克隆测序技术在小鼠心肌炎实验中的应用

目的 :应用克隆测序技术结合观察急性病毒性心肌炎模型的发病过程及病理改变 ,从病原学及病理学角度鉴定柯萨奇病毒B3 亲心肌株 (CVB3m)诱导BALB/c小鼠急性病毒性心肌炎 (VMC)模型 ,为VMC模型提供科学的鉴定方法。方法 :以CVB3m腹腔注射诱导BALB/c小鼠心肌炎 ,分别于 3、5、7、10、14天取心肌 ,以RT -PCR法检测CVB3m,并通过质粒克隆测定cDNA序列 ;同时观察小鼠心肌病理组织学变化。结果 :感染小鼠心肌组织中RT -PCR扩增产物与已知CVB3mcDNA序列相应片段吻合度 >99 3% ;小鼠心肌病变从心肌细胞肿胀、少数淋巴细胞浸润到坏死和炎性病变随病程发展逐渐增多 ,第 10天达高峰 ,至第 14天炎症逐渐恢复 ,出现不同程度的纤维化。结论 :提示用克隆测序法鉴定为VMC发病机理及药物防治研究提供了稳定可靠的动物模型 ,并为研究CVB3m病毒感染小鼠后基因变异提供了参考依据。     

NF-κB途径在病毒性心肌炎小鼠中的作用

目的探讨NF-κB途径在病毒性心肌炎(VMC)小鼠发病中的作用。方法将60只小鼠按随机数字表法分为对照组20只与模型组40只,模型组小鼠腹腔注射0.1mL嗜心性柯萨奇B3病毒Nancy株(CVB3)病毒悬液;对照组腹腔注射0.1mL Eagle’S培养液。取对照组与模型组造模后4、10d心脏组织,采用HE染色观察2组心肌病理改变情况,定量RT-PCR检测2组心肌NF-κB mRNA表达水平;Western blot检测2组心肌NF-κB及磷酸化的IκB(p-IκB)蛋白表达水平。结果对照组心肌细胞未见异常;模型组造模后4d心肌细胞出现坏死,有炎性细胞浸润,造模后10d心肌细胞发生巨大病变,有大量炎性细胞感染。模型组造模后4、10dNF-κB mRNA及NF-κB、p-IκB蛋白的表达水平均显著高于对照组(P<0.05),而模型组造模后10d较造模后4d又显著升高(P<0.05)。结论 CVB3病毒通过NF-κB途径诱导小鼠心肌产生炎性反应。 更多还原     

穿孔素在柯萨奇B3病毒性心肌炎小鼠心肌浸润细胞中的表达

穿孔素在柯萨奇Ｂ３病毒性心肌炎小鼠心肌浸润细胞中的表达熊丁丁杨英珍李延文宿燕岗陈灏珠我们检测了病毒性心肌炎小鼠心肌浸润细胞中穿孔素（Ｐｅｒｆｏｒｉｎ，ＰＦＰ）表达，初步探讨了ＰＦＰ在病毒性心肌炎发病中的作用。一、材料与方法１．材料：４０只雄性４周龄Ｂ...     

细胞凋亡与小鼠病毒性心肌炎的实验研究

目的 :探讨细胞凋亡在病毒性心肌炎发病中的作用。方法 :采用光镜、电镜、原位末端标记法 (TUNEL)观察病毒性心肌炎 (viralmyocarditis ,VM)鼠不同时期病理改变及细胞凋亡情况。结果 :小鼠感染后 7d即见炎性细胞浸润及心肌坏死 ,10～ 14d病变最严重 ,2 1d以后心肌炎性细胞浸润及心肌坏死逐渐减轻 ,代之心肌纤维化 ,对照组无病变。实验组 7、10、14、2 1、2 8d均可见到凋亡细胞 ,且感染后 7～ 14d细胞凋亡数明显高于 2 1～ 2 8d(P <0 .0 5 ) ,对照组未见凋亡细胞。结论 :细胞凋亡在病毒性心肌炎中起着重要作用 ,它参与了病毒性心肌炎的发生、发展。     

