大规模猪肝细胞低温保存方法的建立

目的　建立大规模猪肝细胞的低温保存方法以满足生物型人工肝治疗的需要。方法　用酶法从中国实验用小型猪肝脏分离出猪肝细胞 ;加入本实验室配制的含有 10 %二甲基亚砜 (dimethylsulfoxide,DMSO)的营养液中 ;分别采用两种降温方法使 (12 )× 10 10 猪肝细胞保存在 - 196℃液氮中 ;1个月后复温 ,观察在同一条件下培养不同时间后猪肝细胞形态、存活率和白蛋白、尿素、葡萄糖合成功能及对利多卡因的转化功能。结果　用两种降温方法保存的肝细胞 ,复温后细胞的存活率均较高 (梯度降温组和程控降温组存活率分别较冻存前降低了 4 7%和 8 6 %) ,其中前者肝细胞的尿素、葡萄糖合成功能较后者高。结论　所建立的冻存方法简单易行 ,可保存大量的猪肝细胞。     

新型内皮素受体拮抗剂ETP-508对低氧培养大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的探讨新型内皮素受体拮抗剂ETP-508对低氧培养大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖的影响。方法贴壁原代培养的PASMCs分为4组:常氧组(氧浓度21%),低氧组(氧浓度2%),低氧 BQ-485组(BQ-485的终浓度分别为10-6、10-7、10-8、10-9mol/L),低氧 ETP-508组(ETP-508的终浓度分别为10-6、10-7、10-8、10-9mol/L)。4组细胞均分别培养24、48、72h后,采用MTT法(波长492nm)检测BQ-485和ETP-508对PASMCs增殖的影响。按上述分组培养细胞48h,采用流式细胞仪测定细胞周期;放免法测定培养上清液中内皮素-1(ET-1)的含量。结果24h时各实验组A值差异不明显;48h时低氧组A值明显增加(P<0.01),低氧 BQ-485组、低氧 ETP-508组在10-8、10-7、10-6mol/L时A值下降,与低氧组比较有统计学意义(P<0.01);72h时低氧组A值仍高于常氧组,但较48h时略下降(P<0.05)。48h时低氧组G2、S期细胞比率、DNA合成增加,与常氧组比较有统计学意义(P<0.01,P<0.05);与低氧组比较,低氧 BQ-485组、低氧 ETP-508组G2、S期细胞比率下降(P<0.05),G1期细胞增多(P<0.05),DNA合成减少。48h时低氧组ET-1水平增高(P<0.01),给予BQ-485、ETP-508后ET-1水平降低,10-7mol/L BQ-485、10-9mol/L ETP-508可明显降低ET-1水平(P<0.01)。结论ETP-508作为一种新型内皮素受体拮抗剂能抑制低氧培养PASMCs的增殖,减少ET-1的生成,且其作用较BQ-485强。     

替米沙坦对心肌细胞脂联素受体1表达的影响及其可能机制研究

目的探讨替米沙坦调节糖尿病心肌细胞脂联素受体1表达的作用机制。方法取H9C2心肌细胞作为研究对象,分两个部分进行实验。第一部分检测血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)抑制的影响:以不同浓度(0、10-8、10-7、10-6、10-5mol/L)AngⅡ作用48h以及AngⅡ(10-7mol/L)作用不同时间(0、12、24、36、48h)后检测心肌细胞内脂联素受体1 m RNA和蛋白的表达;以10-5mol/L替米沙坦孵育1h,然后用10-7mol/L AngⅡ培养24h后检测前述指标的表达。第二部分检测过氧化物酶体增殖物活化受体-γ(PPAR-γ)激活的影响:将H9C2心肌细胞分5组:1对照组(NG组);2高糖组(HG组);3高糖+替米沙坦组(HG+T组);4高糖+替米沙坦+PPAR-γ抑制剂GW9662组(HG+T+GW组);5低糖+甘露醇组(NG+M组)。按分组处理24h后检测心肌细胞脂联素受体1 m RNA和蛋白的表达。采用实时荧光定量聚合酶链反应法和免疫印迹法测定心肌细胞脂联素受体1 m RNA和蛋白的表达。结果在AngⅡ浓度为10-8、10-7、10-6、10-5mol/L时心肌细胞脂联素受体1 m RNA和蛋白表达均明显降低(P<0.05),尤以10-7mol/L时下降最显著(P<0.01)。10-7mol/L AngⅡ作用12、24、36、48h后心肌细胞脂联素受体1 m RNA和蛋白表达均明显降低(P<0.05),尤以24h下降最显著(P<0.01)。替米沙坦可显著上调AngⅡ作用后的心肌细胞脂联素受体1 m RNA和蛋白表达(P<0.05)。与NG组比较,HG组心肌细胞脂联素受体1 m RNA和蛋白表达显著降低(P<0.05),而NG+M组表达无显著变化(P>0.05)。与HG组比较,HG+T组心肌细胞脂联素受体1m RNA和蛋白表达显著升高(P<0.05);与HG+T组比较,HG+T+GW组心肌细胞脂联素受体1 m RNA和蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论高糖和AngⅡ可显著降低心肌细胞脂联素受体1的表达。替米沙坦通过激活PPAR-γ、抑制AngⅡ而上调高糖培养的心肌细胞脂联素受体1的表达。     

