晚期骨关节炎患者关节软骨细胞中HIF-1α和VEGF的表达

目的 研究低氧诱导因子1α（HIF-1α）和血管内皮生长因子（VEGF）在晚期骨关节炎（OA）患者关节软骨细胞中的表达,初步探讨HIF-1α在OA发病机制中的作用.方法 选取18例晚期膝骨关节炎（KOA）接受全膝关节置换术患者的膝关节软骨组织标本,根据取材部位分为KOA负重区组（磨损较重的股骨内髁）和KOA相对非负重区组（磨损较轻的股骨外髁）;另选取5例因股骨近端或股骨干肿瘤而截肢患者的正常膝关节软骨组织标本作为对照.HE和SaFRanin O染色下进行Mankin整体评分比较各组关节软骨组织退变程度;免疫组织化学染色检测关节软骨细胞HIF-1α和VEGF表达,比较各组HIF-1α和VEGF阳性细胞计数.结果 KOA负重区组Mankin整体评分为（12.36±0.84）,显著高于KOA相对非负重区组的（7.23±0.32）和对照组的（0.88±0.15）（P＜0.05）.免疫组织化学染色显示,KOA负重区组关节软骨细胞HIF-1α和VEGF阳性细胞计数分别为4.81±0.62和5.67±0.32,均显著高于KOA相对非负重区组和对照组（分别为2.37±0.68、4.87±0.33和0.78±0.14、2.02±0.45）（P＜0.05）.结论 晚期OA患者关节软骨细胞中HIF-1α和VEGF蛋白表达明显增加.提示上调靶基因VEGF表达是HIF-1α在OA发病中可能的调节机制.     

CCL2/CCL3及CCR5在功能磁共振鉴定骨关节炎不同阶段的表达

目的　通过功能磁共振成像鉴定骨关节炎的不同阶段并探讨趋化因子CCL2/CCL3及受体CCR5的表达。方法　选取因骨关节炎（osteoarthritis, OA)行人工全膝关节置换术（total knee arthroplasty, TKA）患者的离体股骨髁软骨标本,进行超短回波磁共振成像（ultrashort echo magnetic resonance imaging, UTE MRI）扫描。标本扫描结束后行Safanin-O染色及Mankin评分,根据Mankin评分结果将标本分为2级OA 组（Mankin评分2~5分）、3级OA组（Mankin评分6~9分）、4级OA组（Mankin评分10~14分）;每组6例,共18例患者。免疫组织化学法检测18例患者的离体股骨髁软骨标本CCL2、CCL3、CCR5的表达。结果　相对于Mankin评分低的2级OA组,Mankin评分较高的3级OA组及4级OA组的患者膝关节功能磁共振成像提示骨关节破坏严重;相对于2级OA组,3级OA组及4级OA组的患者CCL2、CCL3、CCR5的表达增加;相对于3级OA组,4级OA组的患者CCL2、CCL3、CCR5的表达增加。结论　根据功能磁共振成像显示骨关节炎的严重程度可推测CCL2、CCL3及CCR5的表达。     

金骨莲胶囊对兔膝骨关节炎软骨保护作用的研究

目的 研究中药金骨莲胶囊对兔膝骨关节炎(OA)关节软骨中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平的影响,探讨其可能作用机制.方法 40只家兔分为4组:空白对照组(10只)、模型对照组(10只)、金骨莲胶囊组(10只,74.4 mg·kg-1·d-1)、氨基葡萄糖组(10只,150mg·kg-1·d-1).除空白对照组外其余均按改良Hulth法复制OA模型,术后当天开始药物灌胃,对照组仅灌服等量生理盐水,1次/天,连用8周.8周后处死家兔取右膝股骨髁及胫骨平台大体观察.采用Mankin评分评价关节软骨退变情况;采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测股骨内侧髁负重区关节软骨IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA相对表达量.结果 空白对照组、金骨莲胶囊组、氨基葡萄糖组和模型对照组Mankin评分分别为(1.380±0.183)、(2.580±0.464)、(5.250±0.143)、(10.380±0.183)分,Mankin评分依次升高,组间比较差异均有统计学意义(P＜0.05).金骨莲胶囊组和氨基葡萄糖组3种炎性因子mRNA表达量均明显低于模型对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05);中药金骨莲胶囊在下调IL-1βmRNA方面与氨基葡萄糖作用相当,差异无统计学意义(P=0.271).金骨莲胶囊在降低IL-6和TNF-α mRNA方面优于氨基葡萄糖作用,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 中药金骨莲胶囊可不同程度下调关节软骨中IL-1β、IL-6和TNF-α炎症因子的表达,使软骨退变的部分因素得到控制,从而起到保护关节软骨的作用.     

