牛主动脉内皮细胞乙酰胆碱激活蛋白介导的胸内钙离子变化

目的：研究主动脉内皮细胞乙酰胆碱激活蛋白（EPA）介导胞内钙离子变化的特征,并探讨培养牛主动脉内皮细胞EPA功能的变化。方法：以Fluo-3,Frua-2为荧光探针,采用共聚焦和荧光光度法测定内皮细胞[Ca^2 ]。结果：Ach能够引起体外培养6代以内内皮细胞[Ca^2 ]i的增加;Ach能够引起体外培养6代以内内皮细胞[Ca^2 ]i信号表现为瞬时性单次或连续2次的钙振荡,具有异时性和快速耐受的特点。未观察到烟碱和其它M受体激动剂引起的[Ca^2 ]i变化。Ach对胞内[Ca^2 ]i浓度的作用以原代细胞增加最为明显,但随培养时间的延长,此效应逐渐减弱,至13代后无效应。结论：血管内皮细胞乙酰胆碱激活蛋白激活能介导胞内钙离子的增高,经培养后EPA功能丧失。     

氨氯地平对大鼠心室肌细胞内钙离子浓度的影响

目的 探讨不同旋体氨氯地平对大鼠心室肌细胞内钙离子浓度的影响.方法 采用荧光探针Fura-2乙酰羧甲酯(Fura-2/AM)测定细胞内钙离子浓度,并比较1、5、10、50和100 μmol/L左旋、右旋和混旋氨氯地平对细胞内钙离子浓度的影响. 结果不同浓度左旋和混旋氨氯地平(1、5、10、50和100 μmol/L)降低细胞内钙离子浓度分别为(1.1±0.1)%、(15.3±3.8)%、(58.1±5.2)%、(73.5±5.7)%和(88.9±7.2)%及(0.6±0.1)%、(5.1±2.0)%、(15.2±3.7)%、(65.8±4.1)%和(72.1±5.2)%;半效抑制浓度(IC50)分别为8.13) μmol/L及16.19 μmol/L;不同浓度右旋氨氯地平对细胞内钙离子浓度无影响.结论 左旋和混旋氨氯地平降低细胞内钙,且呈浓度依赖;而右旋氨氯地平对细胞内钙无影响.     

CHO-hm_1R工程细胞株的建立及乙酰胆碱对其细胞内钙离子浓度的影响

目的　获得表达人毒蕈碱样乙酰胆碱Ⅰ型受体(hm1 R)的工程细胞株 (CHO hm1 R)并鉴定表达受体是否具有相应的功能活性。方法　以健康人基因组DNA为模板 ,PCR扩增hm1 R之cDNA ,并构建pcDNA3 .1 (+) hm1 R表达载体 ,转染CHO K1 细胞获得CHO hm1 R工程细胞株 ,将不同浓度的乙酰胆碱作用于细胞 ,以Fura 2为荧光探针检测细胞内钙离子浓度变化 ;同时 ,观察阿托品预处理对乙酰胆碱作用的影响。结果　成功得到CHO hm1 R工程细胞株 ;乙酰胆碱 1 0 ,1 0 0 μmol·L-1 均可增高细胞内钙离子浓度 ,此反应可被阿托品 50 0 μmol·L-1 完全阻断。结论　CHO hm1 R工程细胞株可以用于hm1 R配基的检测 ,为建立相关孤儿G蛋白偶联受体的研究体系提供借鉴     

西红花苷对牛主动脉平滑肌细胞内钙离子浓度的影响

目的研究西红花苷对血管平滑肌细胞内钙离子浓度的影响。方法以Fluo-3/AM作为Ca²⁺荧光探针,采用激光扫描共聚焦显微镜观察牛主动脉平滑肌细胞内钙离子浓度的变化。结果无论细胞外有无钙离子,西红花苷(1×10^-8,1×10^-7,1×10^-6 mol·L^-1)均能明显抑制1×10^-2 mol·L^-1 H₂O₂引起的细胞内钙离子浓度的升高,其抑制率含钙条件下分别为34.1%, 57.1%和74.3%(P<0.01),无钙条件下分别为26.2%,32.1%和50.0%(P<0.01);在胞外无钙的条件下,西红花苷 (1×10^-8,1×10^-7,1×10^-6 mol·L^-1)能抑制70 mmol·L^-1 CHCl₃导致雷洛丁敏感钙池的释放,其抑制率分别为27.8%, 27.8%和50.0% (P<0.01)。结论西红花苷能抑制胞外钙离子的内流及内质网上钙离子的释放。     

