shRNA抑制缺氧条件下人视网膜色素上皮细胞低氧诱导因子-1α基因对血管内皮生长因子表达的影响

目的探讨缺氧条件下人视网膜色素上皮（hRPE）细胞低氧诱导因子-1α（HIF-1α）对血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。方法利用体外转录法合成针对HIF—1α mRNA序列的靶点之一的小发卡环RNA（shRNA）,以化学低氧诱导剂CoCl2模拟RPE细胞缺氧环境,对缺氧培养条件下hRPE细胞的HIF-1α进行RNA干扰,通过逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测HIF-1α和VEGF mRNA的表达,免疫印迹法检测HIF—1α和VEGF蛋白水平,以正常组、缺氧组及阴性转染组作为对照,观察其对HIF-1α基因的沉默效果及对VEGF表达的抑制作用。结果转染HIF-1α mRNA的特异性shRNA后,RT-PCR检测结果显示缺氧条件下hRPE细胞HIF-1α基因沉默效果为77．1％,VEGF mRNA的表达水平下降了27．8％;免疫印迹法检测结果显示HIF—1α和VEGF蛋白水平显著降低。结论针对HIF-1α mRNA的shRNA能有效地使HIF-1α基因沉默,进而抑制缺氧对VEGF的上调作用。（中华眼科杂志．2007。43：1022—1027）     

缺氧对人视网膜色素上皮细胞表达缺氧诱导因子-1α及血管内皮生长因子的影响

血管内皮生长因子（VEGF）在眼内新生血管形成中发挥着重要作用。研究发现，VEGF转录活化受缺氧诱导因子（HIF-1）调节。HIF-1是异源二聚体，由α亚基和β亚基组成。常氧状态时，HIF-1α经泛素-蛋白酶途径不断发生水解；缺氧状态下，HIF-1α稳定表达。HIF-1β属构建型表达，不受缺氧诱导，可稳定存在。因此，HIF-1的活性由HIF-1α决定。我们检测了缺氧不同时间培养的人视网膜色素上皮（RPE）细胞对HIF-1α及VEGF的表达，以分析RPE细胞内HIF-1与VEGF表达的关系。     

shRNA抑制人RPE细胞HIF-1 α基因表达对VEGF及PEDF表达的影响

目的利用小发卡环RNA（shRNA）使缺氧培养条件下的人视网膜色素上皮（RPE）细胞缺氧诱导因子1α（HIF-1α）基因沉默，观察对血管内皮生长因子（VEGF）及色素上皮衍生因子（PEDF）的影响。方法体外转录法合成对HIF-1αmRNA序列的两个靶点的shRNA，对缺氧（150μmol／LCoCl2模拟）培养条件下人RPE细胞的HIF-1α进行干扰，使用RT—PCR检测HIF-1α、VEGF和PEDFmRNA的表达及Western印迹分析检测HIF-1α、VEGF和PEDF蛋白水平。结果HIF-1αmRNA的两种shRNA均能有效地抑制RPE细胞在缺氧条件下HIF-1α的表达，同时也有效地抑制VEGFmRNA和蛋白表达，并促进PEDF蛋白表达，但对PEDFmRNA的表达无影响。结论HIF-1αmRNA的shRNA能有效地使缺氧条件下RPE细胞HIF-1α基因沉默，进而有效地抑制缺氧对VEGF的上调作用，同时也促进PEDF表达。揭示了HIF-1与缺氧条件下PEDF翻译后的下调机制有关，是促进视网膜新生血管形成最为关键的细胞因子之一。     

