电针对神经病理性疼痛大鼠脊髓P2X3受体表达的影响

目的 探讨电针对神经病理性疼痛大鼠脊髓P2X3受体表达的影响.方法 清洁级雄性SD大鼠60只,体重180 g～220 g,采用随机数字表法分为6组,每组10只:假手术组(Sham组)仅分离坐骨神经,不结扎;神经病理性疼痛组(CCI组)采用坐骨神经慢性压迫性损伤法制备神经病理性疼痛模型;2 Hz穴位电针组(LEA组)于坐骨神经结扎(chronic constrictive injury,CCI)后第4天开始电针治疗,刺激大鼠术侧足三里-阳陵泉穴,频率2 Hz连续波,强度≤1.5 mA,每天1次,30 min/次,连续6d;15 Hz穴位电针组(HEA组)电针频率为15 Hz,余同LEA组;2 Hz非穴位电针组(NA-LEA组)电针刺激大鼠术侧足三里-阳陵泉旁5mm非穴位点,余同LEA组;15 Hz非穴位电针组(NA-HEA组)电针刺激大鼠术侧足三里-阳陵泉旁5mm非穴位点,余同HEA组.各组术前1 d(T0)和术后3、5、7、9 d(T1-4)测定大鼠后肢机械缩足反射阈值(mechanical withdrawal threshold,MWT)和热缩足反射潜伏期(thermal withdrawal latency,TWL);于术后第10天处死大鼠,取右侧L4-6脊髓节段,Western-blot和反转录酶-聚合酶链锁反应法分别检测大鼠脊髓P2X3受体蛋白和mRNA表达.结果 与Sham组比较,其余各组MWT和TWL降低(P＜0.05),脊髓P2X3受体蛋白和mRNA表达升高(P＜0.05);与CCI组比较,LEA组和HEA组T2-4时MWT和TWL升高(P＜0.05),脊髓P2X3受体蛋白和mRNA表达降低(P＜0.05);与LEA组比较,T4时HEA组MWT和TWL升高,脊髓P2X3受体蛋白和mRNA表达增多(P＜0.05).结论 电针足三里-阳陵穴可明显增加神经病理性疼痛大鼠的机械痛和热痛阈值,其机制可能与降低脊髓背角P2X3受体表达有关.     

背根神经节Sigma-1受体在大鼠神经病理性痛中的作用

目的 探讨神经病理性痛大鼠背根神经节(DRG)中Sigma-1受体的作用以及Sigma-1受体对P2X₃受体表达和功能的影响。方法 选择健康SPF级SD雄性大鼠48只,7周龄,体重180～200 g。按照随机数字表法分为三组：假手术组(Sham组)、神经病理性痛组(CCI组)和Sigma-1受体拮抗剂BD-1047组(BD组),每组16只。鞘内置管后1 d, Sham组只游离右侧坐骨神经主干不结扎,CCI组、BD组制备神经病理性痛大鼠模型。模型制备后第1天起,每日上午08:00 Sham组和CCI组鞘内注射生理盐水30μl, BD组鞘内注射120 nmol BD-1047 20μl+生理盐水10μl,连续14 d。于模型制备前1 d、模型制备后l、3、7、10、14 d鞘内给药后30 min测定热缩足潜伏期(TWL)和机械缩足反应阈值(MWT)。于模型制备后7 d采用Western blot法检测Sigma-1受体和P2RX₃受体蛋白含量。CCI组于模型制备后7、14 d采用免疫荧光双标技术和免疫共沉淀技术检测Sigma-1受体、P2X     

曲马多对神经病理性疼痛大鼠P2X3受体表达的影响

目的研究曲马多对大鼠神经病理性疼痛的镇痛作用及背根神经节(DRG)P2X_3受体表达的影响。方法 30只 SD 大鼠建立慢性缩窄性损伤(CCI)模型后随机分为假手术组(S 组,不给药)和手术组(T5组、T10组、T20组、NS 组),于术后第3天开始腹腔分别注射不同剂量的曲马多(5、10、20 mg/kg)及生理盐水,各组大鼠分别于术前和术后第3、7、10、14天测定大鼠右后足热痛阈,术后第14天取大鼠 DRG 采用免疫组化法测定 P2X_3。结果术后大鼠右后足热痛阈明显缩短。P2X_3在 NS 组表达最高,NS、T5、T10组明显高于 S 组(P<0.05);T20组表达最低,与 S 组相比差异无统计学意义。结论曲马多能剂量依赖性地缓解 CCI 大鼠的热痛觉过敏现象,达到镇痛效果,同时能使 P2X_3表达减少。     