丙泊酚对细胞内钙离子的调节

本文综述了细胞内Ca^2 浓度变化的机制，以及丙泊酚在不同生理条件下对细胞内Ca^2 变化的影响的可能机制，并阐述了其使Ca^2 变化后对机体所产生的影响。众多研究显示，丙泊酚可以从多个途径对细胞内Ca^2 浓度进行调节。临床所见的心肌抑制、血压下降、平滑肌松弛、对缺血缺氧致细胞损伤的保护作用等现象可能与丙泊酚对Ca^2 的调节有关。     

不同治疗时间法舒地尔对心力衰竭大鼠心肌细胞内钙离子浓度的影响

目的：探讨不同治疗时间法舒地尔（fasudil）对心力衰竭大鼠心肌细胞内钙离子浓度的影响。方法：将升主动脉缩窄术后心力衰竭Wistar雌性大鼠随机分为4组,每组10只,两组为心力衰竭组,给予0.9%NaCl溶液,0.1ml,腹腔注射,每日2次;另两组给予fasudil5mg/kg,腹腔注射,每日2次（n=10）;分别治疗2周或6周。同时制备两组机械性套环模拟组模型作为对照组（n=10）,不予处置。观察每组大鼠各项指标变化。结果：心力衰竭鼠心肌细胞钙离子浓度（[Ca2＋]i）显著增高,fasudil组随干预时间增加改善心力衰竭症状更明显,但心肌细胞内[Ca2＋]i无明显改变。结论：法舒地尔能随干预时间的延长而有效的缓解心力衰竭症状,但不降低细胞内[Ca2＋]i,可能为一种新的、有效的治疗心力衰竭的血管扩张剂。     

蛋氨酸脑啡肽对SH-SY5Y细胞的生长抑制作用及其对细胞内钙离子浓度的影响

目的 研究蛋氨酸脑啡肽抗肿瘤作用及对SH-SY5Y细胞内钙离子浓度影响.方法 用CCK-8法,检测蛋氨酸脑啡肽对SH-SYSY细胞的生长抑制作用;显微镜下记录给药前后细胞生长情况;流式细胞术结合Fluo 4-AM染色法,检测细胞内钙离子浓度变化,用SAS 9.1统计分析.结果 蛋氨酸脑啡肽可通过降低细胞内钙离子浓度对SH-SY5Y细胞生长产生浓度特异性抑制作用.结论 细胞内钙离子浓度变化参与蛋氨酸脑啡肽抑制SH-SYSY肿瘤细胞的生长.     

三氧化二砷通过升高细胞内钙离子浓度介导肺癌细胞凋亡

目的　研究三氧化二砷 (As2 O3 )对人肺腺癌细胞株AGZY 83 a的抑制作用 ,探讨As2 O3 诱导人肺腺癌细胞株凋亡的机制。方法　采用MTT法、透射电镜、激光扫描共聚焦仪及流式细胞术等方法观察三氧化二砷对人肺腺癌细胞株AGZY 83 a的影响。结果　①As2 O3 能抑制人肺腺癌细胞株AGZY 83 a的生长 ,呈剂量依赖关系 (P <0 0 1) ,IC50 =1 6 1mg·L-1;②在光学显微镜及电镜下 ,可见As2 O3 作用后的人肺腺癌细胞株AGZY 83 a呈现凋亡中、早期的变化特征 :表面绒毛脱失 ,染色质块状散于核内 ;③流式细胞术显示 :As2 O3 作用后的人肺腺癌细胞株AGZY 83 a细胞凋亡百分率与药物剂量呈依赖关系 ;④LSCM显示 :As2 O3 作用后的人肺腺癌细胞株AGZY 83 a细胞内钙浓度 ([Ca2 + ]i)升高 (P <0 0 1) ,呈剂量时间依赖关系。结论　As2 O3 能明显抑制人肺腺癌细胞株AGZY 83 a细胞的生长 ,并诱导人肺腺癌细胞株AGZY 83 a细胞凋亡 ,细胞内 [Ca2 + ]升高可能是诱导细胞凋亡的机制之一。     

