要因素.方法 将85只Wistar大鼠随机分为平原组(25只)和高原组(60只),其中高原组大鼠运至海拔4300m地区喂养30 d.用ELISA方法对血液中的低氧诱导因子1(HIE-1)、活性氧(ROS)...     

Id1强制表达对血管内皮细胞株ECV-304增殖能力的影响

[目的]为深入研究hCASK功能,构建Id1真核表达载体并转染ECV-304细胞,筛选出Id1强制表达细胞株,观察Id1上调表达对ECV-304细胞增殖能力的影响. [方法]采用RT-PCR方法获取编码Id1的cDNA序列,并将其导入真核表达载体成功构建pIRES2-EGFP-ld1重组表达质粒.将重组质粒转染人ECV-304细胞株,经G418加压筛选,成功筛选出Id1强制表达的细胞株.用蛋白免疫印迹法鉴定转染细胞中Id1基因的表达水平.采用流式细胞技术、细胞计数的方法观察筛选出的细胞株增殖能力的变化. [结果]成功建立了Id1强制表达的ECV-304细胞株.同未转染细胞相比,Id1强制表达细胞株中G0/G1细胞比率下降约4.8%,G2M期细胞比率上升约26.3%,增殖指数明显增高,细胞增殖能力增强. [结论]Id1强制表达细胞株的成功建立和鉴定为CASK、Id1基因功能研究提供了有效手 段.Id1的上调表达可导致ECV-304细胞增殖能力增强.     

三价铬纳米微粒对大鼠胴体组成及肌细胞胰岛素受体基因表达的影响

目的研究三价铬纳米微粒对大鼠胴体组成及肌细胞胰岛素受体基因表达的影响。方法将50只健康雄性SD大鼠随机分为5组,每组10只,第1组饲喂基础日粮作为对照,第2组在基础日粮上以三氯化铬形式添加300μg/kg铬,第3、4、5组在基础日粮上以三价铬纳米微粒形式分别添加150、300和450μg/kg铬,试验6w后测定胴体组成及肌细胞胰岛素受体基因表达量。结果以三价铬纳米微粒形式添加150、300和450μg/kg铬使大鼠体脂含量、血清胰岛素水平显著降低,使肌细胞胰岛素受体基因表达量显著提高;而以CrCl3形式添加300μg/kg铬对大鼠体脂含量、血清胰岛素水平和肌细胞胰岛素受体基因表达量都没有产生显著影响。结论将无机铬经纳米粒径化处理后能显著提高其改善大鼠胴体组成的能力,这种提高作用可能与三价铬纳米微粒增强胰岛素功能有关。     

抗氧化维生素对内皮细胞增殖及凋亡的影响

目的：　观察氧化低密度脂蛋白（ｏｘＬＤＬ）对内皮细胞增殖与凋亡的影响以及抗氧化维生素（维生素Ｅ、维生素Ｃ及β－胡萝卜素）对内皮细胞的防治效应。方法：　在体外培养的小牛主动脉内皮细胞中分别加入不同浓度的抗氧化维生素,作用１２ｈ 后,再与终浓度为０．１ｇ Ｐｒ／Ｌ的ｏｘＬＤＬ共同培养２４ｈ,采用噻唑蓝比色分析法和流式细胞仪分析法对贴壁内皮细胞进行检测,分别观察抗氧化维生素对经ｏｘＬＤＬ作用的内皮细胞的形态、生长增殖、细胞周期及凋亡的影响。结果：　（１）维生素Ｅ和维生素Ｃ能显著减轻ｏｘＬＤＬ对内皮细胞形态的损伤作用;β－胡萝卜素作用稍弱。（２）三种抗氧化维生素均可降低ｏｘＬＤＬ对内皮细胞生长增殖的抑制作用,使其抑制率降低。（３）三种抗氧化维生素均可促进内皮细胞由Ｇ１ 期进入ＤＮＡ合成的Ｓ期,促进内皮细胞的增殖并阻止内皮细胞凋亡的发生。结论：　维生素Ｅ、维生素Ｃ及β－胡萝卜素均可减轻ｏｘＬＤＬ在形态、增殖及凋亡等方面对内皮细胞的损伤作用,这可能是抗氧化维生素加速内皮细胞损伤后修复、促进内皮细胞增殖,从而发挥其抗动脉粥样硬化形成的部分机制。