Ⅰ型人类免疫缺陷症病毒的快速、敏感的培养方法

作者从142例1型人类免疫缺陷症病毒(HIV-1)抗体阳性患者(57例为HIV-1抗体阳性的艾滋病患者;15例为HIV-1抗体阳性的艾滋病相关复征患者;70例为HIV-1抗体阳性的无症状患者)和30名HIV-1抗体阴性的献血者血液中分离到外周血单个核细胞(PBMC)。将患者的10~7PBMC种入含T细胞生长因子的培养液,同时种入献血者的未洗涤的5×10~6PBMC(经植物血凝素-P刺激)。最终的细胞悬液的体积为15ml,培养于50ml瓶中。在37℃、5%CO_2条件下培养28天。每隔3～4天吸取7m上层培养液检测HIV-1抗原,并换以等量新鲜的T细胞生长因子     

西咪替丁抑制再生障碍性贫血小鼠脾细胞产生干扰素γ和肿瘤坏死因子α(英文)

目的:研究西咪替丁对免疫介导再生障碍性贫血小鼠淋巴细胞产生IFNγ和TNFα的影响。方法:亚致死量照射后输注异种淋巴细胞构建再障小鼠,用LPS或PHA-P刺激脾脏细胞产生TNFα或IFNγ,夹心ELISA法检测诱生的IFNγ浓度,用L929细胞毒法测定TNFα水平。结果:(1)再障鼠淋巴细胞诱生的IFNγ和TNFα浓度分别为(137±36)ng/L and(6±3)μg/L,均高于单纯放射组及对照组;(2)用西咪替丁处理淋巴细胞后,再障小鼠淋巴细胞产生的IFNγ和TNFα水平下降,分别为(14±8)ng/L和(2.7±0.6)μg/L。结论:西咪替丁能有效减少再障小鼠脾淋巴细胞IFNγ和TNFα的产生。     

一种改进的通透性处理方法用于胞内抗原的流式细胞仪测定(IL-2产生的分析)

淋巴类细胞激活的最重要变化是细胞变大、增殖和白细胞介素(IL)的产生。对此,可用DNA染色,抗增殖性核抗原抗体或抗IL抗体进行研究,故需增加细胞膜的通透性。本文介绍一种细胞膜通透性化学处理的改进方法,即将细胞用冰冷的等渗缓冲液洗两次后,重悬于培养液中,密度为2×10~6细胞数/ml。取100μl细胞悬液与5μg/ml溶血卵磷脂     

干扰素治疗脊髓灰质炎

本文报道用天然α干扰素(αIFN)治疗两例IFN生物学应答缺陷的延髓脊髓灰质炎患者的结果.例1,16月龄患儿,开始发热,2～3天内出现两腿无力并很快发展成四肢瘫痪和吞咽困难.入院检查发现血及脑脊液(CSF)中无IFN,用植物血凝素(PHA)刺激外周血单核细胞(PBMC),γIFN产量异常砥(12U/ml,PBMC并不处于抗病毒状态.血清中脊髓灰质炎抗体效价为1∶4,拟诊脊髓灰质炎.用IFNα肌肉注射治疗,1×10~6U/天,共16天(最后1周隔日1次).用药的第2天未发现病情进一步恶化:几天后神经系统症状改善,第10天     

大规模浓缩提纯微载体培养的病毒悬液制备灭活病毒疫苗

本实验室采用DEAE-SephadexA50珠为微载体,大规模培养原代细胞以生产灭活脊髓灰质炎和狂犬病毒疫苗。由于DEAE-SephadexA50具有阴离子交换的能力,故接种病毒前不能用无血清培养液或缓冲液洗涤去除细胞培养中的残余牛血清蛋白。用该细胞培养收获的病毒悬液如用于制备人用疫苗,将含有过高水平的血清蛋白,多次接种会引起过敏反应。本文报道能去除病毒悬液中残余血清蛋白的浓缩提纯方法。病毒悬液中残余牛血清蛋白含量用Exa-Phore稀释标准血清和样品的对流免疫电泳测定,可测出1∶10~6稀释血清中的白蛋白和1∶1.28×10~5稀释血清中的免疫球蛋白,分别相当于0.03μg/ml浓度的白蛋白和0.23μg/ml浓度的免疫球蛋白。病毒悬液浓缩和提纯前先经Pall滤器澄清过滤。     

