基于黄芩苷单克隆抗体的ELISA快速检测方法的建立北大核心CSCD

目的:建立黄芩苷快速灵敏的的免疫分析检测方法。方法:以制备出的黄芩苷特异性单克隆抗体为基础,选择单抗最佳工作浓度,建立黄芩苷间接竞争酶联免疫分析方法,并应用此方法检测精制清开灵注射液中的黄芩苷含量。结果:该方法线性范围为2.67～1029.00 ng.mL-1,组内和组间差异均不超过3.31%,平均回收率为100.9%,检测工作时间可控制在4 h内。采用该方法检测精制清开灵注射液中黄芩苷的含量,所得结果与HPLC一致。结论:建立了黄芩苷的ELISA方法,可为含黄芩苷的中药材及复方的质量控制分析提供更加快速灵敏的检测方法。     

反相高效液相色谱法测定清开灵注射液中黄芩苷和栀子苷的含量

清开灵注射液由黄芩苷、栀子、板蓝根等8味中药提取制成,具有清热解毒、化痰通络、醒神开窍的作用,用于热病、神昏、中风偏瘫、神志不清及急性肝炎、上呼吸道感染、肺炎、脑血栓、脑出血见上述证候者[1]。文献报道有关清开灵注射液中黄芩苷含量测定法有分光光度法和高效液相色谱法[2～4],但目前尚未见文献报道同时测定清开灵注射液中黄芩苷和栀子苷的含量。为了更好地控制产品质量,保证产品疗效,本文通过优化的条件,采用反相高效液相色谱(RP-H PLC)法对清开灵注射液中黄芩苷和栀子苷的含量同时进行了测定。实验结果表明,本方法简便、准确…     

清开灵注射液质量评价研究

目的建立清开灵注射液中测定胆酸、栀子苷、黄芩苷含量的HPLC方法,对不同厂家生产的样品进行质量评价。方法测定胆酸用C_(18) YMC—Pack ODS—A色谱柱,乙腈-水-磷酸(35:65:0.1)为流动相,检测波长192nm;测定栀子苷用C_(18)色谱柱,流动相为乙腈-水(10:90),检测波长238nm;测定黄芩苷用SUPELCO C_(18)色谱柱,甲醇-水-磷酸(47:53:0.2)为流动相,检测波长276nm。结果胆酸平均回收率为97.63％,RSD为1.73％;栀子苷平均回收率为98.15％,RSD为1.64％;黄芩苷平均回收率为99.06％,RSD为1.27％。结论本方法灵敏、准确、简便,可用于清开灵注射液质量控制。     

HPLC法测定清开灵注射液中黄芩苷的含量

目的建立用HPLC法测定清开灵注射液黄芩苷含量的方法.方法以HYPERSIL,BDS,C18色谱柱,流动相:水-甲醇-冰醋酸(55:45:1),检测波长274nm.结果黄芩苷在0.2～1.0μg浓度范围内呈良好的线性关系.平均回收率为99.93%,RSD=0.7%(n=6).结论该法方便、快捷、准确,可靠.     

多波长高效液相色谱法测定清开灵注射液中3种有效成分

目的:测定清开灵注射液中的3种有效成分,黄芩苷、栀子苷和绿原酸的含量。方法:紫外-三波长同时检测的高效液相色谱法:色谱柱为Kromasil C18分析柱(5μm,4.6 mm×250 mm);流动相为(A)0.3％甲酸水溶液、(B)甲醇;柱温:30℃;流速:1.0 mL·min-1。检测波长为240 nm(栀子苷)、280 nm(黄芩苷)、330nm(绿原酸);线性梯度洗脱:(B:30%→60%)/(0→25 min)保持10min(B:60%→100%)/(35→40 min) 保持5 min。结果:建立了对清开灵注射液中3个成分进行定量的测定方法,并将此方法用于10批清开灵注射液的各成分测定。结论:为中药注射液提供了更简便、合理、可靠的质控方法。     