缺氧诱导因子-1α和血管内皮生长因子干扰性RNA对人血管内皮细胞血管内皮生长因子表达的抑制

目的 探讨缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）和血管内皮生长因子（VEGF）小片段干扰性RNA（siRNA）对人血管内皮细胞VEGF表达的影响。 方法 构建HIF-1α siRNA重组质粒。将体外培养的人血管内皮细胞（HUVEC-12）分成常氧（20%）组和低氧（1%）组。低氧组中，采用脂质体Lipofectamine ^TM 2000（LF2000）分别转染空载体质粒（空载体组）、HIF-1α siRNA（HIF-1α组）、VEGF-₁₆₅ siRNA（VEGF组）和HIF-1α siRNA+VEGF₁₆₅ siRNA（共转染组）。低氧组中未转染的细胞为对照组。采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）鉴定基因转染效率；RT-PCR和免疫细胞化学法检测各组细胞中VEGF基因和蛋白表达的变化。 结果 成功构建HIF-1α siRNA重组质粒。人血管内皮细胞转染24 h后，HIF-1α siRNA和VEGF-₁₆₅ siRNA重组质粒有表达。常氧组细胞中仅见微弱的VEGF mRNA和蛋白表达，而低氧组表达明显上调；HIF-1α组、VEGF组和共转染组表达较对照组减弱，其中共转染组抑制效果最明显。 结论 HIF-1α和VEGF₁₆₅ siRNA能有效抑制人血管内皮细胞VEGF的表达。     

RNA干扰技术体外抑制低氧诱导因子-1α及血管内皮细胞生长因子表达的研究

目的研究正常氧及低氧环境下,pSUPER^h1-siHIF-1α。真核表达载体对低氧诱导因子-1α（HIF-1α）表达的抑制效果及由此引起的血管内皮细胞生长因子（VEGF）表达的差异。方法构建pSUPER^h1-siHIF-1α真核表达载体,并建立pSUPER^h1-siHIF-1α稳定转染细胞系。采用半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法,筛选HIF-1α mRNA抑制效率最高的细胞系。然后将其与对照细胞在正常氧（20％O2）及低氧环境（1％O2）下培养,采用半定量RT-PCR、免疫印迹法及ELISA技术检测正常氧及低氧环境下pSUPER^h1-siHIF-1α对HIF-1α及VEGF表达的抑制效果。结果低氧环境下,pSUPER^h1-siHIF-1α可明显抑制HIF-1α和VEGFmRNA及蛋白质的表达。而正常氧环境下,pSUPER^h1-siHIF-1α虽可明显下调HIF-1αmRNA表达水平,但对VEGF mRNA和分泌型蛋白表达水平无明显抑制效果。结论低氧环境下,pSUPER^h1-siHIF-1α能显著抑制HIF-1α的表达,且下调其下游基因VEGF的表达。因此,pSUPER^h1-siHIF-1α可能为视网膜新生血管的基因治疗提供新的途径。（中华眼科杂志,2007,43：1028-1035）     

白藜芦醇对急性低压缺氧诱导的大鼠视网膜损伤的保护作用

目的　探讨白藜芦醇对急性低压缺氧诱导的大鼠视网膜损伤的保护作用及机制。方法　将72只健康SD大鼠随机分成3组:常氧对照组、低氧模型组、低氧+白藜芦醇（resveratrol,RES）干预组（RES干预组）。常氧对照组大鼠在常氧环境下喂养,低氧模型组及RES干预组大鼠置于低压氧舱内（模拟5000 m的海拔高度）喂养,RES干预组每日并给予腹腔注射30 mg·kg^-1 RES 1次。各组大鼠在不同处理7 d后剥离视网膜,免疫组织化学法观察大鼠视网膜组织中胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein,GFAP）和缺氧诱导因子-1（hypoxia-inducible factor-1,HIF-1）的表达,RT-PCR检测核转录因子-kappaB（nuclear factor-kappa B,NF-κB）和脑源性神经营养因子（brain-derived neurotrophic factor,BDNF）mRNA的表达。结果　低氧模型组大鼠视网膜GFAP与HIF-1的表达较常氧对照组增加,BDNF mRNA（2.627±0.633）和NF-κB mRNA（1.712±0.198）的相对表达量较常氧对照组（2.000±0.518、1.053±0.483）上调（P= 0.013、0.008）。与低氧模型组对比,RES干预组视网膜受损程度减轻,GFAP与HIF-1的表达减少,BDNF mRNA相对表达量（2.053±0.938）显著下调,差异有统计学意义（P=0.024）,而NF-κB mRNA相对表达量（1.481±0.397）与低氧模型组相比,差异无统计学意义（P=0.455）。结论　RES对高海拔缺氧诱导的视网膜损伤有保护作用,其机制可能与调节GFAP、HIF-1、BDNF以及NF-κB的表达有关。     

