表皮生长因子促进真皮成纤维细胞生长的机制

目的 探讨表皮生长因子（EGF）对真皮成纤维细胞中cyclinD1和CDK-4表达的影响，从细胞周期的角度认识EGF促进真皮成纤维细胞生长的机制。方法 研究对象为大鼠真皮成纤维细胞，用含100ml/L胎牛血清的DMEM，加入50mg/L的EGF培养SD大鼠的真皮成纤维细胞，通过MTT检测、流式细胞仪分析观察细胞的生长状态，免疫组化检测cyclinD1和CDK-4的表达结合流式细胞仪分析来观察细胞的周期变化。结果 MTT检测（加药前0.37&;#177;0.011,加药后0.55&;#177;0.008）、流式细胞仪结果（加药前9.1，加药后14.7）都显示50mg/L的EGF能显著促进真皮成纤维细胞的生长增殖，免疫组化结果显示，两者一致，加药后阳性明显增强。结论 50mg/L的EGF对真皮成纤维细胞的生长有极大地促进作用，促进了细胞周期蛋白cyclinD1和CDK-4的表达增强，细胞G1期变短，增殖能力增强。     

大蒜素对人胃癌MGC803细胞体外作用的研究

目的探讨大蒜素对人胃癌MGC803细胞的作用。方法MTT法检测MGC803细胞生长抑制率;流式细胞仪检测细胞周期改变和免疫组化SP法检测Bcl-2和Bax蛋白表达的变化。结果2μg/ml大蒜素作用24h、72h后细胞的生长抑制率为14.01%±2.36%和50.57%±7.01%;浓度8μg/ml时抑制率升为35.42%±5.55%和89.66%±19.92%。2μg/ml、4μg/ml、8μg/ml的大蒜素作用于MGC803细胞24h后G0/G1期细胞比率明显下降,而G2/M期比率明显上升。经2μg/ml、4μg/ml、8μg/ml的大蒜素处理后MGC803细胞的bcl-2蛋白表达明显下调,bax蛋白的表达明显上调。结论大蒜素能通过诱导癌细胞周期阻滞于G2/M期来抑制癌细胞的生长增殖。其机制可能与下调bcl-2和上调bax蛋白表达诱导癌细胞调亡有关。     

雷帕霉素对骨髓瘤细胞RPMI8226增殖、凋亡及趋化因子受体CXCR4表达的影响

本研究探讨雷帕霉素对骨髓瘤细胞系RPMI8226体外增殖、凋亡、细胞周期及对趋化因子受体CXCR4表达的影响。不同浓度雷帕霉素作用于RPMI8226细胞不同时间,应用MTT检测细胞的增殖,流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期,半定量PCR检测雷帕霉素干预RPMI8226后细胞周期蛋白D1（cyclinD1）、CXCR4mRNA表达,荧光定量PCR检测哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）mRNA表达的影响。结果表明：雷帕霉素对RPMI8226细胞有增殖抑制作用,细胞周期显示细胞阻滞于G0／G1期,G2／M期比例降低,cyclinD1、CXCR4和mTORmRNA表达下调。结论：雷帕霉素呈时间一剂量依赖性抑制RPMl8226细胞增殖,诱导细胞凋亡,并通过下调mTOR及cyclinD1表达,使细胞周期阻滞于G0／G1期,同时通过下调细胞CXCR4的表达,减少骨髓瘤细胞与基质细胞间的黏附及趋化作用达到抗肿瘤的效果。     

