次声作用后大鼠脑中热休克蛋白70的表达和分布

观察次声作用后大鼠脑中热休克蛋白ＨＳＰ７０的表达和分布。方法：ＳＤ大鼠接受频率为８Ｈｚ和１６Ｈｚ，声压为９０ｄＢ和１２０ｄＢ次分别作用１，３，７，１４，２１ｄ后，采用免疫组织化学方法观察大鼠脑中ＨＳＰ７０的表达和分布。结果：各参数次声作一定时间后，ＨＳＰ７０阳性神经元主要布在下丘脑，边缘系统，听觉中枢，皮质，海马等脑区，各脑区出现阳性反应的时间不同，且随次声频率增高、声压增强及作用次数增加，ＨＳＰ     

人胃癌细胞热耐受性与热休克蛋白70的关系

目的观察４１℃６０ｍｉｎ温热作用后人胃癌细胞ＢＧＣ－８２３热耐受性和ＨＳＰ７０表达的变化。方法４１℃６０ｍｉｎ温热作用后不同时间，测定细胞４３℃６０ｍｉｎ温热再作用的克隆形成率，并进行细胞ＨＳＰ７０免疫组化分析。结果①４１℃诱导后即时细胞已形成较高的热耐受性，４ｈ有所降低，８ｈ达到高峰（Ｐ＜０．０１），２４ｈ恢复近原有水平；②ＢＧＣ－８２３细胞常温下表达少量ＨＳＰ７０，并且主要分布于胞浆内；４１℃诱导后即时ＨＳＰ７０的表达量并未增加，但核内染色加深（Ｐ＜０．０１）；诱导后４ｈ开始增加（Ｐ＜０．０１），８～１６ｈ达到高峰，并主要在核内（Ｐ＜０．０１）；２４ｈ衰减至近原有水平（Ｐ＞０．０５）。结论４１℃温热诱导后ＢＧＣ－８２３细胞形成的热耐受性包括两部分：一部分为即时、非ＨＳＰ７０依赖的，另一部分为ＨＳＰ７０依赖的热耐受性。     

人骨形成蛋白-2对人脑胶质瘤细胞周期和增殖的影响

目的 探讨人骨形成蛋白（ｒｈＢＭＰ－２）对体内,外人脑胶质瘤ＳＨＧ４４细胞周期和增殖的影响。方法 体外培养人脑胶质瘤细胞,绘制ｒｈＢＭＰ－２作用前、后的ＳＨＧ４４细胞生长曲线,ＭＴＴ法测定ｒｈＢＭＰ－２对ＳＨＧ４４细胞的增殖影响;以流式细胞仪、电镜和琼脂糖凝胶电泳分别检测其细胞周期、超微结构和ＤＮＡ片段改变,观察局部注射ｒｈＢＭＰ－２对裸鼠皮下ＳＨＧ４４胶质瘤增长的影响,结果 ｒｈＢＭＰ－２可抑制     

HSP70在大肠癌细胞的表达规律

第一军医大学细胞生物与医学遗传学教研室,广东　广州　５１０５１５　摘要目的　探讨大肠癌细胞（ＬｏＶｏ株）热休克蛋白７０（Ｈｅａｔ　ｓｈｏｃｋ　ｐｒｏｔｅｉｎ　７０,ＨＳＰ７０）热应激时表达规律,为进一步研究ＨＳＰ７０在ＴＮＦ－α诱导大肠癌细胞凋亡中的作用提供了实验依据。方法培养大肠癌细胞 （ＬｏＶｏ）,热应激（４２℃, ３０ｍｉｎ）后分别培养２、 ５、 ８、１１ ｈ,然后运用免疫组化、Ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔ方法分析应激后不同时间细胞内ＨＳＰ７０的表达和分布。结果热应激２ｈ后ＨＳＰ７０合成量增加,与未应激组比有显著差异（Ｐ＜０．０５）,５～８ｈ后合成量最高（Ｐ＜０．０１）,１１ｈ后明显减少,与２ｈ染色情况基本相同。并观察到热应激细胞中胞核比胞质染色深,ＨＳＰ７０有核迁移现象。少量热应激死亡细胞的特异性染色更深。结论　热应激前ＨＳＰ７０在大肠癌细胞中合成较少,热应激后合成量增加,在 ５～８ ｈ达峰值后降低。     

