高乳糜样品对透射比浊法测定影响的实验研究

目的探讨高乳糜样品对透射比浊法测定结果的影响及相关分析。方法以载脂蛋白B(ApoB)免疫透射比浊法为例,用两点终点法测定加入不同浓度脂肪乳剂的不同浓度混合血清,观察其结果变化。结果本次实验中当空白吸光度<0.1A,对测定结果影响无统计学差异;当空白吸光度>0.1A时,测定结果有显著差异(P<0.01)。结论对高乳糜样品进行测定时,应对样品进行一定比例稀释,以消除脂浊影响,保证结果的准确性。     

类风湿因子在全自动生化分析仪上检测的钩状效应研究

目的探讨特定蛋白开放检测系统在Beckman Coulter AU5400全自动生化分析仪上钩状效应的监测方法。方法以免疫透射比浊法测定类风湿因子(RF)为研究对象,在分析测量范围及最大稀释倍数确认的前提下,通过一系列浓度梯度RF样品的检测,比较不同浓度RF样品时间-吸光度反应曲线中特定时间段吸光度上升速率及绝对差值的差异,选择合适的钩状效应识别参数。结果确认RF分析测量范围为13.8~135.8U/mL,最大稀释倍数为10倍,剂量-反应曲线平衡点浓度为133.3U/mL;当RF抗原过量时,时间-吸光度反应曲线吸光度峰值出现在6min(13~15读点)前后,选择15读点减去11读点吸光度与25读点减去11读点吸光度的比值0.800 0作为抗原过量判断标准,并以15读点到0读点吸光度差值0.300 0作为低浓度样品的排除标准。结论 Beckman Coulter AU5400全自动生化分析仪上可通过充分的性能确认及正确的参数设置,避免特定蛋白检测过程中由于钩状效应引起的结果偏差。     

免疫透射比浊法测定纤维蛋白原标准曲线拟合公式的选定

本文采用手工操作,以免疫透射比浊法(波长 405nm)绘制纤维蛋白原标准工作曲线,用浓度(X)和相应吸光度(Y)对6种不同回归方程进行验证,比较其准确性.结果表明,纤维蛋白原用方程lgY=a +blgx计算较为合适.     

胶乳增强免疫透射比浊法测定全血糖化血红蛋白A1c

目的建立胶乳增强免疫透射比浊法测定全血中的糖化血红蛋白A1c.方法用免疫透射比浊法测定糖化血红蛋白A1c,并对其重复性、准确性、线性范围、相关性实验和干扰实验加以评价.结果高、低浓度的糖化血红蛋白A1c批内CV为3.2%和4.1%;批间CV为4.6%和5.8%,总CV分别为6.7%和4.6%.线性范围为2%～15%;平均回收率分别为106.7%和102.4%.与微柱法测定结果比较具有良好的相关性(P>0.05).一定程度脂浊和黄疸对测定无明显干扰,抗坏血酸对测定无影响.结论胶乳增强免疫透射比浊法测定糖化血红蛋白A1c具有较好精密度和准确度,并且快速、灵敏和可靠,适合临床实验室常规开展.     

样品体积分数影响APO-A1校准曲线的实验分析

随着栽脂蛋白检测在心血管疾病的预防和诊治中越显重要.通常我们用简便、灵敏度高和重复性好的免疫透射比浊法在自动生化仪上测定,基本能满足临床准确快捷的测定要求.市场上可供选择的试剂很多,性能有所差别,选择不好可直接影响到血脂检验质量,经过一个时期的应用我们发现无论进口试剂还是国产试剂,在测定时产生的吸光度(A)的高低不仅取决于试剂中抗体的性能,PEG浓度及激活剂等,同时还取决于样品体积分数.     

消除脂蛋白对直接法测定高密度脂蛋白胆固醇影响的方法探讨

目的研究消除脂蛋白对直接法测定高密度脂蛋白胆固醇影响的方法.方法用选择性抑制法直接测定.将测定波长放在所用色原的最大吸收峰处,用双波长下去样品空白法和二点法消除干扰.[KG2〗结果(1)双波长测定的非特异性反应明显小于单波长测定,而双波长下的去样品空白法和二点法测定则进一步缩小了非特异性反应.(2)与推荐方法磷钨酸镁法比较,去样品空白法和二点法的偏差分别为1.73%和2.17%,均小于不去样品空白法的5.6%.(3)乳糜微粒所致的标本混浊和三酰甘油浓度高达11.03mmol/L时,对去样品空白法和二点法测定无影响.(4)低密度脂蛋白(LDL)加入量达5g/L,总胆固醇(TC)和低密度脂蛋白-胆固醇(LDL-C)浓度高达18.7mmol/L和16.59mmol/L时,对去样品空白法无影响LDL加入量在4.17g/L,TC和LDL-C浓度在15.43mmol/L和13.27mmol/L时,对二点法形成小的负干扰.(5)未去样品空白法在乳糜微粒所致的标本混浊,TG浓度＞4.69mmol/L和LDL加入量从0.88g/L到5g/L时,均受正干扰.结论双波长下的去样品空白法和二点法能有效消除脂蛋白对直接法测定高密度脂蛋白胆固醇的影响.     