尼美舒利联合阿霉素对舌鳞癌Tca8113细胞的体外作用

目的:探讨尼美舒利联合阿霉素对舌鳞癌Tca8113细胞的协同作用.方法:通过MTT法检测细胞的生长抑制率、流式细胞仪检测细胞周期分布的改变.免疫组化SP法检测Bcl-2和Bax蛋白表达的变化.结果:20μmol/L尼美舒利作用24 h、48 h、72 h细胞生长抑制率为12.14%、27.10%和36.42%:浓度升至500 μmol/L时,抑制率分别升为38.57%、67.40%和85.18%.单用阿霉素(0.5 mg/L)作用48 h后,细胞生长抑制率为(37.54±6.47)%:合用20、100、500 μmol/L的尼美舒利后,抑制率分别升为(60.54±9.14)%,(75.34±12.79)%,(88.35±14.27)%.随着尼美舒利浓度(20、100、500 μmol/L)的增加,Tca8113细胞的G0/G1期细胞比率下降,G2/M期细胞比率逐渐上升:且细胞内Bcl-2表达下调,Bax表达上调.结论:尼美舒利能通过诱导癌细胞周期阻滞于G2/M期,下调Bcl-2表达和上调Bax表达的表达来抑制舌鳞癌Tca8113细胞的生长增殖,与阿霉素具有协同抗肿瘤作用.     

Cyclin D1-siRNA真核质粒的构建及对HepG2肝癌细胞增殖的影响

目的 利用PGE-1建立针对抑制cyclinD1功能的siRNA 真核表达载体以及对肝癌HepG2细胞增殖和周期的影响.方法 针对cyclinD1 mRNA序列设计合成4对寡核苷酸,退火后连接到PGE-1质粒中,PCR及测序鉴定.用脂质体将重组质粒转染到HepG2中,RT-PCR cyclinD1 mRNA的表达,G418筛选后用RT-PCR和Westernblot技术分别检测cyclinD1 mRNA和蛋白质水平;流式细胞仪测定细胞周期的变化;MTT法测定细胞的生长.结果 在设计的4条靶序列中有一序列重组成质粒后,可明显抑制cyclinD1的表达;目的 序列表达载体转染HepG2细胞后,可以明显减少G2-M期细胞的比例,当HepG2细胞稳定转染针对cyclinD1的干扰质粒后,mRNA和蛋白质的表达也明显降低;HepG2细胞cyclinD1表达降低后,其生长也受到明显抑制.结论 成功构建针对siRNA-cyclinD1真核质粒,在体外可成功抑制人肝癌HepG2细胞的增殖.     

中华眼镜蛇毒对K562/ADM和难治性急性髓性白血病细胞作用研究

目的:探讨中华眼镜蛇毒(NNAV)对人红白血病/阿霉素细胞(K562/ADM细胞)及原代难治性急性髓性白血病细胞的作用。方法:以K562/ADM细胞及10例急性髓性白血病(AML)患者的原代初发难治性急性髓性白血病细胞为研究对象进行实验,应用不同剂量的NNAV作用于细胞后,采用噻唑蓝实验法(MTT)测定细胞增殖情况,免疫细胞化学法检测凋亡相关蛋白Bcl2表达,流式细胞仪测定凋亡率,蛋白质印迹法检测Caspase-3表达。流式细胞仪检测NNAV对细胞周期的影响,检测原代初发难治性急性髓性白血病细胞细胞周期蛋白D(Cyclin-D)的表达情况;观察以上指标在Cyclin-D阳性表达组和阴性表达组有无差异。结果:经过不同浓度的NNAV处理后,无论是K562/ADM细胞还是初发难治性急性髓性白血病细胞,Bcl-2表达下调,Caspase-3表达上调;细胞增殖抑制明显,并具有时间依赖性及剂量依赖性。流式细胞仪检测证实0.8 mg/L和1.0 mg/L的NNAV均能够使原代初发难治性细胞阻滞于细胞周期的G0/G1期,而处于G2/M期的细胞含量减少。10例原发难治性急性髓性白血病细胞中Cyclin-D表达阳性7例,Cyclin-D表达阴性3例,但以上指标在Cyclin-D阳性表达组和阴性表达组无显著差异。结论:NNAV在体外可明显抑制K562/ADM细胞和原代初发难治性AML细胞增殖;调节细胞周期停滞于G0/G1期,减少G2/M期的细胞含量,提示NNAV有可能通过干预Bcl-2、Caspase-3表达而诱导细胞凋亡,细胞周期进程可能是中华眼镜蛇毒组分对原发难治性AML细胞的发挥增殖抑制作用的机制。     