肿瘤浸润淋巴细胞的TNF-α、IFN-γ分泌情况研究

目的　检测胃腺癌肿瘤浸润淋巴细胞 (TIL )经 IL - 2激活培养其上清内各时间点的 TNF-α、 IFN-γ含量 ,探讨 TIL 的激活状态和过继免疫治疗的时间选择。方法　提取多个病人的胃腺癌肿瘤浸润淋巴细胞 ,用淋巴细胞培养液培养 4 8h后 ,调整 TIL 丰度为 2× 10 6 /m l。取 2 ml单独培养 ,培养的第 4天提取上清液 1ml并再次调整TIL丰度为 2× 10 6 /ml,之后依照同样的方式提取 6、 8、 10、 12、 14天 TIL的培养上清液。 EL ISA检测 TNF-α、 IFN -γ浓度。结果　 TNF- α随 TIL 培养时间的延长培养液中的浓度倾向增高 ,以培养的第 12天以后变化为剧。总体上IFN- γ浓度也有随培养时间延长倾向增高的趋势 ,培养的第 10～ 12天以后浓度变化较显著。结论　 TIL 分泌的 TNF-α、 IFN-γ有随培养时间延长而浓度增高的趋势 ,培养的第 12天后增高显著 ,提示 TIL于培养的 12天后表现出激活迹象 ,免疫过继治疗宜在 TIL 培养的 12天后进行。     

干扰素抗病毒作用的免疫酶定量试验

本文介绍了用酶联免疫吸附试验(ELISA)定量测定干扰素(IFN)抗病毒作用的方法。将在细胞生长培养液中经2倍系列稀释的50μl IFN置予组织培养板微孔中,加等量人WISH细胞(5×10~4/孔),37℃孵育过夜后感染水泡性口炎病毒(VSV)[2,000空斑形成     

S_(801)和S_(7811)白血病细胞系的干扰素诱生试验

用我室自建的S_(801)和S_(7811)白血病细胞系进行干扰素诱生试验。当诱生细胞在5～8×10~6细胞/ml浓度时,加入新城疫病毒或仙台病毒,于37℃培养20～22小时,离心后收集上清,经用HCl调至pH2.0,在4℃灭活残余病毒5天后,干扰素滴度一般在3200u/ml,这两个细胞系均可用于干扰素的生产。     

PHA对单产和联产白细胞介素-2活性的影响

本文研究了用人外周血白细胞在细胞浓度为5×10~5个/ml、培养时间为24h,PHA加量对单独生产白细胞介素_2(单产)及联合生产a_干扰素、白细胞介素-2(联产)的影响.单产中,以25μg/mlPHA刺激量为宜;联产中以100μg/ml刺激量最好.联产比单产所得白细胞介素-2产量高10倍以上,且纯度高.     

仙鹤草驱绦虫有效成分的研究 11.鹤草酚的杀精子作用

本文实验证明,仙鹤草根芽石油醚提取物、鹤草酚和鹤草酚制成的药膜均有杀精子作用。仙鹤草根芽石油醚提取物配制的悬液和鹤草酚配制的悬液均可杀死动物和人的精子;在不同种动物精子中,杀死家兔精子的药物浓度(3×10~(-4)g/ml)稍低于杀死小白鼠和豚鼠精子的药物浓度(5×10~(-4)g/ml);对于人精子,杀死稀释精液精子的药物浓度(5×10(-4) g/ml)低于杀死原精子的药物浓度( 2 x 10(-3)/m 1)。鹤草酚药膜配制的悬液杀死动物精子的浓度,按鹤草酚含量计算,基本与仙鹤草根芽石油醚提取物悬液和鹤草酚悬液的浓度同相。     