沉默TCF7L2对胰岛素抵抗HepG2细胞胰岛素降解酶表达的调控作用观察

目的探讨沉默转录因子7类似物2(TCF7L2)对胰岛素抵抗(IR)Hep G2细胞胰岛素降解酶(IDE)表达的调控作用及可能机制。方法将Hep G2细胞分为空白组、TCF7L2干扰组、空载体组、IR组、IR+TCF7L2干扰组、IR+空载体组。采用高浓度胰岛素(5×10-6mol/L)持续作用24h诱导IR模型(IR-Hep G2细胞)生成。以人TCF7L2 m RNA编码序列为干扰靶点构建TCF7L2特异性小干扰RNA慢病毒载体(LV-TCF7L2-si RNA)转染空白组及IR组细胞,空载体病毒转染空载体组及IR+空载体组细胞。q RT-PCR法检测各组细胞TCF7L2及IDE m RNA的表达,Western blotting检测各组细胞TCF7L2、IDE、胰岛素刺激后蛋白激酶B(AKT)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)蛋白表达的变化,流式细胞术检测各组2-脱氧-D-葡萄糖(2-NBDG)荧光葡萄糖摄取率。结果与空白组比较,IR组细胞葡萄糖消耗量及2-NBDG摄取率均明显降低(P<0.01),证明IR细胞模型建立成功。q RT-PCR及Western blotting结果显示,IR组TCF7L2及IDE m RNA种蛋白表达水平均明显低于空白组(P<0.05),TCF7L2干扰组TCF7L2、IDE m RNA和蛋白表达水平较空白组、空载体组明显下降,IR+TCF7L2干扰组TCF7L2、IDE m RNA和蛋白表达水平较IR组、IR+空载体组均明显下降(P<0.05)。生理剂量胰岛素刺激后,IR组、IR+TCF7L2干扰组p-AKT蛋白水平较空白组明显下降(P<0.01),各组总AKT水平差异无统计学意义。TCF7L2干扰组2-NBDG荧光葡萄糖摄取率较空白组和空载体组明显下降,IR+TCF7L2干扰组2-NBDG荧光葡萄糖摄取率较IR组、IR+空载体组明显下降(P<0.01)。结论 TCF7L2联合IDE致肝细胞IR,其机制可能与减少胰岛素信号通路关键酶p-AKT蛋白的表达有关。     

氰戊菊酯对大鼠睾丸Leydig细胞睾酮合成的影响及其机制

目的 探讨氰戊菊酯(Fen)对大鼠睾丸Leydig细胞睾酮合成的影响及其可能机制。方法 采用差速贴壁法分离提纯SD大鼠睾丸Leydig细胞。用0、25、50和100μmol/L Fen处理Leydig细胞1、12和24 h，采用ELISA法检测睾酮水平。设置空白对照组(加入0.1%DMSO处理)、Fen暴露组(加入100μmol/L Fen处理)、Fen+NAC组(加入100μmol/L Fen和5 mmol/L NAC处理)、Fen+CsA组(加入100μmol/L Fen和2 mmol/L CsA处理)，给药后继续培养24 h。采用流式细胞仪检测活性氧(ROS)和线粒体膜电位变化，ELISA法检测睾酮水平及谷胱甘肽(GSH)、cAMP含量，化学发光法检测ATP含量，Western blotting检测超氧化物歧化酶(SOD)、类固醇激素合成急性调节蛋白(StAR)、3β-羟类固醇脱氢酶(3β-HSD)和细胞色素P450胆固醇侧链裂解酶(CYP11A1)的表达。结果 选择100μmol/L Fen处理24 h进行实验。与空白对照组比较，Fen暴露组Leydig细胞睾酮合成水平，GSH...     

