间隙连接蛋白家族中Cx26、Cx32、Cx43在前列腺癌组织中的表达

目的:研究间隙连接蛋白家族中Cx26、Cx32、Cx43在前列腺癌(PCa)及良性前列腺增生(BPH)组织中的表达情况,分析三者与PCa生物学行为关系,探索其在PCa发生、发展中的作用机制,为PCa的诊断及治疗提供新的实验依据。方法:随机收集我院近4年存档的PCa石蜡标本31例、BPH 23例,采用免疫组化染色SABC法回顾性研究Cx26、Cx32、Cx43在PCa和BPH组织中的表达情况,半定量研究Cx26、Cx32、Cx43的表达与PCa、BPH的临床和病理参数的关系。结果:①Cx26、Cx32、Cx43在BPH、PCa组织中的阳性表达率分别为82.6%与74.2%(χ2=0.541,P0.05)、78.3%与61.3%(χ2=1.763,P0.05)和87.0%与38.7%(χ2=12.730,P0.01),Cx43在PCa组织中的阳性表达率较BPH中显著降低。②Cx26、Cx43在PCa组织中的阳性表达强度与肿瘤的恶性程度呈负相关(r Cx26=-0.476,P0.01;r Cx43=-0.484,P0.01);Cx32的表达与肿瘤恶性程度无相关性(r=-0.242,P0.05)。③3种Cx表达与年龄、血清PSA浓度及组织中PSA表达强度无相关性,且3种Cx间的表达亦无相关性。结论:Cx26、Cx32、Cx43在BPH和PCa组织中均有不同程度表达,其中Cx43在PCa的发生、发展中可能起到一定的作用,其也许可作为PCa除PSA外的另一标志物以及PCa生物治疗的新靶点,Cx26在PCa进展过程中可能起一定的作用,但其机制尚需进一步研究。     

不稳定逼尿肌中Cx43的表达及其对细胞间通讯的影响

目的研究Cx43在不稳定逼尿肌细胞中的表达及其对不稳定逼尿肌细胞间缝隙连接通讯的影响,探讨Cx43与逼尿肌不稳定（DI）的关系。方法采用Western blot法检测正常及不稳定逼尿肌细胞中Cx43蛋白表达。构建Cx43反义真核表达载体,脂质体介导转染体外培养不稳定逼尿肌细胞（转染组）,空载体做对照转染（空载组）。利用划痕标记荧光染料示踪（SLDT）技术观察Cx43表达降低后不稳定逼尿肌细胞间缝隙连接通讯改变。结果不稳定逼尿肌细胞中Cx43表达显著增高（P〈0．01）,转染反义Cx43组不稳定逼尿肌细胞间缝隙连接通讯较空载组明显减弱（P〈0．05）。结论抑制Cx43表达可明显降低不稳定逼尿肌细胞间缝隙连接通讯功能,Cx43表达增高可能是不稳定逼尿肌发生的重要原因。     

小干扰RNA抑制人阴茎海绵体平滑肌细胞间隙连接蛋白connexin43的表达

目的:利用小干扰RNA(siRNA)抑制人阴茎海绵体平滑肌细胞间隙连接蛋白connexin43(Cx43)的表达和检测细胞间间隙连接通讯功能,探讨该技术在阴茎海绵体平滑肌细胞间隙连接和阴茎勃起功能研究中的应用。方法:利用Ambion公司设计软件,构建靶向人Cx43基因的siRNA重组质粒,转染人阴茎海绵体平滑肌细胞48h后,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western印迹检测Cx43基因和蛋白的相对表达水平、划痕标记荧光染料传输技术检测细胞间间隙通讯功能,并分别与siRNA阴性对照、空白对照组比较。结果:酶切和测序证实siRNA真核表达载体构建成功。siRNA重组质粒转染细胞后的Cx43 mRNA和蛋白相对表达水平分别为(0.45±0.08)%、(0.56±0.06)%,与siRNA阴性对照组(0.72±0.04)%、(0.80±0.08)%和空白对照组(0.74±0.09)%、(0.77±0.11)%相比,差异均有显著性(P(0.05);转染后的细胞间间隙连接通讯功能也显著降低。结论:siRNA能有效抑制人阴茎海绵体平滑肌细胞Cx43的表达和阻断间隙连接介导的间隙连接通讯功能。     

Osteoblast and osteocyte‐specific loss of Connexin43 results in delayed bone formation and healing during murine fracture healing

Connexin43 (Cx43) plays an important role in osteoblastic differentiation in vitro, and bone formation in vivo. Mice with osteoblast/osteocyte‐specific loss of Cx43 display decreased gap junctional intercellular communication (GJIC), bone density, and cortical thickness. To determine the role of Cx43 in fracture healing, a closed femur fracture was induced in Osteocalcin‐Cre+; Cx43^flox/flox (Cx43cKO) and Cre‐; Cx43^flox/flox (WT) mice. We tested the hypothesis that loss of Cx43 results in decreased bone formation and impaired healing following fracture. Here, we show that osteoblast and osteocyte‐specific deletion of Cx43 results in decreased bone formation, bone remodeling, and mechanical properties during fracture healing. Cx43cKO mice display decreased bone volume, total volume, and fewer TRAP+ osteoclasts. Furthermore, loss of Cx43 in mature osteoblasts and osteocytes results in a significant decrease in torsional rigidity between 21 and 35 days post‐fracture, compared to WT mice. These studies identify a novel role for the gap junction protein Cx43 during fracture healing, suggesting that loss of Cx43 can result in both decreased bone formation and bone resorption. Therefore, enhancing Cx43 expression or GJIC may provide a novel means to enhance bone formation during fracture healing. © 2012 Orthopaedic Research Society. Published by Wiley Periodicals, Inc. J Orthop Res 31:147–154, 2012