脂肪组织来源干细胞的分离培养及鉴定

目的探讨脂肪组织来源干细胞(adipose-derived stem cells,ASCs)的分离、培养、分化和鉴定的方法,为进一步的实验研究提供理论依据。方法酶消化法处理脂类抽吸物,分离培养ASCs,观察细胞形态;四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测细胞活性并绘制细胞生长曲线,流式细胞仪测定细胞周期,丫啶橙染色检测细胞的衰老;流式细胞仪、免疫组织化学染色法鉴定表面分子表达;成脂定向诱导分化后油红"O"染色定性。结果原代培养的ASCs呈成纤维细胞样贴壁生长,具有很强的增殖能力;细胞周期研究发现ASCs具有干细胞的特性。流式细胞仪检测显示干细胞标志的CD29、CD44、CD34的表达均呈阳性;免疫化学染色发现VШ因子、CD31、CD34,CD105、SMA表达阳性;成脂诱导分化2周后,细胞内可见有大量脂滴,油红"O"染色可见胞浆内有大量红染颗粒。结论自人体脂类抽吸物中通过酶消化法能分离和培养出具有干细胞特性的成纤维细胞样细胞群,该细胞具有很强的增殖活性且不易衰老,能稳定表达干细胞表面标志并能实现定向成脂分化。     

苦参碱抑制血管紧张素Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞增殖的机制研究

目的:探讨苦参碱对血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,AngⅡ)诱导的大鼠心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)增殖的抑制作用及其机制.方法:差速贴壁法体外培养新生Wistar大鼠的心肌成纤维细胞,随机分为6组:对照组,AngⅡ组,Losartan+Ang Ⅱ组,不同浓度Mat(0.25、0.5、1.0 mmol/L)+Ang Ⅱ组.MTT法检测细胞的增殖;流式细胞仪分析细胞周期并检测CyclinD1、p21的表达;免疫荧光细胞化学染色法检测p27蛋白表达.结果:(1)AngⅡ可显著提高心肌成纤维细胞MTT-OD值,使S期细胞比率增加,G1期细胞比率下降,并降低细胞p27蛋白的表达.而对CyclinD1、p21蛋白表达无影响.AT1受体拮抗剂Losartan可完全阻断AngⅡ的作用.(2)在一定范围内(0.25～1.0 mmol/L),Mat能降低AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞MTT-OD值,使S期细胞比率下降,G1期细胞比率增加,并提高心肌成纤维细胞中p27、p21蛋白水平,且呈浓度依赖性.结论:(1)AngⅡ通过AT1受体促进CFs增殖,机制可能与降低p27蛋白的表达有关.而与CyclinD1、p21无关.(2)在一定范围内,Mat可剂量依赖性地抑制AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞增殖,其作用与增强p27、p21的蛋白表达有关.     

原代人尿道狭窄成纤维细胞的体外培养及鉴定

目的对原代人尿道狭窄成纤维细胞的体外培养及鉴定,了解其增殖能力及生物学特性。方法人尿道狭窄成纤维细胞通过细胞的提取、传代、冻存与复苏获得。采用倒置显微镜观察、HE染色及波形蛋白免疫染色的方法鉴定细胞。以人胚肺成纤维细胞为对照组,以原代培养人尿道狭窄成纤维细胞的第2、4代及复苏后的第2、4代为试验组,通过对比试验组与对照组的细胞生长曲线、噻唑蓝(MTT)及流式细胞仪的检测结果了解细胞的增殖能力。结果倒置显微镜观察发现试验组与对照组细胞的形态相似,细胞HE染色及波形蛋白免疫染色鉴定细胞为成纤维细胞。通过比较试验组与对照组的细胞生长曲线、MTT及流式细胞仪的检测结果,发现各组间差异无统计学意义(P0.05),表明试验组与对照组的细胞具有相似的增殖能力。结论该试验确立了人尿道狭窄成纤维细胞的原代培养。     