骨骼肌微损伤自体修复中超微结构变化与蛋白质组学研究

目的:从蛋白质组代谢角度分析骨骼肌微损伤自体修复过程中不同功能蛋白质组与肌纤维超微结构恢复的同步变化机制。方法:Wistar雄性大鼠36只随机分为安静对照组(D组)、运动后即刻组(0 h组)、运动后24 h组(24 h组)、运动后48 h组(48 h组)、运动后72 h组(72 h组)及运动后168 h组(168 h组)每组6只。运动方案:跑台下坡跑,坡度-16度,速度18 m/min,运动持续60 min,运动后相应时间处死。超薄切片、染色,用JEM-1200EX透射电镜分析不同组别骨骼肌的超微结构。以D组电泳图谱作参考,进行特异蛋白质表达量分析并对表达受到激活或者抑制的蛋白质进行进一步质谱鉴定。特异蛋白质按照功能不同分为I、II、III和IV类。结果:运动后即刻,参与细胞损伤修复的蛋白质(II类)包括膜联蛋白A5、维生素D结合蛋白、α1抗胰蛋白酶前体、DJ-1蛋白、免疫球蛋白、热休克蛋白β1、着丝粒关联蛋白E表达先于超微结构变化;运动后24~72 h,损伤修复过程中能量代谢相关蛋白质(I类)如辅酶Q9、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶、乙酰基转移酶、异柠檬酸脱氢酶、磷酸甘油-3脱氢酶受到显著激活,可能促进了线粒体自身修复进而加快肌纤维再生速度;运动后48 h组和72 h组内Trim72蛋白、角蛋白、核糖体蛋白、肌球蛋白、载脂蛋白和内质网驻地蛋白29参与骨骼肌构成的结构蛋白质(III类)表达出现显著上升,这与超微结构恢复具有一定的同步性。结论:骨骼肌微损伤后0~48 h之内细胞损伤修复蛋白表达先于超微结构变化;在损伤修复后24~72 h之内线粒体酶系统及能量代谢相关蛋白表达先于超微结构修复,这可能促进了线粒体自身修复进而加快肌纤维再生速度;在损伤修复后24~48 h之内,骨骼肌结构蛋白表达与超微结构恢复具有一定的同步性。     

缺氧诱导人卵巢癌OVCAR3细胞亲环素A表达水平变化及其临床意义

目的 探讨缺氧诱导人卵巢癌OVCAR3细胞亲环素A(CypA)表达水平的变化及其临床意义。方法 将人卵巢癌OVCAR3细胞置于Bactron厌氧室,37℃、1%O₂、5%CO₂环境下培养0、3、6、12、24 h。合成以CypA基因为靶点的CypA-siRNA(CypA-siRNA组)和control-siRNA(control-siRNA组),将CypA-siRNA和control-siRNA转染,转染后置于缺氧环境(37℃、1%O₂、5%CO₂)培养48 h;同时,设置对照组,细胞缺氧环境培养48 h,不转染。采用RT-PCR法检测CypA mRNA表达,采用Western Blot法检测CypA蛋白表达,采用MTT比色法检测细胞增殖。结果 缺氧环境下培养3、6、12、24 h时的CypA mRNA和CypA蛋白表达水平均高于培养0 h时(P<0.05)。与对照组比较,control-siRNA组OVCAR3细胞增殖和CypA蛋白表达无明显变化(P>0.05),CypA-siRNA组...     

