B细胞慢性淋巴细胞白血病发生Bcl-1基因重排的研究

 目的 探讨Bcl-1基因重排(即Bcl-1／IgH基因重排)在B细胞慢性淋巴细胞白血病中的发生情况及其临床意义。方法 我们对13例慢性淋巴细胞白血病(CLL)进行了Bcl-1基因重排的检测;对照组为10例骨髓正常者。运用半筑巢式多聚酶链反应(PCR)技术对从外周血、骨髓中提取的基因组DNA进行扩增。结果 这13例CLL均为B细胞型,在13例CLL中检出4例(31％)的Bcl-1基因重排;10例骨髓正常者的对照组中未检测出Bcl-1／IgH基因重排。结论 (1)B细胞慢性淋巴细胞白血病常发生Bcl-1基因重排,骨髓正常者未检出Bcl-1／IgH基因重排。(2)发生Bcl-1基因重排的B细胞慢性淋巴细胞白血病外周血中原始或幼稚淋巴细胞增多。     

多聚酶链反应检测淋巴细胞白血病微小残留分析

根据IgH、TCR克隆性基因重排原理,用半重叠PCR和单轮PCR技术分别对同一份ALL患儿的骨髓标本进行检测(共25例),并对两法的检出率进行了比较。结果:半重叠PCR阳性捡出率为80％,单轮PCR阳性检出率为52％,前者较后者提高了28％,尤其对ALL-MRD组的检测,半重叠PCR的阳性检出率有显著提高。结果表明,半重叠PCR双轮扩增IgH、TCRγ基因重排对于MRD的检测起到增敏效果,可减少非特异性产物的生成,大大提高了MRD的阳性检出率,并与单轮PCR同样具有简便、快速以及用DNA量少,对DNA模板质量要求低,无放射性污染等优点。对区别肿瘤细胞的T、B细胞源性TCRβ基因重排尤其有价值。     

高通量测序结合捕获技术检测非霍奇金B细胞淋巴瘤中重链基因重排VDJ区的临床研究

目的探讨高通量测序（Next-Generation Sequencing,NGS）结合基因捕获技术检测非霍奇金B细胞淋巴瘤中免疫球蛋白重链基因（Immunoglobulin heavy chain gene,IgH）重排的临床应用。方法收集2019年3月至2020年5月在中国人民解放军总医院第一医学中心治疗的15例成熟B细胞淋巴瘤病例,包括11例弥漫大B细胞淋巴瘤,1例滤泡性淋巴瘤,2例边缘区淋巴瘤,1例边缘区淋巴瘤伴局部弥漫大B转化淋巴瘤。采集其初诊时的组织样本与血浆样本,通过NGS检测IgH重排,并分析其与临床病理特征的相关性。结果在组织样本中,平均检出11 212条唯一的互补决定区3（Complementarity Determining Region 3,CDR3）序列,范围从515到41 476条;在血浆样本中,平均检出1 689条唯一的CDR3序列,范围从238到6 499条。在73.3%（11/15）的患者组织中检出特异性寡克隆扩增,在其对应的血浆样本中,72.7%（8/11）存在组织中的特异性寡克隆,并且二者的比例显著相关（Spearman rho=0.803,P=0.003）。另外,存在特异性寡克隆的组织样本中,克隆指数显著高于没有特异性寡克隆的样本（P<0.05）,表明存在特异性寡克隆的样本的IgH重排多样性较低。现有数据尚未发现克隆指数及组织中特异性寡克隆数与各项临床病理指标存在显著相关性。结论通过NGS检测非霍奇金B细胞淋巴患者的IgH重排,可以有效获得具体量化的CDR3序列,全面评估克隆多样性,并在大部分样本中得到特异性寡克隆序列。血浆检测结果与组织中的结果显著相关,可用于后续微小病灶残留的检测与复发监测。     

前列腺原发淋巴瘤转白血病研究

 目的 提高对前列腺原发淋巴瘤转白血病的认识.方法 对1例前列腺原发淋巴瘤转白血病临床资料进行分析,并对其骨髓细胞做细胞免疫学、遗传学和分子生物学检查.结果 患者经病理检查初诊为前列腺T细胞淋巴瘤,3个月后骨髓细胞形态学提示白血病,细胞免疫分型考虑急性双系列白血病(T-淋巴细胞、髓系白血病),染色体核型分析提示复杂变异,融合基因筛查结果SET/CAN阳性、BCR/ABL及其他融合基因阴性,IgH基因重排阳性, TCRγ、TCRδ阴性.最后确诊为急性难定系列白血病(acute leukaemias of ambiguous lineage,ALAL).结论 前列腺原发淋巴瘤罕见,该病进展快,预后差,在前列腺疾病的诊断时应考虑到它的可能并及早明确诊治.     