脑缺血再灌流大鼠海马热休克蛋白70基因表达与细胞凋亡

脑缺血再灌流大鼠海马热休克蛋白７０基因表达与细胞凋亡路敦跃江德华通过观察大鼠前脑缺血后再灌流不同时间海马结构中热休克蛋白（ｈｅａｔｓｈｏｃｋｐｒｏｔｅｉｎ，ＨＳＰ）７０基因表达及细胞凋亡，探讨ＨＳＰ７０基因与缺血神经元凋亡的关系及意义。一、材料及方法...     

HSP70在大肠癌细胞的表达规律

目的 探讨大肠癌细胞（ＬｏＶｏ株）热休克蛋白７０（Ｈｅａｔ ｓｈｏｃｋ ｐｒｏｔｅｉｎ７０,ＨＳＰ７０）热应激时表达规律,为进一步研究ＨＳＰ７０在ＴＮＦ－α诱导大肠癌细胞凋亡中的作用提供了实验依据。方法 培养大肠癌细胞（ＬｏＶｏ）,热应激（４２℃,３０ｍｉｎ）后分别培养２、５、８、１１ｈ,然后运用免疫组化、Ｗｅｓｔｅｍｂｌｏｔ方法分析应激后不同时间细胞内ＨＳＰ７０的表达和分布。结果 热应激２ｈ后Ｈ     

人骨形成蛋白-2诱导人脑胶质瘤细胞凋亡的实验研究

目的 探讨重组人骨形成蛋白－２（ｒｈＢＭＰ－２）对体内、外人脑胶质瘤ＳＨＧ４４细胞生物学特性的影响。方法 绘制ｒｈＢＭＰ－２作用前、后的ＳＨＧ４４细胞生长曲线,ＭＴＴ法测定ｒｈＢＭＰ－２对ＳＨＧ４４细胞增殖的作用;以流式细胞仪、电镜和琼脂糖凝胶电泳分别检测其细胞周期、超微结构和ＤＮＡ片段改变;观察局部注射ｒｈＢＭＰ－２对裸鼠皮下ＳＨＧ４４胶质瘤增长的影响。结果 流式细胞检测显示,ｒｈＢＭＰ－２可抑     

一氧化氮诱导VSMC凋亡观察

目的研究动脉粥样硬化和冠脉气囊成形术后再狭窄中血管平滑肌细胞数量异常增多的机制,并初步探讨ＮＯ诱导血管平滑肌细胞凋亡的作用。材料和方法　以ＳＮＡＰ作为ＮＯ供体,采用ＨＥ,ＴＵＮＥＬ,荧光双染后光镜观察以及电镜、流式细胞术、细胞ＤＮＡ的琼脂糖凝胶电泳对ＳＮＡＰ作用下的细胞凋亡进行鉴定和检测。结果　观察发现, ０．４ｍｍｏｌ／Ｌ　 ＳＮＡＰ作用 ８－１０ ｈ即能明显地诱导培养的血管平滑肌细胞凋亡。结论 ＳＮＡＰ以浓度依赖方式诱导血管平滑肌细胞凋亡;细胞爬片的ＨＥ染色结合ＴＵＮＥＬ标记是检测凋亡的较为准确且简单的方法。     

血液光量子疗法影响热休克蛋白表达的研究

目的 探讨血光量子疗法对细胞ＨＳＰ７０表达的影响及血液光量子半法治疗作用的机理。方法 利用不同剂量紫外线（ＵＶ）照射体外培养的小鼠巨噬细胞,进行ＨＳＰ７０表达的Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹分析。;并用不同剂量ＵＶ照射大鼠血液后回输进行ＨＳＰ７０合成的Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹分析。结果 小剂量ＵＶ（３０秒钟）对照后细胞内ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ稍有增多,增大剂量（１分钟）后其表达明显增多;ＵＶ照射血液回输可引起大鼠肺、     

