不同浓度腐胺对人皮肤成纤维细胞增殖、迁移和凋亡的影响

目的探讨不同浓度腐胺对人皮肤成纤维细胞（human skin fibroblasts,HSF）增殖、迁移、凋亡的影响。方法将体外HSF
分为腐胺组和对照组,以含腐胺浓度分别为0.5、1、5、10、50、100、500、1000 μg/ml完全培养基培养细胞设为腐胺组,不添加腐胺
设为对照组。经对照组及不同浓度腐胺组处理的HSF培养24 h后,再以四唑化合物电子耦联显色法（MTS法）测定细胞增殖能
力（用吸光度值表示）,Transwell迁移实验测定细胞的迁移能力,流式细胞技术（Flow Cytometry, FCM）Annexin V/PI标记法测
定细胞凋亡率。结果（1）细胞增殖能力（MTS）测定结果显示,0.5、1、5、10 μg/ml 腐胺组HSF的吸光度值较对照组升高（P<
0.01）,并且1 μg/ml时达峰值（0.754±0.024）;500、1000 μg/ml腐胺组HSF吸光度值较对照组降低（P<0.01）;50、100 μg/ml腐胺
组HSF的吸光度值与对照组无明显差异（P>0.05）;（2）Transwell迁移实验结果显示,1 μg/ml腐胺组穿过微孔膜的细胞数目较对
照组显著增加（P<0.01）,且达到峰值309±21;50 μg/ml及以上浓度腐胺组HSF穿过微孔膜的数目较对照组减少（P<0.05）;0.5、
5、10 μg/ml腐胺组HSF穿过微孔膜的细胞数目与对照组比较无明显差异（P>0.05）;（3）流式细胞凋亡结果显示,0.5、1、5、10 μg/ml
腐胺组HSF凋亡率较对照组显著降低（P<0.05）,而且在1 μg/ml时细胞凋亡率达最低值（11.10±0.79）%;100 μg/ml及以上浓度
腐胺组细胞凋亡率较对照组显著升高（P<0.01）,而且随着浓度增加凋亡率逐渐升高;50 μg/ml腐胺组与对照组比较细胞凋亡率
无明显差异（P>0.05）。结论微量腐胺可维持细胞正常的迁移能力,显著提高HSF的细胞增殖能力,而较高浓度的腐胺能显著
抑制HSF迁移与增殖,并诱导细胞发生凋亡,提示不同浓度的腐胺会对创面愈合起到完全不同的作用。
     

大鼠股骨骨折对肾皮质浅层细胞凋亡的影响及三七总皂苷的保护作用

目的探讨大鼠股骨骨折对肾皮质浅层细胞凋亡的影响和三七总皂苷（PNS）对骨折后肾皮质浅层的保护作用。方法将
90只Wistar大鼠随机分为单纯骨折组（36只）、骨折给药组（36只）、对照组（18只）,前两组又平均分为6组分别在骨折1、6、12、
24、36、48 h时各处死6只,而对照组在各时间段分别处死3只。采用HE染色观察病理变化及TUNEL染色观察凋亡分布,免疫
组化及原位杂交技术检测Bcl-2和Bax在肾皮质中的表达。结果单纯骨折组中肾皮质浅层肾毛细血管扩张,近曲小管颗粒样
变性,而骨折给药组与单纯骨折组比较肾损伤较轻。单纯骨折组中,Bcl-2及Bcl-2 mRNA表达在1~12 h较正常对照组高（P<
0.01）;Bax表达在12~36 h高于正常对照组（P<0.01）,Bax mRNA表达24~48 h阳性表达高于正常对照组（P<0.01）。在骨折给药
组,Bcl-2 表达在1 h 明显高于单纯骨折组（P<0.01）,Bcl-2 mRNA表达在12~24 h 高于单纯骨折组（P<0.01）;Bax 阳性表达及
Bax mRNA表达在24~48 h低于单纯骨折组（P<0.01）。结论骨折对肾皮质浅层Bcl-2和Bax蛋白的表达及mRNA的转录均有
明显影响,PNS通过上调抑凋亡基因Bcl-2和下调促凋亡基因Bax表达而抑制细胞凋亡的发生。
     