白芍配方颗粒对四氯化碳诱导的LO2细胞损伤的影响

目的 观察白芍配方颗粒对四氯化碳(CCl4)致人肝脏LO2细胞损伤的影响,并初步探讨其作用机制.方法 将LO2细胞分为正常对照组、CCl4模型组、白芍配方颗粒组(1、5、10mg/L)、维生素素E(Vit E)组(50mmol/L).除正常对照组外,其余各组细胞预先用相应药物处理24h后,建立CCl4诱导(终浓度10mmol/L,6h)的LO2细胞损伤模型,测定细胞培养上清中丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)含量,MTT法检测细胞存活率.随后将细胞分为正常对照组、CCl4模型组、白芍配方颗粒组(10mg/L)、Vit E组(50mmol/L),采用高内涵分析(HCA)技术同时观察药物对LO2细胞线粒体膜电位、细胞色素C含量、膜通透性、核DNA含量、核尺寸及形态、细胞数量的影响.结果 与CCl4模型组相比,白芍配方颗粒或Vit E预处理可明显降低ALT、AST水平(P＜0.05或P＜0.01),其中尤以10mg/L白芍配方颗粒组及Vit E组为明显,且白芍配方颗粒各浓度及Vit E可明显减缓CCl4导致的细胞活力下降(P＜0.05或P＜0.01),呈现出一定的浓度依赖性.HCA结果显示,10mg/L白芍配方颗粒及Vit E可明显升高线粒体膜电位(P＜0.01),阻止细胞色素C释放(P＜0.01),降低细胞膜通透性(P＜0.01),并可降低核荧光强度(P＜0.01),增加细胞核尺寸(P＜0.01)及细胞数量(P＜0.05).结论 白芍配方颗粒可明显减轻CCl4诱导的肝细胞损伤,其作用机制可能与保护线粒体膜完整性、降低细胞膜通透性、抑制肝细胞凋亡有关.     

高压氧对脑缺血再灌注致线粒体过氧化损伤的保护作用研究

目的 通过观察高压氧(HBO)对局灶性脑缺血再灌注(CI/R)所致脑组织细胞线粒体过氧化损伤及凋亡的影响,探讨HBO对抗CI/R损伤的作用及其机制.方法 将80只SD大鼠按随机数字表法分为4组:假手术对照组(假手术组)8只,CI/R组、CI/R后常压吸氧(CI/R+N)组、CI/R后HBO治疗(CI/R+HBO)组,每组24只.采用大脑中动脉内线栓阻断法(MCAO)制备大鼠局灶性CI/R模型.(假手术组)操作步骤相同,但仅将线栓插入大脑中动脉10 mm后退出.假手术组、CI/R组术后不予任何处理,CI/R+N组术后30 min常压下吸纯氧,CI/R+HBO组术后30 min行常规HBO处理,均为60 min/次,1次/12 h.每组于CI/R术后12、24、48 h各处死8只大鼠,取CI/R损伤灶脑组织,采用比色法检测脑组织内线粒体超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量,流式细胞技术检测脑细胞凋亡率.结果 CI/R组术后12、24、48 h SOD活性持续下降,显著低于假手术组[(139.21±11.52与(214.13±13.76)、(127.41±12.36)与(214.13±13.76)、(112.33±11.69)与(214.33±13.76)×10-6U/g)](均P＜0.01);CI/R+N组12、24、48 h SOD活性[(157.16±8.91)、(146.33±9.93)、(133.49±10.21)×10-6 U/g)]明显高于CI/R组(均P＜0.05),CI/R+HBO组12、24、48 h SOD活性[(176.80±12.35)、(169.43±12.41)、(161.56±13.81)×10-6 U/g)]显著高于CI/R组和CI/R+N组(均P＜0.05),显示CI/R后HBO治疗能有效地保护线粒体SOD的活性.CI/R组MDA含量术后持续增高,12、24、48 h显著高于假手术组(均P＜0.01).CI/R+N组MDA含量术后12、24、48 h时均低于CI/R组,但差异均无统计学意义(均P＞0.05);CI/R+HBO组MDA含量术后24、48 h时均显著低于CI/R组(均为P＜0.01)和CI/R+N48 h组(均P＜0.05),显示HBO治疗可有效抑制MDA的产生.CI/R组术后12、24、48 h脑细胞凋亡率持续增高,均显著高于假手术组(均P＜0.01);CI/R+N组术后24、48 h组脑细胞凋亡率均低于CI/R组,但差异无统计学意义(均P＞0.05);CI/R+HBO组术后24、48 h脑细胞凋亡率均显著低于CI/R组(均P＜0.05)和CUR+N 48 h组时(均P＜0.05);显示HBO治疗能有效降低CI/R后脑细胞凋亡率.结论 HBO治疗可明显增强细胞线粒体的稳定性,有效保护CI/R后脑组织线粒体SOD的活性,减轻大鼠CI/R所致线粒体过氧化损伤及脑细胞凋亡,较常压吸氧具有更显著的脑保护作用.     