肝细胞刺激因子与阿霉素在人肝癌细胞凋亡的协同作用

目的　研究肝细胞刺激因子（ｈｅｐａｔｉｃ ｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｓｕｂｓｔａｎｃｅ , Ｈ Ｓ Ｓ） 对肝癌细胞凋亡的作用及与化疗药物的相互影响。方法体外培养人肝癌细胞（ Ｑ Ｇ Ｙ－ ７７０３） ,并用不同剂量的 Ｈ Ｓ Ｓ 及 Ｈ Ｓ Ｓ＋ 阿霉素（ Ａ Ｄ Ｒ） 处理,琼脂糖凝胶电泳分析 Ｄ Ｎ Ａ 片段。碘化丙锭染色,流式细胞仪观察细胞死亡率。结果　肝癌细胞在体外经 Ｈ Ｓ Ｓ,阿霉素及阿霉素＋ Ｈ Ｓ Ｓ 处理后,肝癌细胞发生凋亡。结论　 Ｈ Ｓ Ｓ可以诱导人肝癌细胞发生凋亡,阿霉素对 Ｈ Ｓ Ｓ 所致人肝癌细胞的凋亡有协同作用。     

端粒酶反义基因对恶性胶质瘤细胞生长的作用

目的研究端粒酶RNA的反义寡核苷酸(AODN)抗恶性胶质瘤细胞系的作用。方法采用脂质体包裹AODN转染恶性胶质瘤细胞系U251-MG细胞。用四唑盐MTT法测定细胞生长曲线,用端粒重复序列扩增法(TRAP)检测细胞的端粒酶活性变化;用流式细胞术检测凋亡细胞。结果2~8μmol/L AODN转染恶性胶质瘤细胞系,培养1~4 d,恶性胶质瘤细胞系端粒酶活性下降,且有剂量依赖性和时间依赖性。AODN转染的恶性胶质瘤细胞培养后细胞增生速度减慢,发生了细胞凋亡。而无义寡核苷酸则无此效应。结论AODN能特异性抑制恶性胶质瘤细胞的端粒酶活性,诱导细胞凋亡。     

壳寡糖对S180肉瘤细胞凋亡、细胞周期以及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的影响

目的探讨壳寡糖对S180肉瘤细胞的生物学效应，为其治疗肿瘤提供新的理论基础。方法体外实验：用流式细胞仪测壳寡糖作用下S180肉瘤细胞周期、细胞凋亡情况。体内实验：建立S180肉瘤小鼠皮下移植瘤模型，给予壳寡糖后，测瘤体积，并用免疫组化法测瘤组织Bax、Bcl-2蛋白的表达情况。结果体外实验：高浓度壳寡糖作用后S180肉瘤细胞阻滞于G0/G1期，同时S180肉瘤细胞凋亡增加。体内实验：壳寡糖对小鼠S180肉瘤有明显的抑制作用并能提高促凋亡基因Bax的表达，降低抑凋亡基因Bcl-2的表达。结论壳寡糖可抑制S180肉瘤细胞的生长，使S180细胞阻滞于G0／G1期并诱导其发生凋亡，其机制可能与Bcl-2蛋白下调而Bax蛋白上调有关。     

奥沙利铂对 K562细胞体外生长的影响

目的:观察奥沙利铂对人白血病K562细胞的作用.方法:检测奥沙利铂对K562细胞作用的时间效应和剂量效应,在电镜下观察奥沙利铂作用后细胞形态变化;用流式细胞仪分析细胞周期的改变.结果:随着作用时间及药物浓度的增加,奥沙利铂对K562细胞的增殖抑制作用就越明显.0.016mmol/L奥沙利铂作用72h,K562细胞生长抑制率达85%,形态学及流式细胞仪分析显示G2/M期阻滞和细胞凋亡.结论:奥沙利铂诱发的人白血病细胞的凋亡与细胞分裂期阻滞密切相关.     

