Ghrelin对缺氧／复氧心肌细胞凋亡的影响及其机制的研究

目的:本实验研究Ghrelin对缺氧/复氧干预下心肌细胞凋亡的影响以及其具体的作用机制.方法:用体外培养的SD乳大鼠心肌细胞,建立缺氧(4 h)/复氧(1h)模型.实验分4组:①对照组;②缺氧/复氧组(H/R);③H/R+Ghrelin干预组;④H/R+Ghrelin+沃曼青霉素干预组.分别检测各组培养液中LDH浓度,Tunel法测定各组细胞凋亡率,免疫印迹法检测细胞内激酶磷酸化Akt的表达.结果:实验发现,与H/R组和H/R+Ghrelin+沃曼青霉素干预组相比H/R+Ghrelin组能明显减轻缺氧/复氧损伤所导致的LDH的漏出(30.00±6.60与78.00±4.20U/L;30.00±6.60与61.67±7.22U/L),以及明显减低心肌细胞的凋亡率(0.0859±0.0303与0.3516±0.06329;0.0859±0.0303与0.3255±0.02258)(P<0.05).同时H/R+Ghrelin干预组磷酸化Akt的表达明显增强.结论:Ghrelin具有减轻缺氧/复氧所引起的心肌细胞损伤,抑制心肌细胞凋亡的作用.与Ghrelin激活细胞内信号传递途径PI3K/Akt(磷脂酰肌醇3激酶/丝-苏氨酸激酶)有关.     

吗啡后处理对兔缺氧复氧损伤肾脏组织的保护作用

目的探讨吗啡后处理对兔缺氧复氧损伤肾脏组织的延迟保护作用及其机制。方法雄性新西兰大白兔30只随机分为正常对照组、缺氧复氧组(H/R组)和吗啡后处理组(H/R+MO组)。H/R组和MO+H/R组吸入8%O23h后立即分别静脉注射生理盐水5mL和吗啡3mg/kg,并空气复氧48h。比较各组肾功能变化和肾脏组织病理学改变,凋亡指数。结果与正常对照组比,H/R组和H/R+MO组复氧48h,血肌酐(SCr)和尿素氮(BUN)水平提高(P均<0.05),肾小管上皮细胞凋亡指数升高(P<0.05);与H/R组相比,H/R+MO组缺氧复氧48h,SCr和BUN水平降低,肾小管上皮细胞凋亡指数降低(P均<0.05)。结论吗啡后处理可能减轻缺氧复氧损伤引起的肾小管上皮细胞的凋亡,降低SCr和BUN水平,发挥肾脏保护作用。     

吡那地尔后处理对成年大鼠缺氧/复氧心肌细胞超微结构的影响

目的 建立成年大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤模型,观察吡那地尔（Pinacidil,P）后处理对心肌细胞超微结构的影响.方法 体外培养成年大鼠心肌细胞,建立心肌细胞缺氧/复氧损伤模型,将细胞随机分为6组,正常组（N）、缺氧/复氧组（H/R）、缺氧后处理组（HPO）和吡那地尔不同浓度组（25 μmol/L、50 μmol/L、100 μmol/L,P25、P50、P100组）,采用透射显微镜观察各组心肌细胞缺氧/复氧损伤后心肌细胞超微结构的变化.结果 透射显微镜显示N组超微结构正常,H/R组超微结构损伤严重,HPO、P25、P50、P100组损伤较轻,P50组较P25、P100组损伤更轻.结论 缺氧/复氧能使成年大鼠心肌细胞造成损伤,吡那地尔后处理对此损伤具有一定保护作用.     