miR-451对结肠癌细胞系SW620生物学行为的影响

目的探讨miR-451对结直肠癌细胞SW620增殖、凋亡及侵袭能力的影响。方法将SW620细胞分为4组:miR-451模拟物(miR-451 mi mics)转染组(细胞转染miR-451 mi mics,终浓度100nmol/L),NC组(细胞转染miRNA阴性对照,终浓度100nmol/L),空白转染组(加入与前2组等量的Lipofectamine 2000,无miRNA片段),对照组(细胞常规培养,不加入Lipofectamine 2000和miR-NA片段)。应用荧光定量RT-PCR检测转染24h后miR-451表达量的改变,采用CCK-8试剂盒检测转染24、48、72h后细胞的增殖能力,流式细胞仪检测转染48h后细胞凋亡情况,Transwell侵袭实验检测转染24h后细胞侵袭能力的改变,细胞免疫荧光和Westernblotting检测转染48h后巨噬细胞迁移抑制因子(MIF)的表达情况。结果转染后24h,荧光定量RT-PCR检测结果显示,miR-451mi mics转染组的miR-451表达量(67.96±13.33)较NC组(以其miR-451表达量作为1)显著上调(P<0.01)。与另外3组比较,miR-451 mi mics转染组细胞增殖能力在转染后48、72h明显受抑(P<0.01),但转染后48h其细胞凋亡率无明显改变(P>0.05)。转染后48h,miR-451 mi mics转染组、NC组、空白转染组、对照组中MIF蛋白表达阳性细胞的比例分别为23.9%±14.9%、53.5%±14.1%、45.2%±19.8%、59.3%±22.2%,统计学分析显示miR-451 mi mics转染组与其他3组比较差异显著(F=7.356,P<0.01)。Transwell侵袭实验显示,miR-451 mi mics转染组侵袭细胞数(37.4±6.1个/视野)明显低于对照组(61.6±8.6个/视野)、NC组(55.6±3.6个/视野)、空白转染组(60.8±7.4个/视野,P均<0.01)。结论上调miR-451表达可抑制结直肠癌细胞的生物活性,该作用可能与抑制MIF表达有关。     

重楼皂苷通过p53/SLC7A11信号轴促进三阴性乳腺癌细胞铁死亡的机制研究

目的 探讨重楼皂苷对三阴性乳腺癌细胞铁死亡的影响及其机制。方法 用0、10、20、30、40、50μmol/L重楼皂苷处理三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞,采用CCK-8法检测细胞活性。取对数生长期MDA-MB-231细胞,随机分为对照组、重楼皂苷组(30μmol/L重楼皂苷处理12 h)、抑制剂组(2μmol/L Ferrostatin-1处理12 h)与重楼皂苷+抑制剂组(2μmol/L Ferrostatin-1处理12 h后,30μmol/L重楼皂苷处理12 h),采用CCK-8法检测细胞活性,流式细胞仪检测细胞凋亡率,qRT-PCR和Western blotting检测二价金属离子转运体1(DMT1)、转铁蛋白受体1(TFR1)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、p53、p53/溶质运载蛋白7家族成员11(SLC7A11)的表达情况。结果 CCK-8法检测结果显示,MDA-MB-231细胞存活率随重楼皂苷浓度的升高而降低,且呈剂量依赖性(P<0.05)。与对照组比较,重楼皂苷组细胞存活率以及CPX4、SLC7A11 mRNA和蛋白相对表达量降低,细胞凋亡率以及TFR...     