P2X嘌呤受体与痛觉调制

嘌呤受体可分为P1和P2受体,在后者的诸亚型中仅P2X受体属配体门控离子通道受体,P2Y受体及其他亚型均为G蛋白耦联受体。P2X受体与伤害性感受器的分布相一致,并参与不同疼痛的调制。现就P2X受体以及其在不同疼痛状态中的作用作一简要综述。     

P2X嘌呤受体与痛觉调制

嘌呤受体可分为P1和P2受体,在后者的诸亚型中仅P2X受体属配体门控离子通道受体,P2Y受体及其他亚型均为G蛋白耦联受体。P2X受体与伤害性感受器的分布相一致,并参与不同疼痛的调制。现就P2X受体以及其在不同疼痛状态中的作用作一简要综述。     

核苷酸和P2Y2受体与伤害性感受的研究进展

P2受体为以ATP、UTP及其类似物激活的受体，分为促离子型P2X受体和促代谢型P2Y受体两大类，其各自又分为许多亚型。许多证据显示，P2Y，特别是P2Y2受体，在痛觉信息调节和痛觉过敏中起着重要作用。ATP和UTP作为P2Y2受体的天然激动剂，是伤害性感受和痛觉过敏信息传递中的重要介质。P2Y2受体参与疼痛的调节可能与辣椒素受体有关。膜片钳分析小鼠背根神经节神经元证明了是P2Y2而非P2Y1受体在ATP诱发的TRPV1介导的热痛过敏反应中起作用。原位杂交组织化学研究结果也显示大鼠腰段脊髓背根神经节中TRPV1mRNA与P2Y2mRNA共同表达。这些证据证明了促代谢型P2Y，受体介导背根神经节神经元中核苷酸对VR1的增敏效应及参与伤害性感受的调节。     

大鼠嘌呤P2Y4受体在神经系统中表达的实验研究

目的 研究P2Y4受体在成鼠脊髓，脊神经节及坐骨神经的表达及分布情况，为研究ATP／UTP对周围神经再生的作用机制提供理论基础。方法 取成鼠脊髓、脊神经节及坐骨神经(SD大鼠，雌雄不拘)，采用原位杂交和逆转录一聚合酶链式反应(RT-PCR)方法，观察嘌呤P2Y4受体的分布与表达，并对RT-PCR的结果进行测序。结果 原位杂交与RT-PCR结果显示，脊髓灰质有P2Y4R的表达，主要分布在中央管上皮细胞和前角，运动神经元呈强阳性，白质中为阴性。坐骨神经也可见到P2Y4受体的表达，主要分布在雪旺细胞及其内的血管内皮细胞。脊神经节则没有P2Y4受体的表达。结论 大鼠的P2Y4受体可能主要分布在输出纤维，在感觉神经原纤维几乎无表达。     

中脑导水管周围灰质中P2X7R调控慢性神经病理性疼痛的研究

目的研究神经病理性疼痛大鼠中脑导水管周围灰质(periaqueductal gray matter,PAG)中P2X7受体(P2X7receptor,P2X7R)的分布和表达变化规律,并观察鞘内给予P2X7R拮抗剂对疼痛的影响及探讨可能的机制。方法成年雄性SD大鼠78只鞘内置管,手术成功后行保留性坐骨神经损伤(spared nerve injury,SNI)手术。术后将大鼠随机均分为三组:假手术组(Sham组)、对照组(C组)、亮蓝G(brilliant blue G,BBG)组(BBG组)。术毕当天起连续7d鞘内给予生理盐水或P2X7R拮抗剂BBG10μl,每组各取8只,分别于术前、术后7、14、21d测定50%缩足阈值(PWT)作为机械痛阈,每组各取18只分别于建模后14和21d处死,取PAG组织,通过免疫荧光观察P2X7R的分布和蛋白印迹(western blot)检测P2X7R蛋白表达量的变化。结果与Sham组比较,建模后7、14、21dC组和BBG组大鼠损伤同侧后肢PWT明显降低,建模后14、21dP2X7R表达、GFAP表达明显增加(P0.05或P0.01)。与C组比较,建模后7、14、21dBBG组大鼠损伤同侧后肢PWT明显升高,建模后14、21d P2X7R表达、GFAP表达明显减少(P0.01)。Sham组、C组和BBG组PAG中均存在P2X7R表达分布。P2X7R与GFAP具有重叠分布性,而与Iba-1和NeuN无重叠分布性。结论 P2X7R参与慢性神经病理性疼痛在中脑节段的调控。     

