分泌抗人早期T细胞单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及初步鉴定

以胎儿胸腺细胞免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，用Ｂ淋巴细胞杂交瘤技术产生了两种单克隆抗体，分别命名为ＳＭＵ１３、ＳＭＵ１４。初步鉴定的结果表明，１）ＳＭＵ１３，ＳＭＵ１４是抗早期Ｔ淋巴细胞的单克隆抗体，但与浆细胞也发生反应；（２）两株单抗的特性，反应谱与ＣＤ３８抗原相似；（３）ＳＭＵ１３，ＳＭＵ１４在白血病免疫学分型中可以明确判断白血病细胞的来源，具有结合补体的能力，在急性Ｔ淋巴细胞白血病的治疗中可发挥     

抗小鼠T淋巴细胞单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用C3H小鼠胸腺细胞免疫的Wistar大鼠脾细胞分别与两株小鼠骨髓瘤细胞(SP2/O和NS-1)融合,选择两个具有分泌抗小鼠T细胞单克隆抗体(McAb)阳性孔的杂交瘤细胞,用有限稀释法连续进行3次克隆化,获得50个分泌阳性McAb的亚克隆杂交瘤细胞。对其中两个亚克隆细胞培养上清液的生物学特性进行分析。结果表明:(1)它能在补体参与下杀伤多种品系小鼠的胸腺细胞(>90％)、淋巴结细胞(约60％)和脾细胞(约30％);(2)用间接荧光法证实它与多种品系小鼠胸腺细胞、淋巴结细胞和脾细胞结合的百分率与上述补体依赖细胞毒试验的结果一致;(3)用细胞培养上清液加补体共同处理小鼠淋巴结和脾脏细胞后,受处理的细胞失去对刀豆素A(ConA)的应答反应而保留对脂多糖(LPS)的应答能力。初步认为这两个亚克隆杂交细胞培养物所分泌的McAb是针对小鼠T淋巴细胞表面抗原的。     

分泌抗——HBe单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用ＨＢｅＡｇ阳性血清纯化ＨＢｅＡｇ，免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞进行融合，反复克隆化培养，最终获得４株分泌抗－ＨＢｅ单克隆抗体的杂交瘤细胞株。对其中两株进行了鉴定。其细胞培养上清中的ＥＬＩＳＡ效价的分别为１：８００和１：５００，诱生同属小鼠腹水中的ＥＬＩＳＡ效价均为１：１０００，特异性试验表明，两株杂交瘤分泌的抗体为特异性抗体，小鼠Ｉｇ亚类鉴定，两株抗体均为ＩｇＧ１亚类球蛋白。细胞染     

分泌抗人甲胎蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用人甲胎蛋白(AFP)免疫BALB/c小鼠的脾细胞与SP2/O骨髓瘤细胞融合,获得两株分泌抗人AFP单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株(G2和G10)。用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养上清液和小鼠腹水的特异性抗体效价,分别为2～4×10~(-3)和10~(-6)～10~(-7)。两株杂交瘤细胞染色体的众数为104～108条。经体外连续传代及冻存半年复苏后,仍具有分泌抗体能力,说明其性能稳定。两株所分泌的抗体,均属IgGl型。     

分泌小鼠抗人甲胎蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

采用活体内生长ＳＰ２／０骨髓细胞为融合伙伴,用ＳＰ２／０细胞与甲胎蛋白免疫的ＢＡＬＡ／Ｃ小鼠脾细胞进行融合,建立了２株稳定分泌抗ＡＦＰ单克隆抗体的小鼠杂交瘤株。冻存两年后复苏,仍稳定地分泌特异抗体。培养上清的抗体效价达１０＾－３,腹水效价达１０＾－６,ＨＭＡ２１５和ＨＭＡ６４识别抗原表位不同,ＨＭＡ２１５和ＨＭＡ６４均属于小鼠ＩｇＧ１亚类。     

分泌抗人喉癌单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及临床意义

用喉癌抗原免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠的脾细胞与ＮＳ－１小鼠骨髓瘤细胞融合，经筛选获得４株分泌抗人喉癌单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞株，均收集到腹水型ＭｃＡｂ，并验证其滴度高，纯化效果好，特异性强。用其中３株ＭｃＡｂ混合，对１２４例喉癌及４０例正常人血清予以检测，结果喉癌患者血清中喉癌相关抗原水平明显高于对照组，Ｐ＜０．０１，且随病情的加重，喉癌相关抗原水平呈上升趋势。故本室建立的抗人喉癌混合ＭｃＡｂ可作为一种较为理想的肿瘤标记物，为喉癌的诊断、病情监测、预后判定提供了一种敏感、特异的测试手段。     

抗日本血吸虫循环抗原单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及鉴定

为检测日本血吸虫宿主循环抗原提供有价值的McAb,用小鼠骨髓瘤细胞SP2/O株与日本血吸虫循环抗原免疫的BALB/C小鼠脾细胞进行融合,融合率90.20%。经用ELISA和IFA检测,总阳性率34.13%。经多次筛选和克隆化后,获得2株分泌McAb的细胞株:G-A12和H-E9。它们均属IgG2a亚类。Western blot结果表明G-A 12所针对的靶抗原为sjCAg31KD,H-E9为SjAW 31 KD。IFA检测发现H-E9主要定位于成虫表膜;G-A12主要定位于成虫肠道。这2株杂交瘤细胞在体外培养下稳定地分泌特异性抗体迄今已达6个月。     