芦荟大黄素对增生性瘢痕成纤维细胞凋亡的量效影响

目的:观察天然药物芦荟大黄素对增生性瘢痕成纤维细胞凋亡的作用。方法:实验于2001-06/2004-12在广东医学院整形外科研究所完成。成纤维细胞取自广东医学院附属医院整形外科患者手术切除的增生性瘢痕组织,瘢痕组织经处理后进行成纤维细胞原代及传代培养至第3～8代细胞。用剂量为40mg/L的芦荟大黄素分别处理对数生长期成纤维细胞[0(为对照组),24,48,72h],以流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡率;观察加入不同浓度(0,20,40,60,80mg/L)芦荟大黄素后24h对成纤维细胞凋亡的影响,采用特异性荧光染色和原位末端标记技术分别检测凋亡指数。结果:①芦荟大黄素作用不同时间对成纤维细胞周期和凋亡的影响:流式细胞术检测发现,用药24h出现“亚二倍体峰”即凋亡峰,凋亡指数为(10.81±1.43)%,到48和72h凋亡指数为(16.02±1.30)%和(21.58±1.56)%。随着作用时间的延长,DNA合成前期细胞百分数增多,DNA合成期的细胞含量逐渐减少,亚二倍体峰百分数增多(F=122.514,225.552,105.346,P<0.05)。②芦荟大黄素对成纤维细胞凋亡的量效影响:荧光染色和原位末端标记法检测凋亡指数,均呈剂量依赖性增高[荧光染色:0mg/L为(4.52±1.22)%,20mg/L为(25.56±1.12)%,40mg/L为(56.20±2.20)%,80mg/L为(80.05±2.12)%,F=1350.737;原位末端标记法:0mg/L为(3.85±1.15)%,20mg/L为(11.66±1.20)%,40mg/L为(23.12±1.06)%,80mg/L为(40.31±1.43)%,F=511.487,P<0.01]。结论:芦荟大黄素以时间依赖性的方式调节细胞周期并诱导增生性瘢痕成纤维细胞凋亡,还可呈量效关系促进成纤维细胞发生凋亡。     

蛇床子素干预人增生性瘢痕成纤维细胞增殖及转化生长因子β1的表达

背景:蛇床子素对体外培养人增生性瘢痕成纤维细胞增殖和细胞分泌的转化生长因子β1有抑制作用,但其具体作用机制尚待进一步研究。目的:体外观察蛇床子素对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖以及对细胞转化生长因子β1的影响。方法:体外原代培养人增生性瘢痕成纤维细胞,以不同浓度的蛇床子素作用于成纤维细胞,观察细胞形态的变化,应用MTT法和生长曲线法检测蛇床子素对细胞增殖活性的影响。免疫组织化学检测细胞转化生长因子β1的表达。结果与结论:蛇床子素能明显抑制人增生性瘢痕成纤维细胞的生长。MTT法检测的IC50为(15.2±2.0)μmol/L,可以明显下调细胞转化生长因子β1的表达(P<0.05)。说明蛇床子素对人增生性瘢痕成纤维细胞有很强的生长抑制作用并可以下调转化生长因子β1的表达。     

