两种双抗原夹心法检测抗人类免疫缺陷病毒抗体的方法比较

目的 探讨酶联免疫吸附试验(ELISA)与胶体金法检测抗人类免疫缺陷病毒抗体(抗HIV抗体)的灵敏度及特异度.方法(1)灵敏度试验:将15份经免疫印迹法确诊为获得性免疫缺陷综合征(AIDS)患者的血清进行倍比稀释,应用ELISA法和胶体金法检测所有患者血清原液、稀释血清的抗HIV抗体,记录两种方法抗HIV抗体检测结果为阳性的最大稀释倍数.(2)特异度试验:应用上述两种方法同时检测200份非AIDS患者的血清,记录两种方法的阴性率.结果(1)灵敏度试验:ELISA法的最大稀释倍数显著高于胶体金法(P＜0.05).(2)特异度试验:两种方法的阴性率均为100％,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 ELISA法抗HIV抗体的灵敏度优于胶体金法,但是两种方法检测血清原液的灵敏度、特异度结果均一致,因此胶体金法可以代替ELISA法用于AIDS的初筛试验.     

反向间接血凝抑制法检测流行性出血热患者血清特异性抗体

1987年2～5月,我们用反向间接血凝抑制法(RPH I)检测了97份流行性出血热(EHF)患者血清和36份对照血清,并与间接免疫荧光法(IFA)进行比较。现将结果报告如下。材料与方法一、材料:EHF 病毒单克隆抗体(McAb)致敏的羊红细胞,EHF 鼠脑抗原,均由南京军区医科所提供。待检EHF 病人血清、正常人血清及其它血清,分别由本市、县有关医院提供。IFA 法所用EHF Vero-E_6细胞抗原片由本室制备,-30℃干燥保存。羊抗人IgG 荧光素由上海生物制品研究所提供。二、方法:RPHI 法:用稀释液将待检血清0.025ml 在V 型血凝板内以1:8开始作系列稀释,每扎加入经预先滴定的4单位EHF 鼠脑抗原0.025ml,振荡并置37℃30′孵育后加入     

结核抗体检测试剂盒用血清标准品的制备及应用

目的 结核抗体检测试剂盒质量控制用血清标准品的制备及应用。方法 采集结核病患者和健康人血清，用ELISA法进行检测，制备血清标准品：包括10份检测结果为阳性的结核病患者血清、10份检测结果为阴性的健康人血清、1份检测结果为强阳性的结核病患者血清用健康人血清进行倍比稀释而成的5个稀释浓度；并对血清标准品进行稳定性试验；同时用本套血清标准品对不同厂家生产的结核抗体检测试剂盒以及同一厂家生产的不同批号的结核抗体检测试剂盒进行测定。结果 本血清标准品具有良好的稳定性;不同厂家生产的结核抗体检测试剂盒质量不均一，同一厂家生产的试剂盒质量也不均一。结论 本血清标准品可以用于结核抗体检测试剂盒的质量控制；各生产厂家要严格按照生产工艺的SOP进行生产，把好质量关。     

HSV-1载体在小鼠及猴体内抗体检测方法的建立

目的为了对以HSV-1为载体的基因工程产品在动物体内药物安全评价检测抗体的需要建立一套ELISA检测方法。方法将重组HSV-1抗原作为包被抗原,对HSV-1抗原的最佳包被稀释度、包被效率、阴性和阳性血清标本的最佳稀释度进行了考察。并根据建立的检测方法,对2种动物(Balb/c小鼠和恒河猴)在给予HSV-1载体后得到的阴性血清(小鼠:30份;恒河猴:24份)和阳性血清(小鼠:120份;恒河猴:96份)进行了血清抗HSV-1抗体检测。结果(1)HSV-1抗原的最佳包被稀释度为1∶800(4.5μg),包被效率为82%;(2)阴性和阳性血清标本的最佳稀释度均为1∶100;(3)用所建立的检测方法,能够较好的在小鼠和恒河猴的阳性血清中检测出抗HSV-1的抗体。结论该方法能全面满足以HSV-1为载体的基因工程产品在药物安全评价中抗体的检测需要,该检测方法的建立能够为该类产品或相关基因工程产品的药物安全评价研究中抗体的检测分析提供一定的参考依据。     