血红素氧合酶-1对脂多糖诱导的急性心肌细胞损伤细胞内钙离子浓度的影响

目的研究HO-1对脂多糖刺激的心肌细胞内钙离子含量的影响。方法差速贴壁法培养乳鼠心肌细胞,分为对照组（C）,脂多糖LPS组（L）,LPS＋Hemin组（L＋H）,LPS＋ZnPP组（L＋Zn）,分别诱导或阻断HO-1的合成,并检测心肌细胞内钙离子含量。结果 LPS诱导心肌细胞钙离子含量升高,Hemin增加HO-1水平,降低细胞内钙离子水平,ZnPP降低HO-1水平,细胞内钙离子浓度进一步增加。结论 LPS刺激使心肌细胞内钙离子含量明显升高,HO-1可降低细胞内钙超载。     

猪苓多糖对膀胱癌细胞钙离子浓度的影响

目的　观察猪苓多糖对人T2 4膀胱癌细胞内钙离子 (Ca2 )浓度的影响 ,探讨猪苓多糖抗癌机理。方法　体外培养人T2 4细胞经钙荧光指示剂 (calciumcrimson AM )负载后 ,用激光扫描共聚焦显微镜测定猪苓多糖作用前后细胞内Ca2 随时间的变化。结果　猪苓多糖低剂量 (0 .2mg·L- 1)使T2 4细胞内Ca2 降低 ,高剂量 (>1mg·L- 1)使T2 4细胞内Ca2 升高 ,最后维持在高钙水平上。猪苓多糖主要促进细胞核内Ca2 升高 ,细胞浆Ca2 无明显改变。结论　猪苓多糖可引起T2 4细胞内Ca2 水平的显著变化 ,而且这种变化主要表现在细胞核内 ,提示猪苓多糖可能有诱导细胞凋亡的作用     

杏花雨对外源性高钙致大鼠脑线粒体损伤的保护作用

目的探讨杏花雨注射液对外源性高钙所致线粒体损伤的保护作用.观察杏花雨对离体线粒体是否具有保护作用,从而进一步完善银杏叶提取物抗脑缺血损伤的机制.方法新鲜制备的大鼠脑线粒体悬液,分别与不同浓度Ca2 以及不同浓度的杏花雨注射液进行孵育,观察线粒体基质游离钙、线粒体活性以及线粒体膜肿胀度的变化.结果与正常对照组比较外源性高钙导致大鼠脑线粒体严重钙超载(P＜0.01),线粒体活性下降(P＜0.01),540 nm处线粒体悬液吸光度值显著下降,线粒体明显肿胀(P＜0.01);于钙离子损伤前给予杏花雨孵育,线粒体基质游离钙浓度明显降低(P＜0.01),线粒体活性显著升高(P＜0.01),吸光度值有明显升高,显示线粒体肿胀度减轻(P＜0.01).结论外源性高钙可使线粒体基质游离钙含量升高,产生线粒体通透性转换(mitochondria permeability transition,MPT),使线粒体活性降低,功能障碍.杏花雨通过缓解线粒体钙超载,防止产生MPT,从而恢复线粒体功能.提示杏花雨抑制线粒体钙超载可能是其对缺血再灌注脑损伤的保护作用机制.     

川芎嗪开放外毛细胞钾通道的细胞内PKA机制

川芎嗪 (ＴＭＰ)是中药川芎的有效成分之一 ,文献报道[1] ＴＭＰ具有开放慢内向电流和抑制ＡＴＰ敏感的Ｋ+ 通道的作用。离子通道受细胞内机制调节以完成生理效应。如Ｉｌｏｐｒｏｓｔ通过ｃＡＭＰ依赖的蛋白激酶激活大鼠尾动脉平滑肌细胞的Ｃａ2 + 敏感Ｋ+ 通道[2 ] 。本实验室研究表明ＴＭＰ增大豚鼠耳蜗外毛细胞Ｃａ2 + 敏感外向Ｋ+ 电流 (ＩＫ(Ｃａ) )和延迟外向Ｋ+ 电流 (ＩＫ) ,具有浓度依赖性。那么ＴＭＰ开放豚鼠耳蜗外毛细胞外向Ｋ+ 通道的机制如何呢 ?本文应用全细胞膜片钳技术探讨了ＰＫＡ系统的改变对豚鼠耳蜗外毛细胞外向Ｋ+ …     

