EGCG对胰腺癌细胞PANC-1生长的抑制作用及机制

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对人胰腺癌细胞株PANC-1生长的影响及可能作用机制。方法采用不同浓度的EGCG处理PANC-1细胞,以四唑氮蓝还原法(MTT)观察处理后细胞的生长情况;流式细胞术(FCM)检测细胞周期变化情况;逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测细胞周期调节蛋白p27 mRNA表达水平的变化;Western-Blot检测p27蛋白水平的表达。结果 EGCG处理后PANC-1细胞生长明显抑制,并且呈现时间、剂量依赖性;G0/G1期的细胞比例明显增高,S期的细胞比例则明显降低;细胞周期调节蛋白p27的mRNA水平和蛋白表达水平随着EGCG浓度的增加而升高。结论 EGCG可以明显抑制胰腺癌PANC-1细胞的生长;其可能机制为上调细胞周期调节蛋白p27的表达水平,导致细胞周期阻滞在G0/G1期,抑制细胞周期从G1期向S期的转化,最终影响细胞增殖。     

EGCG对胰腺癌细胞PANC-1生长的抑制作用及机制

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCS）对人胰腺癌细胞株PANC-1生长的影响及可能作用机制。方法采用不同浓度的EGCG处理PANC-1细胞,以四唑氮蓝还原法（MTT）观察处理后细胞的生长情况;流式细胞术（FCM）检测细胞周期变化情况;逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测细胞周期调节蛋白p27mRNA表达水平的变化;Western-Blot检测p27蛋白水平的表达。结果EGCG处理后PANC-1细胞生长明显抑制,并且呈现时间、剂量依赖性;G0／G1期的细胞比例明显增高,S期的细胞比例则明显降低;细胞周期调节蛋白p27的mRNA水平和蛋白表达水平随着EGCG浓度的增加而升高。结论EGCG可以明显抑制胰腺癌PANC-1细胞的生长;其可能机制为上调细胞周期词节蛋白p27的表达水平,导致细胞周期阻滞在G0／01期,抑制细胞周期从G1期向S期的转化,最终影响细胞增殖。     

雷帕霉素对骨髓瘤细胞RPMI8226增殖、凋亡及趋化因子受体CXCR4表达的影响

本研究探讨雷帕霉素对骨髓瘤细胞系RPMI8226体外增殖、凋亡、细胞周期及对趋化因子受体CXCR4表达的影响。不同浓度雷帕霉素作用于RPMI8226细胞不同时间,应用MTT检测细胞的增殖,流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期,半定量PCR检测雷帕霉素干预RPMI8226后细胞周期蛋白D1（cyclinD1）、CXCR4mRNA表达,荧光定量PCR检测哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）mRNA表达的影响。结果表明：雷帕霉素对RPMI8226细胞有增殖抑制作用,细胞周期显示细胞阻滞于G0／G1期,G2／M期比例降低,cyclinD1、CXCR4和mTORmRNA表达下调。结论：雷帕霉素呈时间一剂量依赖性抑制RPMl8226细胞增殖,诱导细胞凋亡,并通过下调mTOR及cyclinD1表达,使细胞周期阻滞于G0／G1期,同时通过下调细胞CXCR4的表达,减少骨髓瘤细胞与基质细胞间的黏附及趋化作用达到抗肿瘤的效果。     

肺癌肿瘤抑制物1转染HepG2肝癌细胞及作用

目的将已构建完成的携带增强绿色荧光蛋白基因的TSLC1真核表达载体转染到HepG2细胞中,同时观察其对HepG2肝癌细胞的作用。方法脂质体Lipofectamine2000介导重组载体转染到HepG2肝癌细胞中,经G418筛选建立稳定转染细胞株,分别采用RT-PCR、免疫组化法和westernblot法检测其表达;MaT检测细胞增殖活力,流式细胞仪分析细胞周期。结果与对照组比较,RT．PCR方法可见转染组细胞TSLC1mRNA表达明显增多,免疫组化和westernblot方法可见转染组细胞TSLC1蛋白表达明显增高;MTT检测发现转染组细胞生长缓慢,细胞周期检测发现转染组G0／G1期细胞显著增多,而S期及G2／M细胞明显降低。结论本研究成功建立了稳定转染TSLC1的HepG2细胞株,并证实喃LC1能够抑制细胞生长、阻滞细胞周期。     