PCR-SSP检测HLA-B27基因

目的 建立序列特异引物聚合酶链反应(PCR-SSP)检测HLA—B27基因的方法。方法 合成HLA—B27基因和内对照人生长激素基因引物各一对，建立PCR-SSP方法。提取82例患者临床样品基因组DNA，用于PCR扩增。其中20例与微量淋巴细胞毒法(MLCT)比较。结果 PCR检测HLA-B27阳性率为68．3％。20例样本同时行PCR-SSP和MLCT法，PCR阳性14例(70％)，MLCT法阳性11例(55％)，两者一致率为85％。结论 PCR—SSP是一种敏感特异、快速简便的HLA—B27检测方法，优于MLCT法。     

恶性肿瘤B19病毒基因的检测及临床应用研究

 目的探讨恶性肿瘤患者人细小病毒B19的感染状况及其与恶性肿瘤的相关性.方法应用巢式PCR方法对168例恶性肿瘤患者及对照组48例非肿瘤患者血标本进行B19病毒基因检测.结果(1)肿瘤组B19-DNA阳性率21.4%(36/168),其中妇科肿瘤36.4%(4/11),与对照组2.08%(1/48)相比,差异非常显著(P＜0.01);(2)血液系统肿瘤B19-DNA阳性率31.8%(27/85),其他恶性肿瘤阳性率10.8%(9/83),二者比较,差异非常显著(P＜0.01);(3)成人白血病阳性率21.4%(3/14),儿童白血病阳性率为33.9%(20/59),二者比较无显著差异(P＞0.05);(4)5例恶性肿瘤化疗前B19-DNA阴性,化疗期间检出了B19-DNA.结论(1)成人和儿童恶性肿瘤患者可发生B19感染;(2)血液系统肿瘤更易发生B19感染;(3)B19病毒是导致恶性肿瘤患者发生慢性贫血和骨髓增生受抑的重要病毒病因之一;(4)B19病毒与恶性肿瘤密切相关.     

ICU内泛耐药鲍曼不动杆菌耐消毒剂基因研究及消毒对策

目的探讨ICU内泛耐药鲍曼不动杆菌(PDR-Ab)携带耐消毒剂基因的情况。方法采用聚合酶链反应(PCR)对PDR-Ab进行耐消毒剂基因的检测与分析。结果 75株PDR-Ab中73株携带耐消毒剂基因qac E△1-sul I,检出率为97.3%(73/75);12株携带qac A/B,检出率为16.0%(12/75);8株携带qac G,检出率为10.7%(8/75);未检出qac C或qac J基因阳性的菌株。结论 ICU内PDR-Ab耐消毒剂基因检出率高,主要以qac E△1-sul I为主,提示PDR-Ab可能对消毒剂存在抗性。     

华北地区HBV基因亚型特点及其与核苷(酸)类抗HBV药物耐药突变的关系

目的研究乙型肝炎病毒(HBV)基因亚型在中国华北地区的分布情况及其对核苷(酸)类药物基因型耐药突变发生率的影响。方法提取2377例慢性乙肝(1942例)和乙肝相关肝硬化(435例)患者血清HBVDNA,采用巢式PCR扩增反转录酶(RT)基因区,对PCR产物直接测序,根据所测RT/S基因序列构建系统进化树确定HBV基因亚型,检测RT区耐药突变,将数据录入HBVdb数据库进行分析。结果感染HBV各基因亚型的例数为B1型10例(0.4%),B2型344例(14.5%),B3型6例(0.3%),B4型8例(0.3%),C1型28例(1.2%),C2型1937例(81.4%),C3型21例(0.9%),C4型6例(0.3%),D型17例(0.7%)。B2和C2亚型患者之间在性别、HBVDNA载量、总胆红素、丙氨酸氨基转移酶/天冬氨酸氨基转移酶(ALT/AST)水平、胆碱酯酶、凝血酶原活动度方面差异无统计学意义(P0.05);慢性乙肝患者中,C2亚型病毒感染的拉米夫定耐药突变V173L、L180M、M204I和阿德福韦酯耐药突变A181V检出率显著高于B2亚型病毒感染(P0.05);乙肝相关肝硬化患者中,B2亚型病毒感染的阿德福韦酯耐药突变N236T检出率显著高于C2亚型病毒感染(P=0.014)。结论我国华北地区流行的HBV以C型和B型为主,其中C2和B2为主要亚型,HBV基因亚型可能会影响临床核苷(酸)类药物的耐药突变发生率。     

