Scid小鼠免疫重建及T、B和NK细胞对CNE－2Z－H_5移植瘤生长的影响

采用近系淋巴细胞输入或移植胸腺重建Ｓｃｉｄ小鼠免疫功能，以环磷酰胺抑制ＢＡＬＢ／Ｃ裸鼠ＮＫ功能，然后移植ＣＮＥ－２Ｚ－Ｈ＿５。移植瘤生长速度及瘤重依次为：Ｓｃｉｄ小鼠组→ＮＫ功能抑制组→ＢＡＬＢ／Ｃ裸鼠组→免疫重建组；淋巴细胞输入组６／６例、胸腺移植组１／３例于荷瘤２２天内移植瘤完全消退。表明免疫重建成功，有较强抗瘤效应。     

联合检测血清唾液酸和EBVCA-IgA对鼻咽癌诊断及疗效监测的意义

目的 探讨联合检测血清唾液酸（SA）和EB病毒壳抗原IgA抗体（EBVCA-IgA）在鼻咽癌（NPC）患者诊断及疗效监测中的意义.方法 对65例NPC患者治疗前、治疗结束后1个月、和21例治疗后1年出现局部复发或远处转移者,50例头颈部良性病变患者及50例正常人血清SA与EBVCA-IgA进行联合检测.结果 NPC患者治疗前血清SA和EBVCA-IgA阳性率均明显高于正常人和头颈部良性病变患者,差异有统计学意义（均P＜0.01）;联合检测敏感性达到96.9%,明显高于SA、EBVCA-IgA的单项检测（P＜0.05）,同时特异性仍有91.0%.与NPC治疗前组比较,NPC治疗后组和未复发组的血清SA水平明显下降（P＜0.01）,NPC治疗后复发组较未复发组患者的血清SA水平明显上升（P＜0.01）,而EBVCA-IgA的阳性率的变化却不明显.结论 血清SA水平可作为判断NPC疗效及监测病情的一种有效手段,联合检测血清SA水平和EBVCA-IgA阳性率,可明显提高NPC患者的阳性检出率.     

鼻咽癌EB病毒Rta/IgG抗体检测的诊断价值

目的 通过检测血清中的EB病毒Rta/IgG抗体,评价其在鼻咽癌诊断上的价值.方法 收集211例未经治疗的鼻咽癌患者,413例对照组(包括203例相似症状的非鼻咽癌病例和210例健康体检者)的血清,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测Rta/IgG抗体.应用受试者工作特征(ROC)曲线对结果进行分析评价.结果 鼻咽癌组的Rta/IgG抗体rA值中位数明显高于对照组(P<0.001).Rta/IgG抗体检测诊断鼻咽癌的ROC曲线下面积为0.933,最佳截断点时敏感度为90.5%,特异度为90.1%.结论 采用ELISA方法检测血清中Rta/IgG抗体可以作为检测EB病毒的一个新指标,并可作为鼻咽癌诊断的重要标志物之一.     

鼻咽癌淋巴结转移组织中EB病毒BamH Ⅰ"f"变异分析

目的 探讨高发区原发鼻咽癌及相应的淋巴结转移癌组织中EB病毒BamH Ⅰ"f"变异情况.方法 原位杂交法检测了21对鼻咽原发癌及其相应的淋巴结转移癌组织、22例未伴淋巴结转移的鼻咽癌组织中EB病毒EBER的表达,进而采用PCR和限制性酶切分析技术检测了所有鼻咽癌病例及相应的淋巴结转移癌组织和50例鼻咽黏膜慢性炎组织中EB病毒BamH Ⅰ"f"变异情况.结果 所有鼻咽癌和相应的淋巴结转移癌组织均呈EBER阳性表达.21对鼻咽原发癌及其相应的淋巴结转移癌组织、22例未伴淋巴结转移的鼻咽癌组织和50例鼻咽黏膜慢性炎组织中EB病毒BamH Ⅰ"f"基因变异率分别为52.4%(11/21)、57.1%(12/21)、81.8%(18/22)和2.1%(1/47).统计学分析显示,鼻咽癌组织"f"变异率明显高于鼻咽黏膜慢性炎组织的变异率;伴淋巴结转移的鼻咽癌组织中"f"变异率并不比未伴淋巴结转移的鼻咽癌组织的变异率高.另外,表现为"f"变异的1例鼻咽黏膜慢性炎呈"F/f"型,且其组织学可见部分鼻咽上皮出现轻度的不典型增生.结论 高发区鼻咽癌组织中EB病毒BamH Ⅰ "f"变异率远高于同一地区鼻咽黏膜慢性炎组织中的变异率;鼻咽癌淋巴结转移组织中也有较高的BamH Ⅰ"f"变异率,且与其原发癌组织基本一致.     