磁共振T2mapping成像评估膝关节软骨的损伤与修复的效果

目的探讨磁共振T2mapping成像评估膝关节软骨损伤与修复的效果。方法对64例早期膝关节骨关节炎(OA)患者(OA组)及40例健康志愿者(正常组)采用磁共振T2mapping技术观察膝关节软骨的损伤与修复情况。选择16只小型雄性猪(实验组及对照组各8只)制作软骨缺损修复模型,实验组采用Mosaicplasty技术联合组织工程软骨移植进行缺损修复,对照组单纯采用Mosaicplasty技术进行移植。术后采用3T磁共振进行评估,并根据MOCART评分标准对组织修复情况进行评分。结果 OA组膝关节软骨T2值明显高于正常组、正常组和OA组负重区软骨的T2值均高于非负重区(均P<0.05)。正常组的深层股骨髁软骨T2值均低于浅层股骨髁软骨T2值,OA组非负重区的股骨内、外髁软骨中浅层T2值均高于深层T2值(均P<0.05);负重区股骨内、外髁软骨深及浅层T2值比较差异无统计学意义(P>0.05)。术后18周对照组猪MOCART评分为(52.14±3.69)分,实验组MOCART评分为(63.64±7.38)分,2组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论采用磁共振T2-mapping成像能有效地对无明显形态变化的软骨组织成分进行评估,对监测和诊断早期关节软组织有重要的临床价值。磁共振T2-mapping成像能有效地评估组织修复的信息,并能鉴别组织的修复情况。     

p53在骨关节炎软骨组织中的表达及与关节软骨细胞自噬的关系研究

目的:研究p53在骨关节炎软骨组织中的表达及与关节软骨细胞自噬的关系。方法:对20例骨关节炎患者(OA组)及10例正常膝关节软骨组织(对照组),用实时定量PCR(real-time PCR)、免疫组化等方法检测p53及Beclin1在膝关节软骨中的表达与分布,并对两者进行相关性分析。结果:p53在OA组的表达明显高于正常对照组(P0.05),OA组关节软骨组织中Beclin1的表达量明显低于正常对照组(P0.01),p53与Beclin1在软骨组织中表达呈负性相关(r=-0.629,P0.05)。结论:骨关节炎中p53的高表达能够抑制软骨细胞自噬,从而减弱软骨细胞对凋亡抵抗能力,促进软骨细胞凋亡。     

低氧状态对骨关节炎软骨细胞自噬的影响

骨关节炎(osteoarthritis,OA)指由多种原因引起的以关节软骨变性破坏为主的一种疾病,伴或不伴软骨下骨硬化或囊性变、关节边缘骨质增生、滑膜增生等[1].关节软骨的降解是OA的标志,软骨细胞与细胞外基质(extracellular matrix,ECM)化合物之间的相互作用发生改变,软骨下骨的改变也被认为是该病的关键组成部分[2].关于OA的病因学已有很多研究,包括炎症细胞因子的作用、软骨退化的过程、miR-146a的功能、软骨细胞的缺氧刺激和自噬等.由此可知,低氧诱导因子(hypoxia-inducible factor,HIF)在软骨细胞的低氧调节中发挥非常重要的作用,其中HIF-1α和HIF-2α的过表达与OA的发生发展密切相关;在外部缺氧条件下,已分化的软骨细胞能通过自噬趋向成熟化,提高生存能力;对软骨细胞中的HIF-1转录后基因沉默,可使相关基因表达减少,提示HIF-1是自噬的积极调节者.有研究认为低氧条件能够维持软骨细胞形态,促进细胞自噬,HIF-1α和HIF-2α的表达与OA的发生与发展密切相关[3],现将有关进展综述如下.     