O型孕妇血清IgG类抗-A(B)抗体三种检测方法比较

目的:分析三种方法检测孕妇血清IgG类抗-A(B)抗体的阳性检出率.方法:对临床送检的孕妇血清检测IgG类抗-A(B)抗体分别采用凝聚胺,改良抗人球法和微柱凝胶卡进行测定,观察阳性检测率.结果:改良抗人球法和微柱凝胶卡阳性检出率明显高于凝聚胺法(P<0.05),凝聚胺检出率低,不适用于IgG类抗-A(B)抗体的测定.结论:O型孕妇血清IgG类抗-A(B)抗体三种检测方法中以改良抗人球法和微柱凝胶卡为佳,凝聚胺检出率差.     

辛伐他汀对载脂蛋白A1和载脂蛋白B检测的影响

目的:探讨辛伐他汀对原发性高胆固醇血症患者的载脂蛋白A1(apo A1)和载脂蛋白B(apo B)检测的影响.方法:观察辛伐他汀对原发性高胆固醇血症患者载脂蛋白aPO A1和aPO B的作用.结果:两组患者在使用辛伐他汀治疗后.apo B和apo A1/apo B水平均与治疗前有明显差异(P＜0.05).另外,基线apo B正常组治疗前后的apo B和apo A1/apo B水平均与基线apo B升高组有明显差异(P＜0.05).结论:辛伐他汀降低apo B的作用是其调脂机制的一个重要组成部分,亦是辛伐他汀防治动脉样作用的一个重要环节.     

脂氧素A4受体激动剂及白介素-1β在Toll样受体2/髓样分化因子88/核因子-κB信号通路对哮喘小鼠气道炎症的调控作用

目的:研究脂氧素(LX)A4受体激动剂及白介素-1β抗体在Toll样受体2(TLR2)/髓样分化因子88(MyD88)/核因子-κB（NF-κB)信号通路中对哮喘小鼠气道炎症的调控机制。方法:以卵清蛋白(OVA)致敏激发法制备小鼠哮喘模型,60只二级雄性Balb/c小鼠随机分为6组,分别给予脂氧素A4受体激动剂(BML-111)、白介素(IL)-1β抗体、BML-111载体、兔IgG治疗。末次激发后留取血清和肺组织标本,光镜下观察支气管周围炎症浸润情况;测定血清IL-1β、IL-4、IL-8、干扰素(IFN)-γ水平;检测肺组织TLR2、MyD88、NF-κB的表达。结果:OVA致敏的小鼠血清IL-1β、IL-4、IL-8水平升高,IFN-γ浓度降低; OVA致敏导致明显的支气管周围炎症细胞浸润,使支气管炎症分级指数有明显提高;BML-111或IL-1β抗体治疗均能明显阻止上述OVA介导的炎症变化(χ2=28.14,P<0.01)。OVA致敏使肺组织TLR2、MyD88 表达及NF-κB活性升高,BML-111及抗IL-1β抗体可抑制由OVA引发的上述表达变化。结论:OVA可诱导产生气道炎症,这一作用可能受TLR2/MyD88/NF-κB信号通路调控,IL-1β在这一过程中起了至关重要的作用。BML-111和IL-1β抗体可能通过对TLR2/MyD88/NF-κB信号通路的负调控而实现抑制OVA诱发的呼吸道炎症的作用。     

原发性肾病综合征患儿血清载脂蛋白变化意义（附35例分析）

原发性肾病综合征 (NS)常伴有高脂血症 ,具有一定肾毒性及致动脉粥样硬化。我们检测 35例 NS患儿治疗前后的血清载脂蛋白 (apo)浓度 ,同时相应检测血清总胆固醇 (TC) ,以探讨其临床意义。1　资料与方法1.1　一般资料 :所选 35例 NS患儿均为 1993～ 1998年住本院病人。其中男 2 2例 ,女 13例 ;年龄 4～ 14岁。单纯性 NS 2 5例 ,肾炎性 NS 10例。全部病例均经正规激素治疗。并设 30例正常小儿为对照组。1.2　检测方法 :所有患儿于开始治疗前和治疗后 2月分别采空腹静脉晨血 ,以自动生化仪测定 apo A1 、 apo B1 0 0 及 TC。2　结果2 .1…     