真核起始因子5A与细胞周期G1-S调控的研究

真核启始因子5A(eIF-5A)翻译后第49位的赖氨酸被修饰为一个特殊氨基酸hypusine，后是其发挥功能所必需的。本研究用eIF-5A翻译后hypusine修饰的特异性阻断剂1，7-二氨基庚烷(1，7-diaminoheptane，DAH)处理白血病细胞系(TF-1，THP-1和Mo7e)和人乳腺癌细胞系(MCF-7)，用FCM和台盼蓝拒染法检测其对细胞增殖和活性的影响；应用两步胸腺嘧啶核苷阻断法使细胞周期同步化，并用免疫印迹法检测eIF-5A在细胞周期时相的表达情况。结果表明：用1，7-二氨基庚烷处理后，细胞生长明显受到抑制，并有一定的促凋亡效应；且细胞周期被特异性阻滞于G1／S期；eIF-5A在细胞周期的S期和G2／M期的表达量较低，在G1期表达量明显增加。结论：eIF-5A的hypusine修饰参与了细胞周期调控，且与G1／S转换相关蛋白质的表达调控相关。     

Cyclin D1与恶性肿瘤关系的研究进展

细胞周期与细胞癌变是近年来生命科学研究的热门课题之一。现代学者在观察肿瘤的不协调生长和增生时,发现了与细胞周期调控有关的蛋白,并认为肿瘤与细胞周期调控失常有着密切联系。细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)作为细胞周期调节因子之一,其过度表达是多种人类原发性肿瘤的特征,对肿瘤的诊断和预后判断具有重要意义,因而倍受关注。1 Cyclin D1的生物学特性1)Cyclin D1:Cyclin D1含295个氨基酸,由染色体11q13上的CCND1基因编码,分子量为36 000。细胞周期分DNA合成前期(G1期)、DNA合成期(S期)、DNA合成后期(G2期)与有丝分裂期(M期)4个…     

CDK2AP1与肿瘤

正常细胞周期按顺序依次进展为Gl期（DNA合成准备期）、S期（DNA合成期）、G2期（有丝分裂准备期）和M期（有丝分裂期）,最终实现细胞的增殖。细胞周期是一种非常复杂和精细的调节过程,有大量调节蛋白参与其中,尤其是G1／S期与G2／M期两个关键点的转换,     

pEgr-hp53体外稳定转染联合辐射对人肺腺癌A549细胞周期进程及增殖的影响

目的探讨pEgr-hp53重组质粒体外稳定转染联合辐射对人肺腺癌A549细胞周期进程及增殖的影响,阐明其抑制肿瘤细胞增殖的机制。方法脂质体包裹重组质粒pEgr-hp53体外转染A549细胞,G418筛选稳定表达细胞株并扩增培养,采用细胞计数法检测肿瘤细胞增殖速度,流式细胞术检测肿瘤细胞周期的变化。结果经pEgr-hp53体外转染A549细胞10到20d,G418筛选得到稳定表达的细胞株,联合X射线照射可明显抑制A549细胞的体外增殖,细胞周期进程明显改变,G1期和G2期发生阻滞。结论提示pEgr-hp53体外稳定转染联合辐射可使人肺腺癌A549细胞周期阻滞于G1期和G2期,并可抑制肿瘤细胞增殖,本研究为提高肿瘤放射治疗效果提供新的治疗方案奠定了理论基础和实验依据。     

EBV立刻早期蛋白Zta基因对Daudi细胞周期的影响及其机制研究

目的 探讨EBV立刻早期蛋白Zta基因对Daudi细胞周期的影响及其可能机制.方法 构建Zta基因真核表达载体,通过电穿孔将该载体转染Daudi细胞,用流式细胞术检测细胞周期的变化,用蛋白印迹试验检测细胞周期蛋白p21、Rb、E2F-1的表达.结果 成功构建了 Zta基因表达载体,转染Zta基因可抑制Daudi细胞的增殖,并促进Daudi细胞由G0/G11期[(30.0±3.4)％)]向S期[(47.7±1.1)％]的转化.同时转染Zta基因可下调Rb的表达、上调E2F-1、p21的表达.结论 转染Zta基因使Daudi细胞周期由Go/G1期向S期转变,其机制可能与Rb的表达下降、E2F-1和p21表达上调有关.     