端粒酶活性和p16基因甲基化检测对肺癌早期诊断的价值

目的　从分子生物学的角度探索端粒酶活性和p16基因甲基化检测对肺癌早期诊断意义。方法　用PCR -TRAP -ELISA半定量及PCR -TRAP银染定性法、甲基化相关的PCR法 ,检测 49例肺癌、2 8例肺部良性疾病的纤维支气管镜后痰液脱落细胞端粒酶活性及p16基因甲基化状态 ,检测结果与组织病理、细胞学进行对照研究。结果　肺癌痰液标本的细胞学敏感性为 5 5 .1% ,特异性为 10 0 % ;端粒酶活性的敏感性为 71.4% ,特异性为 89.3% ;p16甲基化的敏感性为 2 8.6 % ,特异性为 10 0 % ;三者联合检测的敏感性为 90 .9% ,特异性为 89.3%。结论　痰液的细胞学、端粒酶活性表达及p16基因甲基化联合检测可提高肺癌痰检的敏感性 ,有助于肺癌早期诊断。     

荧光定量16S rRNA基因检测诊断妇产科菌血症的应用价值

 目的 评价荧光定量16S rRNA基因检测诊断妇产科患者菌血症的应用价值。方法 2013-01至2014-12对100例疑为全身感染处于菌血症状态的住院分娩孕产妇进行常规血液培养,同时行细菌16S rRNA基因检测,包括DNA提取、设计引物和探针、PCR扩增及对扩增产物荧光定量检测,以临床诊断及血液培养阳性菌血症作为对照,计算诊断阳性率、敏感性和特异性,数据采用SPSS11.0软件进行统计分析。结果 荧光定量PCR方法检测发现菌血症阳性的患者44例,阳性率为44％,明显高于血液培养的15%,差异有统计学意义(P<0.05);以临床诊断及血液培养阳性菌血症作为对照,荧光PCR的诊断敏感性为87.9%,特异性为90.6%。结论 荧光定量16S rRNA基因检测的阳性率远高于血液培养,可为孕产妇患者感染提供早期、敏感的病原学诊断依据。     

肺泡灌洗液联合肺组织PCR方法检测结核杆菌DNA对肺结核早期诊断的意义

目的探讨肺泡灌洗液(BALF)联合肺组织聚合酶链反应(PCR)方法检测结核杆菌DNA对肺结核早期诊断的意义。方法对104例结核杆菌痰阳性和确诊肺结核的痰菌阴性患者经纤维支气管镜采集BALF及活检肺组织进行石蜡包埋,对标本采用PCR方法检测结核杆菌DNA。结果 104例患者BALF中PCR检测结核杆菌DNA阳性92例,阳性率为88.46%;肺组织石蜡包埋检测结核杆菌DNA阳性98例,阳性率为94.23%。两组阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 BALF联合肺组织PCR方法检测结核杆菌DNA有较高的敏感性及特异性,对肺结核病的早期诊断有重要临床意义。     