双黄连注射剂过敏症动物模型的研究

目的：探索双黄连注射剂中引起工型过敏反应的致敏性物质，建立双黄连注射剂过敏症动物模型。方法：将双黄连注射剂与正常兔血清体外孵育制备抗原，免疫新西兰纯种兔，制备抗双黄连注射剂中过敏性物质的抗血清，并采用ELISA法检测其效价及抗体特异性。结果：双抗夹心ELISA检测抗血清效价，稀释至1：128倍仍为阳性，间接竞争ELISA测定血清特异性并绘制抑制曲线，得到回归方程I：13．3621gC＋50．503，相关系数r=0．966，半数抑制浓度IC50=0．92mg/mL。结论：此法初步建立了双黄连注射剂过敏症动物模型，对双黄连注射剂中致敏物质的研究有一定意义。     

抗核抗体对不同抗原的免疫应答

目的　探讨体内产生抗核抗体的抗原。方法　分别以羊红细胞、伤寒沙门菌及鸡血清免疫小鼠 ,同时设立生理盐水对照组 ,每组 10只 ,采用商品化酶联免疫法检测抗核抗体试剂盒 ,将酶结合物 (酶标抗人IgG)换成酶标金黄色葡萄球菌A蛋白 (SPA) ,建立检测抗核抗体的SPA ELISA法 ,并使其性能保持不变 ,用其检测小鼠的抗核抗体。结果　新建立的检测抗核抗体的SPA ELISA法与原法检测同一批标本 ,相关系数为 0 931,P <0 0 1。小鼠血清抗核抗体检测结果 (阳性率 ) :羊红细胞组为 90 % (9 10 ) ,伤寒沙门菌为 70 % (7 10 ) ,鸡血清组为 10 0 % (10 10 ) ,生理盐水对照组未检出抗核抗体。各实验组与对照组比较差异有显著性 (P <0 0 1)。结论　体内抗核抗体可能是一类由不同抗原刺激非特异产生的抗体。     

小鼠血清乙型肝炎病毒前S1抗体间接ELISA检测方法的建立和验证

目的  建立小鼠血清乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）前S1抗体的间接ELISA检测方法。方法  以合成的HBV前S1（21-47位氨基酸）多肽包被酶标板,利用方阵滴定法确定间接ELISA方法的最适工作条件,对该法的精密度、特异性和灵敏度进行验证,并与商品化试剂盒进行比较。结果  确定最佳抗原包被浓度为1.0 mg/L,血清稀释度为1︰10。该方法的特异性、灵敏度和精密度均符合检测要求。本法与商品化前S1抗体检测试剂盒测定结果的符合率为98.0%。结论  成功建立了HBV前S1抗体间接ELISA方法,可用于小鼠血清中前S1抗体的检测。     

联合酶联免疫的微量病毒中和法检测大流行流感疫苗血清中和抗体的可行性研究

目的:建立联合酶联免疫的微量病毒中和法(ELISA-MVN法),用于大流行流感疫苗流感病毒中和抗体效价的检测,并进行方法学验证。方法:采用4种羊抗流感病毒血清参考品,与人感染禽流感H5N1病毒疫苗株(A/Vietnam/1194/2004-NIBRG-14)病毒液,分别于37℃孵育18 h后,固定细胞,ELISA检测细胞内流感病毒核蛋白表达,确定其中和抗体效价,考察该方法的特异性;通过对高中低不同抗体滴度的血清样本的多次平行检测来评价该方法的重复性;通过ELISAMVN法和血凝抑制试验(HI试验)分别检测大流行流感疫苗接种者血清样本,比较2种方法的灵敏性和相关性。结果:ELISA-MVN结果显示羊抗H5N1的血清中和抗体检测滴度为5 120,其他3种血清的中和抗体滴度小于10,该方法特异性良好;采用ELISA-MVN法对3种不同滴度的血清进行重复检测,组内重复性试验的6次平行试验结果的RSD为3.5%。组间重复性5次结果,RSD为4.8%~8.6%。2种方法测定疫苗接种者血清样本抗体效价的结果具有显著相关性(P<0.001),相关系数r=0.932。ELISA-MVN法检测结果的几何平均滴度高于HI试验检测结果,该方法较HI试验在检测大流行流感疫苗血清样本灵敏度高。结论:ELISA-MVN可满足大流行流感疫苗血清学检测的要求,并可用于评价大流行流感疫苗的免疫效果。     