珍珠液对体外培养人瘢痕成纤维细胞生长的抑制

背景:研究发现,珍珠液有促组织细胞再生、消除瘢痕等功效.目的:观察珍珠液对人皮肤瘢痕成纤维细胞增殖的影响.设计、时间及地点:分组对比观察实验,于2008-09/12在广西医科大学医学实验中心完成.材料:瘢痕组织组织标本来自广西医科大学整形外科患者.珍珠液是珍珠的水解液,含有多种氨基酸、多肽、维生素、矿物质和天然酶等.购自北海国发生物有限公司.方法:参考Veelken方法进行成纤维细胞原代及传代培养,反复传代去除非成纤维细胞成分后,建立人皮肤瘢痕细胞系.取对数生长期的人皮肤瘢痕成纤维细胞3～5代,用胰蛋白酶消化成单细胞悬液,接种于96孔塑料培养板,密度为0.5×10~4/孔,每孔加入100μL的细胞悬液和100μL的DMEM培养基,常规培养24h后吸弃原培养液,实验分组:珍珠液组:加入已经配置的含珍珠液质量浓度为125.00,62.50,31.30,15.60,7.80,3.90,1.95,0.98mg/L的培养基200μL;对照组:每孔只加200μL的培养基.主要观察指标:MTT法检测成纤维细胞增殖情况,TUNEL法检测成纤维细胞凋亡情况.结果:珍珠液对成纤维细胞的半效抑制浓度IC_(50)为15mg/L,除0.98mg/L质量浓度外,其余质量浓度均能有效地抑制成纤维细胞的生长,且呈剂量依赖性抑制成纤维细胞的生长,珍珠液的浓度越高,对成纤维细胞的抑制率越大.剂量IC_(50)=15mg/L培养的成纤维细胞体积缩小、胞质少、密度变小,凋亡细胞多、呈棕黄色.对照组成纤维细胞体积大、胞质丰富、密度大.珍珠液作用后的细胞凋亡指数高于空白对照组(P＜0.01).结论:珍珠液能抑制体外培养皮肤瘢痕成纤维细胞的生长,并诱导其凋亡.     

抗转化生长因子β_2抗体对青光眼术后滤过泡成纤维细胞增殖及p21、cyclinD1表达的影响

背景：研究表明，转化生长因子β2在青光眼滤过性手术后滤过泡瘢痕形成过程中起着重要的作用。 目的：实验拟观察抗转化生长因子β2抗体对体外培养的滤过泡成纤维细胞增殖及p21、cyclinDl表达的影响。 设计，时间及地点：开放性实验，于2007—06在广东医学院附属医院整形科完成。 材料：取自青光眼小梁切除术后失败滤过泡进行手术修复时切除下来的瘢痕组织。患者均为男性，年龄23-35岁。8例患者术前、术中均未接受抗瘢痕药物治疗。 方法：将瘢痕组织进行原代细胞培养，获得成纤维细胞。将浓度为0（对照），0．01，0．1，1，10mg／L抗转化生长因子β2抗体作用于成纤维细胞24h，半数抑制浓度（IC50）抗转化生长因子β2抗体分别处理0（对照），24，48，72h。 主要观察指标：四甲基偶氮唑盐法及免疫组织化学法观察抗转化生长因子β2抗体对成纤维细胞的增殖及p21、eyclinD1表达的作用。 结果：①随着抗转化生长因子β2抗体作用浓度的增加及作用时间的延长，抗体对成纤维细胞具有明显抑制作用。②随着抗转化生长因子β2抗体作用浓度、时间增加cyclinD1阳性表达减少，弱阳性表达增加；而p21强阳性表达明显增多，且在细胞核的表达也增多（P〈0．01）；在不同的作用浓度及时间，p21与cyclinD1表达呈显著负相关（r＝－0．91，r=-0．85，P〈0．05），两者与细胞的增殖抑制显著相关（r=-0．76，P〈0．05）。 结论：抗转化生长因子β2抗体可能通过诱导p21蛋白合成，下调cyclinD1的表达从而抑制成纤维细胞的增殖。     

蛇床子素干预人增生性瘢痕成纤维细胞增殖及转化生长因子β1的表达

背景：蛇床子素对体外培养人增生性瘢痕成纤维细胞增殖和细胞分泌的转化生长因子β1有抑制作用,但其具体作用机制尚待进一步研究。目的：体外观察蛇床子素对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖以及对细胞转化生长因子β1的影响。方法：体外原代培养人增生性瘢痕成纤维细胞,以不同浓度的蛇床子素作用于成纤维细胞,观察细胞形态的变化,应用MTT法和生长曲线法检测蛇床子素对细胞增殖活性的影响。免疫组织化学检测细胞转化生长因子β1的表达。结果与结论：蛇床子素能明显抑制人增生性瘢痕成纤维细胞的生长。MTT法检测的IC50为（15.2±2.0）μmol/L,可以明显下调细胞转化生长因子β1的表达（P〈0.05）。说明蛇床子素对人增生性瘢痕成纤维细胞有很强的生长抑制作用并可以下调转化生长因子β1的表达。     

