流式细胞仪免疫分型在B细胞淋巴瘤诊断中的应用

评估B淋巴细胞是流式细胞仪免疫分型最有临床意义的指征之一,通过检测免疫球蛋白轻链限制性或异常表型可区分肿瘤性B细胞和反应性B细胞,而肿瘤细胞的表型可用于诊断WHO分类中具有不同特点的淋巴瘤亚型.本文综述流式细胞免疫分型在诊断B淋巴细胞肿瘤中的应用.     

流式细胞免疫表型分析在淋巴瘤诊断中的应用

流式细胞术发明于20世纪70年代，近年来在淋巴造血系统肿瘤的诊治应用中优势显著。2001年更新的WHO淋巴瘤分类标准依据形态学、免疫学表型、临床特征以及分子遗传学异常而界定的分类诊治体系中，进一步确立了应用免疫表型鉴定在淋巴瘤分类诊断中的重要地位。流式细胞免疫表型（flow cytometric inmmnophenotyping，FCI）检测以其快捷、敏感及多参数定量分析等优点已成为目前国际上恶性淋巴瘤分类诊断的重要手段，并在淋巴瘤的治疗和提示预后方面发挥重要作用。     

非霍奇金淋巴瘤流式细胞术免疫表型检测及DNA倍体分析

 目的 探讨非霍奇金淋巴瘤（NHL）流式细胞术免疫表型检测及DNA倍体分析与疾病的诊断、分型、恶性程度判断及预后之间的关系。方法 对每例NHL患者进行病理形态学及免疫组化分类,标本均采用淋巴结活检或细针穿刺获取新鲜淋巴结组织,用单克隆抗体标记及碘化丙啶染液一步插入性DNA定量染色法染色后行多参数流式细胞学检测及DNA倍体（DI,SPF）分析。结果 淋巴结常规病理中3例B细胞肿瘤和1例T细胞肿瘤未能明确分型,经流式检测诊断明确。NHL组细胞DI值,DNA异倍体检出率和SPF高于正常对照组,差异有统计学意义（P＜0.01）。DNA四倍体、非整倍体和多异倍体细胞SPF、DI值显著高于二倍体细胞（P＜0.05）,在DNA异倍体细胞中,从DNA异倍体细胞ND→T→ AN →M,SPF检出率越来越高。NHL不同病理分组和NHL-Ⅲ、NHL-Ⅳ组与对照组间异倍体检出率、SPF值及DI值,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论 免疫表型单克隆抗体在不同类型淋巴瘤有不同的表达,可提高淋巴瘤诊断分型的准确率;DI,SPF水平可反映肿瘤增生情况及病理学恶性程度且与预后有关。     

流式细胞免疫分型联合PCR检测抗原受体基因重排在淋巴增殖性疾病诊断与鉴别诊断中的应用

背景与目的:淋巴增殖性疾病是一组病理形态、免疫表型、临床特征高度异质性的疾病.本文旨在评价流式细胞免疫分型联合聚合酶链反应(PCR)检测抗原受体基因重排在淋巴增殖性疾病诊断中的应用价值.方法:分离79例拟诊淋巴增殖性疾病患者的新鲜病理标本(淋巴结、脾脏、胃活检组织和肝穿组织),流式细胞术分析细胞的免疫表型特征;同时采用BIOMED-2多重PCR分析组织的抗原受体基因重排状况及其克隆来源;并与病理诊断及免疫组织化学结果进行比对.结果:患者最终确诊为非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin's lymphoma,NHL) 37例(46.8％),霍奇金淋巴瘤(Hodgkin's lymphoma,HL)3例(3.8％),淋巴组织良性病变34例(43.0％),恶性肿瘤淋巴结转移4例(5.1％).在19例B-NHL确诊患者中,流式免疫分型和抗原受体基因重排诊断符合率均为94.7％(18例);18例T-NHL确诊患者中,流式免疫分型和抗原受体基因重排诊断符合率分别为72.2％(13例)和50％(9例);在34例淋巴组织良性病变的患者中,流式细胞免疫分型虽未见单克隆幼稚细胞,但有7例(19.4％)抗原受体基因重排呈单克隆性;在3例HL确诊患者中,流式免疫分型未能检测出来,抗原受体基因重排均为多克隆性;4例恶性肿瘤转移患者中(3例转移浸润淋巴结,1例转移浸润肝脏),流式细胞免疫分型均检测到大量异常幼稚细胞,其中3例无特殊抗体标记,另外1例表达幼稚髓系标记;抗原受体基因重排均为多克隆性.结论:应用流式细胞免疫分型联合抗原受体基因重排分析,对于淋巴组织良、恶性增殖的鉴别和不同类型恶性淋巴瘤的诊断,具有很好的辅助价值.     