内源性疑似干扰物对ELISA检测结果的影响

目的探讨样品中存在的一些内源性干扰物(结合胆红素、溶血血红蛋白及乳糜)对酶联免疫吸附试验(ELISA)检测结果的干扰。方法选取双抗体夹心法、竞争法、捕获法、间接法4种ELISA中具有代表性的4个项目,采用实验添加法将结合胆红素、溶血血红蛋白及乳糜3种内源性干扰物添加到新鲜混合血清中配制成极限浓度(结合胆红素浓度为344μmol/L、溶血血红蛋白浓度为4.95 g/L、乳糜为1460FTU)样品与正常对照组,共24组同时检测,并对检测结果吸光度(A值)进行差异分析。结果上述浓度的内源性干扰物样品ELISA 4种方法检测结果与正常对照组检测结果A值差异无统计学意义(P>0.05),仅竞争法乙型肝炎病毒e抗体阳性的福尔马肼浊度小于或等于1460FTU研究组,与正常对照组的检测结果A值差异有统计学意义(P<0.05)。结论当样品中干扰物浓度未超过以上浓度时,不对ELISA的检测结果产生干扰,但检验工作中仍需注意含有大于以上浓度干扰物质的样品可能会对检测结果产生影响,对其应采取前处理或重新采血检测的办法。     

AST试剂中NADH含量变化对线性范围影响的研究

目的 评估天门冬氨酸氨基转移酶(AST)试剂中还原型辅酶(NADH)含量变化对试剂盒线性范围的影响。方法 对两个具有不同NADH含量的同一品牌AST试剂的线性范围、精密度、灵敏度、试剂空白等性能指标分别进行验证,利用己糖激酶法测定葡萄糖浓度的方法测定NADH的摩尔消光系数,进而评估NADH浓度变化对分析性能的影响。结果 较高及较低NADH浓度AST试剂的R1试剂中NADH浓度分别为0.21 mmol/L(基础吸光度为1.187 6)和0.13 mmol/L(基础吸光度为0.7567),NADH浓度降低可造成试剂盒的线性范围减小,检测上限由1 629 U/L降至1 263 U/L。NADH浓度变化对两种试剂的精密度、灵敏度、试剂空白等性能指标无明显影响。结论 AST试剂盒的R1试剂中NADH浓度降低(基础吸光度减小)可造成样品检测线性范围减小,因此实验室通过合适的线性评估方案定义其AST试剂能够满足线性范围的基础吸光度标准,对于判断试剂质量、保证高值结果准确是很重要的。     

免疫透射比浊法自建检测系统钩状效应性能确认方法的建立

目的建立免疫透射比浊法自建检测系统钩状效应性能的确认方法。方法采用AU5400全自动生化分析仪,选取3种非配套免疫透射比浊法IgG试剂盒(试剂A、试剂B、试剂C),通过对不同浓度IgG样本进行检测,绘制Heidel-berger曲线,确定平衡点及安全范围。比较不同IgG试剂从抗原适量到过量的过程中,快速反应期内吸光度(A)值变化速率、达到峰值时间及上升幅度的差异,确认3种非配套IgG试剂钩状效应的识别参数。结果 3种非配套IgG试剂(试剂A、试剂B、试剂C)的Heidel-berger曲线平衡点浓度分别为49.0、42.0、105.0 g/L;安全范围分别为35.0～90.0、20.0～75.0、33.0～120.0 g/L。试剂A、试剂B、试剂C钩状效应报警的浓度范围分别为49～350、28～70、42～350 g/L。结论免疫透射比浊法自建检测系统可通过钩状效应性能确认方法建立相关识别参数,以确保检测结果的准确、可靠。     