骨灵膏及其拆方制剂对骨关节炎氧化损伤及低氧诱导因子的作用

目的通过骨灵膏及其拆方制剂对骨关节炎超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、脂质过氧化物(LPO)及低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、低氧诱导因子-2α(HIF-2α)、血管内皮生长因子(VEGF)的影响,探讨骨灵膏及其拆方制剂抗骨关节炎(OA)软骨损伤的作用机制。方法 60只雌性SD大鼠随机分为正常组、模型组、骨灵膏组、骨膏组、灵膏组及塞来昔布组6组,每组10只,除正常组外其余各组采用冷固法6周建立OA模型,造模成功后除正常组和模型组给予生理盐水灌胃外,其余组分别给予骨灵膏、骨膏、灵膏及塞来昔布灌胃,给药8周后,取大鼠血清、膝关节软骨组织,采用ELISA检测血清SOD、MDA、LPO的含量,免疫荧光法检测HIF-1α、HIF-2α、VEGF的阳性表达,FQ-RT-PCR检测HIF-1α、HIF-2α、VEGF mRNA的表达。结果模型组与正常组及骨灵膏组比较能显著增加血清MDA、LPO的含量(P0.01),增加SOD的含量(P0.01);骨灵膏组与骨膏及灵膏比较能增加SOD的含量(P0.01),降低MDA、LPO的含量(P0.01);模型组与正常组比较能显著增加软骨HIF-1α、HIF-2α、VEGF的阳性率(P0.01),骨灵膏组与模型组、骨膏组、灵膏组、塞来昔布组比较能降低HIF-1α、HIF-2α、VEGF的阳性率(P0.01);模型组与正常组比较能显著增加软骨HIF-1α、HIF-2α、VEGF mRNA的表达(P0.01),骨灵膏组与模型组、骨膏组、灵膏组、塞来昔布组比较能降低HIF-1α、HIF-2α、VEGF mRNA的表达(P0.01)。结论骨灵膏可能通过增加血清SOD含量,降低LPO、MDA的含量,纠正OA氧代谢失衡对软骨组织的氧化损伤,抑制组织HIF-1α、HIF-2αmRNA的表达,从而抑制异常低氧环境HIF-1α向HIF-2α的转化,降低其下游靶基因VEGF mRNA在软骨组织的表达,减轻了关节骨赘的形成,对抗OA软骨损伤,其作用明显优于骨膏、灵膏、塞来昔布。     

关节软骨Osterix蛋白表达强度对膝关节骨性关节炎形态学变化的影响

目的:探讨Osterix蛋白在关节软骨中的表达强度对膝关节骨性关节炎形态学变化的影响.方法:选取44例因膝关节骨性关节炎行人工全膝关节置换术的患者,取术中去除的股骨髁软骨组织,磨损较重的一侧为负重区(实验组),磨损较轻的一侧为非负重区(对照组).通过HE染色评估软骨组织形态学变化,再将负重区软骨分为中度磨损组和重度磨损...     

益气养血方抗兔膝骨关节炎模型软骨退变的作用及机制研究

目的探讨益气养血方对兔膝骨关节炎(KOA)模型软骨细胞凋亡及血清白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、Ⅱ型胶原蛋白(COL-Ⅱ)、人基质金属蛋白酶-13(MMP13)表达的影响,揭示其抗骨关节炎软骨退变的作用及机制。方法 40只日本大耳白兔随机分为4组,即假手术组、KOA模型组、阳性药(双醋瑞因)组、益气养血方组各10只。石蜡切片HE染色观察软骨退变情况,TUNEL法检测软骨细胞凋亡,免疫组化检测COL-Ⅱ、MMP13的表达。结果益气养血方对KOA模型兔膝关节软骨退变具有一定抑制作用,能下调血清促炎细胞因子TNF-α产生水平(P0.05),抑制软骨细胞凋亡;能下调软骨组织MMP-13蛋白的表达(P0.01),上调软骨组织COL-Ⅱ胶原的表达(P0.05),抑制软骨基质降解。结论益气养血方通过下调TNF-α、MMP-13蛋白表达,同时上调COL-Ⅱ胶原表达,抑制软骨细胞凋亡及细胞外基质降解,可能是益气养血方治疗骨关节炎的作用机制之一。     