HPLC法同时测定清开灵注射液中黄芩苷和千层纸素A-7-O-β-d-葡糖醛酸苷的含量

目的:建立同时测定清开灵注射液中黄芩苷和千层纸素A-7-O-β-d-葡糖醛酸苷含量的方法,并比较不同厂家、批号产品中黄芩苷和千层纸素A-7-O-β-d-葡糖醛酸苷的含量差异。方法:采用高效液相色谱法。色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C18,流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液(梯度洗脱),流速为1.0 ml/min,检测波长为274 nm,柱温为30℃,进样量为10μl。结果:黄芩苷、千层纸素A-7-O-β-d-葡糖醛酸苷检测质量浓度分别在10.1²52.0、1.0252.0、1.0⁶.0μg/ml范围内与各自峰面积积分值呈良好的线性关系(r=0.999 9);精密度、稳定性、重复性试验的RSD≤1.6%;平均加样回收率分别为99.64%、99.03%,RSD分别为2.7%、0.9%(n=6)。不同厂家、批号产品中黄芩苷、千层纸素A-7-O-β-d-葡糖醛酸苷的质量浓度范围分别为4.1516.0μg/ml范围内与各自峰面积积分值呈良好的线性关系(r=0.999 9);精密度、稳定性、重复性试验的RSD≤1.6%;平均加样回收率分别为99.64%、99.03%,RSD分别为2.7%、0.9%(n=6)。不同厂家、批号产品中黄芩苷、千层纸素A-7-O-β-d-葡糖醛酸苷的质量浓度范围分别为4.151⁴.849、0.0974.849、0.097⁰.157 mg/ml。结论:该方法简单、准确、可靠,适用于清开灵注射液的质量控制;不同厂家、批号清开灵注射液中黄芩苷和千层纸素A-7-O-β-d-葡糖醛酸苷的含量存在较大差异。     

反相高效液相色谱法测定清开灵注射液中2组分的含量

目的建立以反相高效液相色谱法同时测定清开灵注射液中黄芩苷、栀子苷含量的方法。方法色谱柱为DiamonsilTMC18(250mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-20mmol.L-1磷酸二氢钠溶液(20∶80),流速为1.0mL.min-1,检测波长为238nm。结果黄芩苷在1~50μg.mL-1浓度范围内线性良好(r=0.9995),平均回收率为100.75%(RSD=1.75%);栀子苷在0.1~10μg.mL-1浓度范围内线性良好(r=0.9997),平均回收率为100.63%(RSD=1.35%)。结论本方法快速、简便、准确、灵敏度高,可用于清开灵注射液的质量控制。     

清开灵不同制剂中黄芩苷的含量测定

目的:统一清开灵软胶囊、泡腾片和口服液中黄芩苷的含量测定方法。方法:采用高效液相色谱法,使用Agilent TC-C18(150 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,流动相为甲醇-水-磷酸(47∶53∶0.2),流速为1 mL.min-1,检测波长277 nm。结果:黄芩苷的质量浓度在8.928~89.28μg.mL-1范围内与峰面积线性关系良好,r=0.9994;精密度、重复性、稳定性及加样回收率结果均能满足分析要求。结论:该方法简单可行,为清开灵药品中黄芩苷含量测定方法的统一提供可靠的依据。     

黄芩苷在多壁碳纳米管修饰玻碳电极上的电化学行为及其测定

目的建立了检测黄芩苷含量的电化学分析新方法。方法采用循环伏安法研究黄芩苷在多壁碳纳米管修饰玻碳电极上的电化学行为及其电极反应机理,以差示脉冲伏安法建立了检测黄芩苷含量的电化学分析新方法。结果在优化的条件下,电化学信号强度电流值I与黄芩苷浓度在1×10-9~5×10-7mol.L-1和6×10-7~5×10-6mol.L-1范围呈线性关系,相关系数为0.9956和0.9934。该方法的黄芩苷浓度检出限为1×10-10mol.L-1,平行测定6次得RSD为1.04%,回收率为98.0~102.0%。结论利用多壁碳纳米管修饰的玻碳电极分析法,建立了测定黄酮类药物黄芩苷的含量新方法,并应用于清开灵注射液中黄芩提取物（黄芩苷计）的含量测定,结果令人满意。     

光程对清开灵注射液中黄芩苷近红外定量模型的影响

目的:探讨光程变化对清开灵注射液中黄芩苷近红外定量模型的影响。方法:以清开灵注射液为研究对象,分别采集6mm和8 mm 2个不同光程下的近红外光谱,采用偏最小二乘回归法(PLSR)建立黄芩苷定量模型,比较不同光程及光谱预处理方式对黄芩苷定量模型性能的影响。结果:在2个光程下,采用原始光谱所建模型最优,且6 mm光程优于8 mm光程。PLS模型对校正集的预测结果为RC=0.989,RMSEC=0.16;对验证集的预测结果为RP=0.993,RMSEP=0.12,RPD=7.65。结论:光程变化对基于近红外光谱的黄芩苷定量模型存在影响,选择适合于待测组分的光程能够更有效地实现定量检测。     

