人端粒酶逆转录酶在膀胱肿瘤中的表达及其与预后的关系

目的检测人端粒酶逆转录酶(hTERT)在膀胱肿瘤中的定量表达,探讨hTERT与膀胱肿瘤预后复发的关系。方法采用免疫组织化学法和高清晰彩色医学图文分析系统,对45例膀胱移行细胞癌(BTCC)组织标本中的hTERT的表达情况进行定量检测,并用13例正常膀胱组织标本作为对照。结果BTCC组织标本中均可见有hTERT的表达,正常膀胱组织中无表达。hTERT的表达强度与患者的性别、年龄、肿瘤的大小、部位以及肿瘤的单多发等情况无关(P>0.05),而与肿瘤复发有关(P<0.05)。结论hTERT在膀胱肿瘤中表达上调,其活性与预后相关,可以作为检测肿瘤复发的指标。     

尖锐湿疣组织中survivin mRNA和人端粒酶逆转录酶mRNA的表达及意义

survivin是近年发现的一种凋亡抑制基因，具有抑制细胞凋亡的作用，人端粒酶逆转录酶（hTERT）是端粒酶（telomerase）活性的限制性组分。尖锐湿疣（CA）增生快，治疗后常易复发，部分病例有恶变可能，这与CA存在细胞凋亡和端粒酶活性异常可能有关。而survivin在CA中表达情况未见报道，为研究CA组织中survivin mRNA和hTERT mRNA表达情况，我们应用逆转录-PCR（RT—PCR）和原位杂交法分别检测CA组织中survivin和hTERT mRNA的表达，并探讨他们在CA发病中的可能机制。     

人端粒酶逆转录酶和人白细胞介素18融合基因真核表达载体的构建和功能研究

目的：以基因重组技术在真核细胞中表达人白细胞介素18（hIL-18）和人端粒酶逆转录酶（hTERT）融合基因，并观察其生物学功能。方法：健康人单核细胞经RT～PCR扩增hIL-18后、T—A克隆。亚克隆至经NheⅠ、HindⅢ酶切的PCDNA3．1（＋）／hTERT中，限制性内切酶验证后，挑选出含有目标基因的正确克隆。经限制性内切酶和DNA测序分析两个基因是否已经正确连接到真核表达载体中。将hTERT／hIL-18融合基因质粒脂质体介导转染3T3细胞中表达，经Western—blot验证目的基因表达产物，同时对转染细胞作免疫荧光染色。以ELISA检测转染细胞刺激KG-1细胞分泌了干扰素的能力，以流式细胞仪检测转染细胞抗MTX诱导凋亡的能力。结果：hTERT／hIL-18融合基因的真核表达载体PCDNA3．1（＋）构建成功，经限制性内切酶验证和DNA测序及同源性对比分析，该基因片段与NCBI基因库hIL-18和hTERT基因CDS序列同源性均达到99．9％；而细胞转染后经Western—blot验证，hTERT／hIL-18融合蛋白的分子量约127kMr，与预期一致，荧光显微镜观察显示融合蛋白在细胞中弥散表达。此融合蛋白能刺激KG-1细胞分泌γ-干扰素，并具有抗MTX诱导凋亡的生物学功能。结论：本实验构建的PCDNA3．1（＋）／hTERT—hIL-18质粒能够在真核细胞中表达，并具有生物学功能，为进一步转染树突状细胞，研制肿瘤的治疗性疫苗提供基础。     