LIGHT在病毒性心肌炎中的表达及意义

目的 探讨LIGHT在实验性病毒性心肌炎(VM)小鼠中的表达及其意义.方法 60只小鼠随机分为心肌炎组(n=50)和对照组(n=10),心肌炎组腹腔接种0.1mL柯萨奇B3病毒(CVB3)复制VM动物模型,于接种后7、14和28 d处死,对照组腹腔接种0.1 mL Eagle's液,于第28天处死,采用RT-PCR、免疫组织化学检测心肌LIGHT mRNA及蛋白表达,ELISA测定血清LIGHT浓度,HE染色检查心肌病理变化,并对心肌炎组血清LIGHT浓度与心肌病变积分进行相关性分析.结果 心肌炎组各时点心肌LIGHT mRNA及蛋白表达水平、血清LIGHT浓度均显著高于对照组(P＜0.05),并且心肌炎组血清LIGHT浓度与心肌病变积分呈正相关(r=0.81,P＜0.05).结论 LIGHT可能在VM发病机制中起重要作用,血清LIGHT浓度能反映心肌炎的严重程度,可作为VM病情判断的一个血清学指标.     

细胞凋亡在小鼠病毒性心肌炎中的作用

目的 :探讨柯萨奇病毒 B3(CVB3)所致小鼠病毒性心肌炎 (VM)心肌细胞损伤的变化 ,观察细胞凋亡在心肌损伤中的作用。方法 :采用 CVB3制备小鼠病毒性心肌炎动物模型 ,分别于腹腔接种 CVB3后第 5、7、10、14、2 1、2 8d,取心肌组织切片 HE染色了解心肌损伤 (坏死 )情况 ;电镜和流式细胞仪检测 ,观察心肌中的细胞凋亡。结果 :心肌坏死方面 :光镜观察见对照组小鼠心肌组织无异常改变 ,实验组病鼠可见心肌细胞坏死和单核、淋巴细胞浸润 ,后期可见纤维化 ;心肌细胞凋亡方面 :电镜观察对照组心肌中未检出凋亡细胞 ,而病鼠心肌凋亡细胞检出率较高 5 8.33% (7/12例 ) ,且细胞凋亡多存在于炎症病灶周围的心肌细胞及病灶处炎性浸润细胞 ;各期病鼠心肌组织中的细胞凋亡比率较对照组明显增加 ,流式细胞仪检测平均心肌细胞凋亡百分率为 2 6 .74± 15 .2 2 % ,感染后第 7～ 14 d心肌细胞凋亡百分率明显高于其余时间 (P<0 .0 0 1)。结论 :小鼠病毒性心肌炎中心肌损伤坏死与凋亡共存 ,其中异常的心肌细胞凋亡与病毒性心肌炎的发病过程有关     

STAT3在小鼠急性病毒性心肌炎发病中的作用研究

目的:观察STAT3在小鼠急性病毒性心肌炎(Viral myocartditis,VMC)发病中的作用及其可能作用机制.方法:建立急性VMC小鼠模型,将45只小鼠随机分为3组:正常对照组10只、急性VMC组15只,急性VMC+RPM干预鼠20只,分别采用DMEM和STAT3特异性抑剂RPM0.4mg/kg每日腹腔注射,12 d后观察小鼠的一般情况及存活率,心肌组织病理变化,心肌组织病毒滴度,ELISA法检测血清IFN-γ和TNF-α含量.结果:与急性VMC鼠相比,急性VMC+RPM干预鼠一般情况明显加重,心肌组织变性坏死及炎性细胞浸润明显加重,并且血清中IFN-γ和TNF-α含量均增加,但心肌组织病毒滴度两组间无明显差异.结论:STAT3活化在病毒性心肌炎小鼠发病中对心肌组织有一定的保护作用,抑制其活化,小鼠对CVB3的易感性明显增加;STAT3活化虽不能干扰心肌组织中病毒复制,但却可通过抑制IFN-γ、TNF-α的过度表达而对心肌组织有一定保护作用.     