缺氧诱导体外培养的人视网膜色素上皮细胞转录和表达缺氧诱导因子-1α的研究

目的探讨在不同缺氧时相人视网膜色素上皮(RPE)细胞转录和表达缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的情况。方法原代培养人RPE细胞,经鉴定后,选择第3—6代RPE细胞进行缺氧分析,分别在缺氧6、8、16、24、48h不同时相,利用半定量RT—PCR法及免疫荧光测定法检测人RPE细胞转录和表达HIF-1α的情况。结果半定量RT-PCR法和免疫荧光法检测结果均显示缺氧可以明显诱导入RPE细胞转录和表达HIF-1α。在缺氧8h时,HIF-1α转录和表达量达高峰,并可持续至24h后;缺氧48h时,人RPE细胞代谢产物增加,细胞形态发生改变,HIF-1α转录和表达量开始下降。结论缺氧可以明显诱导人RPE细胞转录和表达HIF-1α,这可能是发生脉络膜新生血管的重要始动因素。（中华眼科杂志,2005,41：312-316）     

青光眼视网膜和视神经乳头中的缺氧诱导因子1α

目的：通过评测一种转录因子、缺氧诱导因子1α（HIF-1α），一种与细胞的氧浓度紧密调节的因子，来检查组织缺氧在青光眼视网膜和视神经乳头中的情况。     

低氧诱导因子-1α干扰RNA对血管内皮生长因子mRNA表达的抑制作用

目的 探讨低氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor-1α．HIF-1α）特异性小片段干扰RNA表达载体pSUPER^H1-SiHIF1α对低氧诱导因子-1α和血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor．VEGF）mRNA表达的抑制作用。方法 构建HIF-1α特异性小片段干扰RNA表达载体pSUPER^H1-SiHIF1α通过脂质体Lipofectamine2000分别介导pSUPER^H1-SiHIF1α转染低氧状态下培养的人低分化鼻咽鳞癌细胞（nasopharyngeal carcinoma cell line，CNE2），对照组转染pSUPER空载体．采用半定量RT—PCR方法检测HIF-1αmRNA和VEGF mRNA的表达。结果 转染DSUPER^H1-SiHIF1α的CNE2细胞中HIF-1α mRNA和VEGF mRNA的表达较对照组分别降低79．4％和65．7％。结论 HIF-1α特异性小片段干扰RNA表达载体pSUPER^H1-SiHIF1α能明显抑制HIF-1α mRNA和VEGF mRNA的表达。     

信号转导与转录激活因子3在脉络膜新生血管发生中的可能作用

目的　观察磷酸化信号转导与转录激活因子3（STAT3）在激光诱导的大鼠脉络膜新生血管（CNV）中的表达,探讨STAT3在CNV中可能的作用。方法　建立激光诱导的大鼠CNV模型,免疫荧光法观察CNV生成早期磷酸化STAT3的表达。建立细胞缺氧模型,细胞培养液中加入Janus激酶2（JAK2）特异性阻断剂AG490后培养1、3、6、12、24 h。流式细胞仪检测视网膜色素上皮（RPE）细胞的增生指数,反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）和VEGF的mRNA表达,蛋白质免疫印迹法检测HIF-1α蛋白表达,酶联免疫吸附试验检测细胞培养液上清液中血管内皮生长因子（VEGF）的含量。结果　激光光凝后3 d,磷酸化STAT3高表达于大鼠CNV区域。阻断JAK2/STAT3信号转导通路后,缺氧条件下人RPE细胞随时间增生指数明显降低（t=1.472,3.566,2.391,6.420;P=0.054,0.038,0.042,0.016）。随缺氧时间增加,HIF-1α和VEGF mRNA表达逐渐增强。采用AG490阻断JAK2/STAT3信号转导通路后,缺氧条件下人RPE细胞HIF-1α mRNA和VEGF mRNA的表达、HIF-1α蛋白的活化均受明显抑制(t=0.07,0.02,0.01, P＜0.05);细胞培养上清液中VEGF含量显著降低（t=1.330,1.106,2.828,7.742,5.610,6.894,P=0.082,0.063,0.014,0.002,0.016,0.011）。结论　STAT3可能参与了CNV的发生,这一过程部分是通过JAK2/STAT3信号转导通路调控RPE细胞HIF-1α和VEGF表达而实现的。      