人端粒酶逆转录酶原核表达载体的构建

目的：构建人端粒酶逆转录酶原核表达载体pGEX-4T-1-hTERT,并观察融合蛋白的表达。方法：用RT-PCR方法从人肝癌组织中扩增出带有EcoRⅠ酶切位点的hTERT基因片段,与pGEM-T Easy连接,转化感受态大肠杆菌JM109,经蓝-白筛选、PCR扩增等筛选阳性菌落,用EcoRⅠ酶切获取目的片段,并与EcoRⅠ酶切过的pGEX-4T-1质粒连接,重组子转化BL21感受态大肠杆菌,PCR扩增筛选出阳性菌落。基因测序并用Omega 2．0软件比较分析重组质粒中hTERT基因片段与GenBank中的已知序列的同源性。通过诱导pGEX-4T-1融合蛋白表达,用抗hTERT多抗对融合蛋白进行Western blot鉴定,薄层凝胶光密度扫描测定融合蛋白表达量。结果：PCR扩增等方法证实,人端粒酶逆转录酶原核表达载体pGEX-4T-1-hTERT构建成功,其中hTERT基因片段与GenBank中相应基因同源性为98．73％,氨基酸序列同源性为99．68％。Western blot检出GST-hTERT融合蛋白,其表达量达28．4％。结论：成功构建了pGEX-4T-1-hTERT原核重组质粒并获得高度表达。     

端粒、端粒酶的研究及其在喉癌中的应用

端粒酶作为广谱的肿瘤特异性标记物用于肿瘤的诊断 ,以及其抑制剂用于肿瘤的治疗已成为近年来肿瘤分子生物学领域中最热门的研究课题之一。笔者就端粒、端粒酶的研究及在喉癌中的应用作一综述。1　端粒、端粒酶的结构与功能端粒是真核细胞内由DNA序列和结合蛋白组成的、位于染色体 3′末端以维持染色体结构稳定的特殊结构。人类端粒含有几千拷贝的六聚体重复序列 ,是一个简单重复的富含鸟苷酸 (G)的DNA序列[1] ,重复单位是 (5′ ,-TTAGG 3′)n ,端粒对染色体稳定及其基因组的完整非常重要 ,为染色体末端提供一个保护性“帽子” ,就象鞋…     

端粒酶逆转录酶显性负突变体对乳腺癌细胞端粒酶活性的抑制作用

目的：观察端粒酶逆转录酶显性负突变体（DN-hTERT）对乳腺癌细胞MCF7端粒酶活性的抑制作用.方法：将携带DN-hTERT基因的真核表达载体IRES2-EGFP空载体通过脂质体2000介导转入MCF7细胞,以G418进行稳定筛选,得到阳性克隆;倒置荧光显微镜观察转染细胞的生长情况;逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测转染细胞hTERT mRNA的表达;TRAP-ELISA方法检测转染细胞端粒酶活性.结果：MCF7细胞转染DN-hTERT后生长受到抑制;转染DN-hTERT的MCF7细胞（MCF7/DN）hTERT mRNA表达升高;改进端粒重复序列扩增法（TRAP-ELISA）检测MCF7/DN细胞端粒酶活性与转染空载体MCF7细胞（MCF7/I）比较显著降低（P＜0.05）.结论：DN-hTERT能特异性抑制MCF7细胞生长和端粒酶活性.     

hTERT在肾癌中的表达及临床意义

目的 检测人端粒酶逆转录酶(hTERT)在肾癌中的表达及其临床意义.方法 采用RT-PCR及Western blot方法检测45例肾癌组织、45例配对的癌旁肾组织及786-0细胞系中hTERT mRNA及蛋白的表达情况,观察其表达与肿瘤大小、临床分期、病理组织分型、分级之间的关系.结果 hTERT mRNA及蛋白在肾癌组织中呈高表达(P=0.000),其表达与肾癌的肿瘤大小、临床分期、病理组织分型、分级之间无关(P＞0.05).结论 肾癌组织中hTERT表达较高,可尝试用于肾癌的诊断和预测,并为基因治疗提供了思路.     