重复给予恒河猴rhKGF后其免疫原性及抗体中和性质的检测

目的测定恒河猴经静脉重复给予重组人角质细胞生长因子(rhKGF)后血清中特异性抗体的水平及抗体中和性质。方法采用间接ELISA法检测猴血清中的抗体水平,同时采用32D-KGFR细胞检测抗体的中和活性。结果确定了抗原包被浓度为10μg·mL-1,抗体从1.6×103开始稀释,二抗稀释倍数为1∶5×103的间接ELISA法实验体系;14～56 d均可检测到抗体的存在;生物学活性测定的结果显示其为非中和性抗体。结论重复给予恒河猴rhKGF的毒性试验中,部分猴的血清中检测到抗体,但不是中和抗体。     

双黄连注射剂中1，3-二咖啡酰奎宁酸致敏家兔后血清中特异性抗体的测定

摘 要 目的：检测双黄连注射剂中1,3 二咖啡酰奎宁酸致敏家兔后血清中特异性抗体效价。方法: 双黄连注射剂中疑似小分子半抗原物质1,3 二咖啡酰奎宁酸与正常家兔血清体外孵育制备完全抗原,免疫家兔获得特异性抗体。用ELISA法检测抗血清的抗体效价。间接竞争ELISA法测定血清特异性并绘制抑制曲线。采用兔免疫球蛋白 E( IgE)ELISA试剂盒检测各组家兔抗血清中IgE抗体的含量。结果: 1,3 二咖啡酰奎宁酸的抗体效价（A）值高于阴性对照组2倍,说明其具有潜在的致敏性。回归方程I=0.170 6lgC+0.317 5,相关系数r=0.985 4,检测限IC10为57.40 μg·ml-1,半数抑制浓度IC50=8.732 0 mg·ml-1。家兔体内明显产生了外源性IgE型抗体。结论: 在本实验条件下双黄连注射剂中疑似半抗原物质1,3 二咖啡酰奎宁酸具有致敏性。     

流脑快速诊断试验在临床的应用

我院于1977年3～4月采用反向血凝、乳凝、炭凝试验三种流脑快速诊断的方法进行了比较。兹将试验的初步结果报告如下:材料与方法一、反向血凝试验系用北京生物制品研究所提供的流脑A 群血清致敏羊血球干燥制品,批号为771—2和775二种。试验方法亦按该研究所提供的方法进行。后由于在操作过程中发生致敏血球自凝而影响结果的判断,通过我们摸索后改用吐温80代替兔血清制备磷酸盐缓冲盐水(即pH7.2磷酸盐缓冲盐水5毫升加1%吐温80水溶液0.1～0.2毫升),配制血球悬液和稀释标本,防止自凝。二、乳凝试验乳胶系上海市医学化验所     

大鼠肺炎支原体感染的ELISA实验研究

目的 探讨支原体感染大鼠的血清抗体反应及其间接ELISA检查与诊断方法.方法 将肺炎支原体疫苗分别以滴鼻、腹腔注射、尾静脉注射方式免疫大鼠,收集动物血清,以方阵滴定法和间接法确立ELISA检测实验的最适条件,用间接法检测不同方法与时间免疫动物的血清特异性IgG抗体.结果 ELISA系统的最适工作条件包括抗原包被浓度10×10-4g/ml、血清稀释度1:40、酶结合物1:5000.以该系统检测滴鼻免疫大鼠共21只,免疫6次2只大鼠血清抗体阳性(66.67%),免疫7次后阳性率达100%;腹腔免疫和静脉免疫大鼠各18只,免疫2次后2只大鼠可检出特异性抗体(66.67%),免疫5次后全部动物均为血清抗体阳性(100%).结论 肺炎支原体0.0016g/只以滴鼻、腹腔注射、尾静脉注射的方法均能够使大鼠产生特异性抗体,以间接ELISA检测法检查腹腔免疫组和静脉免疫组大鼠血清免疫2次后即有部分大鼠血清抗体检测即呈阳性,5次后阳性率达100%,而滴鼻免疫组大鼠直至免疫6次后部分血清抗体检测才可呈阳性其阳性率与腹腔免疫和静脉免疫2次阳性率相当.间接ELISA法可有效检测支原体感染动物的血清特异性抗体,是一种具有较高特异性的快速简便方法.     