缺氧对小鼠角膜血管内皮生长因子及可溶性fms-样酪氨酸激酶受体-1表达的影响

目的观察缺氧对小鼠角膜组织中血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）及可溶性fins一样酪氨酸激酶受体-1（soluble fms-like tyrosine kinase receptor-1, sFlt-1 ）表达的影响并探讨两者之间的关系。方法实验用健康雌性成年昆明小鼠70只，分为缺氧组和正常对照组，缺氧仓的氧气体积分数为8％～10％，缺氧时间分别为1、3、5、7、10、14d。用变性Western blot技术检测小鼠在缺氧条件下角膜组织中总VEGF表达的变化，用非变性Western blot技术检测小鼠在缺氧条件下角膜组织中游离及结合VEGF表达的变化，用逆转录聚合酶链反应技术检测小鼠在缺氧条件下角膜组织中VEGF、sFlt-1、缺氧诱导因子-1（hypoxia in-ducible巧玲珑factor-1，HIF-1）的基因表达变化。结果缺氧14d内未见小鼠角膜新生血管。缺氧组总VEGF及结合VEGF表达增加，随着缺氧时间的延长而增强，与正常对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05），但缺氧14d内均未见游离VEGF表达。缺氧组VEGF、sFh-1、HIF-1的基因表达均增加，随着缺氧时间的延长而增强，与正常对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05），其中VEGF的基因表达与HIF．1的基因表达呈正相关（r=0．993），sFlt-1的基因表达与HIF-1的基因表达呈正相关（r=0．997）。结论缺氧可以诱导小鼠角膜组织中VEGF和sFlt-1表达的增加，在缺氧的条件下，小鼠角膜组织中VEGF和sFlt-1呈平衡状态。sFlt-1可作为一种内源性VEGF拮抗因子治疗眼部新生血管性疾病。（中国眼耳鼻喉科杂志，2008，8：286-288）     

HIF-1与VEGF在翼状胬肉中的表达及意义

目的研究缺氧诱导因子-1（HIF-1）与血管内皮生长因子（VEGF）在翼状胬肉组织中的表达及其相关性。方法采用免疫组织化学法研究HIF-1与VEGF分别在32例翼状胬肉与11例人正常球结膜组织中的表达。结果32例翼状胬肉中HIF-1的阳性表达率为62.5%（20/32）,VEGF的阳性表达率为84.8%（27/32）,11例正常结膜组织中HIF-1的阳性表达率为9.1%（1/11）,VEGF的阳性表达率为18.2%（2/11）,正常球结膜与翼状胬肉组织中HIF-1与VEGF的表达差异有统计学意义,且翼状胬肉中HIF-1与VEGF的表达呈正相关（P〈0.05）。结论HIF-1及VEGF在翼状胬肉中高表达,提示其可能参与了翼状胬肉的发生和发展。HIF-1与VEGF在翼状胬肉中的表达呈正相关,提示在翼状胬肉中HIF-1可能参与了对VEGF的调控。     

