单核细胞增生性李斯特菌PCR快速检测方法的建立及在朝阳区大中型宾馆食品卫生监测中的应用

目的:通过扩增iap基因PCR法建立快速检测单核细胞增生性李斯特菌(Lm)方法.方法:用PCR法扩增iap基因来检测Lm标准菌株,并应用于朝阳区大中型宾馆的食品监测中.结果:将Lm、英诺克李斯特及其他13株非李斯特标准菌株同时进行PCR,仅Lm出现特异性条带,而其他菌株均未出现特异性片段,表明所扩增的iap基因约700 bp的DNA片段对Lm具有较高的特异性.PCR法对Lm纯培养物的检测限达106cfu/ml.采用该法对朝阳区大中型宾馆160件食品样品检测,5份样品呈阳性且均来源于B级餐厅,该结果与传统的生化鉴定方法完全一致.结论:扩增iap基因的PCR法对Lm的鉴定具有特异性强、灵敏度高、速度快和易操作等优点,可用于食品Lm分离.朝阳区部分大中型宾馆的食品卫生监督仍有待加强.     

用DNAG＋C含量和DNA同源性测定法鉴定米克载德军团菌

本文采用热变性温度法和液相复性速率法对一表型特征及血清学反应相似米克戴德军团菌（Ｌｍ）的菌株进行了测定，结果表明该菌与标准Ｌｍ（ＣＤＣ株）的ＤＮＡＧ＋Ｃｍｏｌ％相差３．４５％，与标准Ｌｍ（ＣＤＣ株）的ＤＮＡ同源性达８１．９９％，根据伯杰细菌鉴定手册（１９８４），可判定该菌株与标准Ｌｍ（ＣＤＣ株）为遗传型一致的类群，即从遗传学角度证明该菌为Ｌｍ。     

3种方法鉴定单核细胞增生李斯特菌比较

[目的]采用分子生物学方法(accuprobe和PCR)对传统方法经ATB鉴定为单核细胞增生李斯特菌和疑为单核细胞增生李斯特菌的菌株进行鉴定比较,建立灵敏,快速,可靠的鉴定方法。[方法]对经传统方法结合ATB鉴定分离的菌株(单核细胞增生李斯特菌)分别采用accuprobe和PCR试剂盒进行鉴定比较。[结果]对10株经传统方法结合ATB鉴定的Lm菌(包括疑似Lm菌)经PCR鉴定,3株为阳性,7株为阴性,与accuprobe法鉴定结果一致。[结论]分子生物学方法检测单核细胞增生李斯特菌是对传统方法的有效补充,可用于大批量样品中致病菌的快速鉴定     

应用PCR技术快速检测沙门菌

[目的]建立用于快速和特异检测沙门菌的PCR方法。[方法]将受试菌种按煮沸裂解法提取DNA,针对hns与invA基因序列合成2对PCR引物,对沙门菌标准菌株和其他菌属的菌株进行PCR检测,并用福建省2006—2007年沙门菌临床分离株137株进行验证。[结果]沙门菌标准菌株hns和invA基因均为阳性;137株沙门菌临床分离株hns和invA基因的阳性率分别为100％和99．3％,其他菌属的菌株无特异性条带。[结论]本研究建立的PCR方法可用于检测沙门菌属。     

市售猪肉产单核细胞李斯特菌分离及hly基因序列分析

目的：了解市售猪肉中产单核细胞李斯特菌（Lm）的污染状况及Lm分离菌株hly基因部分序列的分析比较。方法：分离菌株鉴定应用聚合酶链反应（PCR）；以PCR产物直接测序，对780bp片段作序列分析。结果：市售猪肉产单核细胞李斯特菌的污染率为1．08％（4／370）；分离菌株WLD1和FCY1与国内外14个参考菌株的同源性分别为96．4％～98．6％和95．0％-97．2％，而两分离株之间的同源性仅为95．9％。结论：合肥市市售猪肉中有一定程度产单核细胞李斯特菌的污染，且存在李斯特菌病的可能性和食物中毒的潜在危险；分离菌株WLD1和FCY1，尤其是FCY1分化程度较高．Lm hly基因核苷酸序列蒡异的距离与地理分布、菌株的样品来源无相关性。     

随机引物扩增技术对变形菌DNA多态性分型研究

目的建立变形菌随机扩增DNA多态性分型技术,应用于临床菌株流行病学调查. 方法优化随机扩增DNA多态性指纹技术(RAPD)的实验条件,利用RAPD技术成功地检测21株变形菌DNA指纹图谱. 结果 21株变形菌分为18型别,其中16株奇异变形菌分为13个型,5株普通变形菌分为5个型. 结论 RAPD分型技术可简便、快速为变形菌提供分型标志,是分子流行病学研究的有效方法.     

