MicroRNA-218（miR-218）在肾透明细胞癌中的表达及临床意义

目的：研究miR-218在肾透明细胞癌中的表达及其与临床病理之间的关系。方法收集2012年3月-2013年5月间在该院就诊的46例病理确诊为肾透明细胞癌组织和30例癌旁≥3.0 cm正常肾组织作为对照组,采用Realtime PCR方法检测microRNA-218在肾透明细胞癌组织和癌旁≥3.0 cm正常肾组织的表达,分析microRNA-218表达水平与肾透明细胞癌临床病理参数之间的关系。结果与对照组癌旁正常肾组织相比, miR-218在肾透明细胞癌组织的的表达明显降低（P〈0.001）。同时, miR-218表达的降低与肿瘤的分期,转移和分化程度有密切关系。miR-218的表达与患者的年龄,性别,肿瘤位置及肿瘤大小无明显统计学意义。但是, miR-218的表达与肿瘤的转移（P=0.007）,肿瘤的 T分期（P=0.022）及肿瘤的分级（P=0.015）有统计学意义。结论 miR-218在肾透明细胞癌中和肿瘤分期、分化、转移有着很大的相关性。miR-218在肾透明细胞癌组织呈下调表达,其可能成为肾细胞癌新的潜在的治疗靶点及诊断预后的分子标志物。     

miR-223在肾透明细胞癌中的表达与功能

目的探讨miR-223在肾透明细胞癌中的表达与功能。方法用real-time RT-PCR法检测miR-223在肾透明细胞癌组织和
瘤旁组织中的表达以及细胞系中miR-223的表达量。用transwell迁移实验和划痕实验测转染miR-223模拟物的786-O细胞的
迁徙能力,MTS法测其增殖情况,流失细胞仪分析其细胞周期。并用SPSS统计软件分析其临床数据与miR-223 表达量的关
系。结果miR-223在肾透明细胞癌组织和细胞系中的表达量高于瘤旁组织和正常肾小管上皮细胞（P=0.0003）,其miR-223的
表达量与肿瘤的大小有关,肿瘤直径大于4 cm的肿瘤miR-223 表达量升高（P=0,0028）。转染miR-223 模拟物的786-O 细胞
transwell细胞迁移数比对照组多（P<0.0001）,划痕实验显示实验组愈合能力比对照组快,增殖实验表明实验组增殖速度快于对
照组（P=0.006）,细胞周期显示实验组细胞G1期减少,S期细胞增加,提示处于增殖的细胞数多（P<0.05）。结论miR-223可能
起着促进肾透明细胞癌发生发展的作用,可能是抗肾透明细胞癌治疗的新的抗癌靶标。
     

miR-128a在肝细胞癌中表达上调并通过靶向调控RND3 促进肝癌细胞增殖

目的检测MicroRNA-128a（miR-128a）在肝细胞癌中的表达情况并探讨其在肝癌细胞中的生物学功能及机制。方法收
集19例肝细胞癌及对应癌旁组织,运用qRT-PCR技术检测miR-128a 在肝细胞癌和对应癌旁组织及肝癌细胞株中的表达;应用
miR-128a mimics或inhibitor转染人肝癌细胞,MTT检测转染后细胞增殖活力变化;软件预测miR-128a的潜在靶点RND3,并用
双荧光素酶报告实验证实miR-128a与RND3 3’UTR结合,qRT-PCR和Western blot检测miR-128a潜在靶点RND3的表达变化;
Western blot检测细胞周期蛋白变化。结果在肝细胞癌组织中miR-128a的表达显著高于对应的癌旁组织（P<0.05）;miR-128a
促进肝癌细胞增殖（P<0.05）;在肝癌细胞中miR-128a通过与RND3 3’URT结合下调RND3 mRNA和蛋白的表达（P<0.05）;抑
制miR-128a的表达可以导致cyclin B1、cyclin D1 和CDK4表达下调。结论miR-128a在肝细胞癌中表达上调并通过靶向调控
RND3促进肝癌细胞增殖。
     