shRNA抑制人RPE细胞中HIF-1α表达下调后IGF-1对VEGF表达的影响

背景 增生性玻璃体视网膜疾病(PVD)是一组眼底视网膜血管性疾病,主要由视网膜色素上皮( RPE)细胞增生所致,胰岛素样生长因子-1(IGF-1)和血管内皮生长因子(VEGF)与RPE细胞的异常增生和病理性新生血管生成有关,但其信号机制及功能尚不完全明了. 目的 探讨利用小发卡环核糖核酸( shRNA)使人RPE细胞缺氧诱导因子1α(HIF-1α)基因沉默后,IGF-1对VEGF表达的影响. 方法 收集健康男性供体眼球4只,分离、收集、培养RPE细胞,用SABC法行抗人角蛋白免疫细胞化学染色进行鉴定.用体外转录法合成针对HIF-1α mRNA序列靶点的shRNA,对3～5代RPE细胞的HIF-1α进行干扰后再经50 μg/L IGF-1处理24 h,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测人RPE细胞中HIF-1α及VEGF mRNA的表达,采用Western blot法检测人RPE细胞中HIF-1α及VEGF蛋白的水平.结果 分离培养的细胞呈扁平不规则多角形,97％的细胞对人角蛋白呈阳性反应.50 μg/L IGF-1作用后,人RPE细胞HIF-1α mRNA表达量(1.49±0.18)与0 μg/L IGF-1组(1.46±0.17)比较差异无统计学意义(t=0.335,P=0.743),而HIF-1α蛋白表达量(1049.86±172.54 vs 0.00±0.00)、VEGF mRNA(0.95±0.15 vs 0.35±0.07)及VEGF蛋白(391.98±56.77 vs 214.36±37.15)表达量均明显增高,差异均有统计学意义(t=16.098、9.935、6.928,P＜0.05).shRNA干扰HIF-1α mRNA表达后,RNAi转染组HIF-1α、VEGF mRNA及其蛋白水平较RNAi空白对照组及RNAi-C转染组明显下降,3个组间各指标的总体比较差异均有统计学意义(F=68.679、89.904、21.770、6.205,P＜0.05). 结论 IGF-1可通过促进人RPE细胞中HIF-1α蛋白的累积诱导VEGF的表达,是导致PVD重要的细胞因子之一.     

HIF-1α特异性双链RNA抑制鼠视网膜新生血管的剂量-效应关系

背景 脂质体介导缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)特异性双链RNA(dsRNA)能够有效抑制鼠视网膜新生血管,抑制效率与其剂量比相关. 目的 探讨HIF-1αdsRNA抑制鼠视网膜新生血管的剂量-效应关系.方法 采用Smith的方法,将出生后7d的C57BL/6J小鼠置于氧舱内,控制氧体积分数为(75±3)％,5d后正常氧环境喂养7d后处死;采用异硫氰酸荧光素-葡聚糖(FITC-Dextran)荧光造影视网膜铺片观察视网膜新生血管的形态,鉴定视网膜新生血管模型.将出生后7d的8只小鼠于空气中喂养,为正常组.另51只8日龄小鼠放入(75±3)％的高氧环境中,5d后出舱并随机分为对照组(3只)、空载体组(3只)和基因治疗组,基因治疗组按照剂量比例(脂质体:质粒)亚分为9个组,每组5只.出舱当天空载体组小鼠玻璃体腔内注射空载体pSilencer2.1-U6 hygro,基因治疗组按照不同剂量比例注射HIF-1α dsRNA表达质粒pSilencer2.1-U6hygro,均采用脂质体介导.对照组小鼠不作任何处理.注射后7d采用FITC-Dextran荧光造影视网膜铺片观察视网膜新生血管的形态变化,采用病理切片统计突破内界膜的血管内皮细胞细胞核数,采用免疫组织化学法检测视网膜中血管内皮生长因子(VEGF)的表达差异. 结果 视网膜铺片荧光造影发现,正常组视网膜血管分布呈规则均匀的网状结构.对照组和空载体组视网膜血管不规则扩张,中周边部有大量血管新生.基因治疗组中央区视网膜血管迂曲及不规则扩张较对照组和空载体组明显减轻,其中脂质体∶质粒为1∶1组更为明显.病理切片显示,正常组很少见到突破视网膜内界膜的内皮细胞细胞核,而对照组和空载体组中均大量出现,其发生率为100％.各基因治疗组均较对照组的(11.57±5.85)个和空载体组的(11.53±6.15)个明显减少,其中脂质体∶质粒为1∶1组突破视网膜内界膜的内皮细胞细胞核数最少,为(2.17±4.23)个,各治疗组间的差异均有统计学意义(P＜0.05).免疫组织化学染色显示,正常组视网膜中VEGF呈弱阳性表达;对照组和空载体组视网膜中VEGF呈阳性表达.各基因治疗组与对照组和空载体组相比较,VEGF的表达明显减少.结论 采用脂质体介导,玻璃体腔显微注射HIF-1α特异性dsRNA表达质粒pSilencer2.1-U6 hygro能有效抑制小鼠缺血性视网膜病变模型新生血管的形成,其中脂质体∶质粒为1∶1时抑制效率最高.     