湖北省36株单增李斯特菌脉冲场凝胶电泳分型

目的:了解湖北省各类食品中分离到的单核细胞增生李斯特菌各菌株之间的遗传相关性,了解湖北省Lm基因型的分布情况和分子流行特点。方法:按照标准化的Lm-PGFE方法对所分离到的36株Lm菌株进行脉冲场凝胶电泳分型。结果:36株Lm菌株通过PGFE分成了12个型别,各型别之间不紧密相关。结论:湖北省食品中Lm的污染来源于不同的克隆株,菌型分散,未发现单个基因型菌株流行的迹象。     

台州市动物食品中肺炎克雷伯菌质粒介导产AmpC酶的耐药表型与基因型分析

目的探讨动物食品中肺炎克雷伯菌质粒介导产Amp C酶的耐药表型与基因型,以控制动物食品中的细菌耐药性在动物、环境和人类之间的传播。方法采用头孢西丁纸片扩散法筛选产Amp C酶菌株;采用三维试验确证产Amp C酶;采用聚合酶链反应(PCR)和DNA测序检测分析Amp C酶基因型别;采用UNIQ-10柱式质粒小量抽提试剂盒提取细菌质粒。结果 67株肺炎克雷伯菌经头孢西丁敏感试验选出疑产Amp C酶菌株15株,经三维试验确证产Amp C酶菌株有12株,15株疑产Amp C酶菌株经PCR检测和DNA测序证实有10株菌株均为DHA-1型Amp C酶。结论动物食品中分离的肺炎克雷伯菌产Amp C酶的菌株检出率较高,基因型以DHA-1型为主,并且产Amp C酶的肺炎克雷伯菌表型与基因型不完全相同,二者的结果有一定的关联性但同时存在差异。临床兽医应慎用β-内酰胺类药物,动物食品加工更应严格操作规程,切断动物食品链传递给人类。     

大肠埃希菌耐喹诺酮类药物回旋酶基因突变的研究

目的 研究导致大肠埃希菌DNA回旋酶A亚单位的基因变异耐喹诺酮类药物的机制。方法 收集3株大肠埃希菌耐药菌株及1株敏感株，用PCR方法扩增其回旋酶(gyraseA)基因，对扩增片段进行单链构象多态性分析(PCR--SSCP)及DNA序列分析。结果 PCR—SSCP发现3株耐药株其DNA单链与标准株及临床敏感株迁移率不同，3株耐药菌株存在Ser—83→Leu，Asp—87→Asn及His—184→Asn突变，Ser—83→Leu及Asp—87→Asn突变位于氟喳诺酮类药物耐药决定区，gyrA基因碱基552位点C→A碱基突变致组氨酸突变为天冬酰胺。结论 大肠埃希菌对氟喹诺酮类药物产生耐药性与gyrA基因点的突变有关。     

1例孕妇感染李斯特菌病例的病原学分析及分子特征研究

目的对北京市1名孕妇感染单核细胞增生李斯特菌(listeria monocytogenes,Lm)病例进行病因食品溯源、病原学检测、血清学分型、耐药及分子特征研究。方法对流行病学相关的1株孕妇病例Lm分离株和1株可疑食品Lm分离株进行血清型分型及脉冲场凝胶电泳(pulsed-field gel electrophoresis,PFGE)分子分型,并采用CLSI和EUCAST推荐的微量肉汤稀释法检测菌株对12种抗生素的敏感性。结果 2株Lm分离株均为1/2a血清型,药敏结果一致,对有国际标准的青霉素、氨苄西林、复方新诺明及红霉素敏感,其他8种抗生素的MIC值均较小,经AscⅠ酶切后具有100%同源的PFGE指纹图谱带型。结论结合流行病学调查、实验室病原学检测、药敏和PFGE分子分型结果,高度怀疑本例孕妇感染李斯特菌病例是由进食受1/2a血清型单核细胞增生李斯特菌污染的牛肉三明治所致。     