槲皮素下调HSP27蛋白的表达诱导人胶质母细胞瘤T98G凋亡

目的：探讨天然药物槲皮素对人胶质母细胞瘤的生物效应及机制。方法：将人胶质母细胞瘤细胞系T98G用槲皮素治疗,采用MTT法检测治疗后T98G细胞的增殖抑制情况;通过流式细胞术检测槲皮素治疗后,T98G细胞的凋亡情况并用western blot方法检测细胞活化caspase-3 (cleaved caspase-3)的表达和热休克蛋白27(HSP27)的表达;将T98G细胞的HSP27基因用特异性HSP27 siRNA沉默后再用槲皮素治疗,检测槲皮素对T98G细胞的增殖抑制作用和凋亡诱导效应。结果：槲皮素显著抑制T98G细胞的增殖且呈剂量和时间依赖性;槲皮素可诱导T98G细胞的凋亡和caspase-3的活化;槲皮素治疗后,T98G细胞的HSP27表达显著下降,当用HSP27 siRNA转染T98G细胞后, 槲皮素对T98G细胞的凋亡诱导活性显著提高。结论： 槲皮素有良好的抗神经胶质母细胞瘤的生物活性,其抗肿瘤效应的机制可能和下调HSP27蛋白有关。     

Effects of HSP70 antisense oligonucleotide on the proliferation and apoptosis of human hepatocellular carcinoma cells

The study investigated the effects of heat shock protein 70(HSP70) antisense oligonucleotide(ASODN) on the proliferation and apoptosis of a human hepatocellular carcinoma cell line(SMMC-7721 cells) in vitro.HSP70 oligonucleotide was transfected into SMMC-7721 cells by the mediation of SofastTM transfection reagent.Inhibition rate of SMMC-7721 cells was determined by using MTT method.Apoptosis rate and cell cycle distribution were measured by flow cytometry.Immunocytochemistry staining was used to observe th...     

人参皂甙Rg3在体外对胃癌细胞生长和凋亡的影响

目的 研究人参皂甙Rg3在体外对低、中分化胃腺癌细胞株MKN-45和SGC-7901生长及凋亡的影响。方法 取处于对数生长期的MKN-45和SGC-7901细胞,加入不同终浓度（20、30、40、50 μg/mL）的人参皂甙Rg3分别培养24、48 h或24、48和72 h,以不加药细胞作为阴性对照。MTT法检测MKN-45和SGC-7901细胞生长抑制率;流式细胞仪Annexin V/PI双染法检测SGC-7901细胞凋亡率;流式细胞仪分析SGC-7901细胞周期;透射电子显微镜观察50 μg/mL人参皂甙Rg3处理组SGC-7901细胞的形态学改变。结果 人参皂甙Rg3各处理组SGC-7901和MKN-45细胞生长抑制率均明显高于对照组(P<0.05),且随药物浓度的增加和作用时间的延长而上升(P<0.05)。与对照组比较,人参皂甙Rg3各处理组SGC-7901细胞凋亡率和G0/G1期细胞百分比均明显上升,且呈浓度和时间依赖性。透射电子显微镜观察50 μg/mL人参皂甙Rg3处理组SGC-7901细胞,可见典型的凋亡细胞结构。结论 人参皂甙Rg3在体外对胃癌细胞生长具有抑制作用,且呈现一定的时效和量效关系,其机制可能与诱导胃癌细胞凋亡有关。     

藤黄菌素对人白血病细胞系HL-60体外增殖的影响

目的:观察藤黄菌素对HL-60细胞体外增殖的抑制作用及其对细胞周期的影响。方法:分别采用台盘蓝拒染法及流式细胞术,在不同条件下测定细胞增殖的抑制率及细胞周期的分布。结果:应用台盘蓝拒染法,藤黄菌素能够显著地抑制HL-60细胞的体外增殖并且呈现时效及量效关系。流式细胞术的结果表明:藤黄菌素作用2h可使HL-60细胞的细胞周期分别阻滞于G2/M期和G0/G1期。结论:藤黄菌素能够明显抑制HL-60细胞体外增殖。     