分泌抗人精子单克隆抗体杂交瘤细胞的建立

用人精子免疫BALB/C小鼠,用杂交瘤技术制备出9株抗人精子单克隆抗体。经酶联免疫吸附试验和间接免疫荧光实验证明,9株抗人精子单克隆抗体均能与人精子产生特异性免疫反应。连续传代及液氮中保存的杂交瘤细胞分泌抗人精子单克隆抗体的滴度持续稳定。     

分泌抗B型肉毒毒素单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立

我国由肉毒毒素引起的食物中毒以A、B型最常见。但用常规法制备的抗血清在两型间常有交叉反应,不适于分型鉴定之用。即使应用亲和层析交叉吸收纯化,仍难以获得B型特异性抗体。为获得高效价的型特异性抗体,本研究以B型肉毒类毒素免疫纯系BALB/c小鼠,注射3次后,血清抗体琼脂双     

小鼠阿片肽δ受体多肽片段的单克隆抗体细胞系的建立

本实验选用一段合成的小鼠阿片肽δ受体的多肽片段，通过与牛血清清蛋白连接，免疫小鼠，经细胞融合后，检测出抗该多肽片段抗体，从而建立了抗多肽片段单克隆抗体的细胞系。     

分泌抗破伤风类毒素人单克隆抗体的人鼠杂交瘤细胞系的建立

作者采用小鼠骨髓瘤细胞系与破伤风类毒素免疫的人外周血淋巴细胞进行融合,对影响人-鼠杂交瘤细胞制备人单抗成功的因素进行了探讨。按免疫时间(天)及体外刺激与否分为四组、其中以 PWM+TT 体外刺激 PBL(比体外不刺激)的细胞融合率高,且易建成稳定分泌抗体的细胞系。经5次克隆化后获得5株抗 TT 的人单抗杂交瘤细胞系。经双扩确定 IgG2株,IgM3株。冻存10个月后复苏,传代及适当的克隆化后仍为阳性。上清液中人 IgM 的分泌量为0.42～1.15μg/ml。经染色体鉴定确为人-鼠杂种细胞。     

分泌抗人精子单克隆抗体的杂交瘤细胞株(6B_4、7C_4)的建立

将经正常人的精子细胞免疫的 BALB/c 鼠脾脏取出,使此细胞与 NS1小鼠骨髓瘤细胞融合。用间接免疫荧光法等方法检测抗体,得到12个孔抗人精子阳性的杂交瘤。经过2～3次有限稀释法克隆化后建立了分泌抗人精子单克隆抗体的杂交瘤细胞株6B_4及7C_4。其染色体数目为86～88对,它对人精子有制动、凝集作用并有种间交叉反应,对人 LDH 活力有明显的消耗作用。证明该抗体有特异性。这些生物学特性对男性避孕有一定的实用价值。     

分泌抗巨细胞病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株的建立

用CMV-AD_(169)病毒株免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP_(2/0)细胞融合,获得5株分泌抗CMV单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株,其细胞培养上清液效价(ELISA)为1∶32～1∶128,腹水效价为10~4～10~5,经证实McAb为IgG2a或IgM,均具有HCMV种特异性,可作为特异、敏感的免疫试剂,用于巨细胞病毒感染的早期快速诊断。     

人脑肌酸激酶单克隆抗体的制备及鉴定

用事故死亡者脑组织中提纯的人脑肌酸激酶（ＣＫ－ＢＢ）对ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠进行免疫，应用杂交瘤技术将免疫小鼠脾细胞分别与２种骨髓瘤细胞（ＮＳ－１，６５３）融合，筛选得到８株能稳定分泌ＩｇＭ抗体的杂交瘤细胞。对分泌抗体经酶联免疫电泳转移试验（Ｗｅｓｔ－Ｂｌｏｔ）进行了鉴定，其中４种抗体能特异地与ＣＫ－ＢＢ的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳带结合。提示这些单克隆抗体有可能应用于肌酸激酶的结构功能研究和临床检验中。     

分泌抗SPA单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立与鉴定

以 SPA 作基础免疫 BALB/C 小鼠后,融合前三天直接脾内免疫,取脾细胞与 SP_2/O 瘤细胞常规融合,融合率100%;以快速 ELISA 法检测抗体,阳性率60%。5次有限稀释法克隆化后获得7株杂交瘤细胞,作中和抑制试验,证实为 SPA 特异性抗体。经鉴定属 IgG2a 及 IgG2b 亚类。电镜观察细胞融合,发现其细胞内含逆转录病毒。杂交瘤细胞液氮保存与体外连续传代一年,仍保持原有各种特性。     

霍乱弧菌单克隆抗体杂交瘤细胞株建立

本法获得了841C71、841C72两个分泌抗霍乱弧菌菌体抗原单克隆抗体(MAb)的杂交瘤细胞株。其培养上清抗体滴度为1∶8～1∶64,小鼠腹水抗体滴度为1∶1280～1∶5120。与霍乱弧菌小川型的反应滴度在1∶80～1∶160之间,但不与水弧菌及大肠杆菌等肠道杆菌发生交叉反应。此二株细胞产生的MAb为IgG类。