反式激活蛋白-NEMO结合域抑制核因子-κB活化在胆红素诱导大鼠海马神经元凋亡中的作用

目的明确核因子-κB（NF-κB）活化在胆红素诱导大鼠海马神经元凋亡中的作用,及反式激活蛋白-NEMO 结合域
（TAT-NBD）对胆红素神经毒性的干预作用。方法原代培养海马神经元分为对照组、胆红素组、TAT-NBD早期干预组、持续干
预组及晚期干预组。免疫细胞化学法检测NF-κB p65蛋白表达,改良MTT法、Annexin V-FITC/PI双染法及TUNEL法检测细胞
相对存活率及凋亡率,ELISA法检测原代培养基上清IL-1β水平。结果胆红素组海马神经元NF-κB p65 蛋白平均光密度值
（MOD）明显高于对照组（P<0.01）,6、24 h达高峰。TAT-NBD早期干预组细胞相对存活率为（80.784±9.767）%低于对照组（P<
0.01）、高于胆红素组（P<0.01）,细胞凋亡率为（14.100±2.252）%（Annexin V-FITC/PI双染法）、（12.883±1.629）%（TUNEL法）高
于对照组（P<0.01）、低于胆红素组（P<0.01）,IL-1β水平为15.348±0.812 pg/ml低于胆红素组（P<0.05）。TAT-NBD持续干预及晚
期干预组细胞存活率、凋亡率、IL-1β水平与胆红素组无显著性差异（P>0.05）。结论NF-κB双向调控胆红素诱导的海马神经元
凋亡。TAT-NBD抑制NF-κB早期高峰有神经保护作用,有可能用于胆红素脑损伤的预防。
     

丙泊酚对肿瘤细胞肺转移及E钙粘蛋白、β-连环蛋白表达的影响

目的探讨不同剂量丙泊酚对大鼠MADB106细胞肺转移和肿瘤组织中E钙粘蛋白（E-cadherin）、β-连环蛋白（β-catenin）
的影响。方法Fischer344雄性大鼠40只,随机分为4组（每组10只）：生理盐水组（S组）、脂肪乳剂组（F组）、丙泊酚30 ㎎/㎏组
（P1组）和50 mg/kg组（P2组）。1%戊巴比妥钠50 mg/kg腹腔注射后行股静脉置管,分别泵入等容量的生理盐水、脂肪乳剂和丙
泊酚,1 h后静注0.5 ml MADB106肿瘤细胞（2×105个）。3周后处死,计数肺表面转移瘤数目及转移抑制率;采用免疫组化法检
测肿瘤组织中E-cadherin和β-catenin 的表达,用IPP图像分析系统对结果进行半定量分析。结果S组与F组肺转移瘤数目、转
移抑制率和肿瘤组织中E-cadherin、β-catenin的表达均无显著差异（P>0.05）。与S组和F组相比,P1组和P2组的肺转移瘤数目
减少（P<0.01）,转移抑制率增加（P<0.01）,E-cadherin 和β-catenin 蛋白的表达减少（P<0.05）;肺转移瘤数目及E-cadherin 和
β-catenin蛋白的表达与丙泊酚剂量负相关,Pearson相关系数分别为-0.879、-0.755、-0.693（P<0.01）。结论丙泊酚可通过抑制
Wnt/β-catenin通路,下调转移瘤组织中E-cadherin和β-catenin的表达,从而抑制MADB106细胞肺转移,呈剂量依赖性。
     