HSP70、Caspase3在胶质细胞瘤中的表达及与肿瘤病理分级的关系

目的： 观察半胱天冬蛋白酶(Caspase3) 和热休克蛋白70(HSP70)在胶质细胞瘤中的表达,探讨Caspase3,HSP70与胶质细胞瘤生物学行为和病理分级的关系。方法: 采用SP免疫组化染色法, 检测50例胶质瘤组织中Caspase3与HSP70蛋白的表达水平,并比较两者的相关性。结果: 随着胶质瘤病理级别的升高, HSP70的表达强度增加,而Caspase3 的表达强度减弱, Ⅰ～Ⅳ级胶质瘤的HSP70阳性率分别为25%、69%、92%、100%(P<0.01),Ⅰ～ Ⅳ级胶质瘤的Caspase3阳性率分别为87.5%、61.5%、38.5%、31%(P<0.05)。Caspase3与HSP70表达存在负相关(P<0.01) 。结论: HSP70与Caspase3蛋白的表达结果提示,两者与胶质瘤的生物学行为和分化程度有关,又对于判断其预后有重要价值。     

逆转录酶抑制剂对恶性胶质瘤细胞端粒酶活性和细胞增殖的影响

目的研究逆转录酶抑制剂（AZT）对胶质瘤细胞端粒酶活性、细胞增殖和细胞周期的影响，为以端粒酶为靶点治疗脑胶质瘤提供理论和实验依据。方法采用MTT法检测AZT对细胞生长增殖的影响。用TRAP—PCR—ELISA法检测端粒酶活性的变化。用流式细胞仪检测细胞周期的改变。结果与对照组比较，12h后1．0mol／L AZT组的端粒酶活性降低（P〈0.05），24h时0.5mol／L AZT组细胞生长增殖受抑制（P〈0．05），1．0mol／L AZT组则呈现出显著性差异（P〈0．01），在实验范围内，呈时间一剂量依赖性。实验组细胞周期中各时相的细胞分布发生改变，0．5mol／L AZT组细胞多阻滞于G2／M期，而1．0mol／L AZT组细胞G1期增多，S期细胞数减少。结论逆转录酶抑制剂能够有效地抑制胶质瘤细胞的端粒酶活性，抑制细胞的增殖，参与了细胞周期及凋亡的调控，具有较好的应用前景。     

槲皮素对大鼠脑胶质瘤C6细胞增殖调控的作用

目的：研究类黄酮化合物槲皮素（quercetin,QUE）对体外培养的大鼠脑胶质瘤C6细胞增殖调控的作用。方法：按QUE浓度分成10、25、50、75及100 μmol·L^-15个处理组和空白对照组（生理盐水）及溶剂对照组（二甲亚砜）,大鼠脑胶质瘤C6细胞在RPMI 1640培养基中生长达1×10⁶·mL^-1后,在96孔板中分别加入上述浓度的QUE继续培养,每组设3复孔,作用24、48及72 h,采用MTT比色法检测QUE对大鼠脑胶质瘤C6细胞的增殖抑制情况,流式细胞术（FCM）对50及100 μmol·L^-1的QUE作用48 h的大鼠脑胶质瘤C6细胞进行周期分析,免疫组化法检测50 μmol·L^-1的QUE作用48 h 的p53和bcl-2基因产物。结果：与空白对照组比较,QUE处理组随药物浓度增加和作用时间的延长,A值减小(P<0.05),对C6细胞的增殖抑制作用增强,使停滞在G₀／G₁期的细胞增加(P<0.01),而S和G₂/M期细胞减少(P<0.05)。P53蛋白表达增加和Bcl-2蛋白表达减少。结论：QUE对C6细胞增殖抑制作用具有浓度、时间依赖性,通过P53蛋白表达增加和Bcl-2蛋白表达减少诱导细胞凋亡来实现。