miR-7在肾癌中的表达及临床意义研究

目的检测肾细胞癌组织及相应癌旁正常组织中miR-7的表达,分析18达与临床病理特征之间的关系,为进一步研究miR-7在肾癌的发生发展中作用奠定基础。方法收集48例经手术切除的配对肾癌及癌旁组织标本,提取组织中总RNA,经逆转录获得cDNA,采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）方法检测标本中miR-7表达量,并通过统计学软件分析其表达量与患者临床病理特征之间的相关性。结果与相应癌旁组织相比,肾癌组织中miR-7表达量明显升高,其中34例（70.8%）肾癌标本miR-7表达上调,14例（29.2%）表达下调,差异有统计学意义（P〈0.05）。肾细胞癌中miR-7表达上调与患者年龄、性别、肾癌组织类型、TNM分期、AJCC临床分期无相关性（P〉0.05）。结论 miR-7在肾癌组织中明显高表达,提示其可能与肾癌的发生和发展相关,可能成为肾癌早期诊断、治疗乃至预后判断的新的生物标记物。     

MicroRNA-218在肝细胞癌中的表达及功能

目的检测MicroRNA-218（miR-218）在肝细胞癌中的表达情况并研究其在肝癌中的功能。方法收集46例肝细胞癌及对
应癌旁组织,运用qRT-PCR技术检测miR-218 在肝癌及对应癌旁组织中的表达情况;应用miR-218 mimic转染人肝癌细胞系
HepG2,MTT和流式细胞术检测转染后细胞活力和凋亡变化,qRT-PCR和Western blot检测miR-218潜在靶点的表达变化。结
果miR-218在肝癌组织中的表达显著低于对应的癌旁组织（P<0.05）;miR-218低表达与肿瘤大小（>5 cm）和高TNM分期（Ⅲ+
Ⅳ）具有显著相关性（P<0.05）;在HepG2细胞中,miR-218抑制细胞增殖和诱导凋亡,并下调Bmi-1和CDK6 mRNA及蛋白表达
（P<0.05）。结论miR-218低表达与肝癌的恶性临床病理特征相关,miR-218可能通过下调Bmi-1和CDK6表达抑制肝癌细胞增
殖和促进凋亡。
     

肾癌组织芯片中Survivin表达与临床病理特征及预后关系

目的探讨肾癌组织芯片中Survivin表达与临床病理特征及预后关系。方法免疫组化Envision二步法检测64例肾癌标本组织芯片中Survivin的表达,并探讨其与临床病理特征及预后的关系。并取20例癌旁正常肾组织作对照。结果Survivin在肾癌组织中的阳性表达率为60．9％（39／64）,20例癌旁正常肾组织无一例表达。肾癌组织中的Survivin的表达明显高于癌旁正常肾组织（P〈0．01）。Survivin的表达与肿瘤的大小、组织学分型无关（P〉0．05）,与临床分期和病理分级密切相关（P〈0．05或P〈0．01）。肾癌的组织分化程度越低,临床分期越高,Suwivin的阳性表达率越高。结论Survivin可能在肾癌的形成、生长及发展起中促进的作用,与肾癌的增殖、浸润及转移关系密切。Survivin的过度表达提示肿瘤容易发生增殖、浸润及转移,预后不良。     

MN/CAⅨ在肾细胞癌诊断中的价值

摘要：目的探讨MN/CAⅨ在肾细胞癌组织和血液中的表达情况和诊断价值。方法采用RT-PCR技术检测62例肾细胞癌患
者肿瘤组织和外周血液中MN/CA IX mRNA的表达,以32例正常肾组织和非肾癌患者外周血作为对照。采用免疫组化技术检
测36例肾透明细胞癌,17例其它肾肿瘤,16例正常肾组织标本。结果RT-PCR结果显示62例肾细胞癌患者MN/CAⅨ mRNA
阳性率在癌组织中为82.3%（51/62）,在外周血中为54.8%（34/62）,显著高于对照组（P<0.05）,在肾透明细胞癌患者癌组织和外
周血中MN/CAⅨ mRNA阳性率分别为98%（49/50）和66%（33/50）,显著高于其它类型肾癌结果（P<0.05）。免疫组化结果显示
MN/CAⅨ在肾透明细胞癌中表达阳性率为97.2%（35/36）,明显高于其它类型肾肿瘤和正常肾组织（P<0.05）。结论MN/CAⅨ
在肾细胞癌尤其是透明细胞癌中有特异性的高表达,可以用于肾癌的诊断,尤其在预后和个体化治疗判断上有潜在价值。
     