当归多糖对体外造血微环境中肌卫星细胞增殖的影响

背景: 肌卫星细胞是造血功能重建最有希望的种子细胞来源.当归多糖对造血干细胞和造血祖细胞的增殖分化存在显著的促进作用,也可以有效改变肌卫星细胞的生长特性.目的: 观察当归多糖对不同培养条件下乳鼠骨骼肌卫星细胞增殖的影响.方法: 分离小鼠肌卫星细胞,培养5 d后采用a一肌动蛋白免疫细胞化学鉴定.将细胞接种于96孔板培养24 h,使细胞同步化;将细胞分为空白对照组,骨髓基质细胞培养上清组,加入含50,100,200,300,400 mg/L当归多糖的DMEM/F12培养基实验组及经50,100,200,300,400 mg/L当归多糖干预后骨髓基质细胞条件培养基组.经实验处理后采用MTT法检测各组细胞的增殖活性.结果与结论: 分离培养的骨骼肌卫星细胞呈α-肌动蛋白染色阳性,通过MTT法检测发现,经不同浓度当归多糖干预后的骨髓基质细胞条件培养基培养的各组肌卫星细胞增殖显著.且经当归多糖干预的骨髓基质细胞条件培养基可以有效改变肌卫星细胞的生长特性,并呈剂量依赖性.     

血竭提取物促进成纤维细胞增殖及胶原分泌

背景：血竭为传统医学中生肌方剂的主要成分,长期应用于临床治疗多种难愈性创面,具有确切的疗效,但血竭在创面愈合过程中对正常成纤维细胞分泌胶原的影响,目前未见报道。目的：观察血竭提取物对成纤维细胞增殖及胶原分泌的作用。方法：应用氯仿、乙酸乙酯、乙醇对血竭依次回流提取得到血竭提取液,用DMEM培养液稀释后培养成纤维细胞。将人正常皮肤来源成纤维细胞分别培养于血竭氯仿提取液（氯仿提取组）、血竭乙酸乙酯提取液（乙酸乙酯提取组）、血竭乙醇提取液（乙醇提取组）含1%二甲基亚砜DMEM（含1%二甲基亚砜DMEM组）和正常培养（对照组）条件下。MTT法检测不同血竭提取物在不同质量浓度（0.002,0.02,0.2,2,20 g/L）培养条件下,确定最适合成纤维细胞生长的血竭提取物,并检测在此条件下,成纤维细胞形态、生长曲线、细胞周期、分泌Ⅲ型前胶原水平的变化。结果与结论：血竭乙酸乙酯提取物在0.2-2 g/L范围内,可以促进正常人成纤维细胞增殖,在2 g/L浓度值时促进增殖作用最显著,因此2 g/L乙酸乙酯提取物为最适合成纤维细胞生长的一组血竭提取物。与对照组相比,2 g/L乙酸乙酯提取组成纤维细胞的细胞融合现象增多,细胞浓度增加,S期的细胞比例增加,减少Ⅲ型前胶原表达。提示血竭乙酸乙酯提取物既可促进创面愈合,又不致于过度增生形成病理性瘢痕。     