用快速光电法检测接种过BCG的健康成人和结核病人的白细胞移动抑制情况

本文报道用一种敏感的光电法测定琼脂糖小滴中人外周血白细胞移动抑制(LMI)情况。用199培基将结核菌素纯蛋白衍化物(PPD)作系列稀释,从10~(-8)到2500μg/ml。从儿童期接种过BCG的健康献血员和结核病人中采集静脉血,加抗凝剂并分离白细胞。用199培基配制的0.2%琼脂糖稀释白细胞使其浓度为2×10~8/ml。将琼脂糖细胞液滴在Ste-     

甘草酸对兔红细胞膜N_a~+-K~+ATP酶的抑制作用及其动力学特征

甘草酸在使用浓度为4×10~(-3)mg/ml和4×10~(-2)mg/ml时,对兔红细胞膜Ka~+-K~+ATP酶产生明显的抑制作用。其50%抑制率时的药物浓度为14.6±0.9μg/ml。抑制作用呈竞争—非竞争型混合抑制。本实验条件下测得的Ki值为2.2μg/ml。     

α、β和γ扰素对人白细胞介素2产生的作用

作者选择刀豆素A、葡萄球菌肠毒素A(SEA)及金黄色葡萄球菌(SAU,90℃,10分钟灭活)作为白细胞介素2(IL-2)的诱生剂,刺激人外周血单个核细胞(PBMC)产生IL-2。用小鼠IL-2依赖性细胞毒性T淋巴细胞(CTLL)及胸腺细胞增殖法检测IL-2活性。PBMC预处理的方法有两种:一种方法是以不同浓度的干扰素(IFN)在37℃下对PBMC预处     

重组人肿瘤坏死因子与重组人γ干扰素的抗肿瘤协同作用

许多研究表明,肿瘤坏死因子(TNF)具有抗肿瘤作用。然而,TNF的细胞毒性谱虽已确定,但即使是同一来源的肿瘤细胞对WF的敏感性可能也不同。TNF与其他药物联合治疗似可克服上述细胞敏感性的差异,提高TNF的抗肿瘤作用,减少副作用。为此,作者从下述三方面进行了研究。 1.TNF与重组γ干扰素(IFN-γ)在体外的协同作用:在人鼻咽癌KB细胞、人结肠癌RPMI细胞和人肺癌PC-10细胞(各为2×10~4/ml)中,分别加入TNF(0.6～1×10~4U/ml)和IFN-γ(10～1×10~5U/ml),经培养96小时     

抗坏血酸体外灭活人类免疫缺陷症病毒

作者报道了RPMI培养液、全血(WB)或去白细胞的血液(LDB)中较高浓度的抗坏血酸(AA)对人类免疫缺陷症病毒(HIV)的体外灭活的作用。 首先进行无细胞(CF)HIV滴定,以指示细胞的合胞体形成单位(sfu)表示病毒含量。在RPMI培养液、WB及LDB中均加入终浓度为0.25×10~5sfu的CFHIV。其中RPMI(4份)中AA浓度分别为62.5、125、250和500μg/ml,WB及LDB中AA浓度为500μg/ml。混合液经4C保温3小时后,将RPMI、WB     

用不同的α干扰素制剂治疗的肝炎患者中抗干扰素的非中和抗体的相对发生率

业已证明,患者经干扰素(IFN)治疗后能产生抗IFN抗体。最近报道,肝炎患者用重组干扰素-α2a(rIFN-α2a)和重组干扰素-α2b(rIFN-α2b)治疗后,出现抗IFN-α的中和抗体。作者认为,不同的IFN-α制剂诱生能力不同,并用酶免疫测定法(EIA)检测中和及非中和抗体,确定用IFN治疗肝炎患者后的相对血清阳转率。     