过表达低氧诱导因子-1α（HIF-1α）对体外培养人视网膜血管内皮细胞增殖、炎症反应及血管生成的影响

目的　检测过表达低氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor 1 alpha,HIF-1α）对体外培养人视网膜血管内皮细胞（human retinal capillary endothelial cell,HREC）增殖、炎症反应及血管生成的影响。方法　将体外培养HREC转染人工合成的pEGFP-HIF-1α重组载体,并采用荧光定量PCR检测转染前后HREC中HIF-1α的表达变化。采用四甲基偶氮唑蓝比色法（MTT）、酶联免疫吸附实验（ELISA）和Western blot分别检测过表达HIF-1α对HREC增殖、炎症反应及血管生成的影响。结果　体外转染pEGFP-HIF-1α可显著增加HREC中HIF-1α mRNA 和蛋白表达。过表达HIF-1α可显著促进HREC增殖,HREC转染pEGFP-HIF-1α后24 h、48 h及72 h A值分别为:0.34±0.04、0.57±0.04、0.83±0.05,而HREC转染pEGFP-C1后24 h、48 h及72 h A值分别为:0.26±0.03、0.44±0.04、0.61±0.04,两者相比差异均有统计学意义（均为P＜0.05）。过表达HIF-1α可显著增加HREC中肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor,TNF）-α、白细胞介素（interleukin,IL）-1β及IL-6的蛋白表达水平,TNF-α、IL-1β及IL-6蛋白表达分别为（2.63±0.57）ng·L^-1、（1.94±0.41）ng·L^-1、（5.32±0.83）ng·L^-1,而转染pEGFP-C1后HREC中TNF-α、IL-1β及IL-6蛋白表达分别为（1.20±0.34）ng·L^-1、（0.66±0.27）ng·L^-1、（1.89±0.60）ng·L^-1,两者相比差异均有统计学意义（均为P＜0.05）。过表达HIF-1α可显著增加HREC中血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）蛋白表达,转染pEGFP-HIF-1α后细胞VEGF蛋白的表达为6.72±0.96,而转染pEGFP-C1后细胞VEGF蛋白的表达为2.31±0.47,两者相比差异有统计学意义（P＜0.05）。结论　过表达HIF-1α可促进体外培养HREC增殖、炎症反应及血管的生成。     

缺氧诱导因子1α与喉鳞癌细胞增殖和凋亡的关系

目的 分析缺氧诱导因子1α（hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α）在喉鳞癌中的表达及与肿瘤细胞增殖、凋亡的关系,探讨其临床病理学意义.方法 应用免疫组织化学染色技术检测HIF-1α和Ki-67在86例喉鳞癌及32例正常喉黏膜上皮组织中的表达;脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记（terminal deoxynucleotidyltransferase-mediated dUTP-biotin nick end labeling,TUNEL）检测喉鳞癌细胞的凋亡情况.结果 HIF-1α在喉鳞癌组织中阳性表达率高于正常喉黏膜上皮组织（P＜0.05）,HIF-1α阳性表达率与肿瘤临床分期、淋巴结转移有关（P＜0.05）;HIF-1α阳性组中细胞凋亡指数低于阴性组（P＜0.05）;细胞增殖指数在喉鳞癌HIF-1α阳性组及阴性组中差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 HIF-1α可作为评估正常喉黏膜上皮组织癌变的辅助指标及判断喉鳞癌病情进展的生物学标志;HIF-1α表达水平与喉鳞癌细胞的凋亡抑制有关,与肿瘤细胞的增殖无关.（中国眼耳鼻喉科杂志,2010,10：288-290）     