柯萨奇病毒B基因及特异性抗体测定在病毒性心肌炎诊断中的应用

探讨柯萨奇病毒Ｂ基因及特异性抗体测定在病毒性心肌炎诊断中的临床意义,方法用ＰＣＲ及ＥＬＩＳＡ法检测柯萨奇病毒Ｂ。结果４０例心肌炎患儿用ＰＣＲ方法检出１７例柯萨奇病毒Ｂ基因对照组无一例阳性;４０例患儿柯萨奇病毒Ｂ特异性列阳性,正常对照２例阳性。     

核酸扩增技术在诊断柯萨奇B组病毒性心肌炎中的应用

目的　寻找一种简便、快速、准确、科学检测CVB的方法 ,同时筛选最佳检测标本。方法选择实验组 95例 (病毒性心肌炎病人 ) ,对照组 30例 (健康体检者 )分别采集两次四种不同的标本 ,利用核酸扩增技术检测CVB -RNA。结果四种不同标本 ,白细胞的检出率最高 (5 4 .7% ) ,咽拭子次之 (42 .1% ) ,血清为 (16 .7% ) ,尿液为 (4.2 % )。结论采集病毒性心肌炎病人的白细胞、咽拭子 ,应用核酸扩增技术RT -PCR进行CVB -RNA的检测 ,是诊断由CVB引起的病毒性心肌炎的一种早期、准确、灵敏、值得推广应用的方法     

柯萨奇B组病毒IgM检测在病毒性心肌炎诊断中的应用

肠道病毒 ( EV)感染 ,尤其是柯萨奇病毒感染是病毒性心肌炎的主要病因。笔者采用酶联免疫吸附测定法 ( ELISA)检测血清中柯萨奇 B组病毒 Ig M( CBV- Ig M) ,用于小儿病毒性心肌炎的诊断 ,效果较好 ,现报告如下。1　资料与方法1 .1　一般资料　按小儿病毒性心肌炎诊断标准 ,临床诊断或疑诊病毒性心肌炎患者 32例 ,其中男 1 0例 ,女 2 2例 ;年龄 1～ 1 2岁 ,平均 8.5岁。均系本院儿科住院病人。血标本采集时间为心肌炎首次症状发作后 1～ 8周。1 .2　方法　ELISA法 ,试剂盒由北京高远生物技术研究所提供 ,取患者静脉血 2 ml,分离血清…     

肉桂油治疗小鼠CVB3m病毒性心肌炎的实验研究

目的:研究肉桂油(OC)对柯萨奇病毒B3m(CVB3m)诱发性小鼠病毒性心肌炎(VMC)的治疗作用.方法:0.1 mL CVB3m ip建立BALB/c小鼠VMC模型.正常对照组同法接种0.1 mL不含病毒的Eagle液,与感染病毒小鼠隔离饲养.于接种病毒72 h后给药,OC治疗组(49.1,36.7,26.5 mg/kg肉桂油,ig)、阳性药物组(50 mg/kg黄芪注射液,ip)、模型组与正常对照组(2500 mg/kg生理盐水,ig),连续给药1 wk.观察指标:累计死亡率与中位生存时间;接种病毒后10 d心肌组织光、电镜组织病理学检查;心肌匀浆MDA含量、SOD活性;血清中乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)含量;21 d心肌组织光镜病理检查.结果:OC 49.1和36.7 mg/kg治疗组可降低小鼠死亡率,延长中位生存时间,降低急性期血清中CK,CK-MB含量以及心肌中MDA含量,提高SOD活性;减轻急性期、亚急性期小鼠心肌组织的坏死与钙化,与模型组比较差异显著(P<0.05).结论:OC具有治疗柯萨奇病毒B3m诱发性小鼠VMC的作用.     