5-氨基酮戊酸光动力疗法对白念珠菌生物膜超微结构的影响

正目的:探讨5-氨基酮戊酸光动力疗法(ALA-PDT)对白念珠菌生物膜超微结构的影响。方法:利用6孔细胞培养板为实验载体,构建白念珠菌生物膜的体外模型,分为实验组(A+L+)、单纯光敏剂组(A+L-)、单纯光照组(A-L+)、空白对照组(A-L-),各组均于24 h小时生物膜基本成熟时进行处理。实验组与15 mM的ALA溶液孵育5 h后,以半导体激光为激发光源、在300 J/cm~2的光照剂量下进行ALA-PDT处理;单纯光敏剂组仅与ALA溶液孵育5 h;单纯光照组(A-L+)仅进行光     

Exendin-4改善Aβ31-35所致小鼠海马HT22神经细胞Per2节律基因/蛋白异常表达

目的探讨Exendin-4对β淀粉样蛋白31-35(Aβ31-35)所致HT22细胞Per2节律基因/蛋白表达的影响及机制。方法 HT22细胞分为Aβ31-35处理组(0,2.5,5.0,10.0μmol/L),Exendin-4单独处理组,Exendin-4预处理组,Exendin-4+Exendin(9-39)预处理组,Exendin-4+Exendin(9-39)处理组,Exendin(9-39)单独处理组,以完全培养基培养的细胞为对照组。光镜下观察HT22细胞形态,MTT法检测细胞存活率,实时荧光定量PCR检测Per2基因的表达,免疫荧光染色观察GLP-1R及PER2蛋白表达。结果 5,10μmol/L Aβ31-35处理后,细胞存活率较对照组显著降低(P0.05)。Exendin-4预处理后,5μmol/L Aβ31-35引起的细胞形态结构的改变明显改善,细胞存活率显著提高(P0.05)。Exendin-4预处理后,Per2基因/蛋白表达在CT(circadian time)16时较Aβ31-35处理显著提高(P0.05);Exendin-4+Exendin(9-39)处理后,GLP-1R表达在CT16时较Exendin-4处理显著降低(P0.05)。Exendin-4+Exendin(9-39)预处理后,CT16时PER2蛋白荧光强度较Exendin-4预处理显著降低(P0.05)。结论Exendin-4可能通过上调GLP-1R,改善Aβ31-35所致HT22细胞Per2节律基因/蛋白异常表达。     

辐射诱导对小鼠巨噬细胞钙结合蛋白S100A8表达及调控影响的初步研究

目的 探讨辐射诱导后小鼠巨噬细胞中钙结合蛋白S100A8 mRNA的表达情况及其调控机制.方法 体外培养小鼠巨噬细胞RAW264.7,按处置方法不同分为4组:A组正常培养48h;B组经10Gy射线照射后培养48h;C组用5g/ml LPS培养24h后,更换新鲜培养基继续培养24h;D组经10Gy射线照射后培养24h,然后添加5g/ml LPS继续培养24h.采用RT-PCR及定量PCR方法检测各组细胞S100A8 mRNA表达的变化.分别采用H2O2和喜树碱处理细胞,定量PCR检测S100A8 mRNA表达的变化.构建上游5′端系列报告基因表达载体并转染细胞,采用双荧光素酶法榆测报告基因的表达水平.结果 经γ射线或LPS刺激后,RAW264.7细胞S100A mRNA表达明显增加,二者联合作用后增加更为明显(P<0.05);H2O2处理后S100A8 mRNA表达增加,而喜树碱处理后其表达没有明显变化.单独经γ射线或LPS刺激后,报告基因的表达无明显变化,而二者联合作用后报告基因表达明显增加(P<0.05).结论 辐射诱导可促进RAW264.7细胞中钙结合蛋白S100A8 mRNA的表达.     