尼古丁对BV-2小胶质细胞α7烟碱型乙酰胆碱受体、小胶质细胞P2X4受体表达和脑源性神经营养因子释放的影响

目的观察尼古丁对BV-2小胶质α7烟碱型乙酰胆碱受体（α7nicotine acetyleholine receptor,α7nAChR）、小胶质细胞P2X4受体（P2X4receptor,P2X4R）表达和脑源性神经营养因子（brain derived neurotrophic factor,BDNF）释放的影响,以探讨小胶质细胞参与尼古丁所致痛觉过敏的可能分子机制。方法①BV-2小胶质细胞接种在含12mm圆形盖玻片无菌12孔板,待细胞处于对数生长期,完全随机分为2组：α7nAChR组和P2X4R组。免疫荧光标记检测α7nAChR和P2X4R在BV-2小胶质细胞上的表达。②当12孔板中BV-2细胞处于对数生长期,完全随机分为4组：尼古丁实验组（N组）,尼古丁终浓度为100μm／L;无血清培养基培养的空白对照组（C组）;尼古丁拮抗剂组（NM组）,10nmol／L甲基牛扁碱（methyllycaconitine,MLA）预孵育30min,改用含尼古丁的无血清培养基培养;单纯拮抗剂组（M组）,10nmol／LMLA预孵育30min,改用无血清培养基培养。培养72h后收集各组细胞。应用实时荧光定量PCR（real-timequantitativePCR,RT-qPCR）检测α7nAChRmRNA和P2X4RmRNA表达量的变化,Westernblot检测α7nAChR和P2X4R蛋白表达量的变化。③当12孔板中细胞处于对数生长期,完全随机分为4组：正常对照组（Control组）、尼古丁预处理＋DMEM组（Nicotine＋DMEM组）、尼古丁预处理＋激动剂组（Nieotine＋ATP组）,尼古丁预处理＋拮抗剂组（Nicotine＋5-BDBD组）。其中激动剂和拮抗剂由DMEM无血清培养基稀释,在尼古丁处理72h后加入,各组总体积保持一致,24h后ELISA检测培养液中BDNF释放量。结果①免疫荧光标记结果显示BV-2细胞存在α7nAChR和P2X4R的阳性表达。②RT-qPCR结果显示尼古丁可上调BV-2细胞α7nAChRmRNA和P2X4RmRNA的表达,α7nAChR特异性拮抗剂MLA可抑制α7nAChRmRNA和P2X4RmRNA表达的上调;Westernblot结果显示尼古丁处理可使BV-2细胞α7nAChR和P2X4R蛋白的表达上调,α7nAChR特异性拮抗剂MLA可抑制α7nAChR和P2X4R蛋白表达的上调。③ELISA检测培养液中BDNF含量结果显示：Nieofine＋ATP组较Nieofine＋DMEM组和Control组显著增多（P〈0．05）,Nicotine＋DMEM组较Control组增多（P〈0．05）;Nicotine＋5-BDBD组较Nicotine＋DMEM组和Control组显著减少（P〈0．05）.结论尼古丁可能通过α7nAChR上调小胶质细胞上P2X4R的表达进而通过BDNF的释放引起痛觉过敏的产生。     