正常人外周血淋巴细胞凋亡受体的表达与细胞凋亡的关系

本研究检测凋亡受体Fas、TNFRⅠ、TNFRⅡ在人外周血淋巴细胞（PBL）增殖过程中的表达情况及其细胞周期特异性,并探讨其与凋亡受体途径介导的细胞周期特异性细胞凋亡的关联性。应用双参数流式细胞术检测人外周血淋巴细胞在G0期和经植物凝集素刺激（PHA）进入细胞周期后Fas、TNFRⅠ、TNFRⅡ的表达情况以及细胞周期特异性,同时检测肿瘤坏死因子-α、抗Fas抗体诱导人外周血淋巴细胞的凋亡。结果表明：经植物凝集素刺激24小时后的外周血淋巴细胞Fas、TNFRⅠ、TNFRⅡ表达率较G0期外周血淋巴细胞分别增加了（35.55±6.63）%,（30.63±2.66）%,（26.62±5.14）%,均具有显著性差异（P〈0.01）,而且主要表达在G1期;未经植物凝集素刺激的外周血淋巴细胞停留在G0期,TNF-α和anti-Fas诱导后没有发生凋亡,而刺激后进入细胞周期的淋巴细胞经TNF-α和anti-Fas诱导后发生凋亡,其凋亡主要在G1期。结论：凋亡受体在外周血淋巴细胞中的表达与凋亡受体途径介导的细胞凋亡有明显的量效关系,凋亡受体途径介导细胞凋亡的细胞周期特异性与凋亡受体表达的细胞周期特异性有关,细胞凋亡的发生与细胞是否进入细胞周期有关。     

pEgr-hPTEN体外稳定转染对人脑胶质瘤SHG-44 细胞周期及增殖的影响

目的　探讨外源野生型PTEN基因对人脑胶质瘤SHG 4 4细胞周期及增殖的影响 ,阐明PTEN基因抑制肿瘤细胞增殖的机制。方法　脂质体包裹重组质粒pEgr hPTEN体外转染内源性PTEN基因突变的SHG 4 4胶质瘤细胞 ;G4 18筛选稳定表达细胞株并扩增培养 ;采用细胞计数法检测肿瘤细胞增殖速度 ;流式细胞术检测肿瘤细胞周期的变化。结果　经 10到 2 0dG4 18筛选得到稳定表达细胞株 ;重组质粒pEgr hPTEN稳定转染可明显抑制SHG 4 4细胞的体外增殖 ,细胞周期明显改变 ,细胞从G1期到S期发生阻滞。结论　提示转染外源野生型PTEN基因可使SHG 4 4细胞周期阻滞于G1期 ,并可抑制肿瘤细胞增殖。     

Skp2和p27kip1在浆液性卵巢肿瘤组织中的表达与临床意义

p27基因是近年来发现的一种抑癌基因,目前认为其编码的产物p27kip1蛋白为一种细胞周期蛋白依赖激酶抑制剂,可以通过多种方式参与细胞周期调控,阻止细胞从G1期到S期的转变,最终抑制细胞分裂、增殖,促进细胞分化、凋亡.Skp2作为泛素蛋白酶体途径的底物识别序列,因能泛素化降解p27kip1而与肿瘤关系密切.二者的异常表达与肿瘤组织发生发展以及生物学行为有着密切的关系,是判断肿瘤恶性程度、转移与预后的重要参考指标.     

超声联合微泡抑制血管平滑肌细胞增殖机制的研究

目的观察超声联合微泡对血管平滑肌细胞(VSMCs)周期分布及细胞周期调节蛋白激酶(CDK2)和抑制物p27表达的影响,探讨超声联合微泡抑制VSMCs增殖的作用机制。方法体外培养的VSMCs经血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)刺激后,以低频连续波超声(频率1MHz、声强为0.3W/cm2)联合脂质微泡(1μl/ml)辐照VSMCs60s。分别用流式细胞仪、免疫细胞化学法检测细胞周期分布和细胞周期调控蛋白CDK2、p27的表达。结果与对照组比较,PDGF-BB刺激组细胞G0～G1期细胞比例下降而S期细胞比例增高(P<0.01),CDK2表达上调而p27表达降低(P<0.01);与PDGF-BB组相比,超声联合微泡组G0～G1期细胞比例增高,S期细胞比例降低(P<0.01),CDK2表达下调而p27表达增高(P<0.01)。结论超声联合微泡下调CDK2蛋白和上调p27蛋白的表达,阻滞细胞周期进程,可能是抑制VSMCs增殖的机制之一。     