高氟对人甲状腺细胞功能的影响

 目的 探讨高氟对人甲状腺细胞功能的影响.方法 用人甲状腺细胞,采用原代培养方法,按氟(NaF)剂量不同分为:0(对照组)、40、80、160 mg/L组.染氟48 h后,采用噻唑蓝(MTT)法测定细胞存活率,化学发光法测定抗甲状腺过氧化物酶抗体(TPOA)水平和荧光免疫分析法测定血清总甲状腺激素(T4)水平.结果 甲状腺细胞染氟培养48 h后,细胞存活率组间比较差异有统计学意义(P＜0.05);40 mg/L组细胞存活率与对照组(100)%比较,差异无统计学意义(P＞0.05);80、160 mg/L组细胞存活率分别与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).甲状腺细胞T4水平随着染氟剂量的升高而明显降低,组间比较差异有统计学意义(P＜0.05).甲状腺细胞TPOA表达水平也随着染氟剂量的升高而明显增加,组间比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 高氟可损伤甲状腺细胞,降低细胞存活率,提高TPOA表达,降低T4水平.     

缺氧预处理对脐带间充质干细胞bFGF分泌的影响

目的 探讨氯化钴(CoCl_2)模拟缺氧预处理对人脐带间充质干细胞(UC-MSCs)碱性成纤维生长因子(bFGF)分泌的影响.方法 分离、培养人UC-MSCs,显微镜观察其形态学特征,并运用流式细胞仪检测其表面标志物的表达;选取P3代健康人UC-MSCs,MTT法检测不同浓度(0、50、100、150、200、250μmol/L)CoCl_2对UC-MSCs活力及增殖的影响,然后将细胞分为4组,分别采用0、50、100、150μmol/L CoCl_2处理,于24、48、72h后检测bFGF蛋白及mRNA的表达并分析各组间的差异.结果 经适当浓度(≤150μmol/L)CoCl_2处理后,UC-MSCs生长加快,平台期提前,而高浓度(>200μmol/L)CoCl_2对细胞活力有负面影响.经50、100、150μmol/L CoCl_2处理后,各组bFGF蛋白分泌水平均明显高于0μmol/L CoCl_2处理组(P<0.05),且48、72h时点均高于24h时点(P<0.05),150μnol/L CoCl_2处理组72h时点bFGF蛋白表达水平明显低于48h(P<0.05),100μmaol/L CoCl_2处理组72h时点bFGF蛋白表达水平明显高于48h(P<0.05),而50μmol/LCoCl_2处理组72h时点与48h时点比较无显著差异.bFGFmRNA表达改变与蛋白基本相一致,但50μmol/L CoCl_2处理组在各时点没有显著差异.结论 适当浓度(≤150μmol/L)的CoCl_2对UC-MSCs增殖能力影响较小,可用于细胞模拟缺氧;缺氧预处理对人UC-MSCs的bFGF分泌有一定促进作用.     

地塞米松对海水浸泡人肺泡上皮细胞钠通道的影响

目的 探讨地塞米松对海水浸泡的人肺泡上皮细胞(A549)钠通道的影响.方法 将常规培养的A549细胞分为海水处理组(SG)、阴性对照组(NG)和地塞米松处理组(DG).SG组经灭菌配方海水常规孵育,DG组在经海水处理后,加入地塞米松(终浓度1μmol/L)处理,NG组常规培养至实验终点.配方海水渗透压1 300mmol/L,pH 8.2,相对密度1.05.采用MTT法检测细胞存活率,流式细胞仪榆测细胞的凋亡和坏死情况,Western blotting法检测钠钾泵al亚单位(NKA-al)、钠通道a亚单位(a-ENaC)的表达,水解比色法检测NKA活性.结果 流式细胞术检测结果显示,海水孵育30min后A549细胞的存活率为90.60%±2.11%,地塞米松(1μmaol/L孵育6h)处理对海水孵育后细胞的存活率无影响.NG组的NKA-al和a-ENaC蛋白表达(0.113±0.041、0.396±0.124)显著高于SG组(0.038±0.009、0.093±0.038;P＜0.01)或DG组(0.067±0.015、0.165±0.078;P＜0.01),但DG组显著高于SG组(P＜0.05).与NG组[31.298±5.779μmol/(mg·h)]比较,SG组NKA酶活性[14.211±3.885μnlol/(mg·h)]明显降低(P＜0.05);DG组的NKA酶活性[18.641±1.921pmol/(mg·h)]较SG组有升高(P＜0.05).结论 在不影响人肺泡上皮细胞存活状况的情况下,地塞米松可以抑制海水孵育导致的a-ENaC、SKA-al含量及NKA活性的下降.     