ELISA法测定小鼠血清中流脑抗体效价

目的采用酶联免疫吸附测定技术(ELISA)测定流脑疫苗效价,同时为提高效价测定的准确度,选定包被抗原最佳工作浓度及待测血清最佳稀释比,为疫苗效价测定提供科学依据。方法分别以不同浓度C群多糖抗原液为包被抗原,以稀释过的免疫小鼠血清为待测抗体,采用ELISA间接测定法测定抗体效价,寻求包被抗原最佳工作浓度;然后包被抗原在其最佳工作浓度下包被酶标板,以不同稀释比的免疫小鼠血清为待测抗体,测定血清中抗体效价,寻求待测血清最佳稀释比;最后在包被抗原最佳工作浓度及待测血清最佳稀释比下,测定小鼠血清中流脑抗体的效价。同时检测该方法的特异性、稳定性和重复性。结果 ELISA测定流脑疫苗效价的包被抗原最佳工作浓度及待测血清最佳稀释比分别为160μg/mL和1∶4,同时该浓度下测定的免疫小鼠血清中流脑疫苗抗体效价为(1.274±0.003),阳转率为100%。说明该批疫苗产品合格(判定标准:阳转率≥90%)。批内批间变异系数均<7%,表明该测定技术具有良好的稳定性和重复性。结论建立了一种灵敏、特异、简便易行的ELISA法检测流脑疫苗效价,为流脑的预防、控制和诊断提供了一种技术手段。     

应用改进ELISA检测干血棉球HIV抗体的可行性研究

目的研讨以改进的ELISA法检测干血棉球HIV抗体的可行性。方法用包括20份S/CO比值在1～3以内的100份HIV抗体阳性血清,198份阴性血清样品进行实验研究,每份血清分为两部分,一部分血清置-20℃;另一部分血清制成干血棉球置37℃储存3周,然后,用干血棉球样品液与血清样品进行HIV抗体检测对比试验。血清样品按ELISA说明书方法检测,干血棉球用改进ELISA方法检测。结果干血棉球与相同的血清样品检测结果之间差异无统计学意义(P>0.05)。20份37℃储存3周S/CO比值在1～3的HIV抗体弱阳性干血棉球,用ELISA检测,有部分弱阳性样品出现假阴性结果,而用改进ELISA法检测,全部阳性。结论可用干血棉球代替血清样品,用改进ELISA法进行HIV抗体检测。     

AC群脑膜炎球菌多糖结合疫苗的制备

目的  制备以B群脑膜炎球菌外膜蛋白（outer membrane protein,OMP）为载体的AC群脑膜炎球菌多糖（polysaccharide,PS）结合疫苗（AC-OMP）,并初步研究该制备工艺的稳定性。方法  将以溴化氰活化的A、C群PS分别与B群OMP偶联制成AC-OMP。按《中华人民共和国药典》2010年版三部的要求对制备的AC-OMP进行检定。以制备的AC-OMP免疫小鼠,用ELISA法检测小鼠血清抗体阳转率。结果  制备的AC-OMP的各项指标均达到质控标准。AC-OMP具有良好的免疫原性,AC-OMP免疫小鼠的血清抗PS抗体阳转率为100%。结论  该工艺适用于AC-OMP制备。     

O型血孕妇产前IgG抗体效价异常与新生儿溶血病发病关系的探讨

目的探讨O型血孕妇产前免疫球蛋白G(Ig G)抗体效价检测的异常情况与新生儿溶血病发病之间的关系。方法用微柱凝胶法对1357例O型血孕妇产前血清Ig G抗A(B)抗体进行检测。结果 1357例O型血孕妇血清抗体效价≥1:128者147例,异常检出率为10.8%。结论孕妇产前Ig G抗A(B)效价的检测在预防或减少新生儿溶血病方面有重要意义。