miR-216a在胰腺癌组织中的表达及临床意义

目的分析20例胰腺癌及胰腺良性病变组织中miR-216a的表达差异,探讨miR-216a在胰腺癌中表达的临床意义及潜在
应用价值。方法收集14例胰腺癌患者手术标本的癌组织,6例胰腺良性病变组织作为对照。采用Agilent人microRNA寡核苷
酸基因芯片(V12.0)在基因组范围内检测20例组织标本的miR-216a表达,并分析其与胰腺癌临床病理参数的关系。结果胰腺
癌组织中miR-216a的表达显著低于胰腺良性病变组织（P=0.000）,miR-216a在胰腺癌组织中的表达与患者年龄、性别、吸烟、临
床分期、局部淋巴结转移,远处转移、CA19-9浓度、肿瘤分化程度、神经束膜侵犯、脉管侵犯均无相关性（P>0.05）,而与肿瘤T分
期具有显著统计学意义（P=0.002）。结论miR-216a在胰腺癌的发生、发展过程可能发挥重要作用,检测miR-216a有望成为胰
腺癌新的肿瘤标记物或预后因子。
     

基质金属蛋白酶9在肾细胞癌中的表达与患者临床预后的相关性研究

目的：检测基质金属蛋白酶9（MMP-9）在肾细胞癌中的表达,探讨其与患者临床预后的相关性。方法肾癌患者150例,另设癌旁组30例和健康对照组20例,利用免疫组织化学染色检测肾癌组织,癌旁组织及正常肾脏组织中MMP-9的表达。并联系相关随访记录。探讨两者之间的相关性。结果（1）MMP-9在肾癌组织中高表达,肾肿瘤旁组织及正常肾脏组织中低表达,肾癌组与肾肿瘤旁组织及正常肾脏组织分别比较,均有显著差异（P﹤0.05）。（2）MMP-9表达与肾癌病人的年龄,肿瘤大小没有相关性（P=0.412;P=0.083）,与肿瘤分期、分级及淋巴结转移成正相关（ P=0.009;P=0.017;P=0.004）。伴有MMP-9高表达的肾癌患者无复发生存率明显低于MMP-9低表达的患者（ P﹤0.001）。结论 MMP-9在肾癌组织中呈持续高表达,与肾癌患者的临床病理指标,生物学行为和预后密切相关,是评估肾癌进展,不良预后的重要指标。     

miR-451a在鼻咽癌中的表达与病理特征及预后的相关性

【摘要】 目的 探讨miR-451a在鼻咽癌中的表达与病理特征及预后的相关性。 方法 选取本院2006年3月～2012年7月经病理活检证实为鼻咽癌的患者95例作为实验对象,采用实时荧光定量RT-PCR法检测鼻咽癌组织、癌旁正常组织中miR-451a的表达水平,对95例患者进行预后随访,并分析miR-451a表达强度与鼻咽癌组织浸润程度、远处转移以及5年生存率的关系。结果 鼻咽癌组织的miR-451a表达水平较癌旁正常组织显著增加（P＜0.05）。鼻咽癌组织中miR-451a的表达水平随癌组织浸润程度的加深而显著升高（P＜0.05）。有远处转移者的miR-451a表达水平显著高于无转移者（P＜0.05）。miR-451a高表达的鼻咽癌患者其5年生存率明显低于miR-451a低表达者（P＜0.05）。结论miR-451a的异常表达不仅参与鼻咽癌的发生,也有可能促进癌细胞浸润转移,其对于预测患者的生存预后具有一定的参考价值。     

miR-126/miR-126*在肝细胞癌中的表达及其与临床预后的相关性

目的研究miR-126/miR-126*在肝细胞癌中的表达,探讨其表达与相关临床病理参数的关系。方法用RT-QPCR方法检
测74例肝细胞癌手术切除的癌组织与相应的非癌组织中miR-126/miR-126*的表达,分析其表达与相关临床病理参数的关系。
结果miR-126/miR-126*在癌组织中表达水平显著低于相对应的非癌组织;miR-126/miR-126*在肝癌中的表达呈正相关关系;
复发组癌组织中miR-126/miR-126*的表达显著低于未复发组癌组织;miR-126/miR-126*高表达组无瘤生存时间显著优于低表
达组。结论miR-126/miR-126*的的低表达可能是影响肝细胞癌转移并导致患者不良预后的一个重要因素。
     