黄芩苷脂质体的制备工艺研究

目的:探讨黄芩苷脂质体的制备工艺.方法:采用逆相蒸发法、乙醚注入法和薄膜超声法制备黄芩苷脂质体,SephadexG-50凝胶柱分离脂质体,UV-法测定包封率,Zetasizer3000粒度测定仪测定其粒径,透射电子显微镜进行形态学观察.结果:逆相蒸发法制备的黄芩苷脂质体平均粒径360nm,包封率56.02%;乙醇注入法平均粒径2600nm,包封率26.14%;薄膜-超声法平均粒径1200nm,包封率53.65%.结论:逆相蒸发法制备的黄芩苷脂质体粒径小,包封率高,条件易掌握,可作为黄芩苷脂质体的常规制备方法.     

高效液相色谱法测定牛黄消炎灵胶囊中黄芩苷含量

目的探讨牛黄消炎灵胶囊的黄芩苷含量测定方法。方法采用高效液相色谱（HPLC）法，色谱柱为Allteeh C18（250mm×4．6mm，5μm），流动相为甲醇-水-冰醋酸（43：56：1），流速为1．0mL／min，检测波长为276nm。结果黄芩苷质量浓度在20．01～100．05μg／mL范围内与峰面积有良好的线性关系（r=0．9999），平均加样回收率为101．25％，RSD为0．92％（n=6）。结论HPLC法准确、可靠、重现性好．可用于牛黄消炎灵胶囊的质量控制。     

高效液相色谱法测定咳露口服液中黄芩苷的含量

目的 建立咳露口服液中黄芩苷含量测定方法.方法 采用高效液相色谱法(HPLC),色谱柱:Agilent Eclipse CDB-C18;流动相:甲醇-0.6%磷酸水溶液(43:57);检测波长280nm;流速:1.0 ml/min;柱温:25℃;进样体积为20 μl,外标法计算含量.结果 黄芩苷进样量在0.19～0.57 μg范围内与色谱峰面积有良好的线性关系,r=0.9995,平均回收率为97.92%,RSD为2.37%(n=6).结论 该方法灵敏、准确,可用于控制咳露口服液中黄芩苷的含量.     

黄芩苷下调沙眼衣原体感染小鼠TLR2和TLR4基因表达的研究

目的:研究黄芩苷对沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)感染小鼠宫颈组织Toll样受体2和Toll样受体4(TLR2,TLR4)基因表达的影响。方法:6~8周龄雌性C57BL/6小鼠,分为5组:阿奇霉素组,模型组,黄芩苷高、中、低剂量组。通过阴道接种Ct感染小鼠,建立Ct感染小鼠生殖道的动物模型。接种前7 d皮下注射黄体酮以增加小鼠对Ct感染的敏感性。通过比较各组小鼠阴道分泌物中的Ct数量,评价黄芩苷抗沙眼衣原体感染的能力。感染27 d之后,用RT-PCR法和Western Blot法检测宫颈组织TLR2和TLR4基因表达情况。结果:在阴道接种Ct后第3天和第6天,模型组小鼠阴道分泌物中Ct数量显著升高。通过黄芩苷治疗后,各药物组小鼠阴道分泌物中,Ct数量均明显少于模型组,黄芩苷高剂量组和阿奇霉素组显著性降低。同时,黄芩苷还可明显抑制各组宫颈组织内TLR2和TLR4基因的表达。结论:黄芩苷可有效地抑制Ct感染的小鼠宫颈组织TLR2和TLR4的高表达,这可能是黄芩苷抗Ct感染的作用机制之一。     

HPCE法测定双黄连口服液中的黄芩苷和绿原酸

目的:建立双黄连口服液中黄芩苷和绿原酸含量测定的毛细管电泳法。方法:用毛细管区带电泳和紫外检测模式测定双黄连口服液中黄芩苷和绿原酸的含量,电泳条件:以40 m mol·L^-1 硼砂为电泳介质( 测定黄芩苷和绿原酸的pH值分别为9-00 和9-55) ,未涂层弹性融硅毛细管(50 μm ×39-5 cm ,有效分离长度34-8 cm) 为分离通道,压力进样(68-95 kPa·s),17 kV恒压电泳(25 ℃) ,黄芩苷和绿原酸的检测波长分别为285 ,326 nm 。结果:在20～640μg·mL^-1 和8 ～400 μg·mL^-1 范围内,黄芩苷和绿原酸可分别进行定量分析,二者加样回收率分别为100-60 % ±2-36 % 和99-68% ±2-27 % 。结论:本方法简便、快速,结果准确,重现性好,可用于双黄连口服液的质量控制。     