子宫内膜异位症患者TH细胞活性状态的研究

目的 探讨子宫内膜异位症患者TH细胞活性状态;方法 应用细胞因子体外诱生培养及 ELISA技术对子宫内膜异位患者及健康生育年龄妇女外周血单个核细胞(PBMC)培养诱生上清及血浆中TH1类因子(IL-2,IFN-γ)TH2类因子IL-4的含量进行测定。结果 (1)EM患者血浆中IL-2的水平比对照组明显升高,差异有显著性(P<0.01)。(2)在PBMC诱生培养上清中,除了轻度异位症病人的IL-4水平与正常对照组比较差异无显著性外,其余各组IL-2,IL-4,IFN-γ的诱生水平与正常对照组相比差异均有统计学意义。结论 子宫内膜异位症患者体内TH细胞活性发生改变,在疾病早期以TH1细胞为主,随着病情加重,逐渐以TH2细胞占优势、IL-2在异位症致不孕中起了一定作用。测定TH1、TH2因子,对深入了解异位症的发病机理有重要意义。     

新类型酸性色素定量胺类化合物的研究:羊毛罂粟蓝测定胺类药物

前报报道了自70种色素中研究选出测定胺类的两种色素之一:二甲苯蓝(XC),本文报道另一种色素:羊毛罂粟蓝(EG)。经研究得出:EG对亲脂性较大的胺,苯乙托品(Ⅰ)的检出限为15ng/ml,苯乃辛(Ⅱ)为20 ng/ml,其吸收系数(E_(1cm)~(1%))(Ⅰ为36.89×10~2,Ⅱ为24.36×10~2)为溴百里酚蓝(BTIJ)的4.6～5.9倍。EG—胺配合物的氯仿液呈绿蓝色,λ_(max)635.5nm。测定时色素浓度应为2×10~(-3)mol/L。检量线在0～7(Ⅰ)与0～10(Ⅱ)μg/ml为直线。EG—胺配合物的分子比在EG浓度为2×10~(-3)mol/L时,EG:Ⅱ=1:1;2×10~(-4)mol/L时则为0.5:1。Ⅰ则在EG浓度不同时分子比基本不变,为1.3:1。用EG测定Ⅰ或Ⅱ0.2μg/ml时,CV在±5%以内;2.5,5.0,10.0μg/ml时为±1～2%。EG与XC一样,为文献上尚未用来测定胺类的新类型酸性色素,属同一类,其基本构造为:■     

羧甲基茯苓多糖对人外周血淋巴细胞分泌IFN-α和IFN-γ的调节作用及中间体制备

用羧甲基茯苓多糖（CMP）预处理人外周血淋巴细胞（HPBL），经200IU／mlIFN－α启动后，加NDV的促诱生组的α-干扰素（IFN－α）效价比无CMP的常规诱生组高1．2倍；经PHA和／或ConA促诱生组的γ-干扰素（IFN－γ）效价比无CMP的PHA和／或ConA刺激常规诱生组高0．5倍（P＜0.01），尤以CMP＋PHA＋ConA促诱生的IFN－γ效果最佳。说明CMP具有IFN－α和IFN－γ促诱生效应（P＜0．01）。用CMP促诱生的IFN－α和IFN－γ中间体经各项指标检测不仅IFN－α和IFN－γ效价高，而且可达到生物制剂药用标准，经临床试验证明安全有效。     

环硫雄醇抗人乳腺癌和子宫颈癌细胞生长的作用

环硫雄醇(Epitiostanol)学名:2α,3α-环硫-5α-雄甾-17β醇,据报道有抗癌作用。最近我们在国内首次人工合成环硫雄醇纯品,并以免疫抑制小鼠及人乳腺癌细胞株(BCap-37)和子宫颈癌细胞株(HeLa)为模型,进行了抗癌活性的研究。实验方法与结果一、剂量反应试验:BCap-37及HeLa细胞传代并各接种21瓶(3×10~5细胞/瓶),随机分成7组,每3瓶一组;置37℃温箱培养24小时后更换新鲜培养液,分别加入0、50、100、250、500、1000μg/ml的环硫雄醇及50ml蒸馏水;在37℃温箱内作用12小时后以苔盼蓝排除法计算各剂量组的细胞存活率,取存活率50％对应剂量作为实验剂量。细胞存活率=(存活细胞数+修正数)/(3×10~5)×100％ (修正数=3×10~5-空白组细胞存活数)本实验结果取500μg/ml为实验剂量。