Genetic alterations in B-cell non-Hodgkin's lymphoma

BACKGROUND: Although the patients with diagnosed B-NHL are classified into the same disease stage on the basis of clinical, histopathological, and immunological parameters, they respond significantly different to the applied treatment. This points out the possibility that within the same group of lymphoma there are different diseases at molecular level. For that reason many studies deal with the detection of gene alterations in lymphomas to provide a better framework for diagnosis and treatment of these hematological malignancies. AIM: To define genetic alterations in the B-NHL with highest possibilites for diagnostic purposes and molecular detection of MRD. METHODS: Formalin fixed and paraffin embedded lymph node tissues from 45 patients were examined by different PCR techniques for the presence of IgH and TCR gamma gene rearrangement; K-ras and H-ras mutations; c-myc amplification and bcl-2 translocation. There were 34 cases of B-cell non-Hodgkin's lymphoma (B-NHL), 5 cases of T-cell non-Hodgkin's lymphoma (T-NHL) and 6 cases of chronic lymphadenitis (CL). The mononuclear cell fraction of the peripheral blood of 12 patients with B-NHL was analyzed for the presence of monoclonality at the time of diagnosis and in 3 to 6 months time intervals after an autologous bone marrow transplantation (BMT). RESULTS: The monoclonality of B-lymphocytes, as evidenced by DNA fragment length homogeneity, was detected in 88 % (30/34) of B-NHL, but never in CL, T-NHL, or in normal PBL. Bcl-2 translocation was detected in 7/31 (22.6%) B-NHL specimens, c-myc amplification 9/31 (29%, all were more than doubled), K-ras mutations in 1/31 (3.23%) and H-ras mutations in 2/31 (6.45%) of the examined B-NHL samples. In the case of LC and normal PBL, however, these gene alterations were not detected. All the patients (12) with B-NHL had dominant clone of B-lymphocyte in the peripheral blood at the time of diagnosis while only in 2 of 12 patients MRD was detected 3 or 6 months after BMT. CONCLUSION: Because it is quic and simple, PCR analysis of clonal IgH rearrangements is very useful when diagnostic assistance is required. This technique is also very effecient for tracking minimal residual disease in lymphomas and leukemias and for monitoring clonal evolution in acute and chronic lymphoblastic leukemias and lymphomas. The presence of other genetic alterations, which we detected, should serve as an additional prognostic or predictive factor in the patients with B-NHL.     

99Tcm-Sn pyrophosphate scanning in suspected acute myocardial infarction using a mobile rectilinear scanner

99Tcm stannous pyrophosphate injected intravenously gives a positive image of freshly damaged myocardium but not of normal or scarred myocardium. It is safe, cheap and generally available. One hundred and forty patients admitted to hospital with possible myocardial infarction were scanned with a mobile rectilinear scanner of the type available in most district general hospitals. When the diagnosis of infarction was definite on clinical, electrocardiographic and enzyme criteria the anterior scan was positive in 31 out of 36 patients (86%); and when it was probable, the scan was positive in 28 out of 41 (68%) and when it was doubtful the scan was positive in 23 out of 63 (37%). The optimum time for scanning was between the second and seventh days. Pyrophosphate scanning is a very valuable investigation even though it is not an absolute discriminator of myocardial infarction. It is useful in assessing patients with atypical or doubtful symptoms of infarction where the ECG is already abnormal or where there are other causes of raised enzyme concentrations. False negative scans are not common, but a negative scan does not outweigh strong alternative evidence of infarction. Positive scans occur in some patients with unstable angina without confirmatory evidence of infarction. Positive scans due to extracardiac lesions are distinguished readily.     

微焦点点压摄影对乳腺可疑病灶的诊断价值

目的:探讨乳腺微焦点点压放大摄影对常规摄影中可疑病灶的辅助诊断价值。方法:选取60例经常规MLO及CC位摄影见可疑病灶的患者,片中见:①不对称的致密影;②难以确定的团状致密影;③致密影区或远处见模糊钙化灶的病例。对可疑病变区域行微焦点点压放大摄影。结果:无确切异常病灶的21例(35%),考虑良性病变可能(无确定形态及边界)19例(32%),考虑为良性病变(边缘光滑)6例(10%),考虑恶性病变可能的14例(23%)。结论:微焦点点压放大摄影可作为常规乳腺摄影的辅助诊断方法。     

宁夏地区乙型肝炎病毒基因型分布及D基因型的测序鉴定

为确定乙型肝炎病毒Ｄ基因型在我国的存在,建立我国ＨＢＶ Ｄ基因型的参照序列,作者用聚合酶链式反应结合限制性片段长度多态性分析技术,调查了可能存在Ｄ基因型的我国宁夏地区ＨＢＶ基因型分布。对９０例ＨＢｅＡｇ阳性ＨＢＶ感染者的血清进行前Ｓ区ＲＦＬＰ基因型分型。结果发现：Ｃ基因型８６．７％（７８／９０）‘;Ｄ基因型１０％（９／９０）无Ａ、Ｂ、Ｅ和Ｆ型不能明确分型者３．３％（３／９０）。２例ＲＦＬＰ分型为Ｄ