基因芯片对白血病和淋巴瘤的分类和研究

白血病和淋巴瘤的分类和分型一直是诊断和治疗的关键问题，2000年WHO发表了血液和淋巴组织肿瘤性疾病的新分类，进一步明确分类不能单纯依赖形态学和一些免疫表型，基因变异是其重要的甚至关键性的特征。白血病……     

卵巢弥漫性大B细胞淋巴瘤临床病理分析

目的 观察卵巢弥漫性大B细胞淋巴瘤的临床病理、免疫表型特征及患者生存情况,探讨该肿瘤的病理诊断、鉴别诊断及预后影响因素.方法 回顾性分析6例卵巢弥漫性大B细胞淋巴瘤的临床病理资料,按WHO(2001年)淋巴造血系统肿瘤分类标准进行形态学观察并分型,采用免疫组织化学En-Vision两步法研究其免疫表型.结果 按Ann Arbor分期标准,Ⅰ期2例,Ⅱ期2例,Ⅳ期2例.5例有随访资料,随访截止时4例生存,最长生存时间65月.形态学变型5例为中心母细胞型,1例为免疫母细胞型.免疫分型结果6例均为生发中心样B细胞型.肿瘤细胞Ki-67增殖指数低,3例肿瘤细胞呈Bcl-2蛋白阳性表达.结论 病理形态学观察、免疫表型检测对卵巢弥漫性大B细胞淋巴瘤的诊断和鉴别诊断具有重要作用.卵巢弥漫性大B细胞淋巴瘤多为生发中心B细胞起源,其预后和临床分期、免疫组化分型、治疗方案有关.     

FAB标准分类分型困难的急性白血病诊断的研究

我院收治急性白血病311例和CML急变期54例,其中按FAB标准分类分型困难的68例。该68例进一步做了电镜、McAb_5免疫分型以及染色体核型分析。结果28/68例最后诊断与最初按FAB标准疑诊的意见相符;而40/68例则与疑诊意见不一致。这一结果说明应用FAB标准作急性白血病的分类分型的准确率约80%。讨论了部分病例应用FAB标准分类分型困难的原因。     

68例成人白血病免疫分型特点分析

[目的]分析68例成人白血病免疫分型特点.[方法]采用单克隆双色或三色直接荧光标记,流式细胞仪检测以CD45-SSC辅助设门,分型根据抗体积分系统.并与FAB分型进行比较.[结果](1)62例成人白血病中未分化型占6.45%(4例),变异型占12.9%(8例).其中急性髓细胞白血病(AML)占69.35%(43例),B细胞型急性淋巴细胞白血病(B-ALL)占16.13%(10例),T细胞型急性淋巴细胞白血病(T-ALL)占6.45%(4例),AML/ALL为3.07:1.CD34的阳性率在62例成人急性白血病和6例慢性粒细胞性白血病急变患者中分别为58.06%和83.33%;免疫分型与FAB分型的符合率为83.9%.[结论]在流式细胞仪上采用CD45-SSC设门法多参数分析白血病免疫分型,并利用抗体积分系统诊断标准可为临床诊断提供重要依据.     