PI3K/Akt通路在硫化氢后处理保护心肌细胞缺氧复氧损伤中的作用

目的探讨硫化氢后处理对原代培养的新生大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用及可能机制。方法以硫氢化钠(NaHS)作为外源性硫化氢供体。原代培养新生大鼠的心肌细胞随机分为5组:①正常对照组;②缺氧复氧组(hypoxia-reoxygenation,HR组);③二甲基亚砜组(dimethyl sulfoxide,DMSO组);④硫化氢后处理组(hydrogen sulfide post-con-ditioning,H2S组);⑤LY294002+H2S后处理组(LY+H2S组)。分别于缺氧前和复氧2 h检测各组的心肌细胞存活率、培养液中CK和LDH的活性;复氧末,用流式细胞学技术检测各组心肌细胞凋亡情况;Western blot检测HIF-1α、p-Akt与Akt蛋白的表达情况。结果通过比较可知,复氧2 h时,H2S组心肌细胞存活率较HR组升高显著[(71.55±1.46)%vs(62.03±1.29)%,P<0.01],CK、LDH活性以及心肌细胞凋亡率明显降低[(244.99±21.38)U/L vs(329.53±26.14)U/L,(371.64±18.62)U/L vs(427.69±13.25)U/L,(...     

吗啡预处理对兔缺氧/复氧损伤肾脏组织SOD和MDA的影响

目的 探讨吗啡预处理对兔缺氧复氧损伤肾脏组织的超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的影响.方法 雄性新西兰大白兔27只随机分成正常对照组(N组)、缺氧复氧组(H/R组)和吗啡预处理组(MO+H/R组).H/R组和MO+H/R组分别静脉注射生理盐水5 mL和吗啡3 mg/kg后吸入8%O23 h后空气复氧3h.比较各组肾脏组织SOD、MDA水平和肾脏含水量.结果 与N组比,H/R组明显降低SOD活力[(226±13.3)U/g,P<0.05],增加MDA含量[(29.02±2.15)U/g,P<0.05].与H/R组相比,吗啡缺氧预处理明显增加了肾脏组织SOD活力[(294±14.1)nmol/L,P<0.05],降低肾脏组织MDA含量[(16.55±2.23)nmol/L,P<0.05].3组兔肾组织水含量差异无统计学意义.结论 吗啡缺氧预处理可能减轻缺氧复氧损伤肾脏中MDA的生成,增强SOD的活力,从而发挥对兔缺氧复氧损伤肾脏的保护作用.     

川芎嗪预处理对心肌细胞缺血/再灌注损伤延迟保护作用

目的 探讨川芎嗪预处理对心肌缺血/再灌注损伤延迟保护作用.方法 实验用SD新生(1～3 d)大鼠,雌雄不拘,无菌取出乳鼠心脏,经分离附着组织、胰蛋白酶消化及纯化制成心肌细胞培养,第4 天随机分为4组:正常对照(Control)组、缺氧/复氧(A/R)组、缺氧预处理(APC)组、川芎嗪(TMPZ)组.观察心肌细胞搏动频率、细胞存活率(MTT法)、培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性.结果 ①细胞搏动频率:缺氧/复氧组(13±3 )次/min,与正常对照组相比差异有显著性(P＜0.05);APC组(84±6) 次/min,TMPZ组(85±3)次/min,对正常心肌细胞搏动频率无明显影响(P＞0.05),与缺氧/复氧组比较差异有显著性(P＜0.05);APC组、TMPZ组之间差异无显著性(P＞0.05);②细胞存活率: 缺氧/复氧组(36.23±4.05)%,与正常对照组比较,差异有显著性(P＜0.05);APC组(83.76±6.92)%,TMPZ组(80.56±4.65)%分别与缺氧/复氧组比较,差异有显著性(P＜0.05),APC组、TMPZ组之间差异无显著性(P＞0.05);③LDH活性: 缺氧/复氧组(36.73±2.35) U/L与正常对照组比较,差异有显著性(P＜0.05);APC组(5.70±0.63 ) U/L、TMPZ组(5.74±0.34) U/L,分别与缺氧/复氧组比较,差异有显著性(P＜0.05),APC组、TMPZ组之间差异无显著性(P＞0.05).结论 从细胞水平证实TMPZ预处理后24 h心肌细胞对再次缺氧/复氧损伤具有保护作用.     