细胞周期蛋白A对培养大鼠血管平滑肌细胞起始识别复合物1表达水平的影响

目的 探讨细胞周期蛋白A （Cyclin A）对培养大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）周期起始识别复合物1（ORC1）表达水平的影响.方法 采用组织块贴片法原代培养的大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞,利用双胸苷使VSMCs达到细胞周期同步化,应用逆转录聚合酶链反应技术和流式细胞仪检测不同细胞周期VSMCs的ORC1和Cyclin A mRNA和蛋白表达.结果 经鉴定培养的细胞为VSMCs,采用血清饥饿法、双胸苷阻断法和秋水仙素阻抑法分别获得了处于不同细胞周期的同步化的VSMCs：G0/G1期（89.22 ±3.54）％,G1/S交界期（66.74±7.16）％,S期（63.24±4.06）％,G2/M期（51.64±11.18）％,各期比较差异有统计学意义（P均＜0.01）.Cyclin A在静止状态对VSMCs的ORC1 mRNA和蛋白无影响,在G2/M期达到高峰[（52.133 3 ±2.122 1）％],与G1/S期[（10.9167±0.531 1）％]、S期[（7.656 7±0.412 4）％]比较,差异有统计学意义（P均＜0.01）.ORC1在G2/M期达到最低值[（1.276 7 ±0.161 7）％],与G1/S期[（13.371 0±1.057 3）％]、S期[（3.043 3 ±0.538 0）％]比较,差异有统计学意义（P均＜0.01）,可能原因是Cyclin A阻止ORC1结合在VSMCs染色质上.结论 CyclinA可能调控ORC1在VSMCs细胞周期的启动.     

ERK和P38信号转导途径对慢性髓系白血病细胞周期的调控作用

本研究探讨ERK和P38信号转导途径对慢性髓系白血病（CML）细胞周期的调控作用。以RT-PCR、Western blot和FCM方法分别检测CML患者白血病细胞和K562细胞中ERK、p38、cyclin D2、cyclin E、p27的mRNA表达及蛋白表达（其中ERK和P38为磷酸化ERK和磷酸化P38）及细胞周期分布,并分析其相关关系。结果表明：CML患者白血病细胞和K562细胞中ERK、P38、cyclin D2、cyclin E的mRNA表达和蛋白表达增高,P27的表达降低,且cyclin D2蛋白表达与cyclin E、ERK和P38蛋白表达呈正相关（P〈0.01）,与P27蛋白表达呈负相关（P〈0.01）。G0/G1期细胞减少,S期细胞增多,与对照组相比有显著性差异。结论：CML中P38、ERK mRNA表达和活性增加,激活下游的cyclin D2、cyclin E和P27等细胞周期调控因子,致使G0/G1期缩短,细胞快速通过G1/S转换点进入S期,加速细胞周期进程和细胞增殖,导致CML的发生。     

缺氧对人胃癌细胞的细胞周期调控及己糖激酶Ⅱ表达的影响研究

目的 探讨缺氧对人胃癌细胞株SGC-7901的细胞周期调控机制及对乏氧诱导因子-1α(HIF-1α)、己糖激酶Ⅱ(HK Ⅱ)表达的影响.方法 人胃癌细胞株SGC-7901分成3组:缺氧12 h组、缺氧24 h组及对照组.缺氧组分别在缺氧条件下(37℃、5%CO2、2.0%O2饱和度)培养12 h和24 h,对照组置于正常氧浓度条件下(37℃、5%CO2、21%O2饱和度)培养24 h.流式细胞仪检测细胞周期分布,免疫组织化学S2P法检测HIF-1α表达,荧光定量PCR法检测HK Ⅱ mRNA表达量.结果 缺氧情况下细胞周期分析处于G0/G1期细胞百分比明显增多,处于G2/M期的细胞减少,并且可见到较明显的凋亡峰的形成,缺氧12 h组、缺氧24 h组的G0/G1期比例显著高于对照组(P＜0.05);HIF-1α和HK Ⅱ在两组缺氧组与对照组比较,其表达量明显增加(P＜0.05),缺氧24 h组与缺氧12 h组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 缺氧导致细胞阻滞在G0/G1期,HIF-1α可刺激人胃癌细胞HK Ⅱ表达的增加,以HIF-1α为药物靶点可望成为治疗胃癌的重要新方法.     