银杏叶提取物EGb761对阿米卡星所致离体豚鼠耳蜗外毛细胞内钙和运动性变化的影响

利用激光共聚焦成像系统和荧光探针Fluo 3/AM监测离体单个豚鼠耳蜗外毛细胞 (OHC)内游离钙浓度 ([Ca2 + ]i)的变化 ,以及显微摄像记录OHC的运动情况 ,发现阿米卡星 (AK ,4 .76g·L- 1)使OHC[Ca2 + ]i 显著下降 ,伴随着细胞可逆性的缩短变粗 ,恢复后 ,细胞仍比正常短胖 ,胞膜折皱 ,核固缩 .银杏叶提取物EGb761(0 .2g·L- 1)在AK前或后加入均不能中断 [Ca2 + ]i 下降及细胞收缩这一过程 ,但可以使AK所致的极低 [Ca2 + ]i 回升 .此外 ,EGb761可以改善AK对OHC形态的不可逆损伤 .结果提示 ,AK所致的 [Ca2 + ]i 下降可破坏OHC慢运动 ,而EGb761对AK所致OHC损伤有一定拮抗作用 .     

D-聚甘酯对血管内皮细胞损伤的保护作用

目的 用 H_2O_2(200μmol·L~(-1))诱导人脐静脉内皮细胞株ECV304氧化损伤,研究D-聚甘酯(DPS)对血管内皮细胞损伤的保护作用。方法 噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活性,采用试剂盒测定细胞内脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量、培养液中乳酸脱氢酶(LDH)和超氧化物歧化酶(SOD)活性。同时采用流式细胞仪检测损伤后细胞内Ca~(2+)含量,并观察DPS对H_2O_2导致的内皮细胞内钙离子浓度的影响和细胞凋亡的作用。结果DPS 0.1,1,10μg·L~(-1)对损伤后ECV304具有促进增殖作用。DPS 0.1,1μg·L~(-1)使细胞培养液中SOD水平升高并降低细胞内MDA含量,4个剂量的DPS均能使细胞培养液中LDH释放减少。流式细胞术检测结果显示DPS能降低H_2O_2导致的细胞内Ca~(2+)含量的升高,并抑制细胞凋亡。结论 DPS具有保护H_2O_2致血管内皮细胞损伤的作用,其机理可能与其抗脂质过氧化作用,降低损伤后细胞内Ca~(2+)含量并抑制细胞凋亡有关。     

萘甲异喹对大鼠心肌细胞Ca~(2+)内流的影响

目的研究萘甲异喹（NI）对大鼠心肌细胞外Ca(2+)内流的影响。方法：应用钙离子荧光指示剂Fura－2检测。结果：NI（3，10μmol·L(-1)）和维拉帕米（0．3μmol·L(－1)）对静息状态下心肌细胞内Ca(2+)浓度无影响，但可浓度依赖地抑制高钾（60mmol·L(-1)）和异丙肾上腺素（lμmol·L(－1)）引起的心肌细胞内Ca(2+)浓度的升高，抑制率分别为29％±6％、49％±9％和26％±6％、40％±8％；NI对两种激动剂作用的抑制百分率无明显差异，而维拉帕米对高钾作用的抑制大于对异丙肾上腺素作用的抑制。结论：NI对心肌细胞电压依赖性钙通道以及和β受体有关的钙通道有阻断作用，NI可能是非选择性钙通道阻滞剂。     