3-溴丙酮酸增强肝癌细胞对顺铂敏感性的作用

目的探讨3-溴丙酮酸（3-BP）增强肝癌细胞对顺铂敏感性的作用及其可能机制。方法MTT法检测3-BP、顺铂对HepG2、
SMMC7721细胞的增殖抑制作用。选择低于半数抑制浓度（IC50）的100 μmol/L的3-BP和8 μmol/L的顺铂单独或联合处理细
胞,PI 单染流式细胞术检测细胞凋亡,caspase 3 活性检测试剂盒测定caspase-3 的活性变化,ATP检测试剂盒测定细胞内ATP
水平,Western blot 检测XIAP、PARP蛋白的表达。结果3-BP 在50~400 μmol/L 浓度范围内对HepG2、SMMC7721 细胞具有
明显的增殖抑制作用（P<0.01）,作用48 h 的IC50分别为238.9±13.9 μmol/L、278.7±11.7 μmol/L;顺铂在2~32 μmol/L 浓度范围
内对HepG2、SMMC7721细胞具有明显的增殖抑制作用（P<0.01）,作用48 h的IC50分别为16.4±0.9 μmol/L、20.9±1.8 μmol/L。
100 μmol/L 3-BP与8 μmol/L顺铂联合作用于HepG2、SMMC7721细胞48 h 的增殖抑制率分别为（60.6±2.2）%、（56.8±2.3）%,明
显高于对照组和单独用药组（P<0.01）。100 μmol/L 3-BP与8 μmol/L顺铂联合作用于HepG2、SMMC7721细胞48 h 的凋亡率
分别为（51.1±4.3）%、（46.5±3.9）%,较单用3-BP、顺铂的凋亡率明显提高（P<0.01）。结论3-BP 能增强肝癌细胞HepG2、
SMMC7721对顺铂诱导的凋亡的敏感性,其机制可能是通过引起细胞内ATP缺乏、下调XIAP蛋白的表达以及增加caspase-3的
活性。     

Src 激酶抑制剂PP2对星形胶质细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的探讨Src激酶抑制剂PP2对大鼠星形胶质细胞缺氧/复氧损伤的保护作用。方法实验分为正常对照组,缺氧/复氧组
（H/R;缺氧8 h/复氧24 h）,PP2 +缺氧/复氧组（PP2+H/R;缺氧前给予10 μmol/L PP2作用24 h）。MTT法检测各组星形胶质细胞
存活率,流式细胞术测定各组星形胶质细胞凋亡率,Western blotting法检测各组星形胶质细胞中Src激酶、Bax及Bcl-2的蛋白
表达。结果MTT检测结果显示H/R 损伤后细胞存活率降低,而在使用PP2预处理后细胞存活率增加（P<0.01）;流式细胞术实
验结果显示H/R 损伤后细胞凋亡增加,而在使用PP2预处理后细胞凋亡显著减少（P<0.01）;Western blotting法检测结果显示H/
R 损伤后Src激酶表达增加,用PP2预处理后Src激酶表达降低。H/R 损伤后凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2的比值增加,在用PP2预
处理后Bax/Bcl-2的比值显著降低（P<0.01）。结论PP2可对星形胶质细胞H/R损伤起保护作用,其机制可能与抑制Src激酶的
蛋白表达和激活抗凋亡机制有关。
     

盐酸戊乙奎醚对失血性休克-内毒素二次打击大鼠肾损伤的保护作用

摘要：目的探讨盐酸戊乙奎醚（PHC）对失血性休克-内毒素二次打击大鼠肾损伤的保护作用。方法45只成年Wistar大
鼠随机分为假二次打击组(S组)、二次打击组（M组）和PHC 1 mg/kg组（PHC1组）、2 mg/kg组(PHC2组)、3 mg/kg组(PHC3
组)。取动脉血2 ml 测定血清肿瘤坏死因子-α( TNF-α)、白细胞介素- 1(IL-1)、白细胞介素- 8（IL-8）、肌酐（Cr）和尿素氮
（BUN）,测定肾粘附分子-1（ICAM-1）和核转录因子-κB（NF-κB）,HE染色观察肾的病理改变。结果PHC1、PHC2、PHC3
组与M组相比,血清TNF-α、IL-1、IL-8、Cr、BUN含量明显降低,肾组织ICAM-1 和NF-κB表达明显减弱（P<0.05）。与
PHC2、PHC3组比较,PHC1组血清TNF-α、IL-1、IL-8、Cr、BUN明显降低（P<0.05）。光镜下PHC1、PHC2、PHC3组肾小管
损伤均比M组轻。结论PHC 可抑制失血性休克-内毒素二次打击大鼠血清TNF-α、IL-1、IL-8、Cr、BUN及ICAM-1、
NF-κB在肾脏表达,减轻肾功能和肾小管的损伤程度,以1 mg/kg作用最显著。     