脑脊液流式细胞学对小儿急性淋巴细胞白血病并发中枢神经系统疾病的诊断和鉴别价值

目的:探讨分析脑脊液流式细胞学诊断及鉴别小儿急性淋巴细胞白血病并发中枢神经系统疾病（CNSL）的价值。方法:选择2012年1月至2016年6月我院收治的89例ALL患儿脑脊液标本，采用脑脊液 流式细胞（FCM）技术、脑脊液细胞学（CC）法进行检测，对比分析两种检测方式对CNSL的诊断情况。结果:经脑脊液FCM检出23例异常表型细胞，检出阳性率为25.84%，经脑脊液细胞形态学检出10例异常细胞，检出阳性率为11.24%，脑脊液FCM检出阳性率明显高于脑脊液细胞形态学检查（P＜0.05）。对于脑压增高患儿，FCM检出阳性率明显高于细胞形态学检出阳性率（P＜0.05）；对于脑脊液糖正常患儿，FCM检出阳性率明显高于细胞形态学检出阳性率（P＜0.05）。结论:脑脊液FCM在ALL儿童CNSL诊断中具有着重要的临床意义，是脑脊液细胞形态学检查的重要补充方法。     

流式细胞仪三色荧光标记技术在白血病免疫分型中的应用

目的：建立一种准确、可靠的白血病免疫分型检测方法。方法：采用流式细胞仪单染色和三色荧光标记技术。结果：单染色标记法检测48例白血病患者，诊断不明确9例(18.7％)，初始诊断与最后诊断不符2例(4％)，三染色标记法检测36例白血病患者，未发现诊断不明确者或初始诊断与最后诊断不符者；且通过二维表型图谱，可发现相关抗原共同表达，利于混合型白血病诊断。结论：流式细胞仪三色荧光标记法进行白血病免疫分型，克服了单染色标记法细胞分群不清的问题，对白血病诊断、发生发展和预后判断有重要的指导意义。     

多参数流式细胞术在淋巴细胞白血病和非霍奇金淋巴瘤骨髓侵犯诊断的应用

背景与目的：骨髓形态学检查可诊断淋巴细胞白血病,结合淋巴结活检可诊断非霍奇金淋巴瘤(non—Hodgkin‘s lymphoma,NHL)侵犯骨髓,但形态学仅是初步的诊断,采用免疫分型而获得肿瘤细胞来源及发育阶段的资料是目前诊治淋巴系统恶性肿瘤所必需的。本研究探讨多参数流式细胞术(flow cytometry,FCM)在淋巴细胞白血病、NHL骨髓侵犯的诊断和免疫分型方面的应用价值。方法：取初治白血病患者骨髓标本11例和NHL患者骨髓侵犯的骨髓标本41例,以及2例分别表现为巨大纵隔肿块和腹部巨大肿块的患者因无法取得病理标本而取骨髓检测的骨髓标本2例。采用B细胞系列抗体、T细胞系列抗体、粒细胞系列抗体,按常规行FCM免疫表型检测,CD45结合两个系列单抗或阶段特异性单抗进行三色免疫荧光染色,CD45／SSC设门后可将骨髓细胞清晰地分出成熟细胞和幼稚细胞群,然后行FSC、SSC、McAb1-FITC、McAb2-PE、CD45-Cychrome五参数分析。结果：11例白血病患者骨髓形态学经FCM的免疫分型获得进一步确诊和分型。41例NHL骨髓侵犯标本免疫表型与其淋巴结病理免疫组化相符合的为80．5％(33／41),不相符的有19．5％(8／41),结合临床、病理、骨髓形态学诊断和骨髓FCM的结果,最终获得明确诊断。2例分别为巨大纵隔肿块和腹块的患者仅靠骨髓形态学和骨髓FCM确诊为T—NHL和B—NHL。结论：多参数FCM能进一步明确白血病和NHL骨髓侵犯的诊断,对急性淋巴细胞白血病和NHL的病例还可同时获得T或B细胞来源和细胞分化早期或后期的参数,有助于临床诊断、鉴别诊断和治疗方案的确定。     