缺氧诱导因子-1α、诱导型一氧化氮合成酶及环氧合酶-2在慢性高眼压大鼠视网膜中的表达

目的探讨缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）、诱导型一氧化氮合成酶（iNOS）、环氧合酶-2（COX-2）的表达与高眼压视网膜损伤的关系,为青光眼视网膜缺氧提供证据。方法用巩膜静脉烧烙法在50只SPF级Wistar大鼠的双眼制作慢性高眼压模型,眼压高于造模前40%以上者为造模成功。按照视网膜取材时间的不同将动物模型眼随机分为高眼压3、7、14、21、28 d组,每组10只大鼠20只眼。另选取10只匹配大鼠作为假手术对照组,仅作球结膜切开。应用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法及Western blot法检测各组视网膜组织中HIF-1α、iNOS、COX-2 mRNA及其蛋白在大鼠视网膜中的表达。结果 HIF-1α、iNOS、COX-2 mRNA及蛋白在假手术组大鼠视网膜中呈微弱表达,造模眼HIF-1α、iNOS、COX-2 mRNA及其蛋白在视网膜中的表达水平明显升高,于7 d时达到高峰,随后有所下降,但仍明显高于正常组的表达水平。造模后3、7、14、21、28 d组大鼠视网膜中HIF-1α、iNOS、COX-2 mRNA及其蛋白的表达与假手术组相比,差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论 HIF-1α、iNOS、COX-2的低氧信号途径是青光眼神经变性发生发展中重要的病理生理机制。     

血管生成相关因子在脉络膜黑色素瘤中的表达

背景 血管生成与肿瘤的发生之间有着密切的关系,目前对脉络膜黑色素瘤的发生发展过程与缺氧及血管生成相关因子相互关系的研究尚属少见.目的 研究血管生成相关因子缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、环氧合酶2(COX-2)及血管内皮生长因子(VEGF)在脉络膜黑色素瘤中的表达及其相互之间的关系.方法 收集青岛大学医学院附属医院眼科病理室保存的脉络膜黑色素瘤标本44例和眼睑色素痣石蜡标本16例,应用兔抗人HIF-1α、iNOS、COX-2及VEGF多克隆抗体,采用免疫组织化学SP法测定HIF-1α、iNOS、COX-2及VEGF在脉络膜黑色素瘤组织及眼睑色素痣中的表达并进行比较,评价4种蛋白与脉络膜黑色素瘤临床病例特征的关系,并对4种蛋白在脉络膜黑色素瘤中表达的相互关系进行研究.结果 脉络膜黑色素瘤组织中VEGF、HIF-1α、iNOS、COX-2的阳性表达率均明显高于眼睑色素痣组织,差异均有统计学意义(x2 =6.580、4.105、8.350、13.240,P＜0.05);VEGF蛋白在较大体积肿瘤中的表达明显高于体积较小的肿瘤,差异有统计学意义(x2=9.389,P＜0.05),但VEGF蛋白在不同病理分型及不同浸润深度肿瘤中的表达差异均无统计学意义(x2=1.186、5.398,P＞0.05);HIF-1α在脉络膜黑色素组织中的表达与肿瘤体积大小、病理分型有关,差异均有统计学意义(x=8.664、6.622,P＜0.05),但其与肿瘤的浸润深度无关,差异无统计学意义(x2=4.914,P＞0.05);iNOS蛋白的表达与肿瘤体积大小有关(x2=8.609,P＜0.05),但与病理类型及浸润深度无关,差异均无统计学意义(x2=4.789、4.309,P＞0.05);COX-2蛋白的表达在不同体积的肿瘤中明显不同,差异有统计学意义(x2=7.320,P＜0.05),而COX-2蛋白在不同病理分型及浸润深度的肿瘤组织中的表达量差异均无统计学意义(x2=2.772、2.103,P＞0.05).HIF-1α、iNOS、COX-2的表达量与VEGF表达均呈显著正相关(r=0.943、1.000、0.986,P＜0.05);COX-2与iNOS表达量之间、HIF-1α与iNOS表达量间及HIF-1α与COX-2的表达量间均呈明显正相关(r=0.986、0.943、0.986,P＜0.05).结论 HIF-1α、iNOS、COX-2在脉络膜黑色素瘤中表达升高,其表达水平与VEGF相关,提示3种基因对脉络膜黑色素瘤的血管生成均有一定作用,可通过该作用促进肿瘤组织的生长.