辛伐他汀对大鼠肾间质成纤维细胞增殖及α5整合素表达的影响

目的研究辛伐他汀对培养的大鼠肾间质成纤维细胞TGF-β1激活后细胞增殖及表面α5整合素表达的影响。方法不同浓度辛伐他汀加入到含有TGF-β1培养液培养的大鼠肾间质成纤维细胞,分别采用MTT法及细胞流式仪检测细胞的增殖,RT-PCR法检测大鼠肾间质成纤维细胞表面α5整合素的表达。结果辛伐他汀能抑制由TGF-β1所引起的大鼠肾间质成纤维细胞的增殖,阻止细胞由G1期进入S期。辛伐他汀能显著抑制TGF-β1对大鼠肾间质成纤维细胞表面α5整合素的表达促进作用,同时随着辛伐他汀浓度的增加,抑制作用明显增强。结论辛伐他汀能抑制由TGF-β1所引起的大鼠肾间质成纤维细胞的增殖及细胞表面α5整合素的表达。     

异丙酚对血管紧张素Ⅱ诱导大鼠心肌成纤维细胞增殖的抑制作用及机制

目的探讨不同剂量异丙酚对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ, AngⅡ)诱导大鼠心肌成纤维细胞增殖的抑制作用和机制。方法 100只出生1~3 d的Wistar大鼠进行心肌成纤维细胞的分离与培养后,将细胞分为对照组(细胞培养基中加入1 mL含体积分数1%小牛血清的DMEM培养基)、AngⅡ组(细胞培养基中加入1 mL 1.0×10-7 mol/L AngⅡ),AngⅡ+异丙酚0.5 mmol/L组(细胞培养基中加入1 mL 1.0×10-7 mol/L AngⅡ+0.5 mmol/L异丙酚)、AngⅡ+异丙酚1.0 mmol/L组(细胞培养基中加入1 mL 1.0×10-7 mol/L AngⅡ+1.0 mmol/L异丙酚)、AngⅡ+异丙酚1.5 mmol/L组(细胞培养基中加入1 mL 1.0×10-7 mol/L AngⅡ+1.5 mmol/L异丙酚)。采用MTT法检测各组细胞生长抑制率,采用PCR法检测各组细胞α-SMA mRNA相对表达量,采用Western blot法检测各组细胞总蛋白含量。结果培养48 h,AngⅡ组细胞生长抑制率[(14.23±1.17)%]低于对照组[(23.32±2.15)%]、AngⅡ+异丙酚0.5 mmol/L组[(24.19±1.36)%]、AngⅡ+异丙酚1.0 mmol/L组[(29.25±2.30)%]及AngⅡ+异丙酚1.5 mmol/L组[(31.37±2.19)%](P<0.05),AngⅡ+异丙酚1.5 mmol/L组、AngⅡ+异丙酚1.0 mmol/L组、AngⅡ+异丙酚0.5 mmol/L组细胞生长抑制率依次降低(P<0.05);AngⅡ组心肌成纤维细胞α-SMA mRNA相对表达量(2.05±0.23)、总蛋白含量(225.06±18.66)均高于对照组(0.98±0.12、150.65±11.23)、AngⅡ+异丙酚0.5 mmol/L组(1.78±0.25、197.54±11.56)、AngⅡ+异丙酚1.0 mmol/L组(1.50±0.11、182.51±10.14)和AngⅡ+异丙酚1.5 mmol/L组(1.12±0.05、168.26±11.05)(P<0.05),AngⅡ+异丙酚0.5 mmol/L组、AngⅡ+异丙酚1.0 mmol/L组、AngⅡ+异丙酚1.5 mmol/L组及对照组心肌成纤维细胞α-SMA mRNA相对表达量及总蛋白含量依次降低(P<0.05)。结论异丙酚具有抑制AngⅡ诱导的大鼠心肌成纤维细胞增殖的作用,且随剂量增加,抗心肌成纤维的作用逐渐增强。     