透射和散射比浊法测定血清免疫球蛋白的评价

目的对同一临床实验室采用透射比浊和散射比浊法测定血清免疫球蛋白IgA、IgG和IgM结果偏差进行评估。方法按照美国国家实验室标准委员会(NCCLS)EP9A文件,以散射比浊为比较方法,透射比浊为实验方法进行对比及偏差评估,将测定数据进行相关分析,并对两分析系统之间的预期偏差进行评估。结果IgA、IgG两法各浓度值测定结果的预期偏差均可以接受;IgM浓度为1.0g/L时,两法测定结果的预期偏差不能接受,其余浓度值测定结果的预期偏差可以接受。结论在使用性能较好的全自动生化分析仪及配套试剂的前提下,透射比浊法测定血清IgA、IgG和IgM的结果与散射比浊法的测定结果基本一致。     

血清白蛋白测定(BCG法)试剂盒中BCG、Brij-35浓度及工作液pH值对测定结果的影响

根据对市售21家生产的用溴甲酸绿法测定血清白蛋白试剂盒检定结果的研究分析,发现它们的终浓度有较大差异,直接影响测定血清白蛋白的结果．为此我们以DoumasBCG法为基础,分别观察不同BCG、Brji-35浓度和工作液pH值,对试剂测定白蛋白测定的灵敏度（△A＝A4．0g／L－AR．B）、不准确反（与定值质控血清靶值比较的偏差）及试剂空白吸光值A628nm三方面的影响,得出①工作浪pH王好控制在pH4．20±0.05范围内,不得超出pH4．20±0.10．②卫生部颁发的溴甲酚绿法测定血清白蛋白质量暂行技术标准中应增设试剂空白吸光值的下限．③当pH一定时（pH4．20±0．05）,试剂空白吸光度值在接受BCG和Brij-35浓度的影响,两者的加入量应控制在一定比例即：BCG：Brij－35＝1:11．     

不同电导率的纯水对Ca试剂空白吸光度的影响

目的 对纯水的电导率进行监测,了解不同电导率的纯水对Ca试剂空白吸光度的影响.方法 用纯水机制备纯水,监测电导率,分别采用不同电导率下的纯水测定Ca试剂空白,将结果进行统计分析.结果在电导率0~40 μs/cm之间时,Ca试剂空白吸光度值在0.112 5~0.169 2之间,符合实验试剂的性能指标;随着电导率升高,Ca试剂空白吸光度值也越高,差异有统计学意义(P<0.05).结论 实验纯水的质量是影响检验结果准确性和精密性的因素,同时也是保证仪器正常运行的因素,需引起重视.     

免疫透射比浊法定标方式的探讨

目的研究不同的定标方式对免疫透射比浊法测定免疫球蛋白、补体结果的影响。方法使用OLYMPUS AU640自动生化分析仪和立德曼免疫透射比浊法试剂,采用不同的定标方法对40例血清的IgG,IgA,IgM,C3和C4进行测定。结果使用多标准POLYGONAL和SPLINE方法拟合定标曲线后测定结果表现良好的一致性,多点定标与单点定标测定结果具有显著性差异。结论免疫透射比浊测定,应当根据仪器情况,选择适当的非线性曲线拟合方式建立标准工作曲线。     

改良酶法肌酐测定试剂的研制

目的探讨建立一种改良酶法肌酐(Cr)测定试剂,并考察其与进口Cr测定试剂(日本东洋纺公司酶法Cr试剂)对血清测定的可比性及偏倚。方法采用酶法测定Cr反应前后吸光度的变化,探讨试剂各成分和浓度对检测性能的影响,并在同一台全自动生化分析仪上同时测定两种试剂的空白吸光度(A值)、分析灵敏度,对自主研发试剂的精密度、线性范围及方法学指标进行评价。结果自主研发试剂的空白A值为0.009,分析灵敏度的A值变化率为0.13,优于进口试剂。自主研发试剂高、低值血清测定变异系数分别为1.5%和1.1%;线性范围为0~2 850μmol/L;方法学比对回归方程为Y=0.98 X+1.15,r=0.999;估计偏倚低于允许误差。以相对偏差不小于10%作为有明显干扰的评判指标,结果显示35mmol/L肌酸、3.42mmol/L胆红素、0.03g/L维生素C、5g/L血红蛋白、1 450浊度乳糜对高、低值浓度标本检测结果均无干扰。结论自主研发的Cr测定试剂性能良好,与进口试剂之间具有良好的相关性,符合临床应用基本要求。     

原子吸收光谱仪测定血锌时不同进样位置致系统误差分析

目的 分析火焰原子吸收光谱仪测定锌(Zn)时不同水平进样位置所测结果存在的系统误差.方法 从儿童保健门诊的100例儿童静脉血标本中随机抽取20份标本,采用随机分组设计的方法,每份标本制成可以认为锌浓度相同的5份待测样品,然后随机分配到A、B、C、D、E 5个进样点测定Zn的吸光度(OD)值,其中E点为对照点,标准液测定和空白液调零均在次位置进行,对5组数据进行方差分析.结果 除A点外,B、C、D 3点与对照点E比较,差异均有统计学意义(P<0.01),且与对照点E的OD值差总是为正数或者负数.结论 用火焰原子吸收光谱法测定全血锌时,同一样本在不同进样位置测定可能存在系统误差,测定时最好固定水平进样位置.     