膝关节骨性关节炎miR-138 HIF-2α表达与意义

目的 探讨膝关节骨性关节炎(KOA)患者关节液中微小核糖核酸-138(miR-138)和关节软骨中低氧诱导因子-2α(HIF-2α)表达及意义.方法 选取2018年3月至2019年1月深圳市龙华区中心医院收治的46例KOA患者和46例非KOA患者作为研究组和对照组.比较两组患者关节液中miR-138及关节软骨中HIF-...     

阳和汤干预兔骨关节炎软骨细胞中血管内皮生长因子变化

目的：观察阳和汤对兔骨关节炎软骨细胞中血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）表达的影响。 方法：新西兰大白兔15只随机分为正常组、模型组和阳和汤组。按照Hulth法建立膝骨关节炎模型，术后第5周起至第7周末，阳和汤组予混有阳和汤的颗粒饲料，正常组及模型组均给予普通饲料；术后第8周分别取各组胫骨平台关节软骨，采用番红O染色，进行Mankin评分；免疫组织化学染色测定关节软骨中VEGF表达的阳性指数。 结果：正常对照组番红O染色的Mankin评分与模型组比较，差异有统计学意义（P〈0．01）。阳和汤组番红O染色减少或缺失程度较模型组轻，差异有统计学意义（P〈0．01）。各组关节软骨切片VEGF免疫组化染色分析，模型组VEGF的阳性指数明显高于正常组，差异有统计学意义（P〈0．01），阳和汤组VEGF阳性指数明显低于模型组，差异有统计学意义（P〈0．05）。 结论：VEGF在骨关节炎形成早期起重要作用；阳和汤可延缓关节软骨退行性改变，其作用可能是通过调控VEGF而达到抑制血管增生的作用。     

骨关节炎软骨细胞凋亡率的实验研究

目的检测和分析髋关节骨关节炎中软骨损伤轻重部位的软骨细胞凋亡率。方法关节软骨组织切片分别进行HE染色，番红O-固绿染色，Mankin评分评价软骨损伤程度，TUNEL方法检测软骨细胞凋亡率。结果关节软骨损伤重的部位的Mankin评分值及软骨细胞凋亡率均高于软骨损伤轻的部位。结论软骨细胞凋亡率与骨关节炎软骨损伤程度相一致，说明细胞凋亡可能是骨关节炎软骨损伤的机制之一。     

电针对早期膝骨关节炎兔模型关节软骨病理及黏弹性力学性能的影响

目的探索电针治疗对早期膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)兔模型关节软骨病理及黏弹性力学性能的影响。方法33只新西兰兔按体质量随机分为空白组(6只)及KOA造模组(27只),KOA造模组应用改良Videman法(过伸位制动)制动4周建立早期KOA兔模型,拆除固定装置后根据Lequesne评分再随机分为模型组、电针组和西药组(每组9只),均干预4周。干预结束后,兔股骨内侧髁软骨分别进行番红0/固绿染色及黏弹性力学性能(纳米压痕仪)检测。结果(1)与空白组相比,模型组Mankin评分显著升高(P<0.01);干预治疗后与模型组相比,电针组Mankin评分显著降低(P<0.01),西药组Mankin评分明显降低(P<0.05)。(2)与空白组相比,模型组股骨软骨储存模量(storage modulus,SM)平均值显著升高(P<0.01);干预治疗后与模型组相比,电针组、西药组股骨软骨SM平均值表达显著降低(P<0.01)。(3)与空白组相比,模型组软骨损失模量(loss modulus,LM)平均值显著升高(P<0.01);干预治疗后与模型组相比,电针组、西药组软骨平均LM值表达显著降低(P<0.01)。(4)与空白组相比,模型组损失因子(loss factor,LF)表达升高;干预治疗后与模型组相比,电针组和西药组LF值表达升高,但差异均无统计学意义(P>0.05)。结论电针干预早期KOA兔模型,具有减轻关节软骨病理损伤、改善关节软骨SM和LM的作用。     