背根神经节P2X3受体在大鼠切口痛形成中的作用

目的 评价背根神经节P2X3受体在大鼠切口痛形成中的作用.方法 健康雄性SD大鼠24只,体重200～220 g,随机分为3组(n=8):对照组(C组)、切口痛组(IP组)和P2X3受体拮抗剂组(A组).IP组和A组制备大鼠左后趾部切口痛模型.模型建立后30 min,A组左后爪底皮下注射P2X3受体特异性拮抗剂TNP-ATP 200 nmol,C组和IP组注射等容量生理盐水.采用累积疼痛评分法,评定注药后1 h内大鼠疼痛行为学变化.注药后2 h时处死大鼠,取背根神经节,测定P2 X3受体表达和细胞内Ca2+浓度.结果 与C组比较,IP组和A组累积疼痛评分和Ca2+浓度升高,P2X3受体表达上调(P＜0.05);与IP组比较,A组累积疼痛评分和Ca2+浓度降低,P2X3受体表达下调(P＜0.05).结论 背根神经节P2X3受体参与了大鼠切口痛的形成,其机制可能与升高细胞内Ca2+浓度有关.     

弥漫性脑损伤引起迷走复合体中P2X4表达变化的研究

目的观察弥漫性脑损伤(Diffuse brain injury,DBI)大鼠延髓内脏带(Medullary visceral zone,MVZ)中迷走复合体(Dorsal vagalcomplex,DVC)的神经元和小胶质细胞上P2X4受体的表达变化,为临床防治DBI提供理论依据。方法在成功建立DBI大鼠模型基础上,应用免疫荧光组织化学和免疫电镜的方法,观察DBI发生后大鼠MVZ中迷走复合体神经元和小胶质细胞上P2X4受体的变化。结果 DBI发生后1小时,迷走复合体神经元和小胶质细胞上P2X4受体表达不明显。P2X4受体呈现第1次变化高峰是在DBI发生后的2小时。DBI发生后12小时,P2X4受体表达出现第2次变化高峰。免疫电镜上显示:正常状态下,P2X4受体在DVC的神经元以及小胶质细胞上几乎没有表达。而在DBI发生后2小时,在神经元和小胶质细胞上表达明显增加;在DBI发生后12小时,P2X4受体在DVC的神经元以及小胶质细胞上表达明显增加。而DBI发生后24小时,P2X4受体的表达下降。结论 DBI发生后,P2X4受体可能是神经元和小胶质细胞间"信息"交流的媒介,也可能是加重脑水肿发生的的启动因素。     

滥用氯胺酮致膀胱功能障碍患者膀胱组织中P2X3受体的表达及其临床意义

目的:研究P2X3受体在滥用氯胺酮致膀胱功能障碍患者膀胱组织中的表达及其临床意义,讨论P2X3受体在滥用氯胺酮致膀胱功能障碍中的作用。方法:采用免疫组织化学方法分别检测36例滥用氯胺酮致膀胱功能障碍患者(试验组)和36例正常患者(对照组)膀胱组织中P2X3、M2、M3受体的表达情况,利用全自动显微镜及图像分析系统对免疫组化染色结果进行图像采集分析,测量其平均灰度值,同时比较两组间P2X3、M2、M3受体表达的差异。结果:P2X3受体主要在膀胱黏膜移行上皮细胞表达,试验组P2X3受体表达明显增强,与对照组比较差异有统计学意义(P0.01);而M2、M3受体表达与对照组比较差异无统计学意义(P0.01)。结论:滥用氯胺酮致膀胱功能障碍患者膀胱组织中P2X3受体表达显著增强,而M2、M3受体并未异常表达,提示P2X3受体上调可能在滥用氯胺酮致膀胱功能障碍中发挥关键作用。     