血清钙甲基百里香酚兰测定中EDTA添加量的计算

在血清钙甲基百里香酚兰(MTB)试剂中递增加入EDTA,空白管吸光度初呈线性下降,当浓度增至某一值后突然趋向水平(见附图).添加EDTA 可明显降底空白吸光度,它的最适量当应选在曲线的转折点上.过高致使过量EDTA 作用于血清钙影响标本     

三种方法测定血浆纤维蛋白原的结果比对

目的对克劳斯（vonClauss）法、免疫透射比浊法、凝血酶原时间（PT）演算法（PT—Der法）测定纤维蛋白原的结果进行评价并探讨其影响因素。方法用以上三种方法分别测定40例一般患者（Ⅰ组）、20例心脑血管病患者（Ⅱ组）、20例纤维蛋白原含量减少患者（Ⅲ组）的纤维蛋白原（Fib）,并对高、中、低值Fib分别作批内、批间精密度及黄疸、溶血、脂血分析,结果用SPSS10．0软件进行统计学处理。结果在重复性实验中,vonClauss法精密度最高,免疫透射比浊法精密度良好。PT—Der法精密度高值较差,中、低值良好。Ⅰ组Fib差异无统计学意义;Ⅱ组差异有统计学意义;Ⅲ组PT—Der法Fib值差异有统计学意义,免疫透射比浊法结果差异无统计学意义。严重脂血PT-Der法有显著性差异。结论vonClauss法测定Fib精密度高,与免疫透射比浊法均不受黄疸、脂血、溶血标本的影响。PT—Der法、免疫透射比浊法对高、低值Fib测定有不同程度的差异,可用于手术前常规检查或健康人体检筛查。对高、低值标本最好采用vonClauss法。     

光电比色计算中的K值

在光电比色计算时配制一系列浓度不同的标准液,分别测其吸光度。然后以吸光度除以浓度,求出平均每一单位浓度的吸光数。此数字在同样条件下测定是个常数(K),测定时以测定液的吸光度除以此常数或者乘此常数的倒数(因素),即得测定液浓度。测定浓度=测定吸光度×(1/K);K=A/C。(A=     

狼疮肾炎患者尿足细胞标志蛋白水平检测及临床应用

目的:了解免疫透射比浊法测定尿足细胞标志蛋白(podocalyxin,PCX)水平对于狼疮肾炎(lupus nephritis,LN)肾损害的诊断及疗效观察的应用.方法:对45例LN患者治疗前后和52例健康对照组采用免疫透射比浊法测定尿PCX水平和24 h尿蛋白,并对检测结果进行统计学分析.结果:LN患者尿PCX水平为(50.2±10.2) μg/24 h,明显高于健康对照组的(3.95±1.17)μg/24 h(P＜ 0.01),与24 h尿蛋白定量存在相关性;LN患者治疗前尿PCX水平为(50.2±10.2) μg/24 h,与治疗后尿PCX水平(17.9±4.5) μ g/24 h比较有显著差异(P＜0.01).结论:采用免疫透射比浊法测定尿PCX水平有助于LN肾损害的诊断和疗效观察.     

品红亚硫酸法测定甲醇影响因素的研究

目的 研究品红亚硫酸法测定甲醇的影响因素,方法 往不同体积的甲醇标准使用注中依次加入各种试剂,静置显色后,生成蓝紫色化合物,以0管调零测定其吸先度,分别研究显色时间、乙醇浓度和显色温度对甲醇测定的影响.结果 保持乙醇浓度6.0 ml/dl,显色温度30℃不变.各管吸光度随显色时间的增加而增加;保持显色时间30 min,显色温度30℃不变,各管吸光度随乙醇浓度的增加而战小;保持乙醇浓度6.0 ml/dl和显色时间30 min不变,各管吸光度随显色温度的增加而增加.结论 当乙醇浓度为6.0 ml/dl,在30℃下显色30 min可以得到最好的吸光度值(0.2～0.5),为最佳显色条件.