鼻咽癌中EB病毒编码的潜伏膜蛋白1对β-catenin转录活性及表达的影响

目的 观察鼻咽癌细胞潜伏膜蛋白1(LMP1)表达对β-catenin的转录活性及蛋白表达的影响,探讨LMP1与Wnt/β-catenin信号通路在鼻咽癌发生发展中的作用.方法应用免疫组织化学EnVision法检测75例鼻咽癌组织中LMP1和β-catenin的表达.构建pHA2-LMP1重组质粒,应用细胞免疫荧光、双荧光素酶报告分析、Western blot方法研究LMP1在鼻咽癌细胞株CNE1和CNE2中对β-catenin转录活性及表达的影响.结果 (1)鼻咽癌组织中β-catenin的异常表达率为50.7%(38/75),LMP1的阳性表达率为50.7%(38/75).鼻咽癌组织中β-catenin异常表达与LMP1表达存在正相关(相关系数为x2=7.048,P=0.008).(2)LMP1表达明显提高鼻咽癌细胞株CNE1和CNE2中β-catenin的核表达,且β-catenin的核表达在低分化鼻咽癌细胞株CNE2明显高于高分化鼻咽癌细胞株CNE1.(3)LMP1可明显上调CNE1和CNE2中β-catenin的转录活性,且呈时间依赖性.另外,β-catenin的转录活性在低分化鼻咽癌细胞株CNE2高于高分化鼻咽癌细胞株CNE1.(4)LMP1对鼻咽癌细胞株β3-catenin的总蛋白表达水平无明显影响.结论 EB病毒编码的LMP1可能通过β-catenin信号通路参与鼻咽癌的发生发展.     

鼻咽癌患者树突状细胞对EBV特异性细胞毒T细胞的免疫反应

目的：用负载EB病毒抗原LMP-2表位肽段的鼻咽癌患者树突状细胞（DC）诱导自身CD8^＋T细胞，观察其细胞毒性T细胞的免疫应答能力。方法：在体外分离并诱导成熟HLA—A2基因型鼻咽癌患者自身的DC，分别负载EB病毒抗原LMP-2的HIA—A2限制型两个表位肽段CLGGLLTMV（CLG）和LTAGFIFL（LTA）后，诱导自身CD8^＋T细胞，培养2周后，运用酶联免疫斑点法（Elispot）和HLA-肽四聚体法（Tetramer）检测诱导后T细胞的免疫应答情况。结果：经DC抗原呈递后分泌IFN-γ的CLG和LTA特异性CD8^＋T细胞数，分别为（42．67±33．79）个／孔和（25．67±18．25）个／孔，而呈递前分别为（2．67±1．97）个／孔和（5．33±1．86）个／孔。两者IFN-γ^＋CD8^＋T细胞数均有明显增加（P〈0．05）。CLG和LTA肽段特异性细胞毒性T细胞（CTL）的中位数在呈递前分别为0．135％和1．14％；呈递后则为1．045％和1．945％。两者较呈递前均明显增加（P〈0．05）。结论：负载EB病毒抗原LMP-2表位肽段的DC诱导鼻咽癌患者自身CD8^＋T细胞，可产生特异性CTL，对鼻咽癌患者的免疫治疗具有潜在的应用价值。     