高浓度氧暴露对N9小胶质细胞功能的影响

摘要：目的探讨常压高浓度氧暴露对N9小胶质细胞功能的影响。方法体外培养N9小胶质细胞,分别在900 ml/L高浓
度氧中暴露2、6、12、16、24、48 h后（1）流式细胞术检测细胞存活率及凋亡率;（2）DCFH-DA荧光探针检测活性氧（ROS）含
量的变化;（3）RT-PCR检测Toll样受体4（TLR4）mRNA表达变化;（4）ELISA检测N9细胞培养上清中IL-1β和TNF-α的含
量;（5）免疫荧光化学染色检测TLR4蛋白的表达变化。结果流式细胞术结果示,细胞凋亡率在高氧暴露12 h后明显高于
空气对照组（P<0.05）,16 h达高峰（P<0.01）;高氧暴露2 h后,细胞内ROS含量明显增加,呈一定时间依赖性;TLR4 mRNA
及蛋白表达水平明显高于空气对照组（P<0.05）;高氧暴露后细胞上清中TNF-α及IL-1β含量随暴露时间延长而增加,均在
6 h开始升高,12~16 h达高峰（P<0.05）,IL-1β增高较TNF-α更为明显。结论高氧暴露后N9小胶质细胞TLR4通路激活,
产生大量神经毒性因子（ROS、IL-1β及TNF-α）,细胞凋亡增加。
     

二甲双胍对糖基化终末产物诱导的成纤维细胞凋亡及相关蛋白caspase-3、Bax及Bcl-2表达的影响

目的探讨晚期糖基化终末产物（AGEs）对原代人皮肤成纤维细胞凋亡的影响,以及二甲双胍（Metformin）对原代皮肤成
纤维细胞凋亡是否存在保护作用。方法取对数生长期的皮肤成纤维细胞,分为空白组,BSA对照组（300 μg/mL）,AGEs刺激组
（100、200、300 μg/mL）,药物组（AGEs 300 μg/mL+Metformin 1 mmol/L）,采用CCK-8检测24、48、72 h细胞凋亡情况;Western
Blot检测细胞培养72 h后凋亡相关蛋白caspase-3、Bax、Bcl-2表达情况。结果CCK-8结果显示AGEs诱导皮肤成纤维细胞凋
亡呈浓度及时间依赖性,AGEs 300 μg/mL诱导72 h后可见细胞凋亡明显增多（0.72±0.02 vs 1±0.04,P<0.05）,加入二甲双胍后可
对成纤维细胞起一定保护作用（0.98±0.02 vs 0.72±0.02,P<0.05）。Western Blot显示AGEs 300 μg/mL刺激成纤维细胞72 h后,
caspase-3、Bax 蛋白表达增加（P<0.05）,而Bcl-2 蛋白表达下降（P<0.05）,Bcl-2/Bax 比值下降（P<0.05）,二甲双胍作用后
caspase-3、Bax蛋白表达水平较刺激组明显下降（P<0.05）,而Bcl-2及Bcl-2/Bax比值则明显上升（P<0.05）。结论AGEs可诱导
人皮肤成纤维细胞凋亡增加,二甲双胍可以通过调控caspase-3、Bax及Bcl-2表达,从而起到抗凋亡作用。
     

甘露醇对新西兰兔严重烧伤早期血清TNF-α和IL-6的影响及其脏器功能的保护机制

目的探讨甘露醇补液疗法对严重烧伤新西兰兔组织器官的保护作用及其保护机制。方法将12 只新西兰兔构建30%
TBSA深度烧伤模型后,随机分为对照组和甘露醇组,烧伤后1 h开始补液治疗,分别于烧伤前、烧伤后1、4、8、24、48 h收集血清
及48 h 总尿液,用夹心酶联免疫吸附法测定血清、尿中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）含量;生化法测定ALT、
AST、GGT、CK、CK-MB、BUN和Cr 含量。结果烧伤后1 h 两组兔血清TNF-α和IL-6 开始升高,伴随ALT、AST、GGT、CK、
CK-MB、BUN和Cr升高;与对照组相比,甘露醇组兔48 h尿液TNF-α和IL-6总排泄量较高（P<0.05）,血清TNF-α和IL-6水平则
较低（P<0.05）,ALT、AST、GGT、CK、CK-MB、BUN和Cr含量也较低（P<0.05）。结论甘露醇补液疗法可降低烧伤早期血中炎
症介质TNF-α和IL-6的含量,减轻心、肝、肾的功能损害。