心炎宁颗粒剂对柯萨奇B3病毒所致病毒性心肌炎小鼠心肌病理改变和超微结构的影响

目的:探讨心炎宁颗粒剂对柯萨奇B₃病毒性心肌炎（VMC）小鼠心肌病理改变的影响。方法:Balb/c小鼠腹腔注射柯萨奇B₃病毒感染建立VMC小鼠模型,予心炎宁颗粒剂（高、中、低剂量）灌胃治疗,于不同时间观察心肌病理及超微结构改变,计算心肌病理组织学积分。结果:第3天,模型组和治疗给药组小鼠开始出现活动减少等表现,心肌出现不同程度的病理改变,病理积分有不同程度的升高。第5天时,模型组和低剂量组小鼠一般状况差,开始出现死亡,心肌病理改变加重,病理积分明显升高;而高、中剂量组小鼠一般状况好于上述两组,心肌病理改变轻微,病理积分轻度升高。第7天,模型组小鼠出现死亡高峰,而治疗给药组小鼠开始出现死亡,病理积分开始下降。至第14天,模型组心肌病理积分轻度下降,治疗给药组与模型组比较病理积分下降明显,尤其是高剂量组,差异有统计学意义（P<0.01）。在整个观察过程中,模型组心肌超微结构改变重于治疗给药组,而低剂量组重于高、中剂量组。结论:心炎宁颗粒剂可以改善发病小鼠的一般状况,减少动物死亡数目,能有效地维护其心肌纤维及膜系统的稳定性。     

褪黑素在病毒性心肌炎中的保护作用

目的 探讨褪黑素在柯萨奇病毒B3（Coxsackie virus B3,CVB3）感染的病毒性心肌炎小鼠中的保护作用,为病毒性心肌炎的治疗提供新的手段。方法 将64只5周龄的雄性BALB/c小鼠随机分为3 组：正常对照组、实验对照组、褪黑素组。以腹腔注射CVB3建立急性病毒性心肌炎模型,接种当天记为第0 天,24h后正常对照组、实验对照组每日分别经腹腔注射等量生理盐水,褪黑素组每日经腹腔注射溶于乙醇及生理盐水的褪黑素。分别于接种后第7天和第14天从各组随机抽取8只处死,留取心肌组织标本。用苏木素-伊红染色法观察心肌炎症病理改变,蛋白印迹法定量检测Bax、Bcl-2、Cleaved-caspase 9的蛋白水平表达,用免疫组织化学法检测心肌组织中Cleaved-caspase 3的表达量。结果 与正常对照组比较,实验对照组心肌炎症病理评分较高,Bax、Cleaved-caspase 9凋亡蛋白表达水平和Cleaved-caspase 3表达量上调,Bcl-2蛋白水平表达下调,给予褪黑素干预后心肌炎症病理评分降低,并可明显下调Bax、Cleaved-caspase 9凋亡蛋白表达水平和Cleaved-caspase 3表达量,上调Bcl-2蛋白表达水平。结论 褪黑素能够减轻心肌损伤,下调病毒性心肌炎小鼠心肌组织中Bax、Cleaved-caspase 3、Cleaved-caspase 9的表达和上调Bcl-2的表达,从而对病毒性心肌炎小鼠起到保护作用。     

反义硫代寡核苷酸对小鼠柯萨奇病毒B3性心肌炎影响的研究

目的；观察AODN对小鼠病毒性心肌炎的影响。方法：选取4-6周龄雄性Balb/C鼠（体重18-20g)48只，随机分为6组，8只/组，其中正常对照和病毒对照各1组，4个实验组，正常对照组小鼠腹腔内注射0.1mlRPMI1640。其它5组小鼠腹腔内接种0.1mlCVB3(200TCID50)。半小时后4个实验组小鼠腹腔内注射0.2ml不同剂量的AODN，正常对照组和病毒对照组分别注射0.2mlAODN媒体溶液，7天后测定血清LDH活性，并且进行心肌组织病理学检查，结果：随注射AODN剂量增加，血清LDH活性逐渐降低；心肌细胞变性，坏死及间质炎性细胞浸润程度逐渐减轻；心肌炎发病率也逐渐降低。结论：AODN可保护小鼠心肌组织抵抗CVB3感染。     