胸腔积液脱落细胞端粒酶逆转录酶mRNA检测及其意义

目的:通过检测良、恶性胸腔积液脱落细胞端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的表达情况,探讨其在良、恶性胸腔积液中的诊断价值。方法:采用逆转录-多聚酶链反应法检测39例恶性胸腔积液、16例良性胸腔积液中hTERT基因的表达情况。结果:恶性胸腔积液中hTERT基因的表达率明显高于良性胸腔积液(P<0.05)。检测hTERT基因表达对恶性胸腔积液的敏感性、特异性和诊断符合率分别为87.18%,81.25%和85.45%。结论:hTERT基因参与了恶性胸腔积液的发生、发展过程。采用RT-PCR法检测胸腔积液中hTERT基因表达有助于临床上良、恶性胸腔积液的鉴别诊断。     

hTERT及c-myc蛋白在宫颈癌中的表达

目的探讨宫颈癌及癌前病变中端粒酶逆转录酶（hTERT）和c-myc蛋白的表达及相互关系。方法以44例宫颈癌、18例宫颈上皮内瘤变（CIN）和6例正常宫颈组织为研究对象，采用免疫组化SP方法检测c-myc蛋白、hTERT蛋白，并对各指标阳性表达率和相关性进行比较分析。结果正常宫颈组织、宫颈上皮内瘤变（CIN）、宫颈癌组织中，c-myc蛋白的阳性率分别为0，38．9％，72．7％；hTERT蛋白为0，33．3％，77．3％。二者在CIN、宫颈癌中分别与正常组织相比差异有显著性（P〈0．05）。宫颈癌组织中的表达较CIN高，差别有显著性（P〈0．05）。宫颈癌中，c—myc蛋白和hTERT蛋白的表达在有周围组织浸润、有淋巴结转移和远处转移时显著增高，其阳性表达随期别的增加而增高（P〈0．05）。二者的表达呈正相关。结论hTERT基因的过度表达在宫颈癌的发生发展过程中具有重要作用；c-myc蛋白和hTERT的过表达是宫颈癌发生中的早期事件，其表达水平随着宫颈癌恶性程度的增加而增加; c-myc在转录水平上激活hTERT的表达，可能是宫颈癌发生发展的重要阶段。     

膀胱移行细胞癌中端粒酶逆转录酶的表达及意义

目的　研究端粒酶逆转录酶 (hTRT)在膀胱移行细胞癌BTCC中的表达及其与肿瘤分级、分期、复发之间的关系。方法　采用原位核酸分子杂交法 ,对 5 2例BTCC和 10例正常膀胱中hTRT的表达情况进行检测 ,分析其在膀胱癌和非癌膀胱组织中的表达以及与肿瘤病理学分级、分期和患者复发情况的关系。结果　 5 2例BTCC中hTRT表达均较正常膀胱黏膜增高 ,阳性率为 90 4 % (P <0 0 0 1) ;hTRT的表达随BTCC的病理分级、分期的增高而相应增高 ,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级中表达率分别为 80 0 %、95 8%、10 0 % ,浅表性 (Tis T1 )、浸润性 (T2 T4 )中表达率分别为 87 0 %、93 1% ,初发BTCC、复发BTCC表达率为 87 5 %、95 0 % (P<0 0 5 ) ;结论　人端粒酶逆转录酶 (hTRT)在BTCC中表达上调 ,提示hTRT可能通过激活端粒酶 ,使细胞无限增殖 ,对BTCC的发生发展起重要作用 ;hTRT随BTCC病理分级、分期增高而表达增高 ,并与肿瘤复发有关 ,hTRT有可能作为判断分级、分期 ,监测复发的指标 ;hTRT可能为膀胱癌基因治疗提供新的合理靶点。     

人胎肺发育不同阶段端粒酶逆转录酶的表达及意义

目的 检测端粒酶逆转录酶(hTERT)在人胎肺发育不同阶段的表达特征,探讨其在胎肺上皮干细胞发育、分化过程中的作用及意义。方法 对孕妇自愿捐献的胎龄为10~34周的引产胎儿肺组织,用免疫组织化学技术检测hTERT的表达。结果 胎龄10周的肺组织即检测到hTERT的表达,主要表达于正在分支的支气管原始上皮细胞浆内。随着胎肺发育,阳性表达的细胞逐渐向远端呼吸道迁移。到发育晚期,呼吸道上皮hTERT表达较前逐渐减弱,强阳性表达的细胞仅集中在细支气管的基底膜和少数新生肺泡内,在形态上类似基底细胞和Ⅱ型肺泡细胞。结论 在人胎肺发育中hTERT的表达可能是肺上皮干细胞或祖细胞维系其未分化状态和自我更新能力的重要标志;对保证支气管上皮和肺泡上皮细胞持续正常分化和再生,维持上皮组织的完整性起着重要的作用。     