半枝莲多糖的纯化及对S180荷瘤小鼠的抑瘤作用

目的将半枝莲粗多糖纯化后测定多糖含量,并比较粗多糖与精多糖的抑瘤率,为半枝莲化学及药理研究提供有益的参考。方法采用分光光度法、苯酚-硫酸显色法,在490nm处测定其含量;并利用体内实验测定多糖的抑瘤效果。结果精多糖的多糖含量为54．12％,平均加样回收率为99．66％,粗多糖的抑瘤率为45．96％,精多糖的抑瘤率为22．14％。结论测定多糖含量的方法操作简便,准确可靠,精多糖的抑瘤效果没有粗多糖抑瘤效果明显。     

Gradient high-performance liquid chromatography for the simultaneous determination of chlorogenic acid and baicalin in plasma and its application in the study of pharmacokinetics in rats

A novel HPLC-UV method was developed for the simultaneous determination of two major active components in Yinhuang injection, chlorogenic acid and baicalin, in rat plasma. Extracted from the plasma samples with methanol-acetonitrile (3:1, v/v), the two compounds were successfully separated using a C18 column with a gradient elution composed of 15 and 54% methanol-acetonitrile (1:1, v/v) in 0.2% (v/v) phosphoric acid water solution (pH 2.0). The flow-rate was set at 1 ml min(-1) and the eluent was detected at 327 nm for chlorogenic acid, 278 nm for baicalin. Puerarin and rutin were used as the internal standards for chlorogenic acid and baicalin, respectively. The method was linear over the range of 0.388-12.4 microg ml(-1), 0.485-124 microg ml(-1) for chlorogenic acid and baicalin, respectively. The correlation coefficient for each analyte was above 0.998. The intra-day and inter-day precisions were better than 7 and 9%, with the relative error ranging from -9.5 to 7.3% and from -4.2 to 1.8%. The limit of detection (LOD) and the limit of quantification (LOQ) for chlorogenic acid and baicalin in plasma were 0.194, 0.122, 0.388 and 0.485 microg ml(-1), respectively. This assay has been successfully applied in the pharmacokinetic study of chlorogenic acid and baicalin in vivo through intravenous administration of Yinhuang injection to rats.     

银黄注射液及口服液中绿原酸和黄芩苷在大鼠体内的药动学比较

目的 比较银黄注射液和银黄口服液中绿原酸和黄芩苷在大鼠体内的的药物动力学特征.方法 10只(6)大鼠随机均分成两组,分别iv银黄注射液和ig银黄口服液,用HPLC同时测定不同时间点血浆中绿原酸和黄芩苷的浓度.结果 大鼠iv银黄注射液后,血浆中能够同时检出绿原酸和黄芩苷,其中绿原酸的呈三室开放模型,黄芩苷的药-时曲线变化呈二室开放模型;大鼠ig银黄口服液后,血浆中检不出绿原酸,而黄芩苷的药-时曲线呈多峰现象,其绝对生物利用度为15.2%.结论 不同的给药途径,绿原酸和黄芩苷在大鼠体内所表现的药物动力学特征相差很大.     

黄芩含量测定中双波峰的出现及解决措施

目的:为解决中国药典2000年版一部黄芩测定中时而出现的双峰以及正确计算黄芩苷的含量.方法:采用含酸的流动相稀释样品.结果:提高了样品的分离度及分离基线,解决了双峰问题.讨论:对黄芩药材以及含黄芩药材粉末的成方制剂出现双峰时,提供了解决的方法.     

高效液相色谱法测定杏杷止咳颗粒中黄芩苷含量

目的建立测定杏杷止咳颗粒中黄芩苷含量的高效液相色谱法。方法采用Agilent C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-水-磷酸(50∶50∶0.2),流速为1.0 mL/min,检测波长为280 nm,柱温为室温。结果黄芩苷进样量在4～44μg(r=0.999 9)范围内与峰面积线性关系良好,平均加样回收率为99.69%,RSD=0.61%(n=6)。结论高效液相色谱法灵敏度高,操作简便,准确可靠,可用于杏杷止咳颗粒中黄芩苷的含量测定。