卡维地洛对柯萨奇病毒B3病毒性心肌炎小鼠的疗效及其抗氧化应激作用

目的观察卡维地洛对柯萨奇病毒B3(CVB3)病毒性心肌炎小鼠的疗效。方法将80只小鼠随机分为3组:正常对照组(n=20),心肌炎组(n=30)与卡维地洛组(n=30),利用BALB/C小鼠感染CVB3建立病毒性心肌炎模型,感染24 h后每天灌胃给予卡维地洛10 mg/kg直至第14天,分别于接种第7天和第14天随机从各组抽取若干只小鼠取血后处死并留取心脏等标本。结果卡维地洛降低病毒性心肌炎小鼠急性期的死亡率,显著减轻心脏病理损伤,显著降低HW/BW(HW=心脏重量,BW=身体重量)比值;小鼠感染CVB3后第7天和第14天体内脂质过氧化物丙二醛(MDA)增高而超氧化物岐化酶(SOD)降低;卡维地洛干预后第7天小鼠心肌与血清中MDA含量显著降低,SOD含量有增加趋势但无统计学意义;干预后第14天SOD含量显著增加,MDA含量显著降低。结论卡维地洛对病毒性心肌炎有保护作用,不仅可以显著减轻感染小鼠的心肌损害,提高生存率,还具有明显抗氧化功效。     

芪芩Ⅰ号对小鼠柯萨奇B3病毒性心肌炎的防治作用

目的:探讨复方制剂芪芩Ⅰ号(QiqinⅠ)水煎剂对柯萨奇病毒B3(CVB3)的抑制作用和对小鼠CVB3病毒性心肌炎的防治作用. 方法:①在Hep-2细胞上采用微量细胞病变抑制法,从直接灭活病毒、抑制细胞内病毒复制、阻断病毒吸附三方面研究芪芩Ⅰ号对CVB3的抑制作用. ②采用BALB/c鼠建立CVB3病毒性心肌炎的动物模型,建立病毒对照组和芪芩Ⅰ号组,然后在不同时间点处死小鼠,记录其心肌组织病变积分. 结果:①芪芩Ⅰ号水煎剂对细胞无毒且效应明显的原生药浓度是2.88 g/L和1.44 g/L. ②芪芩Ⅰ号可能具有直接灭活CVB3、抑制细胞内CVB3复制、阻断CVB3吸附细胞的作用. ③芪芩Ⅰ号组小鼠的心肌病变积分明显低于病毒对照组,二者比较有显著差异(P<0.01). 结论:体外实验证实芪芩Ⅰ号可能对CVB3有抑制作用,动物实验进一步证明芪芩Ⅰ号在体内对小鼠CVB3病毒性心肌炎有良好的防治作用.     

反义寡核苷酸抑制柯萨奇病毒B3致病作用的实验研究

目的：观察在细胞培养系统和小鼠体内反义寡核苷酸（ＡＯＤＮ）抑制柯萨奇病毒Ｂ３（ＣＶＢ３）致病作用。方法：观察细胞病变效应（ＣＰＥ）,常规微量法滴定病毒的５０％组织细胞感染量（ＴＣＩＤ５０）以及观察感染小鼠心肌组织的病理改变。结果：１．ＡＯＤＮ可推迟和减轻ＣＶＢ３感染细胞ＣＰＥ,且随ＡＯＤＮ浓度增高,对ＣＰＥ的抑制作用增强;培养上清中病毒滴度随ＡＯＤＮ浓度升高而降低。２．随ＡＯＤＮ剂量增加,感染小鼠     

应用PCR对病毒性心肌炎小鼠进行病原学诊断及其相关因素的研究

目的：研究用聚合酶链反应（PCR）技术测定病毒性心肌炎小鼠Coxsackie VirusB3RNA(CVB-PNA)对病毒性心肌炎病毒病原的敏感性和可靠性。方法：对75只小鼠腹腔注射CVB2病毒后，做心肌病理检查和检验血液中CVB-RNA。结果：75只小鼠病理检查结果有心肌炎改变占85.3%，CVB-RNA阳性率为53.3%；CVB-RNA阳性率2周以内显著高于2周以后。结论：用PCR技术检测病毒性心肌炎血中CVB-RNA的敏感性与可靠性均较高，适用于病毒性心肌炎早期诊断。