SD大鼠腹腔注射α2受体阻滞剂——育亨宾对地佐辛镇痛作用的影响

目的 观察腹腔注射α2受体阻滞剂——育亨宾对地佐辛镇痛效应的影响.方法 80只雄性SD大鼠按随机数字表法分为8组(每组10只):A1组、B1组、C1组、D1组、A2组、B2组、C2组和D2组.A1组、B1组、C1组和D1组采用足底注射弗氏完全佐剂(complete freund's adjuvant,CFA)的方法制备大鼠慢性炎性疼痛模型,并于造模后第3天分别腹腔给予生理盐水、地佐辛(2.5 mg/kg)、育亨宾+地佐辛(2.5 mg/kg+2.5 mg/kg)和育亨宾(2.5 mg/kg),给药后0.5 h测定各组大鼠的热缩足反射潜伏期(thermal withdrawal latency,TWL)与机械缩足反射阈值(paw withdrawal threshold,PWT).A2组、B2组、C2组和D2组采用坐骨神经慢性压迫法(chronic constriction injury,CCI)建立大鼠神经病理性疼痛模型,并于造模后第7天分别腹腔给予生理盐水、地佐辛(2.5 mg/kg)、育亨宾+地佐辛(2.5 mg/kg+2.5 mg/kg)和育亨宾(2.5 mg/kg),给药后0.5 h测定各组大鼠的TWL与PWT.结果 与A1组[(8.3±2.0)s,(5.0±1.6)g]比较,B1组[(16.7±3.2)s,(12.1±2.0)g]与C1组[(12.3±3.5)s,(7.8±3.3)g]大鼠的TWL与PWT显著升高(P＜0.05),而D1组差异无统计学意义(P＞0.05);与B1组比较,C1组大鼠的TWL与PWT显著降低(P＜0.05).与A2组[(6.2±1.9)s,(4.6±1.5)g]比较,B2组[(11.3±3.0)s,(11.4±3.3)g]与C2组[(8.7±1.6)s,(6.4±0.7)g]大鼠的TWL与PWT显著升高(P＜0.05),而D2组差异无统计学意义(P＞0.05);与B2组比较,C2组大鼠的TWL与PwT显著降低(P＜0.05).结论 在慢性炎性疼痛和神经病理性疼痛中,腹腔注射α2受体阻滞剂可以减弱地佐辛的镇痛作用.     

Effect of the neuropathic pain receptor P2X3 on bladder function induced by intraperitoneal injection of cyclophosphamide (CYP) in interstitial cystitis rats

BackgroundThe role of purinergic receptor P2X3 in pathological bladder dysfunction and chronic pelvic pain remains unclear. We aim to investigate the effect of P2X3 on bladder function in interstitial cystitis (IC) through the IC rat model induced by cyclophosphamide (CYP).MethodsA total of 120 female Sprague-Dawley (SD) rats were randomly divided into 6 groups: control, CYP-4h, CYP-48h, CYP-10d, CYP-30d, and CYP-45d groups. The control group was injected with normal saline. The rats in the CYP-4h and CYP-48h groups were given a single high dose. The rats in the CYP-10d, CYP-30d, and CYP-45d groups were given a low dose of CYP repeatedly every three days. Bladder voiding function was measured using urodynamic techniques to observe the effect of the P2X3 receptor on bladder function in CYP-induced IC.ResultsThe rats in the CYP-4h group showed significant overactivity of the bladder compared with the control group, the bladder voiding interval was shortened (P<0.01), and the maximal voiding pressure was increased (P<0.01). At the same time, the degree of overactive bladder in the CYP-48h, CYP-10d, CYP-30d, and CYP-45d groups became increasingly serious, the interval of bladder micturition was shortened stepwise (P<0.01), and the maximal micturition pressure was increased stepwise (P<0.01). Compared with the control group, the CYP-48h group mainly showed a shorter bladder voiding interval (P<0.01), lower voiding volume, and higher activation of mast cells and inflammatory factors in the bladder. In the CYP-10d group, bladder mast cell activation and inflammatory factors increased significantly. Intrathecal injection (IT) of A-317491 significantly prolonged the bladder voiding intervals in CYP-4h, CYP-48h, CYP-10d, CYP-30d, and CYP-45d rats (P<0.01), and the maximal voiding pressure of the CYP-4h, CYP-48h, CYP-10d, CYP-30d, and CYP-45d groups was significantly decreased (P<0.05), while the maximal voiding pressure of the CYP-10d group was not significantly affected.ConclusionsP2X3 receptors in dorsal root ganglion (DRG) play an important role in bladder function induced by intraperitoneal injection of CYP in rats. IT of P2X3 inhibitors can significantly improve the grade of bladder voiding dysfunction and chronic pelvic pain.