蛋白酶体抑制剂MG-132及其与顺铂联合应用对喉癌Hep-2细胞株的影响

目的研究蛋白酶体抑制剂MG-132对喉癌Hep-2细胞增殖和凋亡的影响,及其与顺铂(DDP)联合应用对喉癌细胞的毒性作用。方法以Hep-2细胞为实验对象,分别用0、1、2.5、5、10、20μmol/L的MG-132干预Hep-2细胞48h;另用2.5μmol/L MG-132分别干预细胞0、12、24、48、72h。将细胞分为4组:对照组(不做处理)、MG-132组(加入终浓度1μmol/L的MG-132)、单用DDP组(分别加入终浓度为10、20、40、80μmol/L的DDP)及MG-132+DDP组(加入1μmol/LMG-132和10、20、40、80μmol/L的DDP),各组干预细胞48h。利用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、流式细胞术(FCM)检测细胞增殖抑制率及凋亡率的变化。结果MTT检测结果显示MG-132可有效抑制Hep-2细胞的增殖,呈浓度(r=0.944,P<0.01)及时间依赖性(r=0.945,P<0.01),48h时的半数抑制量(IC50)=2.50μmol/L;与单用DDP比较,MG-132联用DDP后对细胞的增殖抑制作用明显增强(P<0.05)。DDP的IC50由62.22μm...     

青蒿琥酯逆转Eca109/ABCG2细胞对阿霉素耐药的作用及机制

目的研究青蒿琥酯(Art)逆转食管癌耐药细胞Eca109/ABCG2对阿霉素(ADM)耐药的作用及其机制。方法采用不同浓度的青蒿琥酯(Art,0、0.01、0.1、1μmol/L),阿霉素(ADM,0、0.02、0.2、2、20mg/L),Art(0.01、0.1、1μmol/L)+ADM(0.02、0.2、2、20mg/L)处理Eca109/ABCG2细胞48h,然后以MTT法检测细胞生长抑制率。采用ADM(0、0.02、0.2、2mg/L),Art(0、0.01、0.1、1μmol/L)和ADM(0.2mg/L)+Art(0.01、0.1、1μmol/L)处理细胞,48h后以流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率及细胞内ADM含量,72h后检测细胞内ABCG2蛋白的表达。结果与单独应用Art或ADM相比,Art+ADM处理后,Eca109/ABCG2细胞的生长抑制率、凋亡率和细胞内ADM含量均显著增加(P<0.05),而细胞内ABCG2蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论 Art可通过下调Eca109/ABCG2细胞ABCG2蛋白表达,增加细胞内ADM的药物浓度,从而增强疗效、逆转耐药。     

白藜芦醇对血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞增殖的抑制作用及其机制观察

目的 探讨白藜芦醇对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的影响及其可能机制.方法 体外培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞(VSMCs).在检测白藜芦醇影响AngⅡ诱导VSMCs增殖和活力的实验中,将细胞分为对照组、AngⅡ组(1μmol/L)、白藜芦醇浓度梯度(10、30、100μmol/L)组及AngⅡ+白藜芦醇浓度梯度组,各组细胞均反应0、6、12、24h,采用细胞计数法检测VSMCs增殖情况,MTT法检测VSMCs活力.在检测腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)抑制剂复合物C对VSMCs生物活性影响的实验中,将细胞分为对照组、AngⅡ组、白藜芦醇+AngⅡ组及复合物C组+白藜芦醇+AngⅡ组,各组细胞反应24h后采用Western blotting检测增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达.结果 与对照组比较,6、12、24h后AngⅡ组细胞活力和细胞数目均显著增高(P＜0.05);与AngⅡ组比较,不同浓度白藜芦醇+AngⅡ组细胞活力和细胞数目均显著降低(P＜0.05).另一方面,与对照组比较,AngⅡ组PCNA蛋白表达显著增高(P＜0.05);与AngⅡ组比较,白藜芦醇+AngⅡ组PCNA蛋白表达显著降低(P＜0.05);而与白藜芦醇+AngⅡ组比较,复合物C+白藜芦醇+AngⅡ组细胞数目、细胞活力及PCNA蛋白表达显著增高(P＜0.05).结论 白藜芦醇可抑制AngⅡ诱导的VSMCs增殖,其机制可能与AMPK的激活有关.