miRNAs慢病毒文库筛选靶向EZH2 3’非翻译区的新型miRNAs及其在乳腺癌中的表达

目的重组过表达EZH2基因3’非翻译区的MCF-7细胞株中筛选靶向miRNAs,并进行细胞和组织定量分析。方法重组
细胞株感染慢病毒文库,利用细胞毒性药物筛选后抽提细胞基因组,以此为模板PCR扩增出miRNA前体,测序确定miRNAs名
称,并对其进行PCR定量分析。结果在重组细胞株中共筛选出7种miRNAs,依次为miR-15b、miR-16-2、miR-181b2、miR-217、
miR-224、miR-329-1、miR-487b,这些新型miRNAs用生物信息学软件PicTar 和TargetScan 无法预测。Real-time PCR发现,与
乳腺癌细胞MCF-7 相比,正常乳腺细胞株HBL-100 中miR-217、miR-329-1、miR-487b 高表达;乳腺癌组织中仅miR-15b 及
miR-16-2表达增加,与癌旁组织相比差异有统计学意义（P<0.05）。结论在重组过表达EZH2 3’-UTR的乳腺癌MCF-7细胞株
中结合慢病毒文库可筛选出用生物信息学软件未预测的新型靶向miRNAs,这些新型miRNA在正常乳腺细胞与肿瘤细胞及组
织中存在差异表达。
     

COX-2、PKC-α和miR-101 在胃癌中的表达及相关性

目的探讨miR-101、蛋白激酶C-α（PKC-α）和环氧合酶2（COX-2）在胃癌中的表达及相关性。方法（1）荧光定量RT-PCR
法检测57例胃癌组织标本对应的正常胃粘膜标本中miR-101的表达水平;（2）Western blotting检测57例胃癌组织标本对应的
正常胃粘膜标本中PKC-α蛋白和COX-2蛋白的表达水平。结果（1）胃癌组织中miR-101表达明显低于正常胃粘膜（P<0.05）;
胃癌组织中COX-2及PKC-α蛋白表达高于正常胃粘膜（P<0.05）;（2）胃癌中COX-2蛋白的表达与其分化程度、浸润深度、淋巴
结转移、肿瘤病理分期有关（P<0.05）;胃癌中PKC-α蛋白的表达与肿瘤分期和淋巴转移有关（P<0.05）;（3）胃癌组织中COX-2蛋
白相对表达水平与胃癌组织中PKC-α蛋白表达呈正相关,与胃癌组织中miR-101表达呈负相关,两者相关具有统计学意义（r=
0.531,P<0.05;r=-0.627,P<0.05）。结论miR-101、PKC-α和COX-2可能参与了胃癌的发生发展;miR-101和PKC-α可能是抑制
COX-2在胃癌中表达的新靶点。
     

抑制miR-23a表达增强卵巢癌顺铂敏感性的分子机制

目的分析抑制miR-23a表达后,耐药卵巢癌A2780细胞对化疗药物顺铂的敏感性变化及其分子机制。方法选择顺铂耐
药卵巢癌A2780细胞株为研究样本,并分为两组,其中对照组仅加入顺铂,实验组加入顺铂及antagomir-23a。应用MTT法检测
antagomir-23a抑制miR-23a并经顺铂处理后细胞增殖抑制率;应用流式细胞仪分析细胞周期分布情况;应用Hoechst33258染色
分析细胞凋亡形态学变化;应用Western blot法分析耐药糖蛋白P-gp的表达变化。结果抑制miR-23a并经顺铂处理后,细胞增
殖抑制率显著上升（P<0.01）,顺铂中效浓度（IC50）为17.89 μmol/L,比对照组IC50 110.18 μmol/L降低了83.76%（P<0.01）,细胞被
阻滞于G0/G1期且凋亡率增加（P<0.01）;Hoechst33258染色见细胞核浓缩、染色增强。Western blot检测提示细胞P-gp蛋白表
达随着顺铂浓度加大而逐渐减低（P<0.01）。结论抑制耐药卵巢癌A2780细胞内miR-23a表达后,细胞对顺铂的敏感性显著增
加,这可能miR-23a靶基因负性调控因素得以缓解,并由此引发P-gp蛋白表达受抑有关。
     

磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3在肺鳞癌和腺癌中的不同表达及其与预后的关系

目的探讨磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3（GPC3）在两种最常见肺癌病理类型鳞癌和腺癌中的不同表达及其与预后的关系。方
法肺鳞癌和腺癌病人共48名,肝癌对照病人10名,采用免疫组织化学方法检测肺癌组织及其癌旁组织中GPC3蛋白的表达。
应用Kaplan-Meier 法进行生存分析。结果肺癌中的GPC3 蛋白总表达率29.2%（14/48）。GPC3 在肺癌旁组织中不表达。
GPC3蛋白在肺鳞癌中的阳性率为54.5%（12/22）,在肺腺癌中的阳性率为7.7%（2/26）,肺鳞癌中的GPC3蛋白表达明显高于肺
腺癌（P<0.01）。在阳性表达的肺癌样本中,肺鳞癌与肺腺癌有淋巴结转移者和低分化组GPC-3均表达更显著。肺癌与肝癌的
GPC3蛋白表达特点不同。Kaplan-Meier生存分析显示GPC3蛋白与预后无关。结论GPC3蛋白肺鳞癌患者表达更高,提示其
可作为潜在候选标记物检测肺鳞癌。
     

鼻咽癌患者血浆miR-24异常表达的临床意义

目的探讨miR-24在鼻咽癌患者血浆中的表达及临床意义。方法收集2007年12月~2011年6月在南方医院耳鼻喉科住
院的初诊鼻咽癌患者血浆217例,以同期住院的慢性化脓性中耳炎或慢性鼻窦炎患者血浆73例作为对照,利用荧光定量PCR的
方法进行miR-24 表达的检测并结合临床资料分析其临床意义。结果血浆miR-24 在鼻咽癌组的相对表达水平为对照组的
4.808倍,差异具有显著统计学意义（P<0.001）;血浆miR-24在不同T分期之间有统计学差异（P=0.007）,miR-24与N分期呈负
相关（P=0.028）;鼻咽癌病人血浆EBV-DNA与血浆miR-24呈负相关（P=0.048）;治疗后血浆miR-24含量较治疗前下降差异有
显著统计学意义（P=0.001）。结论血浆miR-24可作为肿瘤分子标志物用于鼻咽癌早期诊断及预后分析。
     

CDK4蛋白在胞浆中的表达与肺癌临床病理学特征及预后的关系

目的评估CDK4蛋白在胞浆中表达与肺癌患者临床病理学特征的关系。方法利用免疫组化和统计学方法分析CDK4
蛋白在胞浆中表达以及与肺癌患者临床病理参数及预后之间的相关性。结果与正常肺组织相比,CDK4蛋白在肺癌胞浆中的
表达并没有明显增高（P=1.000）。然而,在肺癌组织中,CDK4表达上调正向相关于患者的临床分期和淋巴结转移（P=0.001,P=
0.001）。预后分析表明,CDK4蛋白在胞浆表达越高,患者生存时间越短。多变量分析显示,CDK4在胞浆中过表达是预测肺癌
患者预后不利因素（P<0.001)。结论CDK4蛋白在细胞胞浆中过表达也促进肺癌的发病过程,且其是预测肺癌患者预后的不利
因子。
     

miR-181c靶向己糖激酶2抑制癌相关成纤维细胞的糖酵解

目的探讨miR-181c在癌相关成纤维细胞（CAFs）糖酵解中的作用和机制。方法用组织贴壁法分离原代肺腺癌病人肺组
织CAF 及肺正常成纤维细胞（NFs）。用LipofectamineTM 2000 转染miR-181c mimics,miR-181c inhibitor,siRNA-HK2 和
HK2-vecto等;Q-PCR检测miR-181家族表达水平;Western blotting检测己糖激酶2（HK2）蛋白表达;2-NBDG法检测细胞葡萄
糖摄取率;DRY-CHEM FCD3500仪器检测细胞上清中乳酸生成;双荧光素酶报告基因系统检测HK2 mRNA表达。结果在细
胞形态上CAFs与NFs无明显区别。与NFs组相比,CAFs组葡萄糖摄取、乳酸生成和HK2蛋白表达明显增加,而miR-181家族
表达明显减少（P<0.05）。在NFs 转染inhibitor-181c 后,其HK2 蛋白表达、葡萄糖摄取和乳酸生成明显增加（P<0.05）;相反,
CAFs转染了mimics-181c后,其HK2蛋白表达、葡萄糖摄取和乳酸生成明显减少（P<0.05）。并且在敲低HK2细胞的CAFs中,
mimics-181c 不能减少葡萄糖摄取和乳酸生成;而mimics-181c 可以减少过表达HK2 对NFs葡萄糖摄取和乳酸生成的增强作
用。结论mir-181c可以通过抑制HK2的蛋白表达来抑制CAFs的糖酵解。