豚鼠Ⅱ型前庭毛细胞ACh-敏感性BK电流

目的研究豚鼠球囊和椭圆囊Ⅱ型前庭毛细胞乙酰胆碱(ACh)-敏感性钾电流的特性。方法应用全细胞膜片钳技术检测新鲜单离的豚鼠球囊和椭圆囊Ⅱ型前庭毛细胞ACh-敏感性钾电流的离子特性及其药理学特点。结果①细胞外ACh激活一缓慢持久的外向性电流,其效应呈浓度依赖性,半数激活浓度为45μmol.L-1。②ACh-敏感性钾电流对钾通道阻断剂TEA(tetraethylammon ium)、IBTX(ibe-riotoxin)和Cs+敏感,而对4-AP(4-am inopyride)和apam in不敏感。③细胞内应用钙离子螯合剂BAPTA[b is(2-am inophe-noxy)ethane-N,N,N,′N-t′etra-acetic ac id],ACh-敏感性钾电流的幅值迅速被抑制。④ACh-敏感性钾电流对细胞外液中钙离子浓度变化敏感,0.2 mmol.L-1低钙外液中ACh-敏感性钾电流被抑制,电流最大值由0~10 mV向-20 mV~-30 mV超极化方向移动。结论细胞外ACh激活豚鼠球囊和椭圆囊Ⅱ型前庭毛细胞产生大电导钙依赖性钾电流(BK)。ACh-敏感性BK电流在豚鼠Ⅱ型前庭毛细胞超极化保护机制中具有重要的作用。     

铜对培养心肌细胞电活动的影响

本文观察了不同剂量铜对培养心肌细胞动作电位的作用,2～5ppm可使APA、OS、RP降低,而Vmax、DDR、BR减慢,APD缩短,认为铜影响到细胞膜上酶的活性,而对Na~+、Ca~(2+)、K~+等离子导产生作用。     

Suppression by phthalates of the calcium signaling of human nicotinic acetylcholine receptors in human neuroblastoma SH-SY5Y cells

Phthalates are widely used in industry and cause public concern since they have genomic estrogenic-like effects via estrogen receptors. We previously found that some phthalates have nongenomic effects, exerting inhibitory effects on the functional activities of nicotinic acetylcholine receptors (nAChRs) in bovine chromaffin cells. In this study, we investigated the effects of eight phthalates on the calcium signaling of human nAChR by using human neuroblastoma SH-SY5Y cells. All eight phthalates, with different potency, have inhibitory roles on the calcium signaling coupled with human nAChR, but not muscarinic acetylcholine receptors (mAChRs). For inhibition of human nAChR, the strongest to weakest potencies were observed as di-n-pentyl phthalate (DPP) → butyl benzyl phthalate (BBP) → di-n-butyl phthalate (DBP) → dicyclohexyl phthalate (DCHP) → di-n-hexyl phthalate (DHP) → di-(2-ethyl hexyl) phthalate (DEHP) → di-n-propyl phthalate (DPrP) → diethyl phthalate (DEP). The potencies of phthalates were associated with their structures such that the most effective ones had dialkyl group carbon numbers of C4 or C5, with shorter or longer numbers resulting in decreased potency. At as low as 0.1 μM, DPP, DBP, BBP, DCHP and DHP significantly inhibited the calcium signaling of human nAChR. The IC₅₀ of phthalates on human nAChR, ranging from 0.32 to 7.96 μM, were 10–50 lower than those for bovine nAChR. We suggest that some phthalates effectively inhibit the calcium signaling of human nAChR, and these nongenomic effects are cause for concern.     

蝙蝠葛苏林碱对PC12细胞内游离钙浓度的影响

目的进一步探讨蝙蝠葛苏林碱（Dau）的抗脑缺血／缺氧损伤与其钙拮抗作用间的关系。方法：培养的PC12细胞用Fura－2／AM负载，用AR－CM－MIC阳离子测定系统观测Dau对单细胞内游离钙（[Ca(2+)]_i）升高的影响。结果：Dau（0．1～100μmol·L(－1)）可浓度依赖性抑制高钾和caffeine引起的[Ca(2+)］_i增加，对肌浆网钙泵抑制剂cy－clopiszonicacid引起的[Ca(2+)]_i升高也有抑制作用。结论：Dau不仅抑制电压依赖性钙通道开放引起的细胞外钙内流和caffeine引起的内钙释放．而且对钙泵也可能有影响，这可能是其抗脑缺血／缺氧损伤的重要机制。