呼吸道感染患者军团菌抗体水平调查

目的了解呼吸道感染患者嗜肺军团菌（Lp1-Lp6型）及米克戴德军团菌（Lm型）抗体水平,以掌握深圳地区军团菌感染状况。方法收集医院呼吸道感染患者血清标本56份,采用微量凝集试验的方法,检测嗜肺军团菌（Lp1-Lp6型）及米克戴德军团菌（Lm型）的抗体效价。结果 56份呼吸道感染患者血清未检出嗜肺军团菌（Lp1-Lp6型）抗体阳性;检出米克戴德军团菌Lm型抗体阳性6份,阳性率10.7%。结论深圳地区存在米克戴德军团菌（Lm型）感染,对不明原因呼吸道感染患者应重视军团菌病原菌及抗体的检测。     

四川省家禽家畜军团菌感染的血清学调查

目的 了解四川省家禽家畜军团菌感染状况及主要型别。方法 用微量凝集试验（ＭＡＴ）对四川省２３个地区４５个县市的鸡、鸭、鹅、猪、牛、羊、马、免８种家禽家畜进行嗜肺军团菌（Ｌｐ１～１４型）和米克达德军团菌（Ｌｍ）的血清学调查。结果 家禽家畜中呈多型性感染并有其各自的优势菌型。各型抗体阳性率分别为０．８３％～５９．１８％，合计阳性率为５．０９％；家禽合计阳性率为７．７３％，家畜合计阳性率为４．２５％。结     

泸州市六种家禽家畜军团菌感染的血清学调查

目的　了解泸州市家禽家畜中军团菌感染状况及其主要型别。方法　采用微量凝集试验(MAT)对该市鸡、鸭、鹅、牛、猪、兔6种家禽家畜进行了嗜肺军团菌(Lp1～14型)和米克达德军团菌(Lm)的血清学调查。结果　结果显示,家禽家畜中呈多型性感染特征,并有其各自的优势菌型;各型别抗体阳性率分别为2.00%～28.75%;家畜合计阳性率为4.49%,家禽合计阳性率为6.47%。结论　说明当地家禽家畜中存在广泛的军团菌感染,提示对动物和外环境进行军团菌病的流行病学监测,对于防治人群患军团菌病具有一定意义。     

High prevalence of antibodies to Legionella spp. in Danish blood donors. A study in areas with high and average incidence of Legionnaires' disease

The incidence of Legionnaires' disease has an uneven geographical distribution in Denmark, ranging from 3 to 70 notified cases per million inhabitants per year in different towns. We investigated the prevalence of antibodies to Legionella in the one town with a consistently high incidence (Randers, Aarhus County) and compared it with that of an area of average incidence (Vejle, Vejle County). Blood samples were collected from healthy blood donors in Randers (n=308) and in Vejle (n=400), and analysed for antibodies to Legionella by indirect immunofluorescence antibody test with L. pneumophila, L. micdadei, and L. bozemanii as antigens. Overall 22.9% of the donors had antibody titres of > or = 1:128; indicating that antibodies to Legionella are common in healthy individuals, and reflecting that the bacteria may be widely distributed in the environment. Surprisingly, the study did not reveal a higher prevalence in the hyperendemic area. Thus, the high incidence of notified cases in this particular town may not be attributed to an overall increased exposure of the general population.     

太原地区军团菌感染流行特征的研究

目的探讨太原地区军团菌感染频度及流行特征。方法用酶联免疫吸附测定法对门诊、住院病人及不同健康人群进行９种１５型军团菌ＩｇＭ及ＩｇＧ抗体的检测。结果成人患者军团菌ＩｇＭ抗体阳性率１７．４％，儿科病人１３．２％，成人及儿童患者均以上呼吸道急性感染比率最高，夏季多发。成人患者３０～５０岁年龄高发，儿科患者随年龄增加军团菌急性感染率增大，６例住院患者住院两周后发生急性感染，军团菌ＩｇＭ抗体阳性。健康人群以煤矿职工军团菌ＩｇＧ抗体阳性率最高（３６７％），城区儿童最低（９．５％）。门诊及住院患者以米克戴德军团菌感染为主，嗜肺军团菌次之；健康人群以嗜肺军团菌感染为主。结论军团菌是感染性疾病的常见病原，且有院内感染的可能性，健康人群感染也相当普遍，在经常与水、土接触职业人群更为明显     