短刺法对兔膝骨关节炎软骨细胞Sox9、VEGF和ColⅩ表达的影响

目的观察短刺法对兔膝骨关节炎（KOA）关节软骨细胞Y染色体的性别决定区域（Sox9）、血管内皮细胞生长因子 （VEGF）和Ⅹ型胶原（ColⅩ）表达的影响,探讨短刺治疗KOA的作用机制。方法40只新西兰兔利用随机对照表随机分为正常 组（N组）10只、造模组30只,对造模组行Hulth手术法复制膝骨关节炎模型,X线评估造模情况,造模成功后随机分为对照组（M 组）、短刺组（CN组）和普通针刺组（NTN组）,术后6周开始治疗,M组不予任何处理,CN组和NTN组取左膝关节单侧足三里、 内外膝眼、梁丘和阴陵泉穴,留针20 min,1次/d,一疗程5 d,共4个疗程,分别在治疗前和治疗结束后随机选取各组新西兰兔观 察其行为学改变;实验结束后观察软骨大体形态及组织学评分;Westem-Blot法检测Sox9和ColⅩ蛋白的表达;免疫组化检测 VEGF和ColⅩ蛋白的表达;RT-PCR检测Sox9和VEGFmRNA的表达。结果M、CN、NTN组在治疗前和治疗结束后兔行为学 及软骨大体观察发生明显改变;HE染色显示CN组和NTN组软骨组织损伤减轻,有修复趋势;N组、M组、CN组和NTN组软骨 Mankin评分差异均有统计学意义（P<0.01）;CN组和NTN组较M组Sox9蛋白和mRNA表达升高、VEFG蛋白和mRNA表达降 低、ColⅩ蛋白表达降低（P<0.01）;CN组和NTN组差异有统计学意义（P<0.01）。结论短刺法能有效治疗KOA,其作用机制可 能是提高软骨细胞Sox9 的含量,降低VEGF和ColⅩ的表达,抑制肥大细胞分化,从而维持软骨细胞的正常表型,使软骨得 到修复。     

软硬食性对生长早期小鼠颞下颌关节髁突软骨中Aggrecan与ADAMTS-5表达的影响

目的 探讨软硬食刺激对聚集蛋白聚糖Aggrecan和ADAMTS-5在生长发育期小鼠颞下颌关节髁突软骨中表达的影响。方法 20只3周龄小鼠随机分成硬食组和软食组,分别给予软食和硬食4周,通过HE染色,实时PCR 检测Aggrecan与ADAMTS-5 mRNA变化以及ADAMTS-5免疫组化检测ADAMTS-5阳性软骨细胞变化。结果 软食组髁突软骨厚度要比硬食组薄;软食组Aggrecan mRNA水平比硬食组降低;ADAMTS-5 mRNA水平及ADAMTS-5阳性软骨细胞软食组要高于硬食组,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 软食刺激可能促进髁突软骨ADAMTS-5的基质降解功能,而硬食刺激可能增强髁突软骨基质Aggrecan的合成作用。     