不同来源潜伏膜蛋白1基因转染对鼻咽癌CNE1细胞生长的影响

目的:探讨不同来源的EB病毒潜伏膜蛋白1(LMP1)基因转染对人高分化鼻咽癌(NPC)细胞系CNE1生长的影响。方法:采用脂质体介导法分别将含有来源于B95-8淋巴细胞标准株的LMP1基因(B95-8-LMP1)和来源于NPC组织的LMP1基因(CAO-LMP1)的质粒转染CNE1;RT-PCR和蛋白印迹法分别鉴定LMP1mRNA和蛋白表达;结晶紫法、流式细胞术和平板克隆形成法测定不同来源的LMP1对CNE1生长特性的影响。结果:成功建立稳定表达不同来源LMP1的CNE1细胞系。两种不同来源的LMP1均可促进CNE1细胞的生长(P<0.01);CAO-LMP1比B95-8-LMP1具有更强促进CNE1生长的作用(P<0.01)。结论:不同来源LMP1对CNE1的体外生长均有促进作用,CAO-LMP1比B95-8-LMP1具有更强的促增殖能力。     

鼻咽癌中EB病毒LMP1基因的序列变异

目的 检测广州地区鼻咽癌中EB病毒LMP1基因N-和C-末端区序列变异的热点,并探讨其产生的机制。方法 收集中山大学肿瘤医院未经治疗的鼻咽癌患者鼻咽新鲜活检标本63例。采用巢式聚合酶链反应（PCR）扩增EB病毒LMP1基因N-和C-末端区,用XhoⅠ对N-末端区扩增产物进行酶切分析,并检测C-末端区扩增产物30bp缺失的情况。采用四色荧光末端终止法对4例患者N-和C-末端区的8份扩增产物进行序列分析。结果 63例鼻咽癌组织EB病毒LMP1基因N-和C-末端区有4种序列变异类型：wt-XhoⅠ／wt-LMP1（4例,6．3％）、wt-XhoⅠ＆XhoⅠ-loss／del-LMP1（4例,6．3％）、wt-XhoⅠ／del-LMP1（5例,7．9％）和XhoⅠ-loss／del-LMP1（50例,79．5％）。序列分析显示：与B95-8细胞相比较,所有检测的鼻咽癌组织中EB病毒LMP1基因均发生了错义点突变和无义点突变。错义点突变数与无义点突变数之间的比值为2．25（9／4）。结论 广州地区鼻咽癌中EB病毒LMP1基因的序列变异类型以XhoⅠ-loss／del-LMP1占主导。LMP1基因N-末端区XhoⅠ酶切位点的丢失很可能是在C-末端区30bp缺失的基础上发生的。LMP1基因的4种序列变异类型可能代表了鼻咽癌变过程中EB病毒在宿主内演变的4个时相。     

应用基于Logistic回归的ROC曲线评价鼻咽癌EB病毒抗体联合检测

目的 以基于Logistic回归的受试者工作特征(ROC)曲线分析方法,评价VCA/IgA、EA/IgA、Rta/IgG和EBNA1/IgA等EB病毒抗体不同组合在鼻咽癌诊断中的价值.方法 收集211例初治鼻咽癌和203例相似症状的非鼻咽癌病例的血清,采用免疫酶法检测VCA/IgA及EA/IgA,酶联免疫吸附法检测Rta/lgG和EBNA1/IgA.对各种的抗体组合建立Logistic回归模型,以预测概率为分析指标,应用ROC曲线分析,评价不同组合对鼻咽癌的诊断价值.结果 单一指标评价,VCA/IgA敏感度最高(98.1%),EA/IgA特异度最高(98.5%).以基于Logistic同归的ROC曲线分析各项组合,敏感度和特异度均有所提高.双指标组合中,VCA/IgA+Rta/lgG组合的ROC曲线下面积(AUC)为0.991,诊断效能最高,敏感度、特异度及约登指数分别为94.8%、98.0%及0.928.VCA/IgA+Rta/IgG+EBNA1/IgA组合和4项指标组合的敏感度、特异度及约登指数分别为94.8%、98.5%、0.933和96.7%、97.0%、0.937;这两种多指标组合的AUC与VCA/IgA+Rta/IgG组合比较差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 基于Logistic回归的ROC曲线分析方法可以为多指标联合诊断试验提供更客观的综合分析,VCA/IgA和Rta/IgG联合检测具有互补作用,是鼻咽癌血清学诊断的合适组合.     