乙酰半胱氨酸对人肺成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

目的 研究乙酰半胱氨酸(NAC)对人肺成纤维细胞(HLF)增殖、凋亡和胶原合成的影响.方法 分离培养HLF,经不同浓度NAC(5、10、20、40 mmol/L)处理后,四氮甲基偶氮唑蓝(MTT)检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡、细胞周期,RT-PCR检测Ⅰ型前胶原mRNA表达的变化.结果 ①5、10、20、40 mmol/L的NAC对HLF细胞生长均有明显抑制作用,且呈剂量依赖性.②5、10、20、40 mmol/L的NAC作用24 h后,细胞凋亡率分别为(34.38±5.80)%、(37.72±3.10)%、(44.05±4.52)%和(59.18±5.24)%,均明显高于对照组[(3.92±1.24)%],差异有统计学意义(P均<0.01).③10、20、40 mmol/L的NAC能够引起G0/G1期细胞比例明显升高,S期比例明显降低,差异有统计学意义(P均<0.01).④5、10、20及40 mmol/L的NAC处理组HLF Ⅰ型前胶原mRNA表达均明显低于对照组,差异有统计学意义(P均<0.01).结论 NAC可直接抑制成纤维细胞增殖、诱导其发生凋亡,并降低其胶原合成.     

水溶性壳聚糖对体外培养成纤维细胞生长及表型的影响

背景:研究表明壳聚糖可间接促进成纤维细胞的增生和胶原的合成。利用壳聚糖和特定的成纤维细胞一起构建肌腱损伤修复的组织工程材料,以期在促进损伤修复的同时防止粘连。目的:观察水溶性壳聚糖对3T3TK成纤维细胞生长及表型的影响。设计:观察对照实验。单位:九江学院医学院。材料:3T3TK成纤维细胞由中国科学院细胞库提供。水溶性壳聚糖(规格:60目、30CPS,济南海得贝海洋生物工程有限公司),DMEM(低糖)(美国GIBCO公司),胎牛血清(杭州四季青生物工程研究所),青霉素、链霉素(美国Biosharp公司),胰蛋白酶(北京博大泰克生物基因技术有限责任公司)。方法:实验于2004-11/2006-04在九江学院医学科研中心的系统生物学临床应用实验室(江西省高校重点实验室)完成。①常规培养3T3TK成纤维细胞至对数生长期,制成单细胞悬液,接种96孔板,共设5组,每组5孔,共25孔,每孔加细胞悬液200μL,培养24h后弃上清,前4组各孔分别加入含不同浓度壳聚糖的DMEM培养液200μL,壳聚糖终浓度分别为1,0.1,0.01,0.001g/L,第5组为阴性对照组,加不含壳聚糖的DMEM培养液,采用CellTilter-GloTM细胞活力测试盒检测不同浓度壳聚糖对成纤维细胞活力的影响。②常规培养细胞至对数生长期,制成单细胞悬液,接种24孔板,共设4组,前3组每孔分别加入含1,0.1,0.01g/L壳聚糖的DMEM培养液1mL,第4组为阴性对照组。采用羟脯氨酸、碱性磷酸酶试剂盒分别检测细胞培养上清液的胶原与碱性磷酸酶的含量。主要观察指标:①水溶性壳聚糖对体外培养成纤维细胞活力影响。②细胞培养上清液的胶原与碱性磷酸酶的含量。结果:①细胞活力检测结果:不同浓度壳聚糖组与阴性对照组相比,细胞活力差异均无统计学意义(P>0.05)。②细胞培养上清液的胶原与碱性磷酸酶的含量:1g/L和0.1g/L浓度壳聚糖组细胞培养上清液中的羟脯氨酸含量分别为(7.598±0.770),(8.366±0.308)mg/L,高于阴性对照组[(11.269±0.707)mg/L,P<0.01];胶原含量分别为(56.703±5.748),(62.437±2.301)mg/L,低于阴性对照组[(84.099±5.280)mg/L,P<0.01]。,随壳聚糖浓度的上升,胶原含量下降,呈剂量依赖。与阴性对照组相比,各浓度壳聚糖组细胞培养上清液中碱性磷酸酶活性均无显著差异(P>0.05)。结论:水溶性壳聚糖并不明显抑制3T3TK成纤维细胞的活力,但能使其分泌胶原的量显著减少,提示壳聚糖具有作为肌腱修复的组织工程材料,并抑制肌腱修复中粘连形成的潜力。