关节腔内注射贝伐单抗治疗兔膝骨性关节炎

目的：评估关节腔内注射贝伐单抗治疗兔膝骨性关节炎的效果。方法： 24只新西兰兔制造原发性骨关节炎模型后随机分入贝伐单抗组、透明质酸钠(sodium hyaluronate, SH)组和对照组,每组8只。贝伐单抗组和对照组关节腔各自注射4.0 mg贝伐单抗和生理盐水,每3周1次,连续实验6周,各组分别注射2次;SH组进行SH关节腔内注射,每周1次,连续实验6周,共6次。6周后观察各组软骨和滑膜组织病理切片,滑膜电子显微镜及血管免疫组织化学SP法染色,软骨大体观察评分,MMP-1的免疫组织化学表达,以及Mankin’s评分。结果：病理切片显示贝伐单抗组较SH组和对照组血管生成明显减少,抑制滑膜增生,改善了软骨结构及基质成分;滑膜血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)阳性细胞百分数、平均光密度值、软骨MMP-1细胞百分数、Mankin’s评分及软骨大体评分均显示贝伐单抗组小于SH组和对照组（P<0.05）,SH组小于对照组（P<0.05）。结论：贝伐单抗能减少血管生成,抑制滑膜增殖,减少MMP-1的生成,对软骨有保护作用,并且优于SH,对兔膝原发性骨性关节炎有治疗作用,这为临床膝原发性骨性关节炎关节腔内药物治疗提供了一种可能的方案。     

超微肿痛贴对兔膝骨关节炎模型的软骨中JNK/p38 MAPK信号通路的影响

目的 观察超微肿痛贴对兔膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)模型的JNK/p38 MAPK信号通路的mRNA及蛋白表达的影响.方法 将50只3月龄新西兰兔随机分为空白组、模型组、氟比洛芬凝胶贴膏组、超微肿痛贴组,每组各12只,除空白组外,其他3组均采用木瓜蛋白酶膝关节腔注射方式造模.造模成功后,...     

In vitro effects of sodium hyaluronate on the proliferation and the apoptosis in chondrocytes from patients with Kashin-Beck disease and osteoarthritis

Objective:To identify the in vitro effects of sodium hyaluronate(HA) on the proliferation and the apoptosis of chondrocytes from patients with Kashin-Beck disease(KBD) and osteoarthritis(OA). Methods:Samples of articular cartilages from KBD and OA patients, as well as healthy volunteers(6 subjects in each of the 3 groups) were dissected, digested with collagenase and the cells cultured in monolayers. Chondrocytes from each sample were assigned to an untreated group and two HA-treated groups: H0(no HA), H100(HA, 0.1 g/L) and H500(HA, 0.5 g/L). The first passage chondrocytes were used to observe proliferation using the MTT assay, and apoptosis by flow cytometry through Annexin V/PI staining. Results:HA promoted proliferation of chondrocytes in all the three groups, and in KBD and OA groups, for cells cultured for 4 and 6 days, H500 significantly promoted the cell proliferation. The apoptotic rates of both KBD and OA group chondrocytes were in the order H500 < HA100 < H0. Conclusion:Sodium hyaluronate administration has a dose-dependendent vitro effect to promote proliferation and inhibit apoptosis of chondrocytes from patients with KBD and OA.     

β-羟基异戊酰紫草素对前列腺癌细胞株的生长抑制作用及机制研究

目的 研究β-羟基异戊酰紫草素(β-HIVS)对激素非依赖性前列腺癌细胞株PC-3的体外生长抑制作用及其可能机制.方法 采用MTT法检测β-HIVS对PC-3和人皮肤成纤维细胞株HSF的细胞生长抑制率;荧光素酶报告基因法检测给药后细胞中低氧诱导因子-1(HIF-1)和核因子κB(NF-κB)的转录活性;RT-PCR检测HIF-1下游靶基因血管内皮生长因子(VEGF)的表达;Western blotting检测β-HIVS作用后HIF-1α蛋白的表达水平.结果 β-HIVS对PC-3的细胞生长具有显著抑制作用(P<0.05),而对HSF的细胞生长无明显影响(P>0.05).给药后PC-3细胞中NF-κB转录活性无明显变化(P>0.05);而HIF-1转录活性受抑(P<0.05),其下游靶基因VEGF表达下调,且细胞中HIF-1α蛋白累积减少.结论 β-HIVS对PC-3的细胞生长具有抑制作用,其机制可能与β-HIVS减少低氧条件下PC-3中HIF-1α蛋白水平,抑制其转录活性,使下游促细胞生长靶基因VEGF表达下调有关.