骨髓增生异常综合征骨髓细胞淋巴系免疫标志及其增殖特性临床意义探讨

目的：探讨骨髓增生异常综合征(MDS)骨髓细胞淋巴系免疫标志及其增殖特性的变化和意义。方法：用流式细胞仪(FCM)分析了45例MDS患者和10例良性血液病患者(对照组)骨髓细胞淋巴系免疫标志及其增殖特性。结果：MDS组T细胞标志CD2、CD7。早期B细胞标志CD9。干／祖细胞标志HLA-DR阳性表达率明显高于对照组(P＜0.05)；RA和RAEB组分别与对照组比较，T系标志CD2、CD7，阳性表达率明显高于对照组(P＜0.05)，HLA-DR明显高于对照组(P＜0.01)，B系标志CD9、CD10、CD19，与对照组无差异(P＞0.05)。随病情进展CD2+表达率明显下降，HLA-DR~+表达率明显升高。在S+G2／M期申CD2+细胞所占比例RAEB较RA明显降低(P＜0.05)，CD7+细胞所占比例RAEB较RA明显升高。结论：MDS骨髓细胞T淋巴系免疫标志和增殖特性异常，表明T淋巴细胞增殖分化受阻，提示细胞免疫功能失调在MDS发病和病情进展中可能起作用。     

流式细胞术在非霍奇金淋巴瘤诊断与分型中的应用

 目的　探讨流式细胞术对非霍奇金淋巴瘤（NHL）诊断与分型的临床应用价值。方法　收集临床怀疑淋巴瘤的患者手术切除的新鲜淋巴结59例,流式细胞术（FCM）检测异常单克隆淋巴细胞数量及其免疫表型,分析FCM诊断及分型的结果与病理组织学诊断的符合率。结果　28例病理确诊NHL的淋巴结标本中,FCM检测到有异常克隆性淋巴细胞的24例,异常淋巴细胞的比例为4.28 %～89.10 %,其中确诊B-NHL 23例,T-NHL 1例。FCM对NHL的诊断与病理组织学诊断的符合率为85.71 %;FCM对B-NHL诊断的特异度为100 %,敏感度为92 %。在FCM确诊的24例NHL中,根据异常细胞表型进一步分型,与病理诊断均相符。结论　FCM能准确确定克隆性淋巴细胞,协助诊断NHL,并在B-NHL的分型和鉴别诊断中起重要作用。     

脾边缘区淋巴瘤的诊断

目的:探讨脾边缘区淋巴瘤的临床特征、诊断及鉴别诊断。方法:回顾性分析华中科技大学同济医学院附属同济医院2019年收治的3例表现为脾大、血细胞减少的CD5 - CD10 - B细胞非霍奇金淋巴瘤患者的临床诊断及鉴别诊断过程,并复习相关文献。 结果:3例均为老年患者,均出现不同程度的脾大和血细胞减少,均在骨髓或淋巴结中发现CD5 - CD10 -单克隆B淋巴细胞。综合患者的临床特征、外周血及骨髓形态、免疫表型和遗传学特征,2例患者诊断为脾边缘区淋巴瘤,1例患者诊断为弥漫大B细胞淋巴瘤。 结论:脾边缘区淋巴瘤的诊断需综合临床特征、外周血及骨髓形态、免疫表型和遗传学特征,与其他CD5 - CD10 -小B细胞淋巴瘤进行仔细鉴别。新一代基因突变高通量检测和表达谱分析有助于不典型疑难病例的精准诊断。     

急性髓细胞白血病微分化型流式细胞术免疫分型分析

目的探讨流式细胞术（FCM）检测免疫表型在诊断急性髓细胞白血病微分化型（AML—M0）中的意义。方法采用多色FCM分析14例AML—M0病例的各相关抗原表达情况。结果14例AML—M0中,仅1例依据骨髓细胞形态学作出诊断,其余13例均依靠FCM作出明确诊断。在AML—M0中,髓系抗原CD33 14例（100％）表达阳性,CD13和CD117 9例（64％）表达阳性,CD34和HLA—DR12例（86％）表达阳性,一般成熟髓系相关抗原如CD16、CD10、CD14等均阴性,B和T淋巴细胞特异抗原如CD79a和CD3均为阴性,少数原始细胞表达细胞内髓过氧化物酶（MPO）、TdT。常常表达一些淋系但并不特异的抗原如CD7、CD2或CD19,但比淋巴细胞白血病表达的荧光强度弱。结论FCM免疫分型在AML—M0诊断中至关重要。     