Diagnosis of Legionella pneumonia by detection of antigenuria using an enzyme immunoassay with 6 antibody specificities

In patients with microbiologically and clinically suspected Legionella caused pneumonia antigenuria was investigated by means of a direct two-site binding assay (ELISA) with polyclonal antibodies against Legionella (L.) pneumonia serogroup 1, 2, 3, 5 and 6 and L. micdadei. By application of antibodies only against L. pneumonia serogroup 1 antigenuria was found in 27 of 66 patients (= 41%). The expanding of the used specificities of antibodies in 47 out of this cases resulted in an increase of positive urinary antigen findings from 38% to 55%. Possibilities and limits of the detection of antigenuria with regard to efficient and rapid diagnostics of legionellosis are discussed.     

北京市郊某建筑工地一起米克戴德军团菌病爆发流行的初步调查

1989年12月至1990年1月间,北京市某建筑工地发生了一起上呼吸道感染(上感样)疫情。流行病学调査及细菌学检査证明,这是一起由米克戴德军团菌所引起的军团菌病爆发流行,患病率为26.67%(24/90),在国内系首次报道。     

外科病人手术前后血中细菌DNA检出率的研究

目的用稳定可靠的PCR方法,检测腹部手术前后血中以肠源性细菌为主的DNA并与相关因素进行分析。方法111例择期腹部手术病人在术前,术后第3天、第6天各采血3ml进行检测。患者按手术创伤大小分为三组,又按术后是否存在“全身性炎症反应综合征”（SIR）分为二组,不同组别与PCR阳性率进行对比。结果术前PCR均为阴性。术后第3天PCR阳性率17．1％（19／111）,高于术后第6天PCR阳性率6,3％（7／111,P＝0．004）。大手术组PCR阳性率为32．4％（11／34）,中手术组为13．4％（9／67）,小手术组为10％（1／10）,三组之间有差异（P＝0．02）。术后出现SIRS的病人PCR阳性率为43．9％（18／41）,高于无SIRS组4．3％（3／70,P=0．001）。结论术后禁食输液治疗病人血中可检出细菌DNA,阳性率与手术创伤大小、术后有无SIRS可能有关。     

Nosocomial Legionella micdadei pneumonia: 10 years experience and a case-control study

Sixteen patients with nosocomial Legionella micdadei pneumonia, diagnosed between 1977 and 1988, were studied retrospectively to define clinical and epidemiological characteristics of the disease. Also, a case-control study was performed comparing the five patients with L. micdadei pneumonia during a cluster of cases in 1982, with uninfected patients with the same underlying diagnoses. No significant differences were noted in the case-control study with regard to age, presence of leucopenia, intensity or duration of immunosuppressive therapy, bed location, duration of hospital stay, frequency of transplant rejection or overall mortality. Legionella micdadei isolates from a sink on the renal transport ward, from hot water storage tanks, and one clinical isolate had identical cellular fatty acid composition. Extensive sampling of other potential sources failed to yield the organism. This indirect evidence suggests potable water as the source of infection.     

—起医务人员上呼吸道聚集性感染的调查

目的检测医务人员上呼吸道感染的传染病病原和抗体,为制订预防措施提供依据。方法用活性炭酵母浸液琼脂培养基、血平板、支原体快速培养基检测患者呼吸道分泌物和外环境样品的病原菌,用ELISA检查血清嗜肺军团菌IgM、1～7 IgG抗体,用多重PCR检测呼吸道分泌物SARS和禽流感病毒抗原,用全自动微生物基因指纹系统检测病原基因指纹图谱。结果首例病人和15例发病的医务人员呼吸道分泌物和血清学检查均没有检出军团菌、流脑和肺炎球菌,有6例患者支原体快速培养阳性,首例病人使用过的水体检测出犬巴氏杆菌;检测病人和密切接触者双份血清有1人双份血清军团菌1～7-IgG抗体4倍增长;死亡病例呼吸道分泌物没有检出SARS和禽流感病毒抗原。结论首例病人死于重症肺炎,实验室排除人禽流感、SARS和流脑,不能排除军团菌感染,15例集聚性上呼吸道感染患者与首例患者无同源性传染证据。