血清EB病毒抗体水平与鼻咽癌患者预后的关系

目的 探讨血清EB病毒VCA/IgA、EA/IgA、NA1/IgA及Rta/IgG抗体水平与鼻咽癌患者预后的关系.方法 140例初治无远处转移的鼻咽癌患者分别在治疗前和治疗结束后采用免疫酶法检测血清VCA/IgA和EA/IgA,ELISA法检测NA1/IgA和Rta/IgG.随访进行远期疗效和生存的评价.结果 治疗后患者血清VCA/IgA、EA/IgA、NA1/IgA及Rta/IgG抗体水平较治疗前有明显下降,但仍显著高于正常对照组(P＜0.05).治疗后持续缓解的鼻咽癌患者其治疗前VCA/IgA、EA/IgA抗体水平显著低于疾病进展患者(P＜0.05).血清VCA/IgA、EA/IgA、NA1/IgA及Rta/IgG抗体水平与患者的3年总生存率无关(P＞0.05).治疗前VCA/IgA抗体高水平组(≥1∶320)及EA/IgA抗体高水平组(≥1∶80)患者的无进展生存期(61.8％,61.3％)低于抗体低水平组患者(86.5％,86.5％;P＜0.001).Cox回归分析显示治疗前VCA/IgA抗体水平是影响无进展生存的独立危险因素(HR=3.80,P=0.001).结论 VCA/IgA、EA/IgA可为鼻咽癌患者预后判断提供帮助.     

EBV-LMP及二甲基亚砜对人鼻咽癌细胞生长分化的影响

目的：研究ＥＢＶ－ＬＭＰ及二甲基亚砜（ＤＭＳＯ）对人鼻咽癌（ＮＰＣ）细胞体外生长分化的影响。方法：以人高分化鼻咽癌细胞株（ＣＮＥ１）为对象，采用电穿孔基因转染技术，将重组ＥＢＶ－ＬＭＰ表达质粒转染ＣＮＥ１细胞，以载体质粒转染及ＣＮＥ１细胞为对照，用细胞体外增殖实验、流式细胞仪和免疫组化等方法，观察细胞生长分化的变化情况。结果：ＥＢＶ－ＬＭＰ在体外可明显促进ＣＮＥ１细胞的增殖，实验组与空白组及阴性对照组比较Ｐ＜０．０１，实验组Ｓ期细胞明显增多，细胞角蛋白表达显著下降（Ｐ＜０．０５），有向低分化鳞癌发展倾向；ＤＭＳＯ诱导后ＣＮＥ１细胞增殖力明显下降（Ｐ＜０．０１），细胞角蛋白表达显著增高（Ｐ＜０．０１）；ＬＭＰ可明显抑制ＤＭＳＯ对ＣＮＥ１细胞的诱导分化作用，转染细胞诱导后增殖力和角蛋白表达无显著改变（Ｐ＞０．０５）。结论：ＤＭＳＯ可在一定程度上诱导ＣＮＥ１细胞分化；ＥＢＶ－ＬＭＰ对ＣＮＥ１细胞生长有明显的促进作用，可抑制细胞分化及降低细胞对终末分化信号的反应，有助于深入研究ＮＰＣ的发生机理及防治     

鼻咽癌中hTERT和p53的表达及其相关性

目的　研究人端粒酶逆转录酶 (hTERT)和 p5 3在鼻咽癌中的表达及其对预后的影响 ,并分析hTERT与抑癌基因p5 3的相关性。 方法　用免疫组化S P法分别检测hTERT及 p5 3在 84例鼻咽癌组织、8例癌旁黏膜上皮非典型增生组织和16例鼻咽黏膜慢性炎组织中的表达。结果　 (1)hTERT在鼻咽癌组织 癌旁黏膜上皮非典型增生组织和鼻咽黏膜慢性炎组织中的阳性表达率分别为 83 4 % (70 / 84 )、0 (0 / 8)和 0 (0 / 16 ) ;p5 3在上述 3种组织中的阳性表达率分别为 5 6 % (4 7/ 84 )、5 0 %(4 / 8)和 0 (0 / 16 ) ;两种基因表达在癌与非癌组间差异均有显著性 (P <0 0 0 1)。 (2 )hTERT阳性表达患者的平均生存期、5年生存率和中位生存期均低于hTERT阴性者 ,且差异有显著性 (P <0 0 5 )。p5 3阳性和阴性表达患者的预后组间差异无显著性 (P >0 0 5 )。 (3)鼻咽癌组织中hTERT与 p5 3的表达一致率为 6 3% (5 3/ 84 ) ,存在显著相关性 (P <0 0 5 )。 结论　hTERT可作为临床诊断鼻咽癌的一个潜在指标 ,且对临床判断预后有重要意义。p5 3的表达对鼻咽癌的临床诊断具有一定价值 ,但其特异性不强 ,对判断预后也无显著意义 ;p5 3很可能参与了对hTERT表达的调控 ,但可能以不同方式出现     