不同肿瘤细胞株人端粒酶逆转录酶及端粒酶活性的检测及其意义

目的：检测5种肿瘤细胞株人端粒酶逆转录酶（hTERT）表达及端粒酶活性状态，为端粒酶抑制剂在肿瘤治疗学方面的应用研究提供理论基础。方法：分别用免疫细胞化学S-P法和TRAP-ELISA方法检测人宫颈癌细胞株HeLa、人乳腺癌细胞株MCF-7、人肝癌细胞株SMMC7721、人前列腺癌细胞株PC-3m和人骨肉瘤细胞株U2OS hTERT表达及端粒酶活性状态。 结果：HeLa细胞hTERT表达阳性率最高，为 (93.75±3.10) %；而U2OS阳性表达率最低,仅为(2.75±0.96) %，近于不表达；其他3种细胞MCF-7、SMMC7721和PC-3m的hTERT表达阳性率分别为(92.50±2.65)%、(53.75%±2.22)%和(23.50±2.89)%。与hTERT表达阳性率相似，HeLa细胞端粒酶活性最强，为(94.58±3.49)%；而U2OS 端粒酶活性近于阴性，为(3.02±0.43)%；其他3种细胞MCF-7、SMMC7721和PC-3m的端粒酶活性分别为 (73.90±4.50) %、(66.67±3.35) %和(50.62±1.96) %。结论：5种细胞系中hTERT表达及端粒酶活性状态差别很大，提示端粒酶抑制剂可适用于多数但并非所有恶性肿瘤的治疗学研究。     

hTERT蛋白在胃腺癌组织中定量表达的研究

目的 探讨hTERT蛋白在胃腺癌组织中表达情况及其与胃癌进展的关系.方法 对68例胃腺癌和10例正常组织采用流式细胞术定量检测hTERT蛋白的表达.结果 hTERT蛋白流式细胞术测定在进展期胃癌、早期胃癌和正常胃黏膜荧光指数FI值分别为1.92±0.17、1.60±0.18和0.98±0.15,进展期胃癌hTERT含量高于早期胃癌(P＜0.01)、早期胃癌高于正常胃黏膜(P＜0.01);中、低分化腺癌hTERT蛋白FI值分别为1.89±0.20和1.92±0.19显著高于高分化腺癌1.71±0.19(P＜0.01);有淋巴结转移者高于无淋巴结转移者(P＜0.05);T1-T2级胃癌TERT蛋白FI值高于T3-T4级胃癌(P＜0.05).结论 hTERT高表达与胃腺癌进展相关,可作为胃癌进展的生物学标志之一.     

人端粒酶蛋白催化亚单位反义基因转染对胃癌细胞恶性表型的逆转作用

目的 探讨人端粒酶蛋白催化亚单位（hTRT）反义基因治疗对胃癌细胞恶性表型的逆转作用。方法 采用基因重组技术,构建hTRT正比、反义真核表达载体,采用脂质体法导入SGC－790细胞、反义真核表达载体,并导入SGC－790胃癌细胞株中,获得稳定表达正、反义基因的细胞系7901－S、7901－AS1和7901－AS2。7901－AS1和7901－AS2出现显著生长抑制现象,端粒酶活性明显下降,细胞凋亡增加,异型性减小,G0／G1期细胞增加,S和G2M期细胞减少,增殖指数减小,软琼脂中克隆形成,裸鼠体内成瘤消失。结论 hTRT反义基因治疗可以明显抑制SGC－7901细胞的增殖,部分逆转肿瘤细胞的恶性表型,其机制可能主要是通过诱导细胞分化而非诱导细胞凋亡途径实现的,提示hTRT基因可以作为肿瘤治疗的靶基因。