乳化异氟醚对缺氧/复氧乳鼠心肌细胞的作用及对caspase-3表达的影响

目的 探讨乳化异氟醚(EI)对原代培养乳鼠心肌细胞的作用及对caspase-3表达的影响.方法 原代培养乳鼠离体心肌细胞,建立缺氧/复氧(H/R)损伤模型.将wister乳鼠随机分为4组,正常组(N组)、缺氧/复氧组(H/R组)、H/R+脂肪乳组(F组)、H/R+0.28 mmol/L EI组(EI组),每组8只乳鼠.4组乳鼠均取细胞培养上清液测定乳酸脱氢酶(LDH)活性与肌钙蛋白(cTnI)含量,心肌细胞匀浆后测定超氧化物歧化酶(SOD)活性与丙二醛(MDA)含量;用倒置显微镜观察心肌细胞生长特性及形态的变化.Western blot检测4组乳鼠的caspase-3表达量. 结果 H/R组、F组、EI组3组乳鼠的LDH活性[分别为:(4 355±445)、(4 411±596)和(3 725±873)U/g]、SOD活性[分别为:(14.55±0.47)、(16.24±1.32)和(21.07±5.73)U/ml ]、MDA含量[分别为:(2.01±0.47)、(2.13±0.51)和(1.32±0.31)μmol/g]、cTnI含量[分别为:(1.417±0.135)、(1.412±0.127)和(1.401±0.521)μg/L]与N组[分别为:(1 562±598) U/g、(23.19±0.59)U/ml、(0.23±0.11)μmol/g和(0.265±0.042)μg/L]比较差异均有统计学意义(P<0.05);F组的SOD活性与H/R组比较差异有统计学意义(P<0.05),但LDH活性、MDA含量、cTnI含量与H/R组比较差异均无统计学意义(P＞0.05),EI组LDH活性、SOD活性、MDA含量、cTnI含量与H/R组比较差异均有统计学意义(P<0.05);EI组LDH活性、SOD活性、MDA含量、cTnI含量与F组比较差异均有统计学意义(P<0.05).N组、H/R组、F组、EI组4组乳鼠的Caspase-3表达量[分别为:(0.245±0.028)、(0.642±0.032)、(0.601±0.017)和(0.314±0.027)],组间两两比较差异均有统计学意义(P<0.05).结论 乳化异氟醚对原代培养心肌细胞缺氧/复氧损伤有保护作用,且可能与其抑制caspase-3表达有关.     

NF-κB在EPO预处理对培养心肌细胞缺氧/复氧损伤保护效应中作用的研究

目的观察促红细胞生成素(erythropoietin, EPO)预处理对培养心肌细胞缺氧/复氧损伤(H/R)的保护效应及其与预处理过程中NF-κB的关系.方法采用培养的新生大鼠心肌细胞建立缺氧/复氧损伤模型,细胞分组为:对照组,EPO预处理组(EPO组)(EPO 10 U/ml),EPO 吡咯烷二硫氨基甲酸盐(PDTC)预处理组(EPO PDTC组)(EPO 10 U/ml PDTC 5 μg/ml),PDTC预处理组(PDTC组)(PDTC 5 μg /ml),共4组,分别于缺氧/复氧损伤前后,检测培养液LDH含量,MTT比色法观察细胞活力及流式细胞仪检测心肌细胞凋亡.采用EMSA检测缺氧复氧损伤前后各组心肌细胞NF-κB活性.结果 EPO预处理显著降低心肌细胞缺氧/复氧损伤后细胞培养液LDH含量,提高细胞存活率,并降低心肌细胞凋亡率,预处理过程中同时加入NF-κB阻断剂PDTC使EPO预处理的以上心肌保护效应显著减弱或消失.EMSA显示EPO预处理使H/R前心肌细胞NF-κB活性较对照组、EPO PDTC组、PDTC组显著升高(P<0.05),EPO PDTC组心肌细胞NF-κB活性与PDTC组和对照组无显著差异(P>0.05).缺氧复氧损伤后各组心肌细胞NF-κB活性较正常对照组显著升高(P<0.01),但EPO组的NF-κB活性低于其余各组(P<0.05),其余各组间无显著差异(P>0.05).结论 EPO预处理对培养心肌细胞缺氧/复氧损伤具有保护效应,这一作用与EPO预处理过程中NF-κB的活化有关,NF-κB的活化可能通过其负反馈调节机制抑制H/R后心肌细胞NF-κB活性的升高.     