Establishment and characterization of two nasopharyngeal carcinoma cell lines

Two human nasopharyngeal carcinoma (NPC) cell lines have been established. One derived from a 64-year-old male, and the other from a 36-year-old female Chinese patient living in Taiwan. Both were keratinizing squamous cell carcinoma in nature and designated as NPC-TW039 and NPC-TW076. Both have been grown in culture system for more than 100 passages. Single cells from both cell lines could form colonies in 0.3% soft agar. In the nude mouse transplantation experiment, both cell lines could produce tumor mass with metastasis. The karyotypic analysis showed multiple chromosomal abnormality. The number of chromosomes ranged between 76 to 109 and 80 to 105 with an average of 98 and 95, respectively. The doubling time was 10.5 hours and 10.8 hours, respectively. The NPC-TW039 cell line has been subcloned and three subclones have been obtained. Ultrastructural studies from those two cell line, three subcloned cell lines and two transplanted tumor masses, all showed two types of morphology: the dark and light cells. This morphologic difference is probably derived from the different metabolic state, but not due to an artifact. Three oncogene probes have been used to check the oncogene expression; none of those five cell lines is positive. Similarly, six Epstein-Barr virus fragments have been labeled to hybridize with NPC cellular DNA preparations, results from the Southern blotting showed no detectable Epstein-Barr virus DNA sequence.     

齐齐哈尔地区鼻咽部淋巴瘤与EB病毒的相关性

目的：探讨ＥＢ病毒感染与齐齐哈尔地区鼻咽部淋巴瘤的关系。方法：常规染色后行组织学分类,利用免疫组化ＬＳＡＢ法确定肿瘤的免疫表型。采用原位杂交方法检测ＥＢ病毒编码的小核ＲＮＡ。结果：２１例鼻咽部淋巴瘤中,Ｔ细胞淋巴瘤１７例,占８０．９％其中高度恶性１５例,均为中－大Ｔ细胞淋巴瘤;低度恶性２例,为小Ｔ细胞淋巴瘤。Ｂ细胞淋巴瘤４例,高度恶性３例,分别为中心母细胞性淋巴瘤和免疫母细胞性淋巴瘤;低度恶性１例     

Prognostic value of tumor volume in nasopharyngeal carcinoma

Tumor bulk has been recognized as an important prognostic factor in the treatment of malignancy. The purpose of the present study is to investigate the prognostic value of tumor volume in nasopharyngeal carcinoma. Sixty patients with nasopharyngeal carcinoma were included in this study. Tumor contour was outlined on each of the computed tomography (CT) images using an image analyzer. The primary tumor volume (PTV) and nodal tumor volume (NTV) were calculated by a summation-of-areas technique, and the maximal perimeter of primary tumor (MPP) was measured. The loco-regional control rates and disease-specific survival rates were analyzed according to several variables. The patients had a 5-year local control rate of 75.5%, 5-year nodal control rate of 74.6%, and 5-year disease-specific survival rate of 60.2%. Large PTV ( > 30 cm3) was associated with a significantly lower local control (p=0.005). Large NTV ( > 5 cm3) was associated with a significantly lower nodal control (p=0.019) and lower disease-specific survival (p=0.046). Large MPP ( > 18 cm) was associated with a significantly lower local control (p=0.017). In multivariate analysis, the PTV and NTV were found to be independent factors in predicting the local (p=0.015) and nodal (p=0.039) control, respectively. The NTV (p=0.012) and cranial nerve involvement (p=0.009) were factors that predicted disease-specific survival. Our results suggest that the estimation of tumor volume may identify a subgroup of patients with a greater risk of loco-regional failure and can be used to refine the current staging system.