Simultaneous occurrence of a T-cell lymphoma and a chronic myelogenous leukemia with an unusual karyotype

The simultaneous occurrence of malignant T-cell lymphoma and chronic myelogenous leukemia is reported. The lymph nodes contained E rosette forming cells. Blood and bone marrow cell morphology were consistent with the diagnosis of chronic myelogenous leukemia. Lymph nodes, bone marrow and blood mitosis showed a t(6;8) (6pter→6q27 ::8p12→8pter;6qter→6q27 ::8p12→8qter) translocation.So far a number of recent reports have shown simultaneous B lymphoid and myeloid proliferations in some malignancies, this is apparently the first reported case of simultaneous T lymphoid and myeloid proliferations.     

非霍奇金淋巴瘤免疫分型与骨髓细胞形态学的相关性研究

目的:探讨非霍奇金淋巴瘤免疫分型与骨髓细胞形态学的相关性。方法:选择2015年3月至2017年3月我院收治的NHL骨髓侵犯患者63例,进行骨髓涂片细胞形态学检测与流式细胞（FCM）免疫分型检测,分析两种检测之间的联系。结果:按照骨髓细胞形态学分型结果,63例NHL骨髓侵犯患者其中小细胞成熟细胞型40例（63.49%）、大细胞原始型患者6例（9.52%）、大细胞幼稚型10例（15.87%）以及组织细胞型7例（11.11%）。FCM检测根据骨髓瘤细胞特异性抗原表达情况,诊断为B细胞淋巴瘤患者48例（76.19%）、T细胞淋巴瘤患者10例（15.87%）、NK细胞淋巴瘤患者4例（6.35%）以及间变性大细胞淋巴瘤患者1例（1.59%）。FCM诊断48例B细胞淋巴瘤患者中,小细胞成熟细胞型37例（77.08%）、大细胞原始型4例（8.33%）、大细胞幼稚型5例（10.42%）、组织细胞型2例（4.17%）;10例T细胞淋巴瘤患者中,小细胞成熟细胞型3例（30.00%）、大细胞原始型2例（20.00%）、大细胞幼稚型1例（10.00%）、组织细胞型4例（40.00%）;4例NK细胞淋巴瘤患者中,均为大细胞幼稚型（100.00%）;1例间变性大细胞淋巴瘤患者为组织细胞型（100.00%）。结论:非霍奇金淋巴瘤免疫分型与骨髓细胞形态学之间具有着一定的联系,二者联合运用,可提高临床诊断准确性并为临床提供相应的病理分型意见,值得临床推广。     

Cytomorphologic, immunocytochemical, and nucleic acid flow cytometric study of 50 lymph nodes by fine-needle aspiration. Comparison with results obtained by subsequent excisional biopsy

Fifty patients with clinically suspected or previous diagnosis of lymphoma underwent fine-needle aspiration (FNA) and subsequent excisional biopsy of their lymph nodes. Results of cytologic diagnosis made from the direct smears in conjunction with immunocytochemical study of cytospin preparations and nucleic acid flow cytometric study (FCM) were compared with the results obtained from histologic sections, cryostat-immunohistochemical study, and nucleic acid FCM performed on resected lymph nodes. This study demonstrates (1) results of immunocytochemical and DNA-FCM analysis of FNA-derived material are comparable in the majority of cases to those obtained from surgical specimens, (2) immunostaining of cytospin preparations for immunoglobulin (Ig) gives less background staining and in certain cases is easier to interpret than when performed on frozen sections, and (3) monotypia in FNA in conjunction with cytomorphologic study is 100% specific for lymphoma, and polytypic staining for Ig does not exclude HD, T-cell lymphoma, or B-cell malignancy focally involving a lymph node.