CRIF1介导白血病骨髓基质细胞诱导Jurkat细胞周期阻滞的探讨

目的研究白血病骨髓基质细胞对白血病细胞周期分布的影响及其可能机制。方法分离培养原代正常和白血病骨髓基质细胞体外模拟骨髓微环境功能,与Jurkat细胞共培养后,检测Jurkat细胞周期分布情况;抑制性消减杂交技术筛选和分析与白血病骨髓基质细胞共培养24 h后Jurkat细胞差异表达基因;RT-PCR技术验证目的基因的表达水平。结果成功分离培养正常和白血病骨髓基质细胞,体外与Jurkat细胞共培养24 h后,Jurkat细胞周期阻滞("G0/G1"期)细胞数明显升高(P<0.05);抑制性消减杂交试验发现,与白血病骨髓基质细胞共培养24 h后Jurkat细胞上调表达30个基因克隆、下调表达22个基因克隆;RT-PCR验证发现,与白血病骨髓基质细胞共培养24 h后,Jurkat细胞高表达CRIF1基因。结论白血病骨髓基质细胞诱导Jurkat细胞周期阻滞("G0/G1"期),可能部分通过高表达CRIF1实现。     

p27^kip1、Skp2与肿瘤

细胞周期的运行受多种因素所调控。有两个主要调控点 :一个处于G1/S转折点 ,是控制细胞进入S期的控制点(G1期检测点 ) ,另一个处于G2 /M转折点 ,是控制细胞进入M期的控制点 (G2 期检测点 )。参与细胞周期调控的主要因子有 :周期蛋白 (cyclin) ,周期蛋白依赖性激酶 (cyclindepen dentkinase,CDK ) ,周期蛋白依赖性激酶抑制剂 (CKI)。CDK与cyclin CDK复合物正性催化细胞周期过程 ,而CKI通过与cyclin ,CDK或cyclin CDK复合物结合抑制并阻断细胞周期进程。p2 7kip1就是一种新发现的CKI ,p2 7kip1活性的改变影响细胞周期进程 ,进而…     

细胞周期素G的研究现状

细胞周期素G(cyclin G)在细胞周期素家族中发现较晚,其功能可能主要在细胞周期调控和DNA修复中起作用,并参与细胞凋亡过程,在不同的组织细胞中或不同来源的肿瘤细胞中,其表达水平和生物学功能是不同的。目前发现cyclin G主要存在两个亚型:cyclin G1和cyclin G2,随着对它们研究的不断深入,注意到两种cyclin G所对应的蛋白质结构、功能,对细胞周期进程的影响乃至在肿瘤中扮演的角色是不一样的,并且在不同的肿瘤发生、发展中具有不同的作用。Cyclin G1在人类多种肿瘤细胞中有基因的扩增和过表达,可能对癌症的发生有促进作用。     

苯乙酸对结直肠癌细胞中C-myc基因表达的影响

目的　观察诱导分化剂苯乙酸 (Phenylacetate,PA)抑制结直肠癌细胞HCT 8增殖过程中C myc基因表达的变化。方法　体外细胞培养 ,运用流式细胞技术观察苯乙酸对HCT 8细胞凋亡的影响。应用原位分子杂交方法观察应用PA后对HCT 8细胞C mycmRNA表达的情况。结果　PA组HCT 8细胞G1期比例从 32 3%增加到 6 1 0 % ,S期比例从 5 9 6 %下降到 2 9 7%。PA治疗后HCT 8细胞C mycmRNA表达阳性表达率为 (12 0 5± 7 92 ) % ,显著低于非治疗组中的阳性率 (5 5 15± 2 1 6 4 ) % ,P <0 0 1。通过细胞周期的检测发现 ,PA抑制大肠癌细胞HCT 8增殖的方式为抑制细胞周期G1期比例。结论　PA通过下调结直肠癌细胞C mycmRNA的生成以及细胞生长G1期阻滞在肿瘤诱导分化治疗方面发挥作用