缺氧-复氧对培养的大鼠心肌细胞损伤与细胞凋亡的影响

目的:探讨体外培养的大鼠心肌细胞在缺氧(缺血)和缺氧-复氧(再灌注)状态下心肌细胞损伤和细胞凋亡情况。方法:常规方式培养SD大鼠心肌细胞。给予模拟缺血(缺氧)溶液、模拟复氧(再灌注)液以及终浓度为200U/mL的超氧化无歧化酶(SOD)干预处理,制备缺氧-复氧损伤组(H/R组)、SOD+缺氧-复氧损伤组(SOD+H/R组)和缺氧预处理组(HP组)模型,未经处理的为正常对照组(control组)。结果:屹H/R组的细胞存活率较对照组明显降低(P<0.01);H/R+SOD组和HP组的细胞存活率虽然较正常对照组明显降低(P<0.05),但比H/R组为高(P<0.05);亿H/R组培养液中培养液中心肌酶活性显著高于HP组和H/R+SOD组(P<0.01)。役H/R组心肌细胞内的脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量也明显增高,与HP组和H/R+SOD组的心肌细胞内MDA含量比较有显著性差异(P<0.05);而HP组、H/R组与对照组间比较,无明显差异(P>0.05);均提示了缺氧-复氧过程中心肌细胞损伤严重,也说明了缺氧(血)预处理或SOD均有细胞保护作用。臆H/R组心肌细胞内游离钙含量增加,显著高于HP组和H/R+SOD组(P<0.01);逸流式细胞仪测定出H/R组心肌细胞凋亡率也明显高于HP组和H/R+SOD组(P<0.01)。心肌细胞凋亡的数量与细胞内钙的增加呈正相关(P<0.01)。肄电镜下所见H/R组的许多细胞表现为胞浆减少,核深染、固缩状态,异染色质不均匀,部分线粒体呈空泡变性,或是肌浆网囊泡变等凋亡期或凋亡前期样改变,少数呈凋亡向坏死方面改变;而其他组则少见此些变化。结论:体外培养的心肌细胞在缺氧-复氧情况下同样可加重心肌细胞损伤,可能是通过降低细胞内钙离子浓度而起作用的。     

LXA4诱导HO-1高表达对心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的:探讨脂氧素A4(lipoxinA4,LXA4)在大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤中的保护作用及可能机制?方法:将细胞随机分为5组,每组6孔,分别为对照组(con组)?缺氧/复氧组(H/R组)?LXA4预处理的缺氧/复氧组(LXA4 + H/R组)?HO-1抑制剂锌原卟啉(ZnPP)预处理的缺氧/复氧组(ZnPP + H/R组)?LXA4 + ZnPP预处理的缺氧/复氧组(LXA4 + ZnPP + H/R组)?观察细胞形态改变,测定细胞上清液中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)?肌酸激酶(creatine kinase,CK)水平以反映细胞损伤,并检测心肌细胞HO-1活性和HO-1的mRNA表达水平? 结果:与H/R组比较,LXA4 + H/R组细胞形态较规整,LDH?CK水平较低,而HO-1的活性及mRNA表达水平明显增加;LXA4 + ZnPP + H/R组终止了LXA4对缺氧/复氧细胞的保护作用,细胞形态明显改变,细胞死亡较多,HO-1的活性及mRNA水平受到抑制?结论:LXA4预处理可诱导大鼠